项目1 任务1 细菌的检查（3）（课件）-《畜禽疫病防治》（高教版第三版）同步精品课堂

项目一 任务1 细菌的检查（3） 第三版 《畜禽疫病防治》 教学目标 一 1、掌握实验室常用仪器的使用方法。 2、了解沙门菌生化试验及结果判断。 3、熟悉细菌标本片的制备和染色方法。 4、知道常用培养基的制备方法。 5、了解细菌的分离培养及形态观察。 6、掌握病料的采集、保存和送检方法。 知识目标 教学目标 一 1、能够独立完成实验室常用仪器的操作。 2、能够制备细菌标本片并进行染色。 3、能够制备常用培养基。 4、能够进行细菌的分离培养并观察形态。 5、能够采集、保存和送检病料。 技能目标 教学重难点 二 1、实验室常用仪器的正确使用方法。 2、细菌标本片的制备及染色方法。 3、常用培养基的制备。 4、细菌的分离培养及形态观察。 教学重点 教学重难点 二 1、沙门菌生化试验及结果判断。 2、实验操作中的无菌操作技术。 3、培养基的配制及灭菌技术。 教学难点 导入新课 三 同学们，如果一头牛突然死亡，我们怀疑是某种细菌感染，但肉眼无法直接看到细菌，我们该如何确定具体是哪种细菌，并判断是否具有传染性？ 要完成细菌的鉴定，我们需要哪些工具？需要经历哪些步骤？ 新知讲授 四 一 、实验室常用仪器的使用 沙门菌生化试 验及结果判断 (一)材料准备 电热恒温培养箱、电热干燥箱、高压蒸汽灭菌器、电冰箱、电动离心机、电热恒温水浴箱等。 (二)人员组织 将学生分组，每组5～10人并选出组长，在各实验中组员轮流担任组长，负责操作分工，各组分别练习使用仪器。 任务实施： 新知讲授 四 (三)操作步骤 1. 电热恒温培养箱 2. 电热干燥箱 3. 高压蒸汽灭菌器 任务实施： 新知讲授 四 3. 高压蒸汽灭菌器 使用方法 (1)加适量水于灭菌器外筒内，使水面略低于支架，将灭菌物品包扎好放入内筒筛板上。 (2)器盖盖上时，必须将器盖腹侧的放气软管插入消毒内筒的管架中，然后对称扭紧六个 螺栓，检查安全阀、放气阀，并使安全阀呈关闭状态，放气阀呈打开状态。通电后，待水蒸气从 放气阀均匀冒出时，表示锅内冷空气已排尽，然后关闭放气阀继续加热，待灭菌器内压力升至约 1×10⁵Pa(121.3℃), 开始计时，维持20～30min(通过控制电源维持),即可达到灭菌的目的。灭菌时，锅内空气应完全排净，灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表1-1-3。 (3)灭菌完毕，停止加热，待压力自动降至零时才能开盖取物。 (4)手提式高压蒸汽灭菌器灭菌之后，可放出器内的水，并擦干净。 任务实施： 新知讲授 四 任务实施： 压力数 全部空气排出时的温度/℃ 2/3空气排出 时的温度/℃ 1/2空气排出 时的温度/℃ 1/3空气排出时 的温度/℃ 空气全不排出 时的温度/℃ MPa kg/cm² 1b/in² 0.03 0.35 5 108.8 100 94 90 72 0.07 0.70 10 115.6 109 105 100 90 0.10 1.05 15 121.3 115 112 109 100 0.14 1.40 20 126.2 121 118 115 109 0.17 1.70 25 130.0 126 124 121 115 0.21 2.10 30 134.6 130 128 126 121 表1-1-3  灭菌锅留有不同分量空气时，压力与温度的关系 新知讲授 四 4. 电冰箱 电冰箱主要由箱体、制冷系统、自动控制系统和附件四大部分构成。实验室中常用以保存培养基、药敏片、病料以及菌种、疫苗、诊断液等生物制品。 5. 电动离心机 实验室常用电动离心机沉淀细菌、血细胞、虫卵和分离血清等，较多使用低速离心机，转速 可达4000r/min 。 常用倾角电动离心机，其中管孔有一定倾斜角度，使沉淀物迅速下沉。上口有盖，确保安全，前下方装有电源开关和速度调节器，可以调节转速。 6. 电热恒温水浴箱 电热恒温水浴箱为镀镍的铜或不锈钢制成的水浴箱，加热快、耗电少，箱前有“电源”和 “加热”指示灯(一红一绿),并装有温度调节器，自37～100 ℃可以调节定温，箱侧有一水龙 头，供放水用。水浴箱主要用于蒸馏、干燥、浓缩、温渍化学药品及血清学试验。 任务实施： 新知讲授 四 (四)注意事项 1. 电热恒温培养箱 (1)电热恒温培养箱必须放置于干燥、平稳处。 (2)使用时，随时注意温度计的指示温度是否与所需温度相同。 (3)除了取放培养物开启箱门外，尽量减少开启次数，以免影响恒温。 (4)工作室内隔板放置试验材料不宜过重、过密，以防影响热空气对流。底板为散热板 其上切勿放置物品。 (5)温箱内禁止放入易挥发性物品，以免发生爆炸。 任务准备： 新知讲授 四 2. 电热干燥箱 (1)灭菌时箱内放置物品要留空隙，保持热空气流动，以利于彻底灭菌。 (2)灭菌过程中如遇温度突然升高，箱内冒烟，应立即切断电源，关闭排气小孔，箱门四周用湿毛巾堵塞，杜绝氧气进入，火则自熄。 3. 高压蒸汽灭菌器 (1)螺栓必须对称均匀旋紧，以免漏气。 (2)内简中的灭菌物品，不可堆压过紧，以免妨碍蒸汽流通，影响灭菌效果。 (3)灭菌时间和压力必须准确可靠，操作人员不能擅自离开。 (4)注意安全，在高压灭菌密封液体时，如果压力骤降，可能造成物品内外压力不平衡而 炸裂或液体喷出。 任务实施： 新知讲授 四 4. 电冰箱 (1)电冰箱应放置在干燥通风处，避免日光照射，远离热源，离墙10 cm 以上，以保证对 流，利于散热。(2)冷冻室冰霜较厚时，按化霜按钮或切断电路，进行化霜，霜融化后清洁整理。(3)箱内存放物品不宜过挤，以利于冷空气对流，使箱内温度均匀。 (4)箱内保持清洁干燥，如有霉菌生长，断电后取出物品，经消毒后，方可使用。 5. 电动离心机 (1)离心前，离心管需加上套管放天平上配平，然后对称放入离心机中。 (2)离心时如有杂音或离心机震动，立即停止使用，进行检查。 6. 电热恒温水浴箱 (1)使用时必须先向箱内加水。(2)不可加水过多，以浸过加热容器为宜。(3)使用完毕，待水冷却后，必须放水擦干。 任务实施： 新知讲授 四 二 、细菌标本片的制备及染色方法 (一)材料准备 酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美蓝染色液、革兰染色液、瑞氏染色液、染色缸、染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜纸、细菌培养物(大肠杆菌、葡萄球菌等)、细菌病料、无菌镊子和剪刀、玻璃铅笔等。 (二)人员组织 将学生分组，每组5～8人，组员轮流担任组长，负责本组操作分工。 任务实施： 新知讲授 四 (三)操作步骤 1. 细菌标本片的制作 (1)涂片标本的制作 细菌涂片标本的制作如图1-1-19。 ① 涂片② 干燥涂片③ 固定涂片 (2)血液推片和组织抹片的制作 ① 血液推片的制作 ② 组织抹片的制作 任务实施： 新知讲授 四 2. 常用的细菌染色方法 细菌染色的一般步骤如图1-1-19。常用的细菌染色方法如下： (1)美蓝染色法 (2)革兰染色法 (3)瑞氏染色法 任务实施： 新知讲授 四 3. 常用染色液的配制 (1)碱性美蓝染色液 (2)革兰染色液 ① 草酸铵结晶紫溶液 ② 卢戈碘液 ③ 石炭酸复红稀释液 (3)瑞氏染色液 (4)吉姆萨染色液 任务实施： 新知讲授 四 任务实施： 新知讲授 四 (四)注意事项 (1)根据所检材料不同，选择合适的标本片制备方法。 (2)细菌染色时，严格控制所加试剂与样品的作用时间。 (3)水洗时水流不能直接冲洗样品涂面。 (4)严格遵守病原微生物实验室的生物安全要求。 任务实施： 新知讲授 四 三 、常用培养基的制备 (一)材料准备 高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、营养琼脂培养基(或伊红美蓝琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基、SS琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基)等。 (二)人员组织 将学生分组，每组5～8人，组员轮流担任组长，负责本组操作分工。 任务实施： 新知讲授 四 (三)操作步骤 1. 营养琼脂培养基 以营养琼脂培养基的制备过程为代表说明固体培养基的制备过程，其他固体培养与之相似。 基本程序：计算→称量→溶化→倒平板或倒试管分装→灭菌→无菌检验→保存备用。 任务实施： 新知讲授 四 任务实施： 新知讲授 四 任务实施： 新知讲授 四 将合格的平板培养基和试管培养基放入冰箱，在0～4 ℃中保存备用(图1-1-26)。 注意：SS 琼脂培养基不需要灭菌。 任务实施： 新知讲授 四 2. 血液琼脂培养基 3. 肉汤培养基 4. 半固体培养基 (四)注意事项 (1)正确量取营养琼脂粉和蒸馏水。 (2)加热溶化时，注意边加热边搅拌，沸腾时不能让营养琼脂溢出，防止烫伤。 (3)固体培养基灭菌完毕，将平板或试管拿出放于桌面，凝固前不要移动。 任务实施： 新知讲授 四 任务实施： 四 、细菌的分离培养及形态观察 (一)材料准备 电热恒温培养箱、病料、实验用菌种、营养琼脂培养基、肉渣汤(庖肉)培养基、接种环、酒精灯、烙刀、镊子、剪子等。 (二)人员组织 将学生分组，每组5～8人，组员轮流担任组长，负责本组操作分工。 新知讲授 四 (三)操作步骤 1. 细菌的分离培养 (1)平板划线分离法 (2)倾注分离法 2. 厌氧菌的分离培养 任务实施： 新知讲授 四 3. 细菌基本形态的观察 (1)纯培养物标本片 如葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、炭疽杆菌(图1-1-29)。 (2)血片或组织触片如丹毒杆菌、炭疽杆菌、巴氏杆菌(图1-1-30 至图1-1-33)。 标本片准备两种， 一是纯培养的细菌涂片，二是血片或组织触片。先认识纯培养细菌的形态、大小和排列，然后学会观察血片或组织触片中的细菌，为将来细菌病的实验室诊断打下基础。 任务实施： 新知讲授 四 任务实施： 新知讲授 四 (四)注意事项 (1)接种环使用前后要及时灭菌。 (2)以腕力在平板表面轻轻地分区划线，不能用力过大，以防划破培养基。 (3)划线完毕，用记号笔做好标记，倒置于37 ℃温箱中培养。 任务实施： 新知讲授 四 五 、病料的采集、保存、送检 (一)材料准备 煮沸消毒器、外科刀、外科剪、镊子、试管、平皿、广口瓶、包装容器、注射器、采血针头、脱脂棉、载玻片、酒精灯、火柴、保存液、来苏尔、新鲜动物尸体等。 (二)人员组织 将学生分组，每组5～8人，组员轮流担任组长，负责本组操作分工。 任务实施： 新知讲授 四 (三)操作步骤 1. 病料的采集 (1)采集病料的时间 (2)采集病料器械的消毒 (3)各种组织脏器病料的采集 2. 病料的保存 (1)各材料常用的保存剂 (2)几种保存剂的配制方法 3. 病料的包装和送检方法 (1)病理材料送检单 (2)病料的包装和送检 任务实施： 新知讲授 四 (四)注意事项 (1)采集病料前需作尸体检查，怀疑是炭疽时，不可解剖，应先由末梢血管采血涂片镜检。 操作时应特别注意，勿使血液污染它处。排除炭疽后方可采集有病变的组织器官。 (2)采集病料应无菌操作， 一套器械与容器，只能采集或容装一种病料，不可用其再采其 他病料或容纳其他脏器材料。 (3)病料保存时注意配备并使用合适的保存剂。 任务实施： 师生互动 五 1. 细菌生长曲线各时期有什么特点? 2. 根据物理状态可将培养基分为哪几类?各类培养基有哪些用途? 3. 某养猪场发现猪丹毒疑似病例，如何采样送检进行细菌学检查? 课堂小结 六 布置作业 七 单项选择题 1、关于电热恒温培养箱的操作，下列描述正确的是（ ） A. 红灯亮表示通电升温，绿灯亮表示恒温 B. 箱内物品堆放需紧密以节省空间 C. 温度稳定时红绿灯交替亮起 D. 可随意放入挥发性试剂 2、干热灭菌箱的操作要点是（ ） A. 物品堆满箱体以高效灭菌 B. 灭菌后立即开门取出物品 C. 160℃维持2小时，关闭箱门后需开启活塞通气孔 D. 温度降至60℃以下方可开门 【答案】C 【解析】温箱工作时，红绿灯交替亮起表明温度达到设定值并进入恒温状态。红灯通常指示升温（新型号可能相反），绿灯指示恒温，需参考具体型号说明。挥发性物品严禁放入，以防爆炸。 【答案】D 【解析】玻璃器皿灭菌后需降温至60℃以下取出，防止骤冷炸裂。灭菌时需留空隙保证热空气流通，160℃维持2小时，升温至60℃前应开启活塞排出冷空气。 布置作业 七 判断题 1、高压灭菌结束后压力未降至零即可开盖取物。（ ） 2、美蓝染色液新鲜配制时效果最佳。（ ） 3、病料采集需在动物死亡后24小时内完成。（ ） 【答案】错。压力未归零时开盖会导致蒸汽喷溅、物品炸裂或人员烫伤，必须等待压力表降至零位。 【答案】错。陈旧美蓝液氧化后染色力更强，新鲜配制反而效果较差。 【答案】错。死后6小时内病原微生物活性易保持，超过此时限可能因腐败影响检测准确性。 布置作业 七 简答题 1、对比干热灭菌与高压蒸汽灭菌的适用场景及操作差异（至少3点）。 【答案】 原理差异： 干热灭菌通过高温氧化作用杀灭微生物（160℃维持2小时）；高压蒸汽灭菌利用饱和蒸汽高温高压灭活微生物（121.3℃维持20-30分钟）。 适用对象： 干热灭菌适用于玻璃器皿、金属器械等耐高温干燥物品；高压蒸汽灭菌用于培养基、手术敷料等耐湿热物品。 操作关键： 干热灭菌需开启活塞排出冷空气，降温至60℃后取物防炸裂；高压蒸汽灭菌需完全排尽冷空气，压力归零后开盖。 感谢观看 $$