精品解析：河南省商水县第一高级中学2024--2025学年高二下学期第二次月考生物试题

商水一高2024-2025学年高二年级下期第二次月考 生物试题 一、单选题（每小题2分，共40分） 1. 如图是几种不同限制性内切核酸酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确的是（ ） A. 以上DNA片段由5种限制酶切割后产生，切割产生①片段的限制酶识别序列由5个核苷酸组成 B. 限制酶只存在于原核生物中，作用的化学键为磷酸二酯键 C. 上述能进行连接的两个黏性片段，其连接后形成的DNA分子是 D. 两个③片段不能被E.coliDNA连接酶催化连接形成重组DNA 【答案】C 【解析】 【分析】限制性内切酶（限制酶）是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定部位切割磷酸二酯键的酶，主要来源于原核生物（如细菌）。 【详解】A、图中①④是同一种限制酶切割形成的，因此以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的，切割产生①片段的限制酶，识别的碱基序列为-CTGCAG-，由6个碱基对构成，A错误； B、限制酶主要存在于原核细胞，但并不局限于原核生物中才有，作用的化学键为磷酸二酯键，B错误； C、图中①④具有相同的黏性末端，可被DNA连接酶连接形成DNA分子是，C正确； D、两个③片段属于平末端，能被E.coliDNA连接酶催化连接形成重组DNA，D错误。 故选C。 2. 胚胎工程技术的应用为优良牲畜的大量繁殖提供了有效的解决办法，如奶牛活体采卵—体外胚胎生产（OPU-IVP）技术，该技术流程如图。已知雄性奶牛Y染色体上有一段雄性特异的高度重复序列，依据该重复序列设计引物，建立了用于奶牛胚胎性别鉴定的PCR体系（SRY-PCR）。下列叙述错误的是（ ） A. 体外受精后，在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体说明受精成功 B. 活体采卵前诱导母牛超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞 C. 取滋养层细胞进行SRY-PCR，应选择结果为阴性的胚胎进行移植 D. 为防止受体母牛发生免疫排斥反应，胚胎移植前需要进行免疫检查 【答案】D 【解析】 【分析】体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。（1）卵母细胞的采集和培养：①主要方法是用促性腺激素处理，使其超数排卵，然后从输卵管中冲取卵子。②第二种方法：从已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞或直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。（2）精子的采集和获能：①收集精子的方法：假阴道法、手握法和电刺激法。②对精子进行获能处理：包括培养法和化学诱导法。（3）受精：在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。 【详解】A、在受精过程中，当在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体时，说明卵子已经完成了受精，A正确； B、激素作用的特点之一是作用于靶器官和靶细胞，活体采卵前诱导母牛超数排卵所注射的激素（如促性腺激素）只能作用于特定的靶细胞（如卵巢细胞），从而促进卵泡的发育和排卵，B正确； C、已知雄性奶牛Y染色体上有一段雄性特异的高度重复序列，依据该重复序列设计引物建立的SRY - PCR体系可用于奶牛胚胎性别鉴定。雌性胚胎不含Y染色体，SRY - PCR结果为阴性；雄性胚胎含Y染色体，SRY - PCR结果为阳性，繁殖优良奶牛（雌性），所以应选择SRY - PCR结果为阴性的胚胎进行移植，C正确； D、胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能，所以胚胎移植前不需要进行免疫检查，D错误。 故选D。 3. Leigh氏综合征是一种严重的神经障碍病，其致病基因位于线粒体DNA中。一位母亲约有1/4的线粒体携带有这种线粒体突变基因，她的前两个孩子因患有该病而夭亡。她的第三个孩子因为接受了另一名女性捐赠的健康基因而成为全球首个“三亲婴儿”。下图为其孕育过程，下列说法正确的是（ ） A. 用微型吸管去除卵母细胞 A中成形的细胞核结构 B. 图示过程中代表该母亲卵母细胞的是卵母细胞A C. 体外受精获得的胚胎发育到原肠胚时期进行胚胎移植 D. 该婴儿同时拥有自己父母及捐赠者的部分基因 【答案】D 【解析】 【分析】由图可知：该三亲婴儿形成的过程中，经过了卵母细胞A的细胞质与卵母细胞B的细胞核的结合，形成的重组卵母细胞与精子结合，发育成的早期胚胎经过胚胎移植进入子宫发育。 【详解】A、用微型吸管去除的是卵母细胞A中的细胞核，而不是仅仅去除成形的细胞核结构，A错误； B、由于该母亲的线粒体基因异常，但其核基因是正常的，因此只需要另外母亲 A 提供细胞质，因此，图示过程中代表该母亲卵母细胞的是卵母细胞 B，B错误； C、体外受精获得的早期胚胎，通常可培养至桑葚胚或囊胚阶段进行胚胎移植，即依据体内胚胎进入子宫的时间确定合适的时期进行胚胎移植，C错误； D、根据题意可知，该技术获得的男婴同时含有来自父母的细胞核基因和捐赠者的细胞质基因，即该技术获得的男婴含有来自三个个体的遗传物质，D正确。 故选D。 4. 动物细胞融合技术与植物体细胞杂交技术均完成了两种细胞遗传物质的融合。下列关于两者的叙述，错误的是（ ） 选项 项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交 A 融合原理 细胞膜具有流动性 细胞膜具有流动性 B 诱导融合的手段 可用灭活病毒诱导法 一般采用物理法和化学法 C 实验的结果 获得杂交细胞，生产细胞产品 可获得杂种植株 D 用途 制备单克隆抗体 高效、快速地实现种苗的大量繁殖 A. A B. B C. C D. D 【答案】D 【解析】 【分析】植物体细胞杂交的原理是细胞膜具有流动性和植物细胞具有全能性，动物细胞融合的原理是细胞膜具有流动性。 【详解】A、动物细胞融合和植物细胞融合依据的原理都是细胞膜具有流动性，A正确； B、灭活病毒诱导法是诱导动物细胞融合特有的方法，诱导植物细胞融合一般采用物理法和化学法，如：电融合法，聚乙二醇融合法，B正确； C、动物细胞融合获得杂种细胞，生产细胞产品，如：单克隆抗体；植物体细胞杂交利用植物细胞具有全能性可获得杂种植株，C正确； D、植物体细胞杂交可获得杂种植株，不能高效、快速地实现种苗的大量繁殖，D错误。 故选D。 5. 我国科学家成功构建了具有高比例胚胎干细胞的活产嵌合体猴。如图所示，研究人员将4CL体系下培育的、可表达绿色荧光蛋白的供体猕猴的胚胎干细胞（简称4CL干细胞）注射至与其遗传信息不同的猕猴胚胎中，并最终得到嵌合体猴。下列叙述错误的是（　　） A. 嵌合体猴中仅部分位置能发出绿色荧光是基因重组的结果 B. 嵌合体猴中来源于4CL干细胞的遗传信息不一定能遗传给后代 C. 植入胚胎前通常需要对代孕母猴注射相关的激素促使其同期发情 D. 嵌合囊胚中的内细胞团细胞将发育为嵌合体猴的各种组织 【答案】A 【解析】 【分析】胚胎干细胞来源于早期胚胎或原始性腺分离出来的一类细胞。胚胎干细胞，是高度未分化的细胞。如果进行体外培养，能够无限的增殖和分化。胚胎肝细胞还可以分化成多功能的细胞。胚胎干细胞具有多能性，可以分化成多种组织的能力但是无法独自发育成一个个体细胞。胚胎里的干细胞被称为一种“全能”细胞，可以分化成所有类型的细胞，并且携带生物体的全套遗传信息。 【详解】A、4CL胚胎干细胞与桑葚胚细胞嵌合发育成内细胞团，进而共同发育成幼猴的各种组织，故嵌合体猴体内绿色荧光散乱分布，未发生基因重组，A错误； B、如果来源于4CL干细胞的遗传信息位于体细胞中，则遗传信息一般不能遗传给后代，B正确； C、嵌合胚胎移植前，需要对代孕母猴注射孕激素，进行同期发情处理，C正确； D、嵌合囊胚中的内细胞团细胞会发育成个体（嵌合体猴）的各种组织，D正确。 故选A。 6. 生物碱为铁皮石斛的次级代谢产物。下图是以铁皮石斛为材料，培养拟原球茎(简称PLBs, 类似愈伤组织)生产生物碱的实验流程。下列说法正确的是（ ） A. 生物碱是铁皮石斛生长所必需的物质 B. 图中过程①为脱分化形成PLBs, 过程②为再分化生产生物碱 C. 培养高产细胞系应选择细胞数量/生物碱产量值大的PLBs D. 该过程运用了植物细胞培养技术，原理是植物细胞增殖 【答案】D 【解析】 【分析】在一定的激素和营养等条件的诱导下，外植体可脱分化形成愈伤组织。在脱分化过程中，植物细胞的分化程度逐渐降低，全能性逐渐升高。脱分化形成的愈伤组织由一些排列疏松而无规则，高度液泡化、呈无定形状态的薄壁细胞组成。 【详解】A、生物碱是铁皮石斛的次生代谢物，不是细胞进行正常生命活动必需的物质，A错误； B、题意显示PLBs类似愈伤组织，因此，图中过程①为脱分化形成PLBs，过程②为植物细胞培养过程，不属于再分化，B错误； C、该实验目的是要生产生物碱，故需要选择生物碱产量/细胞数量的值大的PLBs作为高产细胞系，C错误； D、该过程中的PLBs类似愈伤组织，运用了植物细胞培养技术，过程②为植物细胞培养过程，原理是植物细胞增殖，D正确。 故选D。 7. 目前生产实践中常利用植物的茎尖或芽尖进行脱毒苗的培育。某实验室利用草莓芽尖获得草莓脱毒苗的两条途径如图所示。下列说法错误的是（ ） A. 上述过程利用了植物组织培养技术 B. 甲培养基的生长素含量/细胞分裂素含量的值要高于乙培养基的 C. 在诱导草莓芽尖脱分化形成愈伤组织的过程中发生了基因的选择性表达 D. 乙醇和氯化汞的处理是为了对草莓芽尖进行消毒 【答案】B 【解析】 【分析】植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。该技术依据的原理是植物细胞具有全能性。 【详解】A、据图可知，图示为脱毒苗的获得过程，将草莓芽尖（外植体）培养形成脱毒苗利用了植物组织培养技术，A正确； B、甲培养基为发芽培养基，培养基中生长素含量与细胞分裂素含量的比值小于1，乙是生根培养基，培养基中生长素和细胞分裂素的比值大于1，因此甲培养基的生长素含量/细胞分裂素含量的值要低于乙培养基的，B错误； C、在诱导草莓芽尖生芽或生根的过程中发生了细胞分化，细胞分化的实质是基因的选择性表达，C正确； D、在进行植物组培时需要对外植体进行消毒，消毒过程可以使用70%的酒精和氯化汞等消毒剂，D正确。 故选B。 8. 野生大豆的SAMS基因具有提高抗逆性的作用。水稻是一种盐敏感型作物，为提高水稻的抗盐碱胁迫能力，研究者将野生大豆的SAMS基因转入水稻细胞内，从而培养出转基因水稻株系，具体过程如图。下列说法错误的是（ ） A. 图示过程中发生了两次转化 B. Ⅰ和Ⅲ都需使用固体培养基 C. Ⅰ中的筛选可使用PCR技术 D. 获得的转基因水稻苗都具备抗盐碱能力 【答案】D 【解析】 【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。 【详解】A、转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，图示过程需要两次转化，分别为，一是将目的基因（SAMS基因）转化质粒的T-DNA分子上，二是指被插入目的基因的T-DNA转化到受体细胞的染色体DNA分子上，A正确； B、Ⅰ筛选含目的基因的农杆菌，需使用固体培养基，Ⅲ为植物组织培养的再分化过程，需要使用固体培养基，B正确； C、PCR技术可用于目的基因和基因表达载体的筛选，C正确； D、SAMS基因具有提高抗逆性的作用，获得的转基因水稻幼苗不一定都具有抗盐碱的能力，所以需要将转基因水稻置于盐碱的环境中，进行筛选与鉴定，D错误。 故选D。 9. 胞质杂种是指两个原生质体融合产生的杂种细胞，其中一个细胞的细胞核消失后，两个原生质体的细胞质杂交得到的个体。科研人员利用雄性不育的品种A与可育的品种B通过植物体细胞杂交技术获得了雄性不育的胞质杂种“华柚2号”，制备过程如下图所示，其中GFP（绿色荧光蛋白）基因转入了品种A的细胞核基因组中。经检测，“华柚2号”的细胞核和叶绿体基因来自品种B，线粒体基因来自品种A，下列叙述正确的是（ ） A. 制备原生质体时需用纤维素酶或胶原蛋白酶去除细胞壁 B. 电刺激或Ca2+载体可用于诱导原生质体A和B的融合 C. “华柚2号”的获得说明控制雄性不育的基因可能位于线粒体中 D. 应筛选发绿色荧光的杂种细胞C经植物组织培养技术获得“华柚2号” 【答案】C 【解析】 【分析】植物体细胞杂交，又称原生质体融合，是指将植物不同种、属，甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁，未脱壁的两个细胞是很难融合的，植物细胞只有在脱去细胞壁成为原生质体后才能融合，所以植物的细胞融合也称为原生质体融合。 【详解】A、制备原生质体时需用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，A错误； B、钙离子载体是激活重构胚的，不能诱导原生质体融合，B错误； C、雄性不育的胞质杂种华柚2号的细胞核和叶绿体基因来自品种B，线粒体基因来自品种A，融合后品种A的细胞核消失，控制雄性不育的基因可能位于线粒体中，C正确； D、GFP（绿色荧光蛋白）基因转入了品种A的细胞核基因组中，而融合后的华柚2号不含品种A的细胞核，因此发绿色荧光的杂种细胞应被淘汰，D错误。 故选C。 10. 精子载体法是以精子作为外源基因载体携带外源基因进入卵细胞，用该方法制备转基因鼠的基本流程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. ①过程中精子获能后细胞膜的流动性增加 B. ②过程采用体外受精技术，受精卵中的遗传物质都来自父母双方 C. ③过程形成的早期胚胎发育到囊胚或原肠胚才能进行胚胎移植 D. ④过程进行胚胎移植前需要对供体和受体进行超数排卵处理 【答案】A 【解析】 【分析】分析题图：图示表示培育转基因鼠的基本流程，其中①是筛选获得导入外源基因的精子的过程，②是体外受精过程，③是早期胚胎培养过程，④是胚胎移植过程。 【详解】A、①是筛选获得导入外源基因的精子的过程，该过程中获能后的精子运动加速，能够迅速的游向卵子，膜流动性增加，A正确； B、②采用体外受精技术，受精卵中的遗传物质来自父母双方和外源基因，不都来自父母双方，B错误； C、③过程形成的早期胚胎发育到桑葚胚或囊胚才能进行胚胎移植，C错误； D、④是胚胎移植过程，应选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，进行胚胎移植前需要对供体雌性个体进行超数排卵处理，对受体进行同期发情处理，D错误。 故选A。 11. 大肠杆菌经溶菌酶和洗涤剂处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。用三种限制酶处理提取的产物，电泳结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取质粒DNA B. 将提取的DNA溶于0.2 mol/L NaCl溶液后，可用二苯胺试剂进行鉴定 C. 凝胶中的DNA分子通过染色，可在紫外灯下被检测出来 D. 根据电泳结果，质粒上没有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位点，有限制酶Ⅲ的切割位点 【答案】C 【解析】 【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。 【详解】A、蛋白质可溶于酒精，而DNA在冷酒精中溶解度很低，所以在提取DNA时加入酒精，使溶于酒精的蛋白质等物质溶解，而让DNA析出，A错误； B、由于DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度较大，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，所以将提取的DNA溶于2 mol/L NaCl溶液后，可用二苯胺试剂在沸水条件进行鉴定，B错误； C、凝胶中的DNA分子通过染色，可在紫外灯下出现一定的颜色特征，从而被检测出来，C正确； D、因为质粒的本质是环状的DNA，限制酶Ⅰ和Ⅱ处理后电泳只有一条条带，可能是该质粒上有一个切割位点，也可能没有切割位点，D错误。 故选C。 12. 如图表示利用新冠病毒包膜表面的S蛋白制备疫苗的相关过程，SUC2是酵母菌的蔗糖转化酶基因，其表达产物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成单糖被细胞利用，其中m、n分别是启动子和终止子。下表中是可供选择使用的限制酶及其识别序列和酶切位点。据图表推测，下列叙述错误的是（ ） 限制酶 BamHⅠ NheⅠ NcoⅠ SphⅠ Sau3AⅠ 识别序列和酶切位点 5'-G↓GATCC-3' 5'-G↓CTAGC-3' 5'-C↓CATGG-3' 5'-GCATG↓C-3' 5'-↓GATC-3' A. 过程①所需的酶是逆转录酶和DNA聚合酶 B. 过程②所使用的两种限制酶是Sau3AⅠ和NcoⅠ C. 据图推测，目的基因S转录的模板链最可能是b链 D. SUC2可作标记基因，对导入B的酵母菌进行筛选 【答案】C 【解析】 【分析】转录、复制、翻译都是从模板链的3'端开始，因此新合成链的方向均为5'→3'。质粒作为基因的载体，与目的基因形成重组质粒时，需要形成相同的黏性末端，才能重新组合。 【详解】A、过程①表示RNA→DNA，是逆转录，需要逆转录酶和DNA聚合酶，A正确； B、②过程为对DNA进行切割形成黏性末端，需要两种限制性内切酶，因目的基因的黏性末端序列分别为5'-GATC-3'、3'-GATC-5'，然后结合表格中给出的限制酶的识别序列和酶切位点，确定选用的两种酶分别是Sau3AⅠ、NcoI，B正确； C、结合质粒上限制酶的酶切位点可知，目的基因a链位于图中重组质粒的内侧，b链位于外侧；而转录方向为m→n，为确保转录产物从5'→3'延伸，因此转录只能从模板链的为3'端开始，因此a链是模板链，C错误； D、SUC2作为B上的标记基因，可以对导入B的酵母菌进行筛选，D正确。 故选C。 13. 细胞内DNA复制时，一条新子链按5′→3′方向进行连续复制，而另1条链也按5′→3′方向合成新链片段一冈崎片段(如图所示)。已知DNA聚合酶不能直接起始DNA新链或冈崎片段的合成，需先借助引物酶以DNA为模板合成RNA引物，DNA聚合酶再在引物的3′—OH上聚合脱氧核苷酸。当DNA整条单链合成完毕或冈崎片段相连后，DNA聚合酶再把RNA引物去掉，换上相应的DNA片段。人体细胞内的DNA复制过程(如图)和体外进行PCR过程(如图)分别如下，则下列叙述中错误的是（ ） A. 引物酶、DNA聚合酶、连接酶都会催化磷酸二酯键的形成 B. 上述两个过程中的DNA聚合酶都只能从子链的5′端→3′端延伸 C. 细胞内DNA复制时只有一条子链可以连续复制，而PCR时所有子链都是连续复制 D. 细胞内DNA复制所需引物是细胞自行合成的，PCR过程需要加入引物，子链合成后引物都会被切掉 【答案】D 【解析】 【分析】DNA复制需要模板、原料、能量、酶等条件。DNA复制是边解旋边复制、半保留复制。DNA复制时，子链只能从5’端向3’端延伸，两条子链的延伸方向相反。 【详解】A、引物酶能合成 RNA 引物，其本质是形成磷酸二酯键连接核糖核苷酸；DNA 聚合酶连接脱氧核苷酸，也是形成磷酸二酯键；连接酶连接冈崎片段，同样是催化磷酸二酯键的形成，因此引物酶、DNA聚合酶、连接酶都会催化磷酸二酯键的形成，A正确； B、DNA聚合酶催化DNA的合成方向是从子链的5′端向3′端延伸，B正确； C、在细胞内 DNA 复制时，只有一条子链可以连续复制，另一条不连续，在 PCR 过程中，两条子链都是连续复制的，C正确； D、细胞内 DNA 复制所需引物是细胞自行合成的，PCR 过程需要加入引物，引物是不会被切掉的，D错误。 故选D。 14. 目的基因和载体如果用同一种限制酶处理，连接时会出现正反接的情况，为鉴定筛选出的表达载体中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR后，结合电泳技术鉴定，图示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，其中目的基因为长度300bp的片段。下列有关说法错误的是（　　） A. PCR复性温度不宜太低，避免引物错配和模板链形成双链 B. 电泳条带迁移的位置和速度与DNA分子的大小、带电量和构象有关 C. 选取引物甲、丙，扩增出450bp长度片段时，可以说明目的基因正接 D. 选取引物乙、丙，可以判断目的基因是否反接 【答案】C 【解析】 【分析】PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按 碱基互补配对的原则结合，再调 温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶 沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。 【详解】A、退火是在高温解旋后降低温度让引物与模板链结合，退火温度不宜太低，避免引物错配和模板链形成双链，A正确； B、电泳条带迁移的位置和速度与DNA分子的大小、带电量和构象有关，如电泳一段时间后，较大的DNA分子迁移距离小，离加样孔近，而较小的DNA分子迁移距离大，离加样孔远，B正确； C、由于使用的引物是甲和丙，没有与基因相应位置配对，因此不管基因正接还是反接，均为450bp，C错误； D、选取引物乙、丙，扩增出350bp长度片断时，可以说明目的基因正接，若反接，两个引物在一条链的同一侧，不能得到产物，D正确。 故选C。 15. 荧光定量PCR可定量检测样本中DNA含量，其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针并生成荧光分子，即DNA每扩增一次，就有个荧光分子光生成（如图），荧光监测系统随时接收荧光信号变化。下列叙述错误的有（ ） A. 图示引物与胞内DNA复制所用引物的化学本质不同 B. 耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5'→3' C. 一段待扩增的DNA经过4次循环后，等长目标片段所占比例为1/3 D. 反应管内荧光信号到达设定阈值所经历的循环数，与样本DNA浓度呈负相关 【答案】C 【解析】 【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量的原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。 【详解】A、细胞内DNA的复制时，引物为RNA，而PCR反应中所需的引物为DNA，二者化学本质不同，A正确； B、耐高温的DNA聚合酶将脱氧核苷酸连接在引物的3'，故耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5'→3'，B正确； C、一段待扩增的DNA经过4次循环后，共得到24=16个DNA分子，等长目标片段在第3次循环才开始出现，第3次循环产生2个等长目标片段，第4次循环产生22=4个等长目标片段，经过4次循环后等长目标片段共有8个，所占比例为8/16=1/2，C错误； D、由荧光定量PCR技术原理“每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，并且每扩增一次，就有一个荧光分子生成”推测，反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关，反应管内荧光信号到达设定阈值所经历的循环数，与样本DNA浓度呈负相关，D正确。 故选C。 16. CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，与特定分子结合后，能抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，从而使机体肿瘤细胞免受T细胞攻击。抗CTLA-4或抗PD-1的单克隆抗体有较好的抗肿瘤效果。科研人员将两种不同的杂交瘤细胞融合得到双杂交瘤细胞（能够悬浮在液体培养基中生长繁殖），可以从培养液中筛选出同时抗CTLA-4和PD-1的双特异性抗体（如图），实验显示疗效更好。下列叙述正确的是（ ） A. 双杂交瘤细胞需要CTLA-4和PD-1刺激，才能产生双特异性抗体 B. 双特异性抗体与肿瘤细胞的结合具有更强的特异性，从而减少副作用 C. 对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，需使用胰蛋白酶处理 D. 双特异性抗体可以靶向作用两种受体分子，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果 【答案】D 【解析】 【分析】单克隆抗体的制备过程：①给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，然后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；②诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合；③利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；④进行克隆化培养和专一抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；⑤用培养基培养筛选出来的杂交瘤细胞或将其注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、杂交瘤细胞是由已免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融合，无需接触抗原就能产生双特异性抗体，A错误； B、由题意可知：CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，双克隆抗体应该与T细胞结合，而不是肿瘤细胞，B错误； C、杂交瘤细胞是悬浮培养的细胞，细胞之间并未接触，若要传代培养，细胞培养液直接离心，去除上清液培养基，加入新鲜培养基即可，不用胰蛋白酶处理，C错误； D、根据抗原-抗体特异性结合的原理可知，双特异性抗体可靶向作用于T细胞表面的CTLA-4和PD-1，避免这两类受体分子与特定分子结合后抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果，D正确。 故选D。 17. 单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高等优点，被广泛用作诊断试剂。下图是医学上常用的定量检测抗原含量的“双抗体夹心法”示意图。将过量的固相抗体固定在某种固相载体表面上，加入抗原，再加入酶标抗体，洗脱未结合的酶标抗体，最后加入无色底物，该底物在酶标抗体上酶的催化作用下形成产物，通过一定时间内产物（有色）的量反映抗原量。下列说法错误的是（　　） A. 固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，但两者结构不相同 B. 实验过程所加入的酶标抗体、底物均应过量 C. 反应体系最终呈现的颜色深浅与抗原量呈正相关 D. 制备单克隆抗体过程中，第一次筛选的原理是抗原—抗体杂交技术 【答案】D 【解析】 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、据图可知，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，但固相抗体和酶标抗体分别与抗原的不同部位结合，说明两者的结构不同，A正确； B、实验中加入过量的酶标抗体，是为了保证抗原能充分与之结合；而加入过量的底物，是为了保证在酶标抗体上酶的催化作用下能充分反应形成产物，从而更准确地通过产物量反映抗原量，B正确； C、抗原越多，留下的酶标抗体越多，颜色越深，因此反应体系最终呈现的颜色深浅与抗原量呈正相关，C正确； D、制备单克隆抗体过程中，第一次筛选是用选择性培养基筛选出杂交瘤细胞，而不是抗原 — 抗体杂交技术，D错误。 故选D。 18. 下列关于酒精的用法，正确的有几项（ ） ①脂肪鉴定实验中可用50%酒精洗去浮色②DNA粗提取实验中可用95%冷酒精析出DNA③制作果酒果醋实验中可用70%酒精消毒④观察根尖分生区有丝分裂实验中可用无水乙醇直接制备解离液⑤绿叶中色素提取实验中可用无水乙醇提取光合色素 A. 二项 B. 三项 C. 四项 D. 五项 【答案】C 【解析】 【分析】酒精是生物实验常用试剂之一，如检测脂肪实验中需用体积分数为50%的酒精溶液洗去浮色；观察植物细胞有丝分裂实验和低温诱导染色体数目加倍实验中都需用体积分数为95%的酒精对材料进行解离；绿叶中色素的提取和分离实验中需用无水乙醇来提取色素；果酒和果醋制作实验中可用体积分数为70%的酒精进行消毒；DNA的粗提取和鉴定中可以体积分数为95%的冷酒精进一步纯化DNA等。 【详解】①在脂肪鉴定实验中，滴加苏丹Ⅲ染液染色3 min 后，用吸水纸吸去染液，再滴加1~2滴体积分数为 50%的酒精溶液，洗去浮色，①正确； ②DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，所以DNA的粗提取实验中可用预冷的体积分数为95%的酒精溶液析出DNA，②正确； ③制作果酒和果醋实验中，可用体积分数为70%的酒精对发酵瓶、榨汁机等器具进行消毒，③正确； ④观察根尖分生区有丝分裂实验中，用盐酸和酒精按照1:1的比例配置解离液，④错误； ⑤绿叶中的光合色素易溶于无水乙醇等有机溶剂中，因此可用无水乙醇提取，⑤正确。 故选C。 19. 有效微生物群简称EM，是一种新型复合微生物制剂，在我国主要应用于各种有毒的工业废水的处理。EM原液 （微生物处于休眠状态） 中主要代表性微生物有酵母菌、乳酸菌等。为恢复EM各种有效微生物的数量和代谢活性，某生物兴趣小组拟探究EM培养的最优条件，开展了如下实验：①采用不同培养基培养EM，如表1所示； ②每天测量培养基的OD值（与菌悬液浓度正相关），结果如图甲。据此分析，下列说法正确的是（ ） 表1 培养基名称 培养条件 气体条件 pH范围 乳酸菌培养基 A 6.5-7.5 酵母菌培养基 B 4.0-6.5 复合培养基 密闭 6.0 复合培养基 C 注：复合培养基里含有能满足EM 中各种微生物生存所需的营养成分 A. 乳酸菌培养基中含有碳源、氮源、无机盐、水、琼脂等物质 B. 表1中的A、B、C条件分别为密闭、密闭、曝气 C. 培养一段时间后对 C 条件的培养基进行微生物计数，推测同一视野中乳酸菌数量一定多于酵母菌 D. 根据图甲可知，复合培养基 pH6.0、气体条件 C可作为EM 培养的最优条件 【答案】D 【解析】 【分析】.对微生物的数量和菌落研究时，多采取稀释涂布平板法接种；进行计数时，测定微生物数量常用方法有活菌计数法、显微镜直接计数法。统计的菌落往往比活菌的实际数目少，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 【详解】A、琼脂是凝固剂，用于制作固体培养基，而在液体培养基中不需要琼脂，由题意可知，该培养基是液体培养基，所以不含琼脂，A错误； B、酵母菌是兼性厌氧菌，乳酸菌是厌氧菌，在有氧条件下会抑制乳酸菌生长，而曝气是通入空气，是有氧环境，所以乳酸菌培养基应是密闭条件，酵母菌培养基应为曝气条件，复合培养基含有满足各种微生物生存所需营养成分，需要通入空气保证好氧微生物生长，所以是曝气条件，B错误； C、虽然乳酸菌是厌氧菌，酵母菌是兼性厌氧菌，但由于不知道初始接种时两者的数量关系以及它们在该培养基中的生长繁殖速度等情况，所以不能推测出同一视野中乳酸菌数量一定多于酵母菌，C错误； D、根据图甲可知，复合培养基在pH = 6.0，气体条件为C（曝气）时OD值最大，说明菌悬液浓度最大，可作为EM培养的最优条件，D正确。 故选D。 20. 安莎霉素主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染。该抗生素是一种产自深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ） 注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落。 A. 经过A处理，试管中大多数放线菌都可产生安莎霉素 B. 在①中进行扩大培养时，接种后需对培养基进行灭菌处理 C. ②和④是完全培养基，③是缺赖氨酸的不完全培养基 D. D菌落不能产生安莎霉素，而E菌落能产生安莎霉素 【答案】C 【解析】 【分析】影印培养法是指确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法。主要操作方法是：用灭菌的丝绒覆盖在一块与培养皿同样大小（或略小）的木制圆柱体上，轻轻地在母种培养皿的菌苔上印一下，把细菌菌落全部转移到丝绒面上，然后将这一丝绒面再印在另外的选择性培养基平板上，获得与原始平板完全相同的接种平板。待培养后，比对各培养皿在相同位置出现相同的菌落，从而筛选出适当的菌株。 【详解】A、基因突变是不定向的，且突变频率很低，紫外线处理后只有极少数放线菌可能成为赖氨酸缺陷型放线菌，能产生安莎霉素，A错误； B、在①中进行菌种的扩大培养时，接种前需对培养基进行灭菌处理，接种后不能灭菌，否则会杀死目标微生物，B错误； C、②和④中所有微生物都能长出菌落，所以②④是完全培养基，③中没有D菌落，说明③具有选择作用，赖氨酸缺陷型放线菌不能在其中生长，所以③是缺少赖氨酸的不完全培养基，C正确； D、D菌落在③中不能生存，在④中可以生存，说明D菌落只能生活在完全培养基中，不能生活在缺赖氨酸的完全培养基中，即D菌落是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，可以产生安莎霉素，而E菌落在③④中均能生存，即这种微生物有无赖氨酸均可生存，所以E菌落不是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，不能产生安莎霉素，D错误。 故选C。 二、多选题（共15分，每题3分，少选得1分，多选错选不得分） 21. 下图表示胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛。下列相关叙述正确的是（ ） A. 应用1中获得的良种小牛，遗传物质来源于供体1和供体2个体 B. 应用2、3、4所用的受精卵只能来源于体外受精，且精子必需进行获能处理 C. 应用3过程中对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将内细胞团均等分割 D. 应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官，用于器官移植研究 【答案】ACD 【解析】 【分析】分析题图：应用1中：供体1提供细胞核，供体2提供细胞质，经过核移植技术形成重组细胞，并发育形成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，称为克隆牛；应用2中：优良公牛和供体1配种形成受精卵，并发育成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，属于有性生殖；应用3中：采用了胚胎分割技术；应用4中：从早期胚胎和原始性腺中获取胚胎干细胞，并进行体外干细胞培养。 【详解】A、应用1中获得的小牛为克隆牛，其细胞核遗传物质来源于供体1，细胞质遗传物质来源于供体2，A正确； B、应用2、3、4所用的受精卵不一定来源于体外受精，也可以来自体内受精，B错误； C、对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将内细胞团均等分割，C正确； D、应用4中细胞为胚胎干细胞，进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官，用于器官移植研究，D正确。 故选ACD。 【点睛】 22. 与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列相关表述中不正确的是：（ ） A. 发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵 B. 分离、提纯产物是发酵工程的中心环节。发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身 C. 在发酵工程的发酵环节中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径 D. 通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 【答案】ABD 【解析】 【分析】1、发酵工程生产的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。 2、产品不同，分离提纯的方法一般不同。（1）如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；（2）如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取。 3、发酵过程中要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。 4、发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。 【详解】A、发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵，A错误； B、发酵工程的中心环节是发酵，发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，B错误； C、在发酵工程的发酵环节中，发酵条件不仅影响微生物的生长繁殖，也会通过影响酶的活性影响微生物的代谢途径，C正确； D、单细胞蛋白是指利用发酵工程获得的大量的微生物菌体，D错误。 故选ABD。 23. 为探究枯草芽孢杆菌（好氧微生物）能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者设计了相关实验。取适量番茄灰霉病菌菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片（直径5mm）在枯草芽孢杆菌菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养后测量抑菌圈大小以判定抑菌效果。有关说法正确的是（　　） A. 液体培养枯草芽孢杆菌时，可采用摇床震荡培养 B. 培养过程中抽样检测活菌数量时，可采用稀释涂布平板法 C. 抑菌圈越大，枯草芽孢杆菌产生的抑菌物质的数量越多 D. 培养皿倒置培养可防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 【答案】ABD 【解析】 【分析】已知枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌具有抑制作用的蛋白质。若枯草芽孢杆菌能用于番茄灰霉病的生物防治，则在枯草芽孢杆菌生存的地方没有番茄灰霉病菌的生长。 【详解】A、枯草芽孢杆菌为好氧微生物，采用摇床震荡培养可增大培养液的溶氧量，有利于枯草芽孢杆菌的生长繁殖，A正确； B、培养过程中要抽样检测活菌数量，应该采用稀释涂布平板法，用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，B正确； C、根据抑菌圈大降解能力强，抑菌圈小降解能力弱，但不知道是抑菌物质的量还是活性，C错误； D、用平板培养细菌时，一般需要将平板倒置培养，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，D正确。 故选ABD。 24. 幽门螺杆菌（Hp）感染会引发胃炎、消化性溃疡等多种疾病。研究人员将Hp的Ipp20基因作为目的基因，用限制酶XhoI和XbaI切割，通过基因工程制备相应的疫苗，质粒及操作步骤如图所示。下列相关叙述错误的是（ ） A. 基因表达载体导入之前，可用Ca2+处理大肠杆菌 B. Ipp20基因插入到大肠杆菌的DNA中使大肠杆菌发生了基因突变 C. 培养基A中添加了氯霉素，培养基B中添加了潮霉素 D. 能用来生产Hp疫苗的大肠杆菌在菌落3和5中 【答案】BC 【解析】 【分析】基因工程技术的基本步骤：1.目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。2.基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。3.将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 【详解】A、原核细胞作为受体细胞时，可用Ca2+处理受体细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，更容易将基因表达载体导入其中，A正确； B、Ipp20基因插入到大肠杆菌的DNA中，这属于基因工程中的基因重组，而不是基因突变，基因突变是指DNA分子中发生碱基对的增添、缺失或替换，B错误； CD、该过程使用了限制酶 Xho I和Xba I切割质粒和Ipp20基因，结合图示可知，在构建目的基因表达载体的过程中氯霉素抗性基因被切割掉，保留了潮霉素抗性基因，不管是正常质粒还是重组质粒都含有潮霉素抗性基因，但只有正常质粒才同时含有氯霉素抗性基因，因此，可以先用含有潮霉素的培养基A筛选出导入正常质粒、重组质粒的大肠杆菌，再采用同位影印接种到含有氯霉素的培养基B和含有潮霉素的培养基A中，此时含有重组质粒的大肠杆菌不能在含有氯霉素的培养基 B上生长，从而与培养基A（对照）相比会消失一些菌落，对照两个平板上减少的菌落就是符合要求的大肠杆菌菌落，结合图示可知，符合要求的大肠杆菌菌落是3和5，C错误，D正确。 故选BC。 25. 除草剂有效成分草甘膦的作用机理是和PEP竞争性结合EPSP合酶，从而扰乱生物体的正常氮代谢。但作为一种非选择性除草剂，草甘膦对农作物同样具有杀伤作用，这大大限制了其在农业生产中的应用，培育抗草甘膦作物将会解决这一难题。下列说法错误的是（ ） A. 长期使用草甘膦除草剂，会导致杂草产生抗除草剂突变，降低除草剂的效果 B. 根据草甘膦的作用机理，可通过导入强启动子使EPSP合酶过量表达获得抗草甘膦作物 C. 可通过蛋白质工程直接替换EPSP合酶个别氨基酸，使草甘膦无法与EPSP酶结合 D. 在培育抗草甘膦作物时，为避免外源基因流入杂草，最好将外源基因插入细胞核基因组 【答案】ACD 【解析】 【分析】1、蛋白质工程的基本原理：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需要的蛋白质。 2、现代生物进化理论的内容：适应是自然选择的结果;种群是生物进化的基本单位；突变和基因重组提供进化的原材料，自然选择导致种群基因频率的定向改变，进而通过隔离形成新的物种；生物进化的过程实际上是生物与生物、生物与无机环境协同进化的过程；生物多样性是协同进化的结果。 【详解】A、杂草中原本存在抗除草剂突变，除草剂起选择作用，长期使用除草剂，抗除草剂个体数量增多，表现为抗药性下降，A错误； B、草甘膦的作用机理是和PEP竞争性结合EPSP合酶，通过导入强启动子使EPSP合酶过量表达，可以和草甘膦结合，并且有足够的酶满足自身代谢需要，B正确； C、可利用蛋白质工程改造EPSP合酶的基因，使其表达产物与草甘膦无法结合，但是可以和PEP结合，达到抗草甘膦的效果，不能直接替换氨基酸，C错误； D、在培育抗草甘膦作物时，为避免外源基因流入杂草，最好将外源基因插入细胞质基因组，D错误。 故选ACD。 三、非选择题（45分） 26. 人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白l（cTnl）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnl在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnl的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程，见图1.请据图分析回答下列问题： （1）动物细胞培养时，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的_____，以满足动物细胞培养的营养需要。在培养过程中，为了防止有害代谢物的积累，还需要_____，以便清除代谢物。 （2）每隔2周用cTnl作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是_____，最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，常用的化学诱导剂是_____。 （3）①过程使用的是_____（选填“选择”或“鉴别”）培养基，属于_____（选填“固体”或“液体”）培养基。甲、乙、丙中，只含杂交细胞的是_____，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得_____。 （4）单克隆抗体常用于抗原检测，图2是酶联免疫吸附双抗体夹心法的示意图。 据图分析，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，原因是_____。该检测方法中，能不能检测出待测抗原的量，请判断并解释_____。 【答案】（1） ①. 动物血清 ②. 定期更换培养液 （2） ①. 加强免疫，刺激小鼠产生更多的B淋巴细胞 ②. 聚乙二醇 （3） ①. 选择 ②. 液体 ③. 乙和丙 ④. 能产生抗cTnl抗体的杂交瘤细胞 （4） ①. 同一种抗原，含有多种抗原决定簇，能被多种抗体识别结合 ②. 能，可以通过检测产物的生成量来反映抗原量（或：酶催化底物产生产物并有颜色发生，颜色深浅与产物量成正比，而产物量与抗原量也成正比） 【解析】 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【小问1详解】 动物细胞培养时，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的动物血清，以满足动物细胞培养的营养需要。为了防止有害代谢物的积累，可采用定期更换培养液的方法，以便清除代谢物。 【小问2详解】 为了刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞，一般通过多次注射相应抗原，加强机体免疫应答，刺激小鼠产生更多的B淋巴细胞；取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，常用的化学诱导因素是聚乙二醇（PEG）。 【小问3详解】 ①过程是用特定的选择培养基筛选，该培养基属于液体培养基，未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞（浆细胞与骨髓瘤细胞融合后的细胞）才能生长。所以得到的乙就是杂交瘤细胞，由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，因此乙中有能产生其他抗体的细胞，所以要经过②过程，就是在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生所需抗体的细胞，丙代表的是能分泌抗cTnI的抗体的杂交瘤细胞。故甲、乙、丙中，只含杂交细胞的是乙和丙 【小问4详解】 分析图中过程可知，两种抗体与检测的抗原均能结合，但结合部位是不同的，即同一种抗原，含有多种抗原决定簇，能被多种抗体识别结合；该检测方法中，抗体与待测抗原结合，酶催化特定底物反应产生检测产物，可通过测定产物量来判断待测抗原量。 27. 小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中含多种微生物。酿酒的原理主要是酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精，传统酿造工艺流程如图1所示。 回答下列问题： （1）蒸粮的目的是利于糖化（利用霉菌将淀粉水解）和______。蒸粮结束后，蒸熟并摊晾的原料应______后再加入酒曲，以免杀死菌种。然后需将其移至酒坛，并放置在无菌环境中敞开培养一段时间后，再对酒坛进行______处理后，才可高效地进行酒精发酵。最终检验发酵液样品的蒸馏产物是否含有酒精，可用______溶液进行检测。 （2）已知酵母菌不能直接利用淀粉发酵成酒精，若想使其可直接利用淀粉进行发酵，则应导入分解淀粉所需的多种酶的基因（如Amy基因），从而制备新型酵母菌。如图2表示通过PCR技术进行扩增Amy基因后将其导入到质粒的过程。相关步骤如下： ①扩增目的基因。获得相关DNA后，通过PCR技术进行扩增Amy基因。为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Amy基因时需添加限制酶XhoⅠ的识别序列至①处左端（其中一处）。已知限制酶XhoⅠ识别序列为5'-CTCGAG-3'，则其中一种引物设计的序列是5'-______-3'（填写18个碱基）。目的基因在PCR仪中每一次循环可以分为______→退火（复性）→______。 ②构建基因表达载体。除图中所标出的结构外，作为载体，质粒还需具备______（答出1点即可）。质粒中的启动子是______识别和结合的部位。因启动子具有物种特异性，故在质粒中插入Amy基因，其上游启动子应选择______（A.大肠杆菌启动子 B.乳酸杆菌启动子 C.农杆菌启动子 D.酵母菌启动子）。 ③检测目的基因及其表达产物。已知UGA基因缺陷型酵母菌无法合成尿嘧啶，长时间缺少尿嘧啶，其无法存活，因此UGA常被作为标记基因；尿嘧啶可以使5-氟乳清酸转化为对酵母菌有毒物质。导入目的基因的酵母菌应在______的培养基上筛选培养。由于需要导入多种酶基因，需要多次筛选，因此在导入一种目的基因后，要先切除UGA基因，再重新导入另一种目的基因。切去UGA基因的酵母菌应在______的培养基上筛选培养。 【答案】（1） ①. 消毒 ②. 冷却 ③. 密封 ④. 重铬酸钾 （2） ①. CTCGAGTGCCAGTTATAC ②. 变性 ③. 延伸 ④. 复制原点 ⑤. RNA聚合酶 ⑥. D ⑦. 缺乏尿嘧 ⑧. 含有5-氟乳消酸 【解析】 【分析】基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞。 （4）目的基因的检测与鉴定。 【小问1详解】 蒸粮的目的是利于糖化（利用霉菌将淀粉水解）和利用高温进行消毒，蒸粮结束后，蒸熟并摊晾的原料应冷却，以防止高温杀死菌种；然后需将其移至酒坛，并放置在无菌环境中敞开培养一段时间后，再对酒坛进行密封，进行无氧发酵；最终检验发酵液样品的蒸馏产物是否含有酒精，可用酸性重铬酸钾溶液进行检测。 【小问2详解】 ①引物的作用是在脱氧核苷酸链的3'端加入单个的脱氧核苷酸，因此一种引物的设计序列应与核苷酸链碱基互补配对，并且要加入限制酶的识别序列，因此引物设计的序列是5'-CTCGAGTGCCAGTTATAC-3'，目的基因在PCR仪中每一次循环可以分为变性→退火（复性）→延伸。 ②构建基因表达载体。除图中所标出的启动子、酶切位点、终止子结构外，作为载体，质粒还需具备复制原点；质粒中的启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位。因启动子具有物种特异性，实验目的是制备新型酵母菌，因此故在质粒中插入Amy基因，其上游启动子应选择酵母菌启动子，即D。 ③导入目的基因的酵母菌质粒上含UGA，可以合成尿嘧啶，而未导入目的基因的酵母菌由于无法合成尿嘧啶，不能在缺乏尿嘧啶的培养基上存活，因此导入目的基因的酵母菌应在缺乏尿嘧啶的培养基上筛选培养；切去UGA基因的酵母菌无法合成尿嘧啶，而尿嘧啶可以使5-氟乳清酸转化为对酵母菌有毒物质，因此去UGA基因的酵母菌应在含有5-氟乳消酸的培养基上筛选培养。 28. 胰岛素可用于治疗糖尿病，如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。据图回答下列问题： （1）要使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异性表达，图中启动子应为_______，能与启动子结合的酶是_______。 （2）为使目的基因与载体正向连接，在设计PCR引物时需添加限制酶识别序列，实际操作时还会在引物的5′端添加保护序列GGG，可起到延长限制酶识别序列一端的碱基数，提高限制酶识别及切割效率的作用。根据以上信息，在上游引物的5′端应添加的序列应为_______。PCR过程中通过控制温度可使DNA复制在体外反复进行，其中将温度调整到72℃的目的是_______。 （3）获得重组质粒后，可通过_______法导入体外受精获得的奶牛受精卵中，移植前需取囊胚中的_______细胞进行性别鉴定，选择性别为雌性的囊胚进行移植。该过程需对代孕母牛进行_______处理，使之与供体的生理状况保持相同。为提高胚胎利用率，胚胎移植前可对胚胎进行_______处理。 【答案】（1） ①. 奶牛乳腺中特异表达的基因的启动子 ②. RNA聚合酶 （2） ①. 5′-GGGCAATTG-3′ ②. 使溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链 （3） ①. 显微注射 ②. 滋养层 ③. 同期发情 ④. 胚胎分割 【解析】 【分析】PCR是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由酶催化的对特定模板的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术。 【小问1详解】 要使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异性表达，应选择能在奶牛乳腺中特异表达的基因的启动子添加在目的基因上游。启动子是RNA聚合酶识别和结合的序列。 【小问2详解】 PCR过程中，为保证目的基因与载体的正向连接，在设计PCR引物时，应在引物的5′端添加限制酶识别序列；根据目的基因转录的方向和质粒中限制酶的酶切位点可知，目的基因的上游应添加AhaⅠ的识别序列，保护序列GGG应添加在引物的5′端，故在上游引物的5′端应添加的序列为5′—GGGCAATTG—3′。PCR过程中将温度调整到72℃的目的是使溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 【小问3详解】 获得重组质粒后，可通过显微注射法导入体外受精获得的奶牛受精卵中，移植前需取囊胚中的滋养层细胞进行性别鉴定，选择性别为雌性的囊胚进行移植。该过程需对代孕母牛进行同期发情处理，使之与供体的生理状况保持相同。为提高胚胎利用率，胚胎移植前可对胚胎进行胚胎分割处理。 29. 亚洲玉米螟、黏虫是造成我国玉米减产的主要害虫。我国科研人员通过图示过程将Bt基因（能够控制合成Bt毒蛋白）转入玉米细胞培育出了抗虫转基因玉米。回答下列问题： （1）用PCR扩增下面的Bt基因的DNA片段： 5'-GACCTGTGGAAGC……CATACGGGATTG-3' 3'-CTGGACACCTTCG……GTATGCCCTAAC-5' 供选择的引物有： ①5'-GACCTGTGGAAGC-3'②5'-CTGGACACCTTCG-3'③5'-GTTAGGCATAC-3④5'-CAATCCCGTATG-3'共四种，应选择______（填字母）。 A. ①② B. ②③ C. ③④ D. ①④ （2）据图分析，为确保目的基因能够与Ti质粒正确连接，形成含有目的基因的重组Ti质粒，科研人员应选用限制酶______切割Ti质粒和含Bt基因的DNA片段。在获得重组Ti质粒后，可将其加入经_______处理的农杆菌；导入重组质粒的玉米细胞经_______成为转基因玉米植株。 （3）为检测转基因玉米是否培育成功，科研人员首先利用_________法检测Bt基因是否成功翻译：在进行个体生物学水平的鉴定时，科研人员将获得的多株转基因玉米进行自交，发现除少数植株的子代均抗虫外，多数植株的子代中均出现了不抗虫植株，统计这些植株的子代中抗虫与不抗虫的比例，发现有3：1和15：1两种情况。出现15：1的原因是_________。 （4）某科研小组在做抗虫棉试验时，虽已经检测出棉花植株中含有抗虫基因，但让棉铃虫食用棉花叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明________，为此，科学家对棉花植株中的Bt毒蛋白基因进行了修饰，结果食用了棉叶的棉铃虫中毒死亡了，从变异类型分析，这种对Bt毒蛋白基因的修饰属于__________。 【答案】（1）D （2） ①. XbaⅠ和HindⅢ ②. 钙离子##Ca2+ ③. 植物组织培养 （3） ①. 抗原-抗体杂交 ②. 在两对同源染色体的各一条染色体上转入了抗虫基因  （4） ①. Bt毒蛋白基因没有成功表达  ②. 基因重组 【解析】 【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定。目的基因的检测与鉴定包括分子水平上的检测与个体水平上的鉴定两种方式。 【小问1详解】 PCR引物应分别与待扩增片段两端的互补链3′端结合，且引物序列与其结合处应保持“正向一致”。Bt基因的DNA片段的上链(5′→3′)是GACCTGTGGAAGC…CATACGGGATTG，对应的下链(3′→5′)是CTGGACACCTTCG…GTATGCCCTAAC。前向引物通常与上链5′端相同序列（①），后向引物则与上链3′端互补且方向为5′→3′（④），应选①和④。故选D。 【小问2详解】 据图分析，在构建目的基因表达载体外，由于BamHⅠ能将目的基因切割，因此不能用BamHⅠ切割，因此对于目的基因的左侧只能用XbaⅠ切割，而右侧HindⅢ和EcoRⅠ是目的基因和终止子近侧共有的限制酶，但目的基因的左侧有EcoRⅠ的识别序列，因此目的基因右侧需要用HindⅢ切割，因此，为确保目的基因能够与Ti质粒正确连接，形成含有目的基因的重组Ti质粒，科研人员应选用限制酶XbaⅠ和HindⅢ切割Ti质粒和含Bt基因的DNA片段；在获得重组Ti质粒后，可将其加入经Ca2+处理（使其处于易于吸收周围环境DNA分子的状态）的农杆菌；导入重组质粒的玉米细胞经植物组织培养成为转基因玉米植株，该操作的原理是植物细胞的全能性。 【小问3详解】 翻译的产物是蛋白质，由于抗原与抗体的结合具有特异性，故为检测转基因玉米是否培育成功，可在分子水平条件下，科研人员首先利用抗原—抗体杂交法检测Bt基因是否成功翻译；在进行个体生物学水平的鉴定时，科研人员将获得的多株转基因玉米进行自交，发现除少数植株的子代均抗虫外，多数植株的子代中均出现了不抗虫植株，统计这些植株的子代中抗虫与不抗虫的比例，发现有3∶1和15∶1两种情况。其中15∶1为9∶3∶3∶1的变式，说明目的基因转入了两条具有非同源染色体的两条染色体上，即在两对同源染色体的各一条染色体上转入了抗虫基因，进而通过自交产生了性状分离比为15∶1的后代表现。 【小问4详解】 科学家最初做抗虫棉试验时，虽已经检测出棉花植株中含有抗虫基因，但让棉铃虫食用棉花叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明Bt毒蛋白基因没有成功表达；为此，科学家对棉植株中的Bt毒蛋白基因进行了修饰，结果食用了棉叶的棉铃虫中毒死亡了，从变异类型分析，这种对Bt毒蛋白基因的修饰是蛋白质工程的应用，是第二代基因工程，其原理是基因重组。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 商水一高2024-2025学年高二年级下期第二次月考 生物试题 一、单选题（每小题2分，共40分） 1. 如图是几种不同限制性内切核酸酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确的是（ ） A. 以上DNA片段由5种限制酶切割后产生，切割产生①片段的限制酶识别序列由5个核苷酸组成 B. 限制酶只存在于原核生物中，作用的化学键为磷酸二酯键 C. 上述能进行连接的两个黏性片段，其连接后形成的DNA分子是 D. 两个③片段不能被E.coliDNA连接酶催化连接形成重组DNA 2. 胚胎工程技术的应用为优良牲畜的大量繁殖提供了有效的解决办法，如奶牛活体采卵—体外胚胎生产（OPU-IVP）技术，该技术流程如图。已知雄性奶牛Y染色体上有一段雄性特异的高度重复序列，依据该重复序列设计引物，建立了用于奶牛胚胎性别鉴定的PCR体系（SRY-PCR）。下列叙述错误的是（ ） A. 体外受精后，在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体说明受精成功 B. 活体采卵前诱导母牛超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞 C. 取滋养层细胞进行SRY-PCR，应选择结果为阴性的胚胎进行移植 D. 为防止受体母牛发生免疫排斥反应，胚胎移植前需要进行免疫检查 3. Leigh氏综合征是一种严重的神经障碍病，其致病基因位于线粒体DNA中。一位母亲约有1/4的线粒体携带有这种线粒体突变基因，她的前两个孩子因患有该病而夭亡。她的第三个孩子因为接受了另一名女性捐赠的健康基因而成为全球首个“三亲婴儿”。下图为其孕育过程，下列说法正确的是（ ） A. 用微型吸管去除卵母细胞 A中成形的细胞核结构 B. 图示过程中代表该母亲卵母细胞的是卵母细胞A C. 体外受精获得的胚胎发育到原肠胚时期进行胚胎移植 D. 该婴儿同时拥有自己父母及捐赠者的部分基因 4. 动物细胞融合技术与植物体细胞杂交技术均完成了两种细胞遗传物质的融合。下列关于两者的叙述，错误的是（ ） 选项 项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交 A 融合原理 细胞膜具有流动性 细胞膜具有流动性 B 诱导融合的手段 可用灭活病毒诱导法 一般采用物理法和化学法 C 实验的结果 获得杂交细胞，生产细胞产品 可获得杂种植株 D 用途 制备单克隆抗体 高效、快速地实现种苗的大量繁殖 A. A B. B C. C D. D 5. 我国科学家成功构建了具有高比例胚胎干细胞的活产嵌合体猴。如图所示，研究人员将4CL体系下培育的、可表达绿色荧光蛋白的供体猕猴的胚胎干细胞（简称4CL干细胞）注射至与其遗传信息不同的猕猴胚胎中，并最终得到嵌合体猴。下列叙述错误的是（　　） A. 嵌合体猴中仅部分位置能发出绿色荧光是基因重组的结果 B. 嵌合体猴中来源于4CL干细胞的遗传信息不一定能遗传给后代 C. 植入胚胎前通常需要对代孕母猴注射相关的激素促使其同期发情 D. 嵌合囊胚中的内细胞团细胞将发育为嵌合体猴的各种组织 6. 生物碱为铁皮石斛的次级代谢产物。下图是以铁皮石斛为材料，培养拟原球茎(简称PLBs, 类似愈伤组织)生产生物碱的实验流程。下列说法正确的是（ ） A. 生物碱是铁皮石斛生长所必需的物质 B. 图中过程①为脱分化形成PLBs, 过程②为再分化生产生物碱 C. 培养高产细胞系应选择细胞数量/生物碱产量值大的PLBs D. 该过程运用了植物细胞培养技术，原理是植物细胞增殖 7. 目前生产实践中常利用植物的茎尖或芽尖进行脱毒苗的培育。某实验室利用草莓芽尖获得草莓脱毒苗的两条途径如图所示。下列说法错误的是（ ） A. 上述过程利用了植物组织培养技术 B. 甲培养基的生长素含量/细胞分裂素含量的值要高于乙培养基的 C. 在诱导草莓芽尖脱分化形成愈伤组织的过程中发生了基因的选择性表达 D. 乙醇和氯化汞的处理是为了对草莓芽尖进行消毒 8. 野生大豆的SAMS基因具有提高抗逆性的作用。水稻是一种盐敏感型作物，为提高水稻的抗盐碱胁迫能力，研究者将野生大豆的SAMS基因转入水稻细胞内，从而培养出转基因水稻株系，具体过程如图。下列说法错误的是（ ） A. 图示过程中发生了两次转化 B. Ⅰ和Ⅲ都需使用固体培养基 C. Ⅰ中的筛选可使用PCR技术 D. 获得的转基因水稻苗都具备抗盐碱能力 9. 胞质杂种是指两个原生质体融合产生的杂种细胞，其中一个细胞的细胞核消失后，两个原生质体的细胞质杂交得到的个体。科研人员利用雄性不育的品种A与可育的品种B通过植物体细胞杂交技术获得了雄性不育的胞质杂种“华柚2号”，制备过程如下图所示，其中GFP（绿色荧光蛋白）基因转入了品种A的细胞核基因组中。经检测，“华柚2号”的细胞核和叶绿体基因来自品种B，线粒体基因来自品种A，下列叙述正确的是（ ） A. 制备原生质体时需用纤维素酶或胶原蛋白酶去除细胞壁 B. 电刺激或Ca2+载体可用于诱导原生质体A和B的融合 C. “华柚2号”的获得说明控制雄性不育的基因可能位于线粒体中 D. 应筛选发绿色荧光的杂种细胞C经植物组织培养技术获得“华柚2号” 10. 精子载体法是以精子作为外源基因载体携带外源基因进入卵细胞，用该方法制备转基因鼠的基本流程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. ①过程中精子获能后细胞膜的流动性增加 B. ②过程采用体外受精技术，受精卵中的遗传物质都来自父母双方 C. ③过程形成的早期胚胎发育到囊胚或原肠胚才能进行胚胎移植 D. ④过程进行胚胎移植前需要对供体和受体进行超数排卵处理 11. 大肠杆菌经溶菌酶和洗涤剂处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。用三种限制酶处理提取的产物，电泳结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取质粒DNA B. 将提取的DNA溶于0.2 mol/L NaCl溶液后，可用二苯胺试剂进行鉴定 C. 凝胶中的DNA分子通过染色，可在紫外灯下被检测出来 D. 根据电泳结果，质粒上没有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位点，有限制酶Ⅲ的切割位点 12. 如图表示利用新冠病毒包膜表面的S蛋白制备疫苗的相关过程，SUC2是酵母菌的蔗糖转化酶基因，其表达产物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成单糖被细胞利用，其中m、n分别是启动子和终止子。下表中是可供选择使用的限制酶及其识别序列和酶切位点。据图表推测，下列叙述错误的是（ ） 限制酶 BamHⅠ NheⅠ NcoⅠ SphⅠ Sau3AⅠ 识别序列和酶切位点 5'-G↓GATCC-3' 5'-G↓CTAGC-3' 5'-C↓CATGG-3' 5'-GCATG↓C-3' 5'-↓GATC-3' A. 过程①所需的酶是逆转录酶和DNA聚合酶 B. 过程②所使用的两种限制酶是Sau3AⅠ和NcoⅠ C. 据图推测，目的基因S转录的模板链最可能是b链 D. SUC2可作标记基因，对导入B的酵母菌进行筛选 13. 细胞内DNA复制时，一条新子链按5′→3′方向进行连续复制，而另1条链也按5′→3′方向合成新链片段一冈崎片段(如图所示)。已知DNA聚合酶不能直接起始DNA新链或冈崎片段的合成，需先借助引物酶以DNA为模板合成RNA引物，DNA聚合酶再在引物的3′—OH上聚合脱氧核苷酸。当DNA整条单链合成完毕或冈崎片段相连后，DNA聚合酶再把RNA引物去掉，换上相应的DNA片段。人体细胞内的DNA复制过程(如图)和体外进行PCR过程(如图)分别如下，则下列叙述中错误的是（ ） A. 引物酶、DNA聚合酶、连接酶都会催化磷酸二酯键的形成 B. 上述两个过程中的DNA聚合酶都只能从子链的5′端→3′端延伸 C. 细胞内DNA复制时只有一条子链可以连续复制，而PCR时所有子链都是连续复制 D. 细胞内DNA复制所需引物是细胞自行合成的，PCR过程需要加入引物，子链合成后引物都会被切掉 14. 目的基因和载体如果用同一种限制酶处理，连接时会出现正反接的情况，为鉴定筛选出的表达载体中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR后，结合电泳技术鉴定，图示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，其中目的基因为长度300bp的片段。下列有关说法错误的是（　　） A. PCR复性温度不宜太低，避免引物错配和模板链形成双链 B. 电泳条带迁移的位置和速度与DNA分子的大小、带电量和构象有关 C. 选取引物甲、丙，扩增出450bp长度片段时，可以说明目的基因正接 D. 选取引物乙、丙，可以判断目的基因是否反接 15. 荧光定量PCR可定量检测样本中DNA含量，其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针并生成荧光分子，即DNA每扩增一次，就有个荧光分子光生成（如图），荧光监测系统随时接收荧光信号变化。下列叙述错误的有（ ） A. 图示引物与胞内DNA复制所用引物的化学本质不同 B. 耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5'→3' C. 一段待扩增的DNA经过4次循环后，等长目标片段所占比例为1/3 D. 反应管内荧光信号到达设定阈值所经历的循环数，与样本DNA浓度呈负相关 16. CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，与特定分子结合后，能抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，从而使机体肿瘤细胞免受T细胞攻击。抗CTLA-4或抗PD-1的单克隆抗体有较好的抗肿瘤效果。科研人员将两种不同的杂交瘤细胞融合得到双杂交瘤细胞（能够悬浮在液体培养基中生长繁殖），可以从培养液中筛选出同时抗CTLA-4和PD-1的双特异性抗体（如图），实验显示疗效更好。下列叙述正确的是（ ） A. 双杂交瘤细胞需要CTLA-4和PD-1刺激，才能产生双特异性抗体 B. 双特异性抗体与肿瘤细胞的结合具有更强的特异性，从而减少副作用 C. 对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，需使用胰蛋白酶处理 D. 双特异性抗体可以靶向作用两种受体分子，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果 17. 单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高等优点，被广泛用作诊断试剂。下图是医学上常用的定量检测抗原含量的“双抗体夹心法”示意图。将过量的固相抗体固定在某种固相载体表面上，加入抗原，再加入酶标抗体，洗脱未结合的酶标抗体，最后加入无色底物，该底物在酶标抗体上酶的催化作用下形成产物，通过一定时间内产物（有色）的量反映抗原量。下列说法错误的是（　　） A. 固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，但两者结构不相同 B. 实验过程所加入的酶标抗体、底物均应过量 C. 反应体系最终呈现的颜色深浅与抗原量呈正相关 D. 制备单克隆抗体过程中，第一次筛选的原理是抗原—抗体杂交技术 18. 下列关于酒精的用法，正确的有几项（ ） ①脂肪鉴定实验中可用50%酒精洗去浮色②DNA粗提取实验中可用95%冷酒精析出DNA③制作果酒果醋实验中可用70%酒精消毒④观察根尖分生区有丝分裂实验中可用无水乙醇直接制备解离液⑤绿叶中色素提取实验中可用无水乙醇提取光合色素 A. 二项 B. 三项 C. 四项 D. 五项 19. 有效微生物群简称EM，是一种新型复合微生物制剂，在我国主要应用于各种有毒的工业废水的处理。EM原液 （微生物处于休眠状态） 中主要代表性微生物有酵母菌、乳酸菌等。为恢复EM各种有效微生物的数量和代谢活性，某生物兴趣小组拟探究EM培养的最优条件，开展了如下实验：①采用不同培养基培养EM，如表1所示； ②每天测量培养基的OD值（与菌悬液浓度正相关），结果如图甲。据此分析，下列说法正确的是（ ） 表1 培养基名称 培养条件 气体条件 pH范围 乳酸菌培养基 A 6.5-7.5 酵母菌培养基 B 4.0-6.5 复合培养基 密闭 6.0 复合培养基 C 注：复合培养基里含有能满足EM 中各种微生物生存所需的营养成分 A. 乳酸菌培养基中含有碳源、氮源、无机盐、水、琼脂等物质 B. 表1中的A、B、C条件分别为密闭、密闭、曝气 C. 培养一段时间后对 C 条件的培养基进行微生物计数，推测同一视野中乳酸菌数量一定多于酵母菌 D. 根据图甲可知，复合培养基 pH6.0、气体条件 C可作为EM 培养的最优条件 20. 安莎霉素主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染。该抗生素是一种产自深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ） 注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落。 A. 经过A处理，试管中大多数放线菌都可产生安莎霉素 B. 在①中进行扩大培养时，接种后需对培养基进行灭菌处理 C. ②和④是完全培养基，③是缺赖氨酸的不完全培养基 D. D菌落不能产生安莎霉素，而E菌落能产生安莎霉素 二、多选题（共15分，每题3分，少选得1分，多选错选不得分） 21. 下图表示胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛。下列相关叙述正确的是（ ） A. 应用1中获得的良种小牛，遗传物质来源于供体1和供体2个体 B. 应用2、3、4所用的受精卵只能来源于体外受精，且精子必需进行获能处理 C. 应用3过程中对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将内细胞团均等分割 D. 应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官，用于器官移植研究 22. 与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列相关表述中不正确的是：（ ） A. 发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵 B. 分离、提纯产物是发酵工程的中心环节。发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身 C. 在发酵工程的发酵环节中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径 D. 通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 23. 为探究枯草芽孢杆菌（好氧微生物）能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者设计了相关实验。取适量番茄灰霉病菌菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片（直径5mm）在枯草芽孢杆菌菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养后测量抑菌圈大小以判定抑菌效果。有关说法正确的是（　　） A. 液体培养枯草芽孢杆菌时，可采用摇床震荡培养 B. 培养过程中抽样检测活菌数量时，可采用稀释涂布平板法 C. 抑菌圈越大，枯草芽孢杆菌产生的抑菌物质的数量越多 D. 培养皿倒置培养可防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 24. 幽门螺杆菌（Hp）感染会引发胃炎、消化性溃疡等多种疾病。研究人员将Hp的Ipp20基因作为目的基因，用限制酶XhoI和XbaI切割，通过基因工程制备相应的疫苗，质粒及操作步骤如图所示。下列相关叙述错误的是（ ） A. 基因表达载体导入之前，可用Ca2+处理大肠杆菌 B. Ipp20基因插入到大肠杆菌的DNA中使大肠杆菌发生了基因突变 C. 培养基A中添加了氯霉素，培养基B中添加了潮霉素 D. 能用来生产Hp疫苗的大肠杆菌在菌落3和5中 25. 除草剂有效成分草甘膦的作用机理是和PEP竞争性结合EPSP合酶，从而扰乱生物体的正常氮代谢。但作为一种非选择性除草剂，草甘膦对农作物同样具有杀伤作用，这大大限制了其在农业生产中的应用，培育抗草甘膦作物将会解决这一难题。下列说法错误的是（ ） A. 长期使用草甘膦除草剂，会导致杂草产生抗除草剂突变，降低除草剂的效果 B. 根据草甘膦的作用机理，可通过导入强启动子使EPSP合酶过量表达获得抗草甘膦作物 C. 可通过蛋白质工程直接替换EPSP合酶个别氨基酸，使草甘膦无法与EPSP酶结合 D. 在培育抗草甘膦作物时，为避免外源基因流入杂草，最好将外源基因插入细胞核基因组 三、非选择题（45分） 26. 人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白l（cTnl）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnl在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnl的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程，见图1.请据图分析回答下列问题： （1）动物细胞培养时，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的_____，以满足动物细胞培养的营养需要。在培养过程中，为了防止有害代谢物的积累，还需要_____，以便清除代谢物。 （2）每隔2周用cTnl作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是_____，最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，常用的化学诱导剂是_____。 （3）①过程使用的是_____（选填“选择”或“鉴别”）培养基，属于_____（选填“固体”或“液体”）培养基。甲、乙、丙中，只含杂交细胞的是_____，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得_____。 （4）单克隆抗体常用于抗原检测，图2是酶联免疫吸附双抗体夹心法的示意图。 据图分析，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，原因是_____。该检测方法中，能不能检测出待测抗原的量，请判断并解释_____。 27. 小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中含多种微生物。酿酒的原理主要是酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精，传统酿造工艺流程如图1所示。 回答下列问题： （1）蒸粮的目的是利于糖化（利用霉菌将淀粉水解）和______。蒸粮结束后，蒸熟并摊晾的原料应______后再加入酒曲，以免杀死菌种。然后需将其移至酒坛，并放置在无菌环境中敞开培养一段时间后，再对酒坛进行______处理后，才可高效地进行酒精发酵。最终检验发酵液样品的蒸馏产物是否含有酒精，可用______溶液进行检测。 （2）已知酵母菌不能直接利用淀粉发酵成酒精，若想使其可直接利用淀粉进行发酵，则应导入分解淀粉所需的多种酶的基因（如Amy基因），从而制备新型酵母菌。如图2表示通过PCR技术进行扩增Amy基因后将其导入到质粒的过程。相关步骤如下： ①扩增目的基因。获得相关DNA后，通过PCR技术进行扩增Amy基因。为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Amy基因时需添加限制酶XhoⅠ的识别序列至①处左端（其中一处）。已知限制酶XhoⅠ识别序列为5'-CTCGAG-3'，则其中一种引物设计的序列是5'-______-3'（填写18个碱基）。目的基因在PCR仪中每一次循环可以分为______→退火（复性）→______。 ②构建基因表达载体。除图中所标出的结构外，作为载体，质粒还需具备______（答出1点即可）。质粒中的启动子是______识别和结合的部位。因启动子具有物种特异性，故在质粒中插入Amy基因，其上游启动子应选择______（A.大肠杆菌启动子 B.乳酸杆菌启动子 C.农杆菌启动子 D.酵母菌启动子）。 ③检测目的基因及其表达产物。已知UGA基因缺陷型酵母菌无法合成尿嘧啶，长时间缺少尿嘧啶，其无法存活，因此UGA常被作为标记基因；尿嘧啶可以使5-氟乳清酸转化为对酵母菌有毒物质。导入目的基因的酵母菌应在______的培养基上筛选培养。由于需要导入多种酶基因，需要多次筛选，因此在导入一种目的基因后，要先切除UGA基因，再重新导入另一种目的基因。切去UGA基因的酵母菌应在______的培养基上筛选培养。 28. 胰岛素可用于治疗糖尿病，如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。据图回答下列问题： （1）要使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异性表达，图中启动子应为_______，能与启动子结合的酶是_______。 （2）为使目的基因与载体正向连接，在设计PCR引物时需添加限制酶识别序列，实际操作时还会在引物的5′端添加保护序列GGG，可起到延长限制酶识别序列一端的碱基数，提高限制酶识别及切割效率的作用。根据以上信息，在上游引物的5′端应添加的序列应为_______。PCR过程中通过控制温度可使DNA复制在体外反复进行，其中将温度调整到72℃的目的是_______。 （3）获得重组质粒后，可通过_______法导入体外受精获得的奶牛受精卵中，移植前需取囊胚中的_______细胞进行性别鉴定，选择性别为雌性的囊胚进行移植。该过程需对代孕母牛进行_______处理，使之与供体的生理状况保持相同。为提高胚胎利用率，胚胎移植前可对胚胎进行_______处理。 29. 亚洲玉米螟、黏虫是造成我国玉米减产的主要害虫。我国科研人员通过图示过程将Bt基因（能够控制合成Bt毒蛋白）转入玉米细胞培育出了抗虫转基因玉米。回答下列问题： （1）用PCR扩增下面的Bt基因的DNA片段： 5'-GACCTGTGGAAGC……CATACGGGATTG-3' 3'-CTGGACACCTTCG……GTATGCCCTAAC-5' 供选择的引物有： ①5'-GACCTGTGGAAGC-3'②5'-CTGGACACCTTCG-3'③5'-GTTAGGCATAC-3④5'-CAATCCCGTATG-3'共四种，应选择______（填字母）。 A. ①② B. ②③ C. ③④ D. ①④ （2）据图分析，为确保目的基因能够与Ti质粒正确连接，形成含有目的基因的重组Ti质粒，科研人员应选用限制酶______切割Ti质粒和含Bt基因的DNA片段。在获得重组Ti质粒后，可将其加入经_______处理的农杆菌；导入重组质粒的玉米细胞经_______成为转基因玉米植株。 （3）为检测转基因玉米是否培育成功，科研人员首先利用_________法检测Bt基因是否成功翻译：在进行个体生物学水平的鉴定时，科研人员将获得的多株转基因玉米进行自交，发现除少数植株的子代均抗虫外，多数植株的子代中均出现了不抗虫植株，统计这些植株的子代中抗虫与不抗虫的比例，发现有3：1和15：1两种情况。出现15：1的原因是_________。 （4）某科研小组在做抗虫棉试验时，虽已经检测出棉花植株中含有抗虫基因，但让棉铃虫食用棉花叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明________，为此，科学家对棉花植株中的Bt毒蛋白基因进行了修饰，结果食用了棉叶的棉铃虫中毒死亡了，从变异类型分析，这种对Bt毒蛋白基因的修饰属于__________。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $