精品解析：福建省福州市闽侯县第一中学2024-2025学年高二下学期5月月考生物试题

闽侯一中2024-2025学年高二生物第二次月考试卷 一、单选题（共25题，每题2分） 1. 微生物的次生代谢物对微生物生长不是必需的，一般是在微生物生长后期形成。产黄青霉菌是一种广泛存在于自然界中的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种，工业上生产青霉素的发酵工程流程如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 青霉素属于次生代谢物，过程①②为使用液体培养基进行扩大培养 B. 过程③使用高压蒸汽灭菌法灭菌时，要将灭菌锅中的冷空气排除充分 C. 发酵罐中发酵时，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等 D. 过程⑤采用过滤、沉淀等方法将产黄青霉菌分离和干燥，即可得到产品 【答案】D 【解析】 【分析】发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配置、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。 【详解】A、青霉素属于次生代谢物，过程①②③都使用液体培养基，过程①②为扩大培养，目的是获得更多菌种，A正确； B、使用高压蒸汽灭菌锅时，若冷空气没有排除充分，则可能压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，从而影响灭菌效果，B正确； C、发酵罐中发酵是发酵工程的中心环节，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程，C正确； D、采用过滤、沉淀等方法将产黄青霉菌分离和干燥，即可得到菌种，青霉素是青霉菌的代谢产物，在发酵后应采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品，D错误。 故选D。 2. 某野生大肠杆菌经X射线照射后，形成了两种不同的氨基酸缺陷型菌株A、B，其在基本培养基上的生长情况及进行相应处理后的生长情况如表所示。下列叙述错误的是（ ） 接种的菌种 基本培养基 实验处理和结果 野生菌株 能生长 不处理 诱变菌株A 不生长 添加组氨酸，能生长 诱变菌株B 不生长 添加色氨酸，能生长 诱变菌株A+B 均能生长 不处理 A. 基本培养基含碳源、氨源、无机盐和水等，配制后需进行灭菌 B. 利用稀释涂布平板法接种菌株后培养皿不能立即进行倒置培养 C. X射线照射可能导致菌株B发生染色体变异，影响色氨酸合成 D. 菌株A和B混合培养时，可能互相提供了对方不能合成的氨基酸 【答案】C 【解析】 【分析】表格分析，野生菌株能在基本培养基上生长，菌株A需要添加组氨酸才能生长，菌株B需要添加色氨酸才能生长，而菌株A和B混合培养时能生长，可能时菌株A和B互相提供了对方不能合成的氨基酸。 【详解】A、培养细菌的基本培养基含碳源、氨源、无机盐和水等，培养基配置后需要进行灭菌，A正确； B、利用稀释涂布平板法接种菌株后培养皿不能立即进行倒置培养，原因是刚接种的菌液还没有完全被培养基吸收，若立刻导致，可能会导致菌液流动，影响最终的分离效果，B正确； C、细菌没有染色体，菌株B不可能发生染色体变异，可能发生了基因突变，C错误； D、菌株A需要添加组氨酸才能生长，菌株B需要添加色氨酸才能生长，而菌株A和B混合培养时能生长，可能时菌株A和B互相提供了对方不能合成的氨基酸，D正确。 故选C。 3. 某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。下列选项不正确的是（　　） A. 菌T可能产生分解纤维素的酶，能够高效催化纤维素分解 B. 淋洗液中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是合成一些氨基酸、核苷酸等含氮物质 C. 可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，在使用该方法时需要注意必须将冷空气充分排除再开始加压 D. 将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。发酵过程中，要始终保持密封状态 【答案】D 【解析】 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。 【详解】A、菌T能够分泌纤维素酶，纤维素酶能将纤维素最终分解为葡萄糖，因此在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，A正确； B、培养基的主要成分：水、碳源、氮源、无机盐，其中氮源主要为合成微生物的细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂），B正确； C、高压蒸汽灭菌法的注意要把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，如果高压锅内的空气未排除或未完全排除，则蒸汽不能达到饱和，蒸汽的温度未达到要求的高度，结果导致灭菌的失败，C正确； D、果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，将酵母菌接种到灭菌后的培养基中进行酒精发酵，酒精发酵需要在无氧的条件下进行，此时拧紧瓶盖的主要目的是制造无氧环境。酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，在发酵过程中密闭，所以需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放出二氧化碳，D错误。 故选D。 4. 安莎霉素主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染。该抗生素是一种产自深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ） （注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落。） A. 经过A处理，试管中大多数放线菌都可产生安莎霉素 B. 在①中进行扩大培养时，接种后需对培养基进行灭菌处理 C. ②和③是完全培养基，④是缺赖氨酸的不完全培养基 D. D菌落能产生安莎霉素，而E菌落不能产生安莎霉素 【答案】D 【解析】 【分析】影印培养法是指确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法。主要操作方法是：用灭菌的丝绒覆盖在一块与培养皿同样大小（或略小）的木制圆柱体上，轻轻地在母种培养皿的菌苔上印一下，把细菌菌落全部转移到丝绒面上，然后将这一丝绒面再印在另外的选择性培养基平板上，获得与原始平板完全相同的接种平板。待培养后，比对各培养皿在相同位置出现相同的菌落，从而筛选出适当的菌株。 【详解】A、基因突变是不定向的，且突变频率很低，紫外线处理后只有极少数放线菌可能成为赖氨酸缺陷型放线菌，能产生安莎霉素，A错误； B、在①中进行菌种的扩大培养时，接种前需对培养基进行灭菌处理，接种后不能灭菌，否则会杀死目标微生物，B错误； C、②和④中所有微生物都能长出菌落，所以②④是完全培养基，③中没有D菌落，说明③具有选择作用，赖氨酸缺陷型放线菌不能在其中生长，所以③是缺少赖氨酸的不完全培养基，C错误； D、D菌落在③中不能生存，在④中可以生存，说明D菌落只能生活在完全培养基中，不能生活在缺赖氨酸的完全培养基中，即D菌落是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，可以产生安莎霉素，而E菌落在③④中均能生存，即这种微生物有无赖氨酸均可生存，所以E菌落不是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，不能产生安莎霉素，D正确。 故选D。 5. 细胞融合技术应用广泛，如图为细胞融合的简略过程。据图分析，下列叙述错误的是（　　） A. 甲形成过程中，a和b需要通过细胞膜接触完成识别和结合 B. 乙形成过程中培养液渗透压略大于细胞质，有助于植物细胞酶解法去壁 C. 将基因型AaBB、aaBb植株的花粉细胞诱导融合可得到4种基因型细胞 D. 丙形成过程中，获得d需经两次筛选，获得抗体检测并克隆产生的阳性细胞 【答案】C 【解析】 【分析】据图分析，图中甲是有性杂家产生的后代，则a、b分别表示精子和卵细胞；乙是植物体细胞杂交产生的后代，则a、b表示两种植物细胞，融合前需要用酶解法去掉细胞壁；丙是单克隆抗体，是效应B细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞分泌的。 【详解】A、甲是有性杂交的后代，其形成过程中a和b需要通过细胞膜接触完成识别和结合，A正确； B、乙是植物体细胞杂交产生的后代，该过程培养液渗透压略大于细胞质，有助于植物细胞酶解法去壁，防止原生质体在低渗溶液中会吸水涨破，B正确； C、若a和b分别为基因型AaBB、aaBb植株的花粉细胞，去壁后两两融合可以得到6种基因型的细胞，C错误； D、单克隆抗体制备过程中至少涉及两次筛选，第一次是利用选择性培养基进行初步筛选出杂交瘤细胞，第二次是利用克隆化培养和抗体检测的方法筛选出既能大量增殖，又能产生所需抗体的杂交瘤细胞，D正确。 故选C。 6. 研究人员以耳朵皮肤成纤维、胎儿皮肤成纤维和卵丘三种细胞分别作为供核细胞进行核移植，研究结果如下表。下列叙述正确的是（ ） 供核细胞 重构胚数（枚） 卵裂率（%） 囊胚率（%） 孵化率（%） 耳朵皮肤成纤维 39 78.0 19.7 50.0 胎儿皮肤成纤维 33 79.4 35.6 63.9 卵丘 50 85.7 38.0 72.2 A. 诱导多只雌性动物超数排卵所饲喂的激素能作用于特定细胞 B. 卵丘细胞和胎儿皮肤成纤维细胞更适合用作核移植的供核细胞 C. 核移植时，所用的卵母细胞应发育至减数分裂Ⅰ中期再去核 D. 激活重构胚时，需要电刺激或PEG诱导细胞进行细胞分裂和发育 【答案】B 【解析】 【分析】哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难)。选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富，可以激活细胞核表达全能性。 【详解】A、超数排卵需要注射促性腺激素，不能饲喂，A错误； B、由表可知，卵丘细胞和胎儿皮肤成纤维细胞的各种参数较高，更适合用作核移植的供核细胞，B正确； C、核移植过程中可用的卵母细胞应发育至减数分裂Ⅱ中期，C错误； D、激活重构胚的过程，需要用物理或化学激活，不能用PEG，D错误。 故选B。 7. 通过体外受精培育小鼠的过程如图。下列相关叙述正确的是（　　） A. ①过程是先用雌激素使雌鼠超数排卵，再从输卵管或卵巢中采集卵子 B. ②过程发生了有性生殖，此过程中常见的变异类型有基因突变和基因重组 C. ③过程是体外胚胎早期发育，④过程是将培养至囊胚或原肠胚的胚胎进行胚胎移植 D. ②过程发生受精作用，受精的标志是观察到两个极体或雌、雄原核 【答案】D 【解析】 【分析】体外受精技术主要包括卵母细胞的采集、精子的获取和受精等步骤，采集到的精子和卵母细胞，需要在体外进行获能处理和成熟培养，才能用于体外受精。①过程代表卵母细胞的采集，②代表受精过程；③代表早期胚胎培养；④代表胚胎移植。 【详解】A、①过程是卵母细胞的采集，此时可以用促性腺激素使雌鼠超数排卵，A错误； B、②代表受精过程，此过程中常见的变异类型有基因突变和染色体变异，基因重组通常发生在减数分裂产生配子的过程中，B错误； C、④过程是胚胎移植，将培养至囊胚或桑葚胚的胚胎进行胚胎移植，C错误； D、②过程发生受精作用，受精的标志是观察到两个极体或雌、雄原核，雌、雄原核融合表示受精完成，D正确； 故选D。 8. 为了更好地了解动物生殖与发育的细节，科学家先体外培养小鼠卵母细胞，让它们转变为拥有类似正常胚胎干细胞特性的孤雌单倍体干细胞。然后使用基因编辑技术，将孤雌单倍体干细胞中的三个基因沉默，使它的细胞核状态发生改变，接近精子细胞核的状态。接下来将这个改造后的细胞注射到另一个卵母细胞内，之后将形成的早期胚胎适时移植到母鼠子宫内，健康的孤雌小鼠就诞生了。下列说法错误的是（ ） A. 孤雌单倍体干细胞中只有一个染色体组，利于研究一些显性基因 B. 在体外培养条件下，孤雌单倍体干细胞可以只增殖而不发生细胞分化 C. 将改造后的孤雌单倍体干细胞注射到另一个卵母细胞内的过程模拟了自然受精 D. 胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 【答案】A 【解析】 【分析】胚胎干细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。 【详解】A、孤雌单倍体干细胞中只有一个染色体组，不含等位基因，利于研究一些隐性基因，A错误； B、在体外培养条件下，孤雌单倍体干细胞可以只增殖而不发生细胞分化，即可以只进行有丝分裂产生更多的细胞，B正确； C、自然受精是指精子与卵细胞结合，而将改造后的孤雌单倍体干细胞（接近精子细胞核的状态）注射到另一个卵母细胞内，模拟了自然受精过程，C错误； D、胚胎移植是胚胎工程的最后一道工序，其实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，D正确。 故选A。 9. 在胰岛B细胞中，当胰岛素原向胰岛素转变的过程中，furin酶可以识别并切除胰岛素原分子中特定的氨基酸序列，从而完成胰岛素的加工，产生具有生物活性的胰岛素。某些糖尿病患者体内合成的胰岛素原结构异常，不能正常完成上述过程。基因治疗该类患者的方法之一是：将胰岛素基因导入胰岛B细胞以外的细胞，同时导入一些调节因子刺激该细胞再生，使之成为能分泌具生物活性胰岛素的新B细胞。欲使胰岛素基因的表达产物在新的B细胞中能被加工，产生生物活性，正确的操作是 A. 导入胰岛素基因时，同时导入furin酶基因 B. 导入胰岛素基因后，加入furin酶 C. 使胰岛素基因的表达产物中含furin酶切位点 D. 改造furin酶基因，使其丧失识别和切除功能 【答案】C 【解析】 【分析】 【详解】真核基因由非编码区和编码区两部分组成，编码区中又分为外显子和内含子。在非编码区有RNA聚合酶的识别位点，是转录的起点。转录生成的mRNA包含了外显子和内含子的遗传信息。根据题干信息，翻译产生的胰岛素原需经过furin加工切除特定氨基酸序列后，才能变为具有生物活性的胰岛素。某些糖尿病患者是因为胰岛素原结构异常，缺乏酶切点不能被修饰，而不是缺乏furin酶。所以，治疗该类患者重要的是使胰岛素基因的表达产物中含furin酶切位点。综上分析可知，C正确，ACD错误。 故选C。 【点睛】 10. 关于现代生物技术相关知识的叙述，其中正确的是（　　） A. 动物细胞培养与植物组织培养均需使用胰蛋白酶处理 B. 将二倍体玉米花粉和二倍体水稻花粉进行细胞杂交获得的植株不可育 C. 限制酶切割DNA分子,从DNA分子中部获取目的基因时,同时有两个磷酸二酯键被水解 D. 将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中能防止基因污染是因为叶绿体基因组不会进入到生殖细胞中 【答案】B 【解析】 【分析】本题综合考查了基因工程、细胞工程、胚胎工程的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力。 【详解】动物细胞培养需要使用胰蛋白酶处理，从而形成单个细胞，植物组织培养不需要使用胰蛋白酶处理，A错误；将二倍体玉米花粉和二倍体水稻花粉进行细胞杂交，获得的植株为异源二倍体，但由于不含同源染色体，故不可育，B正确；DNA是双链，获得一个目的基因，每条链都有两个切口，每个切口处都要断裂掉1个磷酸二酯键，所以2条链4个切口就会有4个磷酸二酯键被水解，C错误；花粉中的精子在形成过程中，丢掉了大部分的细胞质包括叶绿体，但是卵细胞中含有叶绿体基因组，所以科学家设法将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中后，就不会通过花粉转移到自然界中的其他植物，D错误。 【点睛】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体，植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性；动物细胞的培养：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 11. 某兴趣小组研究了培养基中生长素与细胞分裂素含量的比值对烟草愈伤组织分化的影响，得到如表中结果 组别 生长素/（mg/L） 细胞分裂素/（mg/L） 分化状况 甲 2 0．02 分化形成根 乙 2 0．2 不分化 丙 2 0．5 分化形成芽 下列叙述错误的是（ ） A. 愈伤组织细胞在分裂过程中染色体、核仁会出现周期性变化 B. 培养在乙组培养基中的烟草愈伤组织细胞丧失了细胞全能性 C. 两种激素浓度配比的变化会导致愈伤组织细胞出现稳定性差异 D. 细胞分裂素与生长素含量的比值高时有利于愈伤组织分化形成芽 【答案】B 【解析】 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、愈伤组织是植物细胞脱分化后形成的，具有细胞周期，能够继续进行分裂，所以愈伤组织在生长过程中细胞的核膜、核仁会出现周期性变化，A正确； B、培养在乙组培养基中的烟草只是促进愈伤组织的形成，没有丧失细胞全能性，调节适合的情况下仍然可以发育为一个完整的新个体，B错误； C、据表分析，两种激素含量比值的变化会导致愈伤组织出现不同的分化方向，即细胞出现稳定性差异，C正确； D、从题表数据可知，细胞分裂素与生长素含量的比值高时有利于愈伤组织分化形成芽，因为细胞分裂素能促进细胞分裂，D正确。 故选B。 12. 某研究团队成功用亲代猫的腿部皮肤细胞培育了克隆猫“大蒜”。它与亲代猫除在花纹上的几处细微差异外几乎完全相同。下列叙述错误的是（ ） A. 用Ca2+载体法可以促进皮肤细胞与去核卵母细胞融合 B. “大蒜”与亲代猫的细微差异可能是受细胞质基因的影响 C. 不直接用皮肤细胞进行克隆是由于该细胞的全能性受到限制 D. 皮肤细胞核移植到去核卵母细胞后需核重编程以使重构胚正常发育 【答案】A 【解析】 【分析】动物细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为克隆动物。动物细胞核移植技术的原理是动物细胞核具有全能性。克隆动物的遗传物质来自双亲，其核遗传物质来自供核生物，而细胞质基因来自提供细胞质的生物。 【详解】A、在体细胞核移植过程中，用物理方法或化学方法（如电脉冲、钙离子载体、乙醇、蛋白质合成酶抑制剂等）激活受体细胞，使其完成细胞分裂和发育进程，电刺激、聚乙二醇处理可促进皮肤细胞与去核卵母细胞融合，A错误； B、“大蒜”与亲代猫的细微差异可能是受细胞质基因的影响，因为核移植过程使两者的核基因相同，B正确； C、动物细胞的全能性受到限制，所以不直接用皮肤细胞进行克隆，C正确； D、皮肤细胞核移植到去核卵母细胞后需核重编程（以利于细胞核的一系列变化和基因表达分子的开关的启动）以使重构胚正常发育，D正确。 故选A。 13. 现已建立一种简便快捷、适用于诺如病毒常见流行株的胶体金免疫层析检测方法。即用常见流行株GII。4型诺如病毒的衣壳蛋白P颗粒作为抗原利用小鼠制备单克隆抗体1B10（浓度为5mg/mL）和1D6（浓度2.2mg/mL）。利用羊制备羊抗鼠抗体作为质控线组装成胶体金试纸条（见图）。下列说法正确的是（ ） A. 单克隆抗体1B10和单克隆抗体1D6特异性识别同一种抗原 B. 胶体金试纸条上使用的三种抗体由同一种杂交瘤细胞合成并分泌 C. 检测时，在控制线和检测线出现两条色带时，表示结果阴性 D. 胶体金试纸条可以用来检测所有类型诺如病毒感染导致的胃肠炎 【答案】A 【解析】 【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的效应B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高以及可大量制备的特点。 【详解】A、分析题干，单克隆抗体1B10和单克隆抗体1D6都是由GII.4型诺如病毒的衣壳蛋白P颗粒作为抗原制备的，因此它们特异性识别同一种抗原，但作用于不同位点，A正确； B、经筛选后的一种杂交瘤细胞只能合成并分泌一种抗体，B错误； C、检测时，在控制线和检测线出现两条色带时，说明抗原和抗体发生了反应，表示结果阳性，C错误； D、检测时利用的原理是抗原抗体特异性结合，因此胶体金试纸条不可以用来检测所有类型诺如病毒感染导致的胃肠炎，D错误。 故选A。 14. 纸片扩散法是药敏试验中常用的方法。取少量大肠杆菌培养液，均匀涂在培养基上，再放上4片含有链霉素（抗生素）的圆形滤纸，然后在无菌、适宜条件培养12～16 h，滤纸片周围出现抑菌圈。下列叙述正确的是（ ） A. 接种后的平板在培养时的放置应如图1中的②所示 B. Ⅳ纸片上抗生素抑菌效果最好，其上多个菌落均具有链霉素抗性 C. 若将链霉素换成青霉素进行以上实验，则Ⅳ号纸片上仍会出现相应菌落 D. 在图示实验中的固体培养基上可用平板划线法或稀释涂布平板法接种微生物 【答案】B 【解析】 【分析】题图分析：据图可知，图1中为倒平板操作，图2中将①表示平板进行倒置培养，图2中将②表示平板进行正放培养，。图3中Ⅳ号纸片上抑菌圈最大，抗生素的抑菌效果最好，抑菌圈中出现菌落，说明菌种具有链霉素抗性。 【详解】A、利用固体培养基培养微生物时，应将平板进行倒置培养，如图1中的①，A错误； B、据图可知，图2中Ⅳ号纸片上抑菌圈最大，抗生素的抑菌效果最好，抑菌圈中出现菌落，说明菌种具有链霉素抗性，B正确； C、图2中Ⅳ号纸片上，抑菌圈中的菌种具有链霉素抗性，可能不具有青霉素的抗性。将链霉素换成青霉素进行上述实验，则Ⅳ号纸片上的区域可能不会出现相应的菌落，C错误； D、在图示实验中的固体培养基上可用稀释涂布平板法接种微生物，D错误。 15. 小鼠体细胞克隆胚胎着床后胎盘发育显著异常可能是与克隆胚胎中H3K27me3印记基因过度表达有关，H3K27me3印记基因敲除极大提高了体细胞克隆的成功率。科学家分别测量H3K27me3印记基因敲除的克隆小鼠（甲组）、H3K27me3印记基因不敲除的克隆小鼠（乙组）和受精卵来源的小鼠（丙组）的体重和胎盘直径，结果如下图所示。下列相关分析错误的是（ ） A. 克隆胚胎过大可能是克隆胚胎着床后成活率低的原因 B. 克隆胚胎过大的原因可能是克隆胚胎的胎盘过大 C. H3K27me3印记基因过度表达抑制胎盘的发育 D. H3K27me3印记基因的表达产物可能影响早期胚胎滋养层细胞的发育 【答案】C 【解析】 【分析】1、动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。该过程无精卵细胞的结合，属于无性生殖。 2、早期胚胎发育至囊胚期时，细胞逐渐分化。聚集在胚胎一端的细胞形成内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织；而沿透明带内壁扩展和排列的细胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成胎膜和胎盘。 【详解】A、与丙组相比，乙组（含有H3K27me3印记基因的克隆小鼠）体重和胎盘直径均高于丙组，乙组体细胞克隆胚胎着床后胎盘发育显著异常，成活率低，推测克隆胚胎过大可能是克隆胚胎着床后成活率低的原因，A 正确； B、乙组克隆小鼠的体重、胎盘直径均高于受精卵来源的小鼠（丙），说明克隆胚胎过大的原因可能是克隆胚胎的胎盘过大，B正确； C、甲组为H3K27me3印记基因敲除的克隆小鼠，乙组为H3K27me3印记基因不敲除的克隆小鼠，通过图可以观察到乙组的体重和胎盘直径都高于甲组，说明H3K27me3印记基因过度表达会促进胎盘的发育，C错误； D、滋养层细胞会发育为胎盘和胎膜，H3K27me3印记基因的表达产物可能影响早期胚胎滋养层细胞的发育，进而影响了胎盘的发育，D正确。 故选C。 16. M细胞由小鼠胚胎干细胞定向诱导分化而来，将其移植到糖尿病模型小鼠（胰岛细胞被特定药物破坏的小鼠）体内，测定小鼠的血糖浓度如图所示。用胰岛素基因片段制成探针，对小鼠胚胎干细胞和M细胞进行检测，并将结果记录在表中。下列叙述正确的是（ ） 用探针检测细胞的DNA 用探针检测细胞的RNA 胚胎干细胞 M细胞 胚胎干细胞 M细胞 ＋ ① ② ③ 注：“＋”表示能检测到，“－”表示不能检测到 A. 图中结果表明M细胞不具备胰岛B细胞的功能 B. 表中①②③处的结果分别为“＋、－、－” C. 可用胰蛋白酶处理小鼠的早期囊胚以获得胚胎干细胞 D. 实验需用到动物细胞培养、胚胎移植、核酸分子杂交等技术 【答案】C 【解析】 【分析】1、分析题图可知：未移植组血糖浓度不能恢复到正常水平；移植组的血糖浓度能够恢复到正常小鼠的血糖浓度，说明此时小鼠体内存在了降低血糖的机制，而根据动物体内唯一降低血糖浓度的激素为胰岛素，可知M细胞内已经具有了胰岛B细胞。 2、分析题表可知：细胞在分化的过程中，遗传物质（DNA）并不发生改变，只是基因选择性表达，所以两细胞内均能用探针检测到胰岛素基因，但胰岛素基因只在M细胞内转录和翻译，故只能在M细胞内检测到RNA。故表中①②③处的结果分别为“+、-、+”。 【详解】A、分析题图可知：移植组的血糖浓度能够恢复到正常小鼠的血糖浓度，说明此时小鼠体内存在降低血糖的机制，而根据动物体内唯一降低血糖浓度的激素为胰岛素，可知M细胞内已经具有了胰岛B细胞，故图中结果表明M细胞已具备胰岛B细胞的功能，A错误； B、细胞分化过程中遗传物质不变，细胞分化的实质是基因的选择性表达，由A项可知M细胞具备胰岛B细胞的功能，故表中①②③处的结果分别为“+、-、+”，B错误； C、可用胰蛋白酶处理小鼠的早期囊胚以获得胚胎干细胞，C正确； D、实验需用到动物细胞培养、细胞移植、核酸分子杂交等技术，D错误。 故选C。 17. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6PD）有F和S两种类型，分别由一对等位基因XF和XS编码。基因型为XFXS的女性体细胞中的两个X染色体，会有一个随机失活，且这个细胞的后代相应的X染色体均会发生同样的变化。将基因型为XFXS的女性皮肤组织用胰蛋白酶处理后先进行细胞的原代培养，再对不同的单细胞分别进行单克隆培养。分别对原代培养和单克隆培养的细胞进行G-6PD蛋白电泳检测，结果如下图所示。有关叙述错误的是（　　）。 A. 原代培养的细胞中都含有XF基因和XS基因 B. 用胰蛋白酶处理皮肤组织可使其分散成单个细胞 C. 原代培养细胞电泳图有2个条带是因为同时检测了多个细胞 D. 单克隆培养的细胞1、2、4、5、8、9与3、6、7所含基因不同 【答案】D 【解析】 【分析】1、动物细胞培养过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。2、动物细胞培养是动物细胞工程技术的基础。3、动物细胞培养的原理是细胞增殖。 【详解】A、由题意可知，原代培养细胞是基因型为XFXS的女性皮肤组织用胰蛋白酶处理得到的，都含有XF和XS，A正确； B、动物细胞之间的蛋白质，被胰蛋白酶或胶原蛋白酶分解，分散成单个细胞，B正确； C、结合题干，基因型为XFXS的女性体细胞中的两个X染色体会有一个随机失活，故一个细胞中6-磷酸葡萄糖脱氢酶，电泳后只显示一个条带，原代培养的细胞电泳有2个条带，故同时检测了多个细胞，C正确； D、单克隆培养的细胞，来源于皮肤组织细胞的原代培养，是通过有丝分裂获得的，故单克隆培养的细胞1、2、4、5、8、9与3、6、7，所含基因相同，表达的基因不一定相同，D错误。 故选D。 18. F1、F2、R1和R2是扩增基因片段的四种引物，它们与模板链结合的位置如图。M基因可能正向或反向插入质粒中，选用不同引物组合对基因扩增和电泳，可对M基因的插入情况进行鉴定。则可选用的引物组合是（ ） A. F2和R2、F2和R1 B. F1和R2、F2和R1 C. F1和R1、F2和R1 D. F1和R1、F2和R2 【答案】B 【解析】 【分析】分析题图可知，若图中M基因插入方向正确，选择引物F2和R1、F2和R2、F1和R1、F1和R2均可扩增到基因片段。 【详解】若图中M基因插入方向正确，选择引物F2和R1、F2和R2、F1和R1、F1和R2均可扩增到基因片段。若M基因反向插入时，则图示为用F2和R2、F2和F1、R1和F1、R1和R2均可扩增到基因片段。综合分析，应选用F2和R1、F1和R2进行M基因扩增，正向插入时可扩增到片段，反向插入时不能扩增到片段，B正确。 故选B。 19. 滁菊为菊科多年生草本植物，长期营养繁殖易造成病毒积累，导致滁菊花色劣变。某科研小组比较了3种脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒（CVB）和菊花矮化类病毒（CSVd）脱除的效果，结果见下表；下图是对不同试管苗进行RT-PCR（逆转录PCR）后的电泳示意图（引物根据CVB的基因序列设计），下列叙述错误的是（ ） 不同脱毒方法对“滁菊”茎尖脱毒率的影响 脱毒方法 样本存活数 脱除CSVd率 脱除CVB率 茎尖分生组织培养 77 20.78 44.16 热处理结合茎尖培养 71 36.62 63.38 病毒唑结合茎尖培养 71 46.48 49.30 A. RT-PCR技术中用到的酶有逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶 B. 热处理、病毒唑处理后，试管苗存活率下降 C. 试管苗2、5尚未脱毒成功，3、4已脱去CSVd和CVB病毒 D. 只脱除CSVd病毒时，可选择病毒唑结合茎尖分生组织培养 【答案】C 【解析】 【分析】本实验研究的是不同的脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒（CVB）和菊花矮化类病毒（CSVd）脱除的效果，由表格数据可知，热处理结合茎尖培养和病毒唑结合茎尖培养的效果在脱毒率方面均优于单独的茎尖分生组织培养。 【详解】A、逆转录过程需要用到逆转录酶，PCR过程需要用到热稳定DNA聚合酶，A正确； B、热处理和病毒唑处理后，相比于对照组，成活样本数减少，成活率下降，B正确； C 、2、5电泳结果显示标准片段之外的阳性结果，3，4则没有，说明3、4成功脱去CVB病毒，2、5未能脱去CVB病毒，本实验不能确定是否脱去CSVd，因为没有设计CSVd的基因序列，C错误； D、观察表格发现，病毒唑结合基尖培养时，CSVd病毒脱除率最高，适用于只脱除CSVd病毒，D正确。 故选C。 20. 为了得到能高效降解聚乙烯[PE，（C2H4），]的细菌，以解决塑料污染问题，科学家将分离得到的两种细菌YT1和YP1置于含PE的培养液中，并定期检测培养液中PE的剩余量百分比，检测结果如图所示。下列说法错误的是（　　） A. 可将PE作为该培养液唯一的碳源 B. 一般情况下，该培养液的pH应为中性或弱酸性 C. 可用稀释涂布平板法或细菌计数板对细菌进行计数 D. 第30天后两种菌的降解能力差异显著，YP1的降解能力较强 【答案】B 【解析】 【分析】根据题意可知，实验的目的是为了获得高效降解PE的细菌，该培养液应以PE作为唯一的碳源。与含YT1的培养液相比，第30天后含YP1的培养液中PE的剩余量百分比显著降低，说明YP1的降解PE的能力较强。 【详解】A、根据题意可知，实验的目的是为了获得高效降解PE的细菌，故该培养液应以PE作为唯一的碳源，A正确； B、一般情况下，培养细菌的培养液（基）的pH应为中性或弱碱性，B错误； C、稀释涂布平板法、细菌计数板都可以对细菌进行计数，C正确； D、根据图示可知，与含YT1的培养液相比，第30天后含YP1的培养液中PE的剩余量百分比显著降低，说明YP1的降解PE的能力较强，D正确。 故选B。 21. 某杂种植株的获取过程如图所示，下列有关分析正确的是（　　） A. 叶片经消毒后需用流水多次冲洗，以避免消毒剂长时间作用而产生毒害作用 B. 图示①过程采用酶解法获取原生质体时，可用聚乙二醇调节渗透压 C. 图示②过程通过抽真空处理使酶溶液渗入细胞间隙，提高酶解效率 D. 经④过程获得的杂种细胞经鉴定和筛选后进行植物组培，即可获得目标杂种植株 【答案】C 【解析】 【分析】1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。2、过程：（1）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。（2）细胞融合完成的标志是新的细胞壁的生成。（3）植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束。（4）杂种植株的特征：具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质。 【详解】A、叶片经消毒后需用无菌水冲洗，以避免消毒剂长时间作用而产生毒害作用，A错误； B、聚乙二醇是诱导细胞融合的物质，不是调节渗透压的物质，通常加入甘露醇来调节渗透压，B错误； C、为了提高酶解效率，图示②过程可通过抽真空处理，利用负压使酶溶液快速渗入细胞间隙，通过处理，酶解效率会提高，C正确； D、组培可以获得杂种植株，但是基因的表达是相互影响，相互干预，未必能成功获得我们所需要的目标杂种植株，D错误。 故选C。 22. 乳酸乙酯是白酒中重要的呈香物质，由乳酸脱氢酶催化产生，影响白酒品质和风格。科研人员将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因（PD）替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因（L-PG），可获得乳酸乙酯高产菌株，该过程如图所示。下列说法不正确的是（ ） A. 可借助序列数据库（GenBank）等查询L-PG基因的序列和功能 B. 可以利用PCR技术筛选导入了L-PG基因的受体细胞 C. 酵母菌PD基因被替换为L-PG基因的过程中发生了基因重组 D. 电泳鉴定L-PG基因时，无需根据电泳槽阳极至阴极之间距离来设定电压 【答案】D 【解析】 【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。 【详解】A、乳酸脱氢酶基因（L﹣PG）属于目的基因，在基因工程的操作过程中，可借助序列数据库（GenBank）等查询L-PG基因的序列和功能，A正确； B、PCR技术是一项体外扩增基因的技术，依据碱基互补配对原则，可以用于筛选含有L-PG基因的受体细胞，B正确； C、由图可知，通过基因工程技术将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因(PD)替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因(L-PG)，其原理是基因重组，C正确； D、电泳鉴定L﹣PG基因时，需要根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，D错误。 故选D。 23. 下表是几种限制酶的识别序列及切割位点（Y=C或T，R=A或G）。下列相关叙述正确的是（ ） 限制酶 HindⅡ AluI BamHI Sau3AI 识别切割位点 5'-GTY↓RAC-3' 5'-AG↓CT-3' 5'-G↓GATCC-3' 5'-↓GATC-3' A. 限制酶切割一次需切断2个氢键，增加2个游离的磷酸基团 B. 两种限制酶可能识别同一种核苷酸序列，并在特定位点切割 C. AluI切割后的DNA片段只可用T4DNA连接酶连接 D. BamHI和Sau3AI切割形成的片段进行重组后，BamH和Sau3AI均不能识别并切割 【答案】B 【解析】 【分析】限制酶的特点：识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点进行切割，切割后可能形成黏性末端或平末端。 【详解】A、限制酶切割一次需切断2个磷酸二酯键，形成2个新的游离的磷酸基团，A错误； B、两种限制酶可能识别同一种核苷酸序列，并在不同位点切割，B正确； C、AluI切割后形成的是平末端， E.coli DNA连接酶和T4DNA连接酶既可以连接黏性末端，也可以连接平末端，C错误； D、BamHI和Sau3AI切割形成的片段进行重组后，BamHI不一定能识别并切割重组片段，而Sau3AI可识别并切割重组片段，D错误。 故选B。 24. 大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具，人生长激素的基因工程过程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. 经①获得该mRNA的最佳材料是受精卵 B. 通过①②过程，可以构建基因组文库 C. 要检测③⑥过程的产物可分别用PCR技术和抗原—抗体杂交技术 D. ⑤过程要在低温和较高浓度的氯化钙溶液中处理使重组DNA易进入受体细胞 【答案】C 【解析】 【分析】基因工程过程： 1、目的基因的提取； 2、目的基因与运载体结合； 3、目的基因导入受体细胞； 4、受体细胞内基因的表达。 【详解】A、经①获得该mRNA的最佳材料是特定的组织细胞，而不是受精卵，A错误； B、通过①②过程得到cDNA，cDNA所含的基因不是全部基因不能构建基因组文库，B错误； C、要检测③的产物生长激素基因可以用PCR技术扩增，要检测⑥过程的产物可用抗原—抗体杂交技术，C正确； D、⑤过程要在低温和低渗氯化钙溶液中处理，通过增大细菌细胞壁通透性使重组DNA易进入受体细胞，D错误。 故选C。 25. 下列有关植物细胞工程应用的叙述，不正确的是（ ） A. 利用组织培养技术培育脱毒苗，获得具有抗病毒的新品种 B. 利用植物细胞培养获得的紫草素，实现了细胞产物的工厂化生产 C. 利用培养的愈伤组织进行诱变育种，可以提高基因突变率，获得有用的突变体 D. 利用植物体细胞杂交技术，能打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 【答案】A 【解析】 【分析】植物细胞工程技术的应用，植物繁殖的新途径包括微型繁殖作物脱毒，人工种子等作物。新品种的培育如单倍体育种，突变体的利用，细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、因为分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，所以将分生组织(如根尖、茎尖)进行离体培养能获得脱毒植株，但不能获得抗病毒的新品种，A错误； B、组织培养技术除了在农业生产上的应用外，还可广泛应用于另一个重要的领域，即细胞产物的工厂化生产，如利用细胞培养技术可大量获得紫草素，B正确； C、利用培养的愈伤组织进行诱变育种，可以提高基因突变率，获得有用的突变体，C正确； D、白菜和甘蓝不属于同一物种，它们之间存在生殖隔离，因此利用植物体细胞杂交技术培育的“白菜一甘蓝”能够克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍，D正确。 故选A。 二、非选择题（共4大题，共50分） 26. 我国科技工作者发明的维生素C“二步发酵法”生产工艺是世界首创。第一步发酵用醋酸杆菌为菌种，第二步发酵用氧化葡萄糖酸杆菌（“小菌”）和假单胞杆菌（“大菌”）混合菌种。如图为二步发酵法的生产流程，请回答下列问题： （1）为纯化和保存菌种，取适量一步发酵液稀释后用_____法接种在含有碳酸钙粉的培养基上，以_____（填下列选项代号）为最佳指标，分离保存菌种。 A．菌落直径大小 B．溶钙圈大小 C．溶钙圈直径与菌落直径比值 （2）对一步发酵培养液检测发现几乎没有杂菌存在，推测可能的原因是_____。 （3）二步发酵过程中大小菌的菌种数比例会影响产酸率，种液接入发酵罐前需对种液中的大小菌计数。计数所用的培养基除含有与发酵液相同的成分外，还需添加_____。在培养基上，可根据菌落的_____等特征（至少写两个）对大小菌分别计数。 （4）某检测员将种液稀释接种了3个平板，统计假单胞杆菌的菌落数分别是30、100和200，取平均值110．该结果可信度低，原因是_____。 （5）若要尝试固定化混合菌进行二步发酵生产古龙酸，应选择_____法进行固定。结合题意，你认为固定化混合菌操作时要注意哪些方面？_____（答出一点即可）。 【答案】（1） ①. 涂布法 ②. C （2）培养液呈酸性抑制杂菌的生长 （3） ①. 琼脂 ②. 大小、颜色、形状或隆起程度 （4）数据差距太大，重复性差 （5） ①. 包埋法 ②. 大小菌的混合比例、避免包埋方法对菌种活性影响、避免包埋时混入杂菌等 【解析】 【分析】1、一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征，这些特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。 2、固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法(将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上)和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化，而细胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的细胞难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。 【小问1详解】 为纯化和保存菌种，取适量一步发酵液稀释后用涂布法接种在含有碳酸钙粉的培养基上。 以溶钙圈直径与菌落直径比值为检测指标，该值越大说明溶解钙的能力越强，AB错误，C正确。 故选C。 【小问2详解】 分析图可知，一步发酵培养液的pH在4- 5左右，由于培养液呈酸性而抑制杂菌的生长，故一步发酵培养液检测发现几乎没有杂菌存在。 【小问3详解】 固体培养基能用于计数，琼脂作为凝固剂，用于制作固体培养基，因此计数所用的培养基除含有与发酵液相同的成分外，还需添加琼脂。 菌落特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。 【小问4详解】 分析题意可知，统计的3个平板数据值间差距太大，重复性差，该结果可信度低。 【小问5详解】 细胞个大，所以细胞多采用包埋法固定化，因此若要尝试固定化混合菌进行二步发酵生产古龙酸，应选择包埋法进行固定。 由题意“二步发酵过程中大小菌的菌种数比例会影响产酸率”可知，固定化混合菌操作时要注意大小菌的混合比例，同时还应该避免包埋方法对菌种活性影响、避免包埋时混入杂菌等。 27. 研究者用EBV（一种疱疹病毒）感染动物B淋巴细胞，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞，用以解决杂交瘤细胞传代培养中B淋巴细胞染色体丢失的问题。EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感，骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活。下图为该实验操作示意图。请回答下列问题： （1）B淋巴细胞在______中发育成熟，可分布于淋巴结和______（答出一点即可）等处。 （2）HAT培养基的作用是______，Oua的作用是筛选去除______。 （3）灭活病毒诱导细胞融合的原理是______。 （4）乳腺癌为恶性肿瘤，为了验证雌激素会促进人乳腺癌细胞的增殖，可选择的实验材料有已知细胞密度的人乳腺癌细胞悬液、生理盐水、无水乙醇、适宜浓度的雌激素溶液（溶剂为无水乙醇）等。请简要写出实验思路：______。 （注：添加物对培养液的渗透压的影响可以忽略不计；用增殖率反映癌细胞活性，具体检测方法不做要求）。 【答案】（1） ①. 骨髓 ②. 脾脏、扁桃体 （2） ①. 筛选去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞 ②. 未与骨髓瘤细胞融合的EBV转化细胞和自身融合的EBV转化细胞 （3）病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 （4）取已知细胞密度的人乳腺癌细胞悬液分成甲、乙、丙三组 ，甲组加入适量适宜浓度的雌激素溶液，乙组加入等量的无水乙醇，丙组加入等量的生理盐水 ，在相同且适宜的环境中培养一段时间，然后检测各组乳腺癌细胞数量并计算乳腺癌细胞的增殖率 【解析】 【分析】B淋巴细胞在骨髓中发育成熟，可分布于淋巴结和脾脏等处，结合题干HAT培养基的作用主要是为让细胞存活，而乌本苷（Oua）起筛选作用。本题涉及知识点参考如下：单克隆抗体制备时，首先要给小鼠免疫，产生相应的浆细胞，然后将浆细胞与骨髓瘤细胞融合，经过选择培养基两次筛选，最后获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。在单克隆抗体的制备过程中，使用了动物细胞培养和动物细胞融合等动物细胞工程技术。 【小问1详解】 B淋巴细胞在骨髓中发育成熟，可分布于淋巴结和脾脏、扁桃体等免疫器官处； 【小问2详解】 HAT培养基的作用是筛选去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞，充当选择培养基的作用；EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感，所以HAT培养基的作用主要是为让细胞存活，而乌本苷（Oua）起筛选作用，的作用是筛选去除未与骨髓瘤细胞融合的EBV转化细胞和自身融合的EBV转化细胞； 【小问3详解】 诱导细胞融合常见的方式是利用灭活病毒，诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，这种灭活病毒需要满足特定条件并经过科学选择和处理，细胞发生融合后需要检查融合情况； 【小问4详解】 乳腺癌为恶性肿瘤，为了验证雌激素会促进人乳腺癌细胞的增殖，可选择的实验材料有已知细胞密度的人乳腺癌细胞悬液、生理盐水、无水乙醇、适宜浓度的雌激素溶液（溶剂为无水乙醇）等。实验大体思路是通过设置对照实验，并遵循等量原则和单一变量原则，分别加入无水乙醇和雌激素溶液等，培养后比较不同组细胞的增殖率来验证雌激素对乳腺癌细胞增殖的影响，具体实验设计如下：取已知细胞密度的人乳腺癌细胞悬液分成甲、乙、丙三组 ，甲组加入适量适宜浓度的雌激素溶液，乙组加入等量的无水乙醇，丙组加入等量的生理盐水 ，在相同且适宜的环境中培养一段时间，然后检测各组乳腺癌细胞数量并计算乳腺癌细胞的增殖率。 28. 胆碱脱氢酶（beta）在植物体内的作用主要体现在提高植物的耐盐性和耐低温能力上。研究人员通过转基因技术将beta基因导入棉花中（部分过程如图所示），beta基因的表达显著提高了棉花叶片中甜菜碱的含量，进而增强了棉花的耐盐和耐低温能力。回答下列问题： （1）为了获得相同的末端，应用两种限制酶________同时切割目的基因片段和质粒，用限制酶切割目的基因和质粒时，破坏的化学键是_______；与只用一种限制酶酶切相比，采用双酶切的目的在于避免_______。 （2）利用PCR技术对beta基因进行扩增时，为了合成引物需要已知________，且设计的引物序列不能过短，原因是_______。 （3）基因表达载体上具有启动子，其作用为_______；应将beta基因插入到质粒的位置是______。 （4）若要鉴定beta基因是否表达，从分子水平上可以用________的方法。 【答案】（1） ①. Sma I和Pst I ②. 磷酸二酯键 ③. 目的基因自身环化、质粒自身环化以及目的基因反向连接 （2） ①. beta基因两端的部分核苷酸序列 ②. 引物特异性差，容易引起非特异性扩增 （3） ①. RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA ②. T-DNA中 （4）抗原-抗体杂交 【解析】 【分析】基因工程是一种DNA操作技术，需要借助限制酶、DNA 连接酶和载体等工具才能进行。它的基本操作程序包括：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定。 【小问1详解】 观察目的基因和Ti质粒上的酶切位点，要获得相同的末端，应用两种限制酶Sma I和Pst I同时切割目的基因片段和质粒。因为这两种限制酶在目的基因两侧和质粒上都有合适的酶切位点，且能切割出相应的黏性末端或平末端。限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，所以用限制酶切割目的基因和质粒时，破坏的化学键是磷酸二酯键。与只用一种限制酶酶切相比，采用双酶切的目的在于避免目的基因自身环化、质粒自身环化以及目的基因反向连接。若只用一种限制酶切割，目的基因和质粒的两端黏性末端相同，容易出现自身环化现象，且目的基因可能会反向连接到质粒上，而双酶切产生的不同黏性末端可以有效避免这些问题。   【小问2详解】 利用PCR技术对beta基因进行扩增时，为了合成引物需要已知beta基因两端的部分核苷酸序列。因为引物是根据目的基因两端的部分核苷酸序列设计的，这样引物才能与目的基因的特定部位结合，从而进行DNA的扩增。设计的引物序列不能过短，原因是引物序列过短，引物的特异性差，容易与模板DNA中非目的基因的部位结合，导致非特异性扩增，得不到所需的目的基因片段。   【小问3详解】 基因表达载体上具有启动子，其作用为RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的位点，能驱动基因转录形成mRNA，从而实现基因的表达。应将beta基因插入到质粒的T - DNA中。因为Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上，将目的基因插入到T - DNA中，能使目的基因随着T-DNA整合到受体细胞的染色体DNA上，稳定存在并表达。   【小问4详解】 若要鉴定beta基因是否表达，从分子水平上可以用抗原 - 抗体杂交的方法。因为beta基因表达会产生相应的蛋白质，抗原-抗体杂交的原理是抗原和抗体的特异性结合，用特异性抗体可以检测是否存在相应的蛋白质，从而判断beta基因是否表达。 29. 重组PCR技术是一项新的PCR技术，可将原来两个不相关的DNA连接起来，组成一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1基因片段，用重组PCR技术构建了LTB-ST1融合基因。融合基因的制备过程如图所示。回答下列问题： （1）PCR实验中，子链延伸需要在______催化作用下，该酶需要被______（填离子）激活后才能发挥作用。 （2）设计引物时，引物P1与引物P2的碱基序列______（填“能”或“不能”）互补；引物P2与引物P3的碱基序列_______（填“能”或“不能”）部分互补，原因是____________。 （3）DNA子链是从5'端向3'端延伸。为了使杂交链顺利延伸子链，至少需要经过2次循环才能得到用于杂交的目的链L、S，则第2次循环的目的是______________。 （4）杂交链延伸生成LTB-ST1融合基因的过程中，______（填“需要”或“不需要”）加入引物。在图中标出杂交链两条母链的3'端和5'端，______。 【答案】（1） ①. 耐高温的DNA聚合 ②. Mg2＋ （2） ①. 不能 ②. 能 ③. LTB基因和ST1基因能融合 （3）为杂交链延伸子链起始部位提供3'端 （4） ①. 不需要 ②. 【解析】 【分析】PCR 是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与 DNA 复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链结合的2种引物，4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。 【小问1详解】 在PCR过程中，子链延伸时温度需上升到72℃，在耐高温DNA聚合酶的催化下进行，且该耐高温的DNA聚合酶需要被Mg2＋激活后发挥作用。 【小问2详解】 为防止引物的碱基配对影响扩增结果，引物P1与引物P2的碱基序列不能互补。LTB基因和ST1基因能融合的关键是引物P2和引物P3部分碱基能互补配对，从而将两个基因融合在一起。 【小问3详解】 第一步：在扩增 LTB 基因时，第一次循环使用引物 P2，DNA 子链是从5'端向3'端延伸。 第二步：为了使杂交链能顺利延伸子链，需要引物P2的碱基末端提供3'端，这就需要进行第二次循环。第二次循环使用引物 P2和引物P1，得到的子链能为杂交链延伸子链起始部位提供3'端，ST1基因的扩增过程类似。 【小问4详解】 杂交链延伸生成LTB-ST1融合基因的过程中，不需要加入引物，两条母链的起始位置的碱基序列即为引物，可以作为子链合成的引物，为DNA聚合酶提供3'端，杂交链两条母链的3'端和5'端标注如图： 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 闽侯一中2024-2025学年高二生物第二次月考试卷 一、单选题（共25题，每题2分） 1. 微生物的次生代谢物对微生物生长不是必需的，一般是在微生物生长后期形成。产黄青霉菌是一种广泛存在于自然界中的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种，工业上生产青霉素的发酵工程流程如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 青霉素属于次生代谢物，过程①②为使用液体培养基进行扩大培养 B. 过程③使用高压蒸汽灭菌法灭菌时，要将灭菌锅中的冷空气排除充分 C. 发酵罐中发酵时，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等 D. 过程⑤采用过滤、沉淀等方法将产黄青霉菌分离和干燥，即可得到产品 2. 某野生大肠杆菌经X射线照射后，形成了两种不同的氨基酸缺陷型菌株A、B，其在基本培养基上的生长情况及进行相应处理后的生长情况如表所示。下列叙述错误的是（ ） 接种的菌种 基本培养基 实验处理和结果 野生菌株 能生长 不处理 诱变菌株A 不生长 添加组氨酸，能生长 诱变菌株B 不生长 添加色氨酸，能生长 诱变菌株A+B 均能生长 不处理 A. 基本培养基含碳源、氨源、无机盐和水等，配制后需进行灭菌 B. 利用稀释涂布平板法接种菌株后培养皿不能立即进行倒置培养 C. X射线照射可能导致菌株B发生染色体变异，影响色氨酸合成 D. 菌株A和B混合培养时，可能互相提供了对方不能合成的氨基酸 3. 某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。下列选项不正确的是（　　） A. 菌T可能产生分解纤维素的酶，能够高效催化纤维素分解 B. 淋洗液中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是合成一些氨基酸、核苷酸等含氮物质 C. 可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，在使用该方法时需要注意必须将冷空气充分排除再开始加压 D. 将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。发酵过程中，要始终保持密封状态 4. 安莎霉素主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染。该抗生素是一种产自深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ） （注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落。） A. 经过A处理，试管中大多数放线菌都可产生安莎霉素 B. 在①中进行扩大培养时，接种后需对培养基进行灭菌处理 C. ②和③是完全培养基，④是缺赖氨酸的不完全培养基 D. D菌落能产生安莎霉素，而E菌落不能产生安莎霉素 5. 细胞融合技术应用广泛，如图为细胞融合的简略过程。据图分析，下列叙述错误的是（　　） A. 甲形成过程中，a和b需要通过细胞膜接触完成识别和结合 B. 乙形成过程中培养液渗透压略大于细胞质，有助于植物细胞酶解法去壁 C. 将基因型AaBB、aaBb植株的花粉细胞诱导融合可得到4种基因型细胞 D. 丙形成过程中，获得d需经两次筛选，获得抗体检测并克隆产生的阳性细胞 6. 研究人员以耳朵皮肤成纤维、胎儿皮肤成纤维和卵丘三种细胞分别作为供核细胞进行核移植，研究结果如下表。下列叙述正确的是（ ） 供核细胞 重构胚数（枚） 卵裂率（%） 囊胚率（%） 孵化率（%） 耳朵皮肤成纤维 39 78.0 19.7 50.0 胎儿皮肤成纤维 33 79.4 35.6 63.9 卵丘 50 85.7 38.0 72.2 A. 诱导多只雌性动物超数排卵所饲喂的激素能作用于特定细胞 B. 卵丘细胞和胎儿皮肤成纤维细胞更适合用作核移植的供核细胞 C. 核移植时，所用的卵母细胞应发育至减数分裂Ⅰ中期再去核 D. 激活重构胚时，需要电刺激或PEG诱导细胞进行细胞分裂和发育 7. 通过体外受精培育小鼠的过程如图。下列相关叙述正确的是（　　） A. ①过程是先用雌激素使雌鼠超数排卵，再从输卵管或卵巢中采集卵子 B. ②过程发生了有性生殖，此过程中常见的变异类型有基因突变和基因重组 C. ③过程是体外胚胎早期发育，④过程是将培养至囊胚或原肠胚的胚胎进行胚胎移植 D. ②过程发生受精作用，受精的标志是观察到两个极体或雌、雄原核 8. 为了更好地了解动物生殖与发育的细节，科学家先体外培养小鼠卵母细胞，让它们转变为拥有类似正常胚胎干细胞特性的孤雌单倍体干细胞。然后使用基因编辑技术，将孤雌单倍体干细胞中的三个基因沉默，使它的细胞核状态发生改变，接近精子细胞核的状态。接下来将这个改造后的细胞注射到另一个卵母细胞内，之后将形成的早期胚胎适时移植到母鼠子宫内，健康的孤雌小鼠就诞生了。下列说法错误的是（ ） A. 孤雌单倍体干细胞中只有一个染色体组，利于研究一些显性基因 B. 在体外培养条件下，孤雌单倍体干细胞可以只增殖而不发生细胞分化 C. 将改造后的孤雌单倍体干细胞注射到另一个卵母细胞内的过程模拟了自然受精 D. 胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 9. 在胰岛B细胞中，当胰岛素原向胰岛素转变的过程中，furin酶可以识别并切除胰岛素原分子中特定的氨基酸序列，从而完成胰岛素的加工，产生具有生物活性的胰岛素。某些糖尿病患者体内合成的胰岛素原结构异常，不能正常完成上述过程。基因治疗该类患者的方法之一是：将胰岛素基因导入胰岛B细胞以外的细胞，同时导入一些调节因子刺激该细胞再生，使之成为能分泌具生物活性胰岛素的新B细胞。欲使胰岛素基因的表达产物在新的B细胞中能被加工，产生生物活性，正确的操作是 A. 导入胰岛素基因时，同时导入furin酶基因 B. 导入胰岛素基因后，加入furin酶 C. 使胰岛素基因的表达产物中含furin酶切位点 D. 改造furin酶基因，使其丧失识别和切除功能 10. 关于现代生物技术相关知识的叙述，其中正确的是（　　） A. 动物细胞培养与植物组织培养均需使用胰蛋白酶处理 B. 将二倍体玉米花粉和二倍体水稻花粉进行细胞杂交获得的植株不可育 C. 限制酶切割DNA分子,从DNA分子中部获取目的基因时,同时有两个磷酸二酯键被水解 D. 将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中能防止基因污染是因为叶绿体基因组不会进入到生殖细胞中 11. 某兴趣小组研究了培养基中生长素与细胞分裂素含量的比值对烟草愈伤组织分化的影响，得到如表中结果 组别 生长素/（mg/L） 细胞分裂素/（mg/L） 分化状况 甲 2 0．02 分化形成根 乙 2 0．2 不分化 丙 2 0．5 分化形成芽 下列叙述错误的是（ ） A. 愈伤组织细胞在分裂过程中染色体、核仁会出现周期性变化 B. 培养在乙组培养基中的烟草愈伤组织细胞丧失了细胞全能性 C. 两种激素浓度配比的变化会导致愈伤组织细胞出现稳定性差异 D. 细胞分裂素与生长素含量的比值高时有利于愈伤组织分化形成芽 12. 某研究团队成功用亲代猫的腿部皮肤细胞培育了克隆猫“大蒜”。它与亲代猫除在花纹上的几处细微差异外几乎完全相同。下列叙述错误的是（ ） A. 用Ca2+载体法可以促进皮肤细胞与去核卵母细胞融合 B. “大蒜”与亲代猫的细微差异可能是受细胞质基因的影响 C. 不直接用皮肤细胞进行克隆是由于该细胞的全能性受到限制 D. 皮肤细胞核移植到去核卵母细胞后需核重编程以使重构胚正常发育 13. 现已建立一种简便快捷、适用于诺如病毒常见流行株的胶体金免疫层析检测方法。即用常见流行株GII。4型诺如病毒的衣壳蛋白P颗粒作为抗原利用小鼠制备单克隆抗体1B10（浓度为5mg/mL）和1D6（浓度2.2mg/mL）。利用羊制备羊抗鼠抗体作为质控线组装成胶体金试纸条（见图）。下列说法正确的是（ ） A. 单克隆抗体1B10和单克隆抗体1D6特异性识别同一种抗原 B. 胶体金试纸条上使用的三种抗体由同一种杂交瘤细胞合成并分泌 C. 检测时，在控制线和检测线出现两条色带时，表示结果阴性 D. 胶体金试纸条可以用来检测所有类型诺如病毒感染导致的胃肠炎 14. 纸片扩散法是药敏试验中常用的方法。取少量大肠杆菌培养液，均匀涂在培养基上，再放上4片含有链霉素（抗生素）的圆形滤纸，然后在无菌、适宜条件培养12～16 h，滤纸片周围出现抑菌圈。下列叙述正确的是（ ） A. 接种后的平板在培养时的放置应如图1中的②所示 B. Ⅳ纸片上抗生素抑菌效果最好，其上多个菌落均具有链霉素抗性 C. 若将链霉素换成青霉素进行以上实验，则Ⅳ号纸片上仍会出现相应菌落 D. 在图示实验中的固体培养基上可用平板划线法或稀释涂布平板法接种微生物 15. 小鼠体细胞克隆胚胎着床后胎盘发育显著异常可能是与克隆胚胎中H3K27me3印记基因过度表达有关，H3K27me3印记基因敲除极大提高了体细胞克隆的成功率。科学家分别测量H3K27me3印记基因敲除的克隆小鼠（甲组）、H3K27me3印记基因不敲除的克隆小鼠（乙组）和受精卵来源的小鼠（丙组）的体重和胎盘直径，结果如下图所示。下列相关分析错误的是（ ） A. 克隆胚胎过大可能是克隆胚胎着床后成活率低的原因 B. 克隆胚胎过大的原因可能是克隆胚胎的胎盘过大 C. H3K27me3印记基因过度表达抑制胎盘的发育 D. H3K27me3印记基因的表达产物可能影响早期胚胎滋养层细胞的发育 16. M细胞由小鼠胚胎干细胞定向诱导分化而来，将其移植到糖尿病模型小鼠（胰岛细胞被特定药物破坏的小鼠）体内，测定小鼠的血糖浓度如图所示。用胰岛素基因片段制成探针，对小鼠胚胎干细胞和M细胞进行检测，并将结果记录在表中。下列叙述正确的是（ ） 用探针检测细胞的DNA 用探针检测细胞的RNA 胚胎干细胞 M细胞 胚胎干细胞 M细胞 ＋ ① ② ③ 注：“＋”表示能检测到，“－”表示不能检测到 A. 图中结果表明M细胞不具备胰岛B细胞的功能 B. 表中①②③处的结果分别为“＋、－、－” C. 可用胰蛋白酶处理小鼠的早期囊胚以获得胚胎干细胞 D. 实验需用到动物细胞培养、胚胎移植、核酸分子杂交等技术 17. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6PD）有F和S两种类型，分别由一对等位基因XF和XS编码。基因型为XFXS的女性体细胞中的两个X染色体，会有一个随机失活，且这个细胞的后代相应的X染色体均会发生同样的变化。将基因型为XFXS的女性皮肤组织用胰蛋白酶处理后先进行细胞的原代培养，再对不同的单细胞分别进行单克隆培养。分别对原代培养和单克隆培养的细胞进行G-6PD蛋白电泳检测，结果如下图所示。有关叙述错误的是（　　）。 A. 原代培养的细胞中都含有XF基因和XS基因 B. 用胰蛋白酶处理皮肤组织可使其分散成单个细胞 C. 原代培养细胞电泳图有2个条带是因为同时检测了多个细胞 D. 单克隆培养的细胞1、2、4、5、8、9与3、6、7所含基因不同 18. F1、F2、R1和R2是扩增基因片段的四种引物，它们与模板链结合的位置如图。M基因可能正向或反向插入质粒中，选用不同引物组合对基因扩增和电泳，可对M基因的插入情况进行鉴定。则可选用的引物组合是（ ） A. F2和R2、F2和R1 B. F1和R2、F2和R1 C. F1和R1、F2和R1 D. F1和R1、F2和R2 19. 滁菊为菊科多年生草本植物，长期营养繁殖易造成病毒积累，导致滁菊花色劣变。某科研小组比较了3种脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒（CVB）和菊花矮化类病毒（CSVd）脱除的效果，结果见下表；下图是对不同试管苗进行RT-PCR（逆转录PCR）后的电泳示意图（引物根据CVB的基因序列设计），下列叙述错误的是（ ） 不同脱毒方法对“滁菊”茎尖脱毒率的影响 脱毒方法 样本存活数 脱除CSVd率 脱除CVB率 茎尖分生组织培养 77 20.78 44.16 热处理结合茎尖培养 71 36.62 63.38 病毒唑结合茎尖培养 71 46.48 49.30 A. RT-PCR技术中用到的酶有逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶 B. 热处理、病毒唑处理后，试管苗存活率下降 C. 试管苗2、5尚未脱毒成功，3、4已脱去CSVd和CVB病毒 D. 只脱除CSVd病毒时，可选择病毒唑结合茎尖分生组织培养 20. 为了得到能高效降解聚乙烯[PE，（C2H4），]的细菌，以解决塑料污染问题，科学家将分离得到的两种细菌YT1和YP1置于含PE的培养液中，并定期检测培养液中PE的剩余量百分比，检测结果如图所示。下列说法错误的是（　　） A. 可将PE作为该培养液唯一的碳源 B. 一般情况下，该培养液的pH应为中性或弱酸性 C. 可用稀释涂布平板法或细菌计数板对细菌进行计数 D. 第30天后两种菌的降解能力差异显著，YP1的降解能力较强 21. 某杂种植株的获取过程如图所示，下列有关分析正确的是（　　） A. 叶片经消毒后需用流水多次冲洗，以避免消毒剂长时间作用而产生毒害作用 B. 图示①过程采用酶解法获取原生质体时，可用聚乙二醇调节渗透压 C. 图示②过程通过抽真空处理使酶溶液渗入细胞间隙，提高酶解效率 D. 经④过程获得的杂种细胞经鉴定和筛选后进行植物组培，即可获得目标杂种植株 22. 乳酸乙酯是白酒中重要的呈香物质，由乳酸脱氢酶催化产生，影响白酒品质和风格。科研人员将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因（PD）替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因（L-PG），可获得乳酸乙酯高产菌株，该过程如图所示。下列说法不正确的是（ ） A. 可借助序列数据库（GenBank）等查询L-PG基因的序列和功能 B. 可以利用PCR技术筛选导入了L-PG基因的受体细胞 C. 酵母菌PD基因被替换为L-PG基因的过程中发生了基因重组 D. 电泳鉴定L-PG基因时，无需根据电泳槽阳极至阴极之间距离来设定电压 23. 下表是几种限制酶的识别序列及切割位点（Y=C或T，R=A或G）。下列相关叙述正确的是（ ） 限制酶 HindⅡ AluI BamHI Sau3AI 识别切割位点 5'-GTY↓RAC-3' 5'-AG↓CT-3' 5'-G↓GATCC-3' 5'-↓GATC-3' A. 限制酶切割一次需切断2个氢键，增加2个游离的磷酸基团 B. 两种限制酶可能识别同一种核苷酸序列，并在特定位点切割 C. AluI切割后的DNA片段只可用T4DNA连接酶连接 D. BamHI和Sau3AI切割形成的片段进行重组后，BamH和Sau3AI均不能识别并切割 24. 大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具，人生长激素的基因工程过程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. 经①获得该mRNA的最佳材料是受精卵 B. 通过①②过程，可以构建基因组文库 C. 要检测③⑥过程的产物可分别用PCR技术和抗原—抗体杂交技术 D. ⑤过程要在低温和较高浓度的氯化钙溶液中处理使重组DNA易进入受体细胞 25. 下列有关植物细胞工程应用的叙述，不正确的是（ ） A. 利用组织培养技术培育脱毒苗，获得具有抗病毒的新品种 B. 利用植物细胞培养获得的紫草素，实现了细胞产物的工厂化生产 C. 利用培养的愈伤组织进行诱变育种，可以提高基因突变率，获得有用的突变体 D. 利用植物体细胞杂交技术，能打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 二、非选择题（共4大题，共50分） 26. 我国科技工作者发明的维生素C“二步发酵法”生产工艺是世界首创。第一步发酵用醋酸杆菌为菌种，第二步发酵用氧化葡萄糖酸杆菌（“小菌”）和假单胞杆菌（“大菌”）混合菌种。如图为二步发酵法的生产流程，请回答下列问题： （1）为纯化和保存菌种，取适量一步发酵液稀释后用_____法接种在含有碳酸钙粉的培养基上，以_____（填下列选项代号）为最佳指标，分离保存菌种。 A．菌落直径大小 B．溶钙圈大小 C．溶钙圈直径与菌落直径比值 （2）对一步发酵培养液检测发现几乎没有杂菌存在，推测可能的原因是_____。 （3）二步发酵过程中大小菌的菌种数比例会影响产酸率，种液接入发酵罐前需对种液中的大小菌计数。计数所用的培养基除含有与发酵液相同的成分外，还需添加_____。在培养基上，可根据菌落的_____等特征（至少写两个）对大小菌分别计数。 （4）某检测员将种液稀释接种了3个平板，统计假单胞杆菌的菌落数分别是30、100和200，取平均值110．该结果可信度低，原因是_____。 （5）若要尝试固定化混合菌进行二步发酵生产古龙酸，应选择_____法进行固定。结合题意，你认为固定化混合菌操作时要注意哪些方面？_____（答出一点即可）。 27. 研究者用EBV（一种疱疹病毒）感染动物B淋巴细胞，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞，用以解决杂交瘤细胞传代培养中B淋巴细胞染色体丢失的问题。EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感，骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活。下图为该实验操作示意图。请回答下列问题： （1）B淋巴细胞在______中发育成熟，可分布于淋巴结和______（答出一点即可）等处。 （2）HAT培养基的作用是______，Oua的作用是筛选去除______。 （3）灭活病毒诱导细胞融合的原理是______。 （4）乳腺癌为恶性肿瘤，为了验证雌激素会促进人乳腺癌细胞的增殖，可选择的实验材料有已知细胞密度的人乳腺癌细胞悬液、生理盐水、无水乙醇、适宜浓度的雌激素溶液（溶剂为无水乙醇）等。请简要写出实验思路：______。 （注：添加物对培养液的渗透压的影响可以忽略不计；用增殖率反映癌细胞活性，具体检测方法不做要求）。 28. 胆碱脱氢酶（beta）在植物体内的作用主要体现在提高植物的耐盐性和耐低温能力上。研究人员通过转基因技术将beta基因导入棉花中（部分过程如图所示），beta基因的表达显著提高了棉花叶片中甜菜碱的含量，进而增强了棉花的耐盐和耐低温能力。回答下列问题： （1）为了获得相同的末端，应用两种限制酶________同时切割目的基因片段和质粒，用限制酶切割目的基因和质粒时，破坏的化学键是_______；与只用一种限制酶酶切相比，采用双酶切的目的在于避免_______。 （2）利用PCR技术对beta基因进行扩增时，为了合成引物需要已知________，且设计的引物序列不能过短，原因是_______。 （3）基因表达载体上具有启动子，其作用为_______；应将beta基因插入到质粒的位置是______。 （4）若要鉴定beta基因是否表达，从分子水平上可以用________的方法。 29. 重组PCR技术是一项新的PCR技术，可将原来两个不相关的DNA连接起来，组成一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1基因片段，用重组PCR技术构建了LTB-ST1融合基因。融合基因的制备过程如图所示。回答下列问题： （1）PCR实验中，子链延伸需要在______催化作用下，该酶需要被______（填离子）激活后才能发挥作用。 （2）设计引物时，引物P1与引物P2的碱基序列______（填“能”或“不能”）互补；引物P2与引物P3的碱基序列_______（填“能”或“不能”）部分互补，原因是____________。 （3）DNA子链是从5'端向3'端延伸。为了使杂交链顺利延伸子链，至少需要经过2次循环才能得到用于杂交的目的链L、S，则第2次循环的目的是______________。 （4）杂交链延伸生成LTB-ST1融合基因的过程中，______（填“需要”或“不需要”）加入引物。在图中标出杂交链两条母链的3'端和5'端，______。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $