专题突破集训10 综合PCR的基因工程问题-【金榜题名】2026年高考生物一轮总复习课时提分集训

专题突破集训10 综合PCR的基因工程问题 一、选择题：每小题给出的四个选项中只有一个符 A.图中两条杂交链的获得至少需要经过1次扩 合题目要求。 增循环 1.(2025·成都期末)某科研小组采用PCR技术构 B.图中杂交链延伸成ND1一CD融合基因的过 建了红色荧光蛋白基因(dsred2)和a淀粉酶基 程不需要添加引物 因(amy)的dsred2一amy融合基因，其过程如图 C.PCR反应体系中须加人耐高温的DNA聚合 所示，其中引物②和引物③中部分序列（黑色区 酶，该酶主要在延伸过程起作用 域)可互补配对。下列说法错误的是 ( D.该融合蛋白应是利用抗体部分特异性的识别 red2基因 wmy#内 人大肠癌细胞并将酶带到靶部位 3三引 引物必己3 3已引制@ 引物④户3 3.(2025·衡水模拟)科学家在人类的基因中发现 55 rR扩地 36种病毒基因的片段，并提取相关基因片段进 CR扩州 5' 3' 5' 1 行扩增及电泳鉴定。下列叙述正确的是() 3' 5 3'■ 1疑合 A.用PCR仪进行扩增时，扩增缓冲液中一般要 添加Ca2+ 」5 杂交链 B.基因片段扩增过程中，脱氧核苷酸会依次加到 马惩仰 引物的5'端 3 15 C.电泳时，在凝胶中基因片段的迁移速率与 dre2-amy融合基因 DNA分子的构象无关 A.利用PCR技术扩增基因时不需要解旋酶来 D.将基因片段与凝胶载样缓冲液的混合液加入 打开DNA双链 凝胶加样孔时，要留一个加样孔加标准参 B.不能在同一反应体系中进行dsred2基因和 照物 amy基因的扩增 4.(2025·南京期末)琼脂糖凝胶电泳是分离和鉴 C.dsred2基因和amy基因混合后只能得到一种 定PCR产物的常用方法，下列相关叙述正确 类型的杂交链 的是 () D.杂交链延伸得到dsred2一amy融合基因的过 A.待分离DNA片段越大，配制的琼脂糖溶液浓 程不需要加引物 度越低 2.科学家将抗人大肠癌单克隆抗体基因(ND一1) B.向凝固的凝胶中加入没过凝胶的电泳缓冲液 与酵母胞嘧啶脱氨酶基因(CD)融合，在大肠杆 后，小心拔出梳子 菌中成功地表达了单链抗体与酶的融合蛋白，这 C.将PCR产物与电泳缓冲液混合，用微量移液 类蛋白的疗法称为由抗体介导的酶解前药疗法 器缓慢注入加样孔内 (ADEPT)。ND1一CD融合基因的构建方法如 D.接通电源后，待核酸染料前沿迁移接近凝胶 图所示。下列有关叙述错误的是 ( 边缘时，停止电泳 ND-1基因 CD基因 5.实验小组利用PCR技术获得了含有目的基因的 引物P DNA片段，并用图示的限制酶对其进行酶切，再 用所得DNA片段成功构建了基因表达载体，下 PCR1 引物P2 PCR2 引物P3 PR扩增产物问收 列叙述错误的是 限封睡SpeI5-ACTACT-3NMeI5'-CCTAcC-3'CGI5'-GCGC-3 积别序划 3'-TGATCA-5 3-CGATCG-5' 3-CGCC-5 杂交链5 书地获得S-ACCTACCAATCCI·ATGAACTGCGCA-3 f的DNA片段3'-TCGATCGTTACGAG....TACTTGACGCCT-5' ①，切 ND-1CD融合米因 5'-CTAGCAATGCTC....ATGAACTGCG-3' 3-GTTACCAC...TACTTGAC-5 566 A.PCR技术中用到的一个引物的前8个碱基序 A.0条 B.1条 列为5'-TGCGCAGT-3 C.2条 D.3条 B.步骤①中用到的限制酶是SpeI和CfoI 7.(2025·盐城模拟)PCR引物的3'端有结合模板 C.用步骤①中的限制酶对质粒进行酶切，可至 DNA的关键碱基，5'端无严格限制，可用于添加 少获得2个DNA片段 限制酶切点等序列。下列相关叙述错误的是 D.可用E.coliDNA连接酶或T4DNA连接酶连 ( 接酶切后的目的基因片段和质粒 6.(2025·芜湖月考)我国科学家用诱变剂处理野生 mmmmmImmmmn 51 35 型油菜，获得了新生叶黄化的隐性突变体。由于 iT山 一个碱基对的改变，导致该突变基因上出现了一 A.图中两条子链合成一定都是从5端向3'端 个限制酶B的酶切位点（如图所示）。该突变体与 延伸 野生型杂交得F1,F1自交得F2,提取F2植株的基 B.图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长 因组DNA→PCR→回收扩增产物→用限制酶B 处理→电泳，电泳后得到的条带数最多为( 短有关 ) C.用图示引物扩增5次后，可以产生22个目标 酶阝的酶切位点 引物 产物 D.PCR每次循环都消耗引物和原料，在实验过 引物 程中需要及时补充 8.基因定点突变的目的是通过定向地改变基因内一个或少数几个碱基来改变多肽链上一个或几个氨基酸。 该技术是蛋白质工程的重要技术，图示为利用PCR技术进行定点突变的流程，相关叙述错误的是() 拟突变位点 3 引物1 引物4 5 3'入5 3'5 53 5 第一阶段 引物2 引物3 3 5'A 3 混合、变性后，杂交 33 第二阶段 首先使用酶①使其延仲，然后 使用引物X和吗引物Y进彳行PCR 5 3 注：引物1和引物3的突起处代表与模板不能互补的突变位点，而这两条引物有部分碱基（包括突变位 点)是可以互补的。 A.酶①应为耐高温DNA聚合酶，引物X和Y为引物2和4 B.将四种引物置于同一个反应系统中同时进行第一个阶段的反应 C.第一阶段PCR过程中需要进行两次循环才能得到两种所需的DNA片段 D.通过该技术获得的突变基因可以表达出原来自然界不存在的蛋白质 9.常规PCR只能扩增两引物之间的DNA序列，要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列，可用反向 PCR技术。反向PCR技术扩增的原理如图所示。下列叙述错误的是 (未知序列)（已知序列）（木知序列）酶切 m ，5'A 环化 PCR 引物 ZZZZ▣ A.酶切阶段，L中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列 B.环化阶段，可选用E.coliDNA连接酶或T4DNA连接酶 C.图中引物，应选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对 D.PCR扩增，将温度调至72℃的目的是使引物与模板链结合 567 10.油菜的绿叶对黄化叶为显性。与绿叶基因相 C.利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的 比，黄化叶基因有一个碱基对发生了改变，从而 未知序列 出现一个限制酶B的酶切位点。为鉴定某绿叶 D.通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定 油菜的基因型，提取其DNA进行了PCR和电 T-DNA的插人位置 泳。下列叙述正确的是 13.反转录PCR又称逆转录PCR(RT-PCR),是 以mRNA为模板进行的特殊PCR,过程如图。 A.需设计能与目的基因结合的双链DNA作为 下列相关叙述正确的是 PCR引物 5 mRNA B.应在PCR扩增体系中添加Mg2+,以激活 引物P1 DNA聚合酶 3' 5'单链cDNA C.可适当降低复性的温度，以减少PCR中非特 引物P2② 异性条带的产生 双链：DNA D.用酶B作用后进行电泳，若有2条电泳条带 5+04= 可判断为杂合子 A,过程①除图示条件外还需反转录酶和扩增 二、选择题：每小题给出的四个选项中有一个或多 缓冲液等 个符合题目要求。 B.过程②形成的双链cDNA中含外显子和内 11.PCR技术不仅可用于基础研究，还适用于日常 含子等片段 的临床诊断、法医学调查和农业生物技术研究。 C.过程③中子链沿着模板链的5'→3'方向延伸 采用PCR方法进行研究，其反应程序如图所 D.RT一PCR技术可应用于是否被RNA病毒 示。下列叙述不正确的是 感染的检测 ) 三、非选择题 预定性 变性 14.(2025·山东济宁三模)PCR技术的实用性和 94℃，1min94℃，308 延伸 极强的生命力其使成为生物科学研究的一种重 !后延仲 复性/72℃，30s72℃，1mi品 要方法，极大地推动了分子生物学以及生物技 58℃，308 术产业的发展。下面是两个具体实验中的 35次循环 PCR技术应用，请根据资料回答下列问题： A.PCR反应中的每次循环的变性、复性、延伸 (1)重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸 链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多 过程，都涉及氢键的形成或断裂 次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。利用 B.延伸和后延伸过程中需要DNA聚合酶、 该技术可以实现基因的定点诱变。它在需要诱 ATP和4种核糖核苷酸 变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引 C.PCR应用于临床病原菌检测，所用的引物应 物，然后分别与引物a和引物d做PCR,这样得 该能与病原菌的两条单链DNA特异性结合 到的两个PCR引物产物都带有变异基因，并且 D.后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 彼此重叠，再将重叠部位进行重组PCR就能得 12.农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插 到诱变PCR产物，如图所示： 入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将如 引物a 引物c ●X 图中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以 PCR1 引物b 引物d 此环为模板，利用PCR技术扩增出TDNA插入 PCR2 位置两侧的未知序列，以此可确定TDNA插入 产物AB 的具体位置。下列说法正确的有 产物CD 5 未知序列引物①T-DNA引物② 未知序列 AB上链 限制悔切点引物③ 引物④ 限制酶切点 CD下链 延伸 注：子链从引物的3端开始延 A.PCR利用了DNA的热变性原理 B.进行PCR扩增需要的酶有解旋酶、引物、四 突变产物AD 种脱氧核苷三磷酸(dNTP) 图1 568 ①PCR扩增DNA的过程中，引物a、b、c、d中， (1)分别进行PCR扩增片段F1与片段F2时， PCRI应选择图1中引物 ,大量扩 配制的两个反应体系中不同的有 增突变产物AD则应选择引物 ,扩增程序中最主要的不同是 ②重叠延伸PCR通过 实现 定点突变。PCR1和PCR2需要分别进行的原 因是 (2)将PCR产物片段与线性质粒载体混合后， 在重组酶作用下可形成环化质粒，直接用于转 ③若正常基因可被限制酶DpnI识别并切割， 化细菌。这一过程与传统重组质粒构建过程相 特定位点突变后的基因不能被DpnI识别，请 比，无需使用的酶主要有 设计实验思路鉴定上述过程获得的突变产物 AD是否为突变基因： (3)转化后的大肠杆菌需采用含有抗生素的培 (2)反向PCR可用于扩增未知序列，其原理如 养基筛选，下列叙述错误的有 下图所示。下图链状DNA分子内侧是已知序 A.稀释涂布平板需控制每个平板30~300个 列，外侧为未知序列。 菌落 翻器 已知序列 翻 已如列 物1 引物a B.抗性平板上未长出菌落的原因一般是培养基 图1mA分了 温度太高 5r理 上物入 3' 口物a 1于零列 C.抗性平板上常常会出现大量杂菌形成的菌落 TT44未别序列、 图2经oR1鲜阳的DNA分子 图3乐化的INA分子 D.抗性平板上长出的单菌落无需进一步划线 ①不直接在图2中DNA分子的两端设计引物 纯化 并进行扩增，原因是 (4)为了验证平板上菌落中的质粒是否符合设 ②图3中环状DNA进行PCR的过程中，沿引 计，用不同菌落的质粒为模板、用引物F1一F 物A延伸子链的延伸方向是 (填 和F2一R进行了PCR扩增，质粒P1~P4的扩 “顺时针”或“逆时针”)，PCR产物 增产物电泳结果如图2。根据图中结果判断 (填“含有”或“不含”)EcoR I的酶切位点。 可以舍弃的质粒有 15.(2023·江苏高考节选)为了将某纳米抗体和绿 色荧光蛋白基因融合表达，运用重组酶技术构 bp M24 建质粒，如图1所示。请回答下列问题： 3000 2000— 拟构建的 720bp 1390hp SN i006✉ 甚因结构 EGFP AnBI 注：GP灾光蛋白 500= Anl1纳米抗休。 F1-F 了2片段 (R引物 250= 1片段 S牌 及月的产 国 T7启动」 2-R 物片段 四 FI-R 50 基因重红 AePl 线性质粒 载体 克降流程 图2 PCR产物片段' 重组酶 线性裁体膨合 注 ◆表示PCR引物： (5)对于PCR产物电泳结果符合预期的质粒， 转化 扣问背其方槟表示 通常需进一步通过基因测序确认，原因是 同源序列。 图1 56913.BC[A、将目的基图导入黄花高愈伤组织细胞常用的方法是 段，C正确：D、图中形成的是黏性末端，E.oliDNA连接醉只能 农杆首转化法，A正确：B、图中P为启动子，位于基因的首端， 连接钻性末沸，T4DNA连接晦既可连接平末端，又可连接钻性 作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动转录，B错误： 末瑞，所以可用E.oliDNA连接醉或T4DNA连接酶违接酶切 C,图中还缺少的结构是标记基因，标记基国的作用是鉴别受体 后的日的基因片段和质粒，D正确。故选B。门 细胞中是否含有目的叁因，从而将含目的基因的细胞肺选出 6.D[野生型基国电泳结果有一条带，叶黄化的基园经过限制酶 来，C错误：D、要检测目的基因是否导入冠瘦红织细胞的染色 B处理后，据图分析基因被切成两段长度不一的片段，根据电泳 体IDNA上，可采用PCR技术，D正确。故选BC,] 的原因是根据DNA的长度不一，将DNA进行以条带的形式区 14.【答案】(1)5'GATCGATC 分开来，则F:中条合子既有野生型基因，也有叶黄化的基因，故 (2)BamH1和EcoR I20kb,45kb样品2 电泳条带数目应为3条，D符合题意。故选D。 (3)潮霉素草甘膦抗性基因没有表达 7,D[A、Tag DNA聚合醉只能从引物的3'端开始延仲DNA子 【解析】(1)PCR扩增后的苹甘裤抗性基因包含引物，切割的 链，所以两条子链合成一定都是从5瑞向3瑞延仲，A正确 时候也要包含引物，需要把限制酶识别序列加在5端，扩增产 B、图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长短、碱基组成等 物用BamHI酶到BglⅡ酶进行切割，产生的黏性末端分别是 有关，引物长度越长成者GC含量越高，则复性的温度设置总高， 5-GATC-35-GATC-3 B正确：C、经过5次循环后会产生2一32个，其中只有2个 (2)用BmH1酶到BglⅡ酶切制产生相同的黏性末端，保证正 DNA分子含有最初的模板链，另仅含有第一次复制产生的单链 向连接用的是EoRI酶和Bam日I酶，正向连接的重组质粒 参与形成的DNA分子有8个，因此经过5次复制产生等长的目 会被切去20十25=45kb长度的片役，反向连接的重组质粒会 的基因片段32一10=22个，C正确：D、PCR所需要的引物和原 被切去20kb长度的片段，电泳疑胶中，DNA分子量越大，在凝 料是一次性添加的，在实验过程中不需要补充，D错误。故 胶中收到的阻力越大，迁移距离感短，正向连接的重组质粒被 选D。] 切制后两个片段的大小介于反向连接的重组质粒被初割后两 8.BA、酶①要在高温条件下延仲DNA,所以酶①为时高温的 个片段的大小之间，说明样品2是所需的基因表达载体 DNA聚合酶，由图可知，要得到两条链一样长的DNA单链，应 (3)由图可知，卡那写素抗性基因不在TDNA片段中，剃写素 速捧引物2和引物4，所以引物X和Y应孩为引物2和4，A正 抗性基因在T-DNA片段中，可随T-DNA转移并整合到被侵乘 确：B,引物3和引物1是完全互补的，不能放入同一个体系，B辑 的脚胞的桑色体DNA上，从而使含目的基国的甘蓝植株有抗 误：C,第一阶段要获得的DNA是目的DNA的一段，且不是中间 潮霉素的抗性，所以能在含潮幂素的培养基上筛选含目的基因 的一段，故雾要两次循环可以获得，已正确：D、通过该技术可莪 的甘蓝植株，故步骤①的培养基中添加潮露素，以使痛选出含 得突变的基因，城基因的产物可能是自然界原来不存在的，D正 目的基因的甘蓝枝株。转基因甘蓝植株有一部分具有草甘降 确。故远B。 抗性基园，但没有表现出抗草甘降性状，原因可能是草甘降祝 9.D[A,在酶切阶段，已知序列L.中不能含有酶切时所选限制酶 性基因没有表达，从而使得相应性欢没有表现出来 的识别刷序列，不然会将已知序列I切断，造成序列识别混乱，A 15.【答案】(1)脱氧核苷酸逆（反）转录 正确：B、T:DNA连接酶或E,iDNA连接酶都可以用来连接 (2)8305'XhoI和HindⅢ便于重组DNA分子的筛选 黏性末端，因此环化阶段，可选用E.oliDNA连接酶或T,DNA 连提酶，B正确：C、PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因 (3)TP和P4 【解析】(I)研究人员提取mRNA,然后以mRNA为模板，在 两条链的3端通过碳基互补配对站合，为保证延种的是已知序 列两侧的未知序列，应该选择引物1和引物4，且二者间不能互 逆（反）转汞醉的作用下合成cDNA 补配对，C正确，D、PCR扩增中，将温度调至72℃的日的是时高 (2)PCR过程中第一、二轮德环合成的子链长度均不同，根据半 温的DNA聚合酶将四种脱氧核苷酸，根据碱基互补配对原测合 保留复制特点可知，前两轮循环产生的四个DNA分子的两条 成新的DNA链，D错误。故选D。] 链均不等长，第三轮循环产生的DNA分子存在等长的两条横 1O.B[A、PCR引物一餐是单链DNA,A错误：B,PCR过程中周 #酸链，如分折中的图示。由于第三轮出现两个等长的DNA, 到了援冲液，缓冲液中一般要添加Mg+用于激活DNA聚合 经过第四次复制产生4个等长的DNA,另外有图个DNA通过 酶，B正确：C,复性温度过低会导致引物与模板链的结合不牢 第四次复制也会分别一个等长的DNA,即总共8个。 固，会增加PCR中非特异性条帝，C错误：D、用酶B作用后进 wm 行电浓后得到的2条条带，说明DNA分子上有1个酶B的酶 切位点，且酶切后得到2个片段，若为杂合子，则同时含B、b,酶 肝 m+A一人 切后可获得3个片段，故由结果可判断其为纯合子，D错误：故 选B.] 。m 11,B[A、PCR反应中的每次循环的变性过程DNA分子双链解 螺旋，氢键断裂：复性时，引物与模板链通过形成氢键相钻合 筇一轮循环 第一轮循环 廷伸过程中，游离的胝氧核糖核荇酸与模板链通过形成氢键相 第一轮循环 站合，游离的厩氧核苷酸固定在模板链上，每次循环的变性 PCR技术的原理是DNA双链复制，使DNA以指数形式增加， 复性，延仲过程都重复以上过程，因此，都涉及氢键的形成或断 复制n次后，产生的DAN总数为2"，护增过程中，需要引物与 裂，A正确：B、PCR技术合成的是DNA分子，四此，延仲和后延 DNA单链结合，再进行链的延伸，所以产生的子代DNA链中 仲过程中需要DNA聚合酶，4种脱氧核糖核苷酸，不需要ATP (四种dNTP即可以提供能量又可以原林)，B错误：C、PCR技 都有引物，因此PCR过程中需要消耗引物为21一2个，复制 术中所使用的引物是根据一较已知的病原菌的基因序列合成 4次，雾要引物为30个。 的，因此，PCR应用于临床病原荫检测，所用的引物能与病原菌 引物的设计在5'，选择限制酶时应当保证目的基因插入位，点在 的两条单链DNA特异性站合，C正确：D、后是仲过程是为了让 启动子和终止子之间并保征日的基因的正确连接，应当在 引物延伸完全并让单链产物完全褪火形成双链结构，可使目的 XhoI,HindⅢ、VdeI中远择两种，由于NdeI在质粒上还有 基因的扩增更加充分，D正确。故选B。] 一个酶切位，点，国此不能进择NdeI,应当选择Xh。I和Hind 12.ACD[A、PC利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来 Ⅲ两种限制醉。 控制DNA双链的解聚与结合，A正确：B,进行PCR扩增需要 杭性基因为质粒上的标记基因作用为便于重组DNA分子的 热稳定DNA聚合酶(TagDNA聚合酶)，但不需要解旋酶，B错 防选 误：C,DNA的两条链反向乎行，子链从引物的3端开始延伸， (3)结合免我共沉淀技术的原理及表中结果可知，TP和P4是 则利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列，C正确： 与T蛋白相互作用的蛋白质。 D,基国有特定的硫基序列，通过与受体细胞的基周组序列比 专题突破集训10 对，即可确定T-DNA的墙入位置，D正确。故选ACD。 13.AD[A,图中①过程是逆转录过程，诚过程需要逆转录酶的催 1.C2.A3.D4.A 化，此外还需扩增媛冲液等，A正确B,经逆转最得到的单链 5.B[A、由于引杨只能引导予链从5到3.根据碱基互补配对原 :DNA中不含内拿子等非转录区段，故过程四形成的双链©DNA 则，其中一个引物序列为5'一TGCGCAGT一3'，A正骗：B,根据 中也不含内含子，B错误：C,过程③中，在引物作用下，DNA聚 三种酶的酶切位点，左侧的钻性末端是使用NhI切割形成的， 合酶从引物3端开蛤延伸DNA链，即子链沿着模板使的3'5 右边的黏性末端是用CfI切制形成的，B错送：C、周步骤①的 方向延仲，C错误：D,RT一PCR是将RNA的反转最和cDNA 醉对载体进行醉切，使用了NheI和CfoI进行切割，根据他们 的聚合酶链式扩增相结合的技术，可应用于是否被RNA病毒 的识别位，点以及原本DNA的序列，切割之后至少获得了2个片 感柒的检测，D正确，故迭AD。门 700 14.【答案】(1)a和bn和d在引物b和c上引入突变引物b:6.D[A,凝胶中的DNA分子经荣色后，对波长为300nm的紫外光 和引物c可以互补配对，导致引物失效用限制酶DpnI分别 吸救性强，可在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，A正确：B、 处理正常基因和上述过程获得的突变产物AD,然后进行电泳： 染色质用擅酸酶处理后，得到的是都分水解的染色质，但若先将染 若上述过程获得的突变产物AD的电冰条带只有一条且大于正 色质中的蛋白质去掉后，用同样的核酸酶处理，则得到长度随机的 常基因的电泳条带，则为突变基因 DNA片段，说明染色质中的蛋白质可能对DNA具有保护作用，B (2)DNA两端序列未知，无法设计引物逆时针含有 正确：C、柒色质是由一定长度的核小体为基本单位构成的，核小 【解析】(1)①PCR扩增DNA的过程中，新合成的两条单链延 体的组成成分是蛋白质和DNA,其基本单位是税氧核苷酸和黛基 仲方向相反，根据图中引物的方向可知，P℃R]应选择引物a和 酸，C正确：D、在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、 b,得到产物AB。PCR2应选择引物c和d,得到产物CD。突变 DNA分子的大小和构摩等有关，故当DNA分子处于不同构象时， 产物AD扩增选择的引物是8和d。重登是仲时，可以分刷以 其在琼脂糖凝胶中的移动速率是不一样的，D错误。 AB上链和CD下链为引物进行延仲，所以不需要引物。 7.C[A,用AI预测新型蛋白质的基因结构依据的原理是中心法 ②重叠延仲PCR通过在引物b和c上引入突变实现定点突变， 则，从蛋白质结构反推出氨基酸序列，再反推出相应悬因序列，A 引物b和c分别和第一代DNA的两条单链的对应碱基互补，则 正确：B、对蛋白质的改造是通过改造或合成基因来完成的，B正 其上的突变位，点的碱基应互补配对。由于引物b和引物C可以 确：C、启动子和终止子为非篇码区，故由氨基酸序列推理的基因 互补配对，导致引物失效，所以PCR1和PCR2需要分别进行 序列中不包含启动子和终止子，C错误：D,因为一种氨基酸可能 ③据题意可知，若正常基因可被限制酶DI识别并切割，特 对应多种密码子（简并性），故用蛋白质的急基酸序列雏测的 定位，点突变后的基周不能梳DPnI识别，图此要鉴定获得的突 RNA编码序列有多种可能，D正确。故选C。 变产物AD是否为突变基因，实验设计思路为：用限制醉DnI 8.B[A、蛋白质工程的模作流程与中心法则的方向相反，A错误： 分别处现正常基因和上迷过程获得的突变产物AD,然后进行 B、蛋白质工程是对现有蛋白质进行改造，或制造一种断的蛋白质， 电泳：若上述过程获得的突变产物AD的电泳条带只有一条且 最终通过基因改造或合成新基因来完成，B正确：C、对干扰素进行 大于正常基固的电浓条带，则为突变基因。 改造需要从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，C错 (2)①利用PCR技术扩增日的基图的前提是要有一段己知目的 误：D、蛋白质工程不需要改变蛋白质分子的所有章基酸序列， 基因的核苷酸序列作为引物，由于该D入NA分子两瑞的配氧核 通过蛋白质工程，将干扰素结构上的两个半能魚酸改为丝氨酸，就 苷酸序列未知，故无法设计引物，所以不能直接在图】中DNA 可以使其保存半年，而活性不受影响，D错误。故选B。门 分子的两瑞设计引物并进行扩增。 9,A[A,氨基酸的排列顺序是由基因决定的，因此完成气基酸的 ②据图中未知序列的位置可知，图3中环状DNA进行PCR的 替换需要通过改造基因实现，A正确：B,该成采培育了新品种 过程中，沿引物A运时针延仲子链，沿引物：顺时针延仲子链 而不是新物种，B错误：C、经蛋白质工程数造后的粘草杆菌蛋白 才能扩增到来知序列，由于城基互补配对，环化后的DNA分子 酶的基因发生了改变，国此经蛋白质工程改造后的枯草杆菌露 含有EoRI的切割位点，财PCR产物含有ERI的酶初 白酶活性提高这一性状可以逢传，C错误：D、蛋白质工程是在深 位点 入了解蛋白质分子的结构与功能关系的基础上进行的，虽然合 15.【答案】(1)模板，引物引物的设计 成了改造的基因，但它最终要达到的目的是改造现有蛋白质或 (2)限制酶、DNA连接酶 (3)ABC 制造新的蛋白质，满足人类的需求，D错误。故选A] (4)P3.P4 1O.D[A、动物知胞没有细胞壁，因此鸡血细胞相对于莱花细胞 (5)电泳只能检测DNA分子的大小（长度），无法确定待检测 更容易吸水张破，A正确：B,图①搅掉的日的是加速吸水后的 DNA分子的碱基序列 细胞破碎，因此力度和速度较大，图③搅拌的目的是使析出的 【解析】(1)PCR反应进行的条件：引物、骑，dNTP、模板和缓 DNA辘绕在玻璃棒上，搅拌时力度小、速度缓，B正确：C,DNA 冲液（其中需要Mg2)。分别进行PCR扩增片段F1与片段 不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用 这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离，C正确：D、图① F2时，配制的两个反应体系中不同的有模板（片段F1、片段 甲试管中加入的是2mol/L.NaC1和二苯胺试剂，流水浴后不会 F2)、引物。P℃R过程需要两种引物，能分别与目的基因两条健 的3'端通过碱基豆补配对结合。引物设计是决定PCR反应成 出现颜色变化，D错误。故达D。 败的最主要因素。(2)传统重如质粒构建需要使用限制性内切 11,ABC[AB,据图可知，因启动子在左侧，转录从左向右，可以在 核酸酶（限制酶）切割质粒，使其其有与目的基因相可的钻社未 Gata3基因转录后，使GFP基因转录，而翻译方向从mRNA的 端，之后再用DNA连接酶将目的基因和质经连接成重组质粒， 5'一3'，Ga1a3蛋白在GFP蛋白的左侧，所以翻译时先合成 将PCR产物片段与线性质粒载体混合后，在重组酶的作用下可 Gaa3蛋白，再合成GFP层白，A、B正确：C、若用引物1和引物 形成环化质复，不需要使用限制性内切核酸醉（限制酶） 3进行PCR,杂合子和Gata3一GFP基因纯合子都能扩增出相 (3)转化后的大肠杆菌需采用含有抗生素的培养基筛选，用稀 应的片段则不能区分杂合子和纯合子，C正确：D、整合GFP基 释涂布平板法韩远时，首落数可能低于30，八错误：培养基冷却 因后，核敢片段变长，2号个体只有大片段，所以是Gatn3一GFP 后才接种，故抗性平板上未长出菌落不是因为培养基温度太 基因纯合子·4号个体只有小片饺，是野生型，D错误。故 高，B错误：转化后的大肠杆菌需采用含有抗生素的培养基筛 选ABC.] 选，一般含有重组质粒的大肠杆菌才能发展为首落，故不会出 12.AC[A、蛋白质工程技术中的操作对象是基因，不是蛋白质，A 现大量杂菌形成的菌落，C错溪，稀释涂布平板法和平板划线法 错误：B、蛋白质工程是指以蛋白质分子的钻构规律及其生物功 均为分离她化细菌的方法，用稀释涂布平板法接种后在抗性平 能的关系作为基础，通过基国修饰或悬因合成，对现有蛋白质 板上长出的单菌落无需进一步划线饶化，D正确，(4)EGFP为 进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活 720bp,AnB1为390bp,二者的总大小为720+390=1100 的需求，B正确：C、图中①表示转录过程，转录的模板是DNA (p),用引物F1一F和F2一R进行PCR扩增，其大小接近于 的模板链，形成的mRNA与模板DNA方向相反：②表示翻译 P1,P2,根据图中结果判断，可以舍弃的质粒有P3、P4。(5)琼 过程，翻译的模板是转录形成的mRNA,所以两个过程方向相 脂糖凝胶电泳技术仅能用于分析待检测DNA分子的大小，无 反，C错误：D,蛋白质工程是从④开始的，D正确。故进AC,门 法确定待检测DNA分子的碱基序列，因此对于PR产物电深 13,A[A,实脸【中，取洋葱研磨液的上清液，由于DNA不溶于 结果精合预期的质粒，通常需进一步通过基因测序确认 酒精溶液，加入等体积冷酒精后析出粗捉取的DNA,A正确： B、实验I中，将丝状物溶于2mol/L的NaCI溶液后加入二苯 课时提分集训62 胺试剂，在沸水浴条件下，DNA遏二苯胺会被兼成蓝色，用于鉴 1.B2.B3.D4.B 定DNA,B辑送：C、实验Ⅱ中，PCR实验所需的枪头，蕊够水等 5.C[A.由题可知，植魚酸与AK,DHDPS结合，抑制它们的活性 必须进行高压灭菌处理，移液器不需要进行高压蒸汽灭菌处 从而使反应速卓下降，属于负反馈调节，A正确：B、根据题意“将 理，C错溪：D,实验Ⅱ中，将扩增得到的PCR产物进行琼脂糖凝 AK中第352位苏急酸变成异亮复酸，DHDPS中第104位天冬 胶电泳，应先加样后接通电源，D错溪。故选A。门 酰胺变成异亮氯酸”，可知上述操作为蛋白质工程，蛋白质工程 14.【答案】(1)蛋白质工程基因工程 的实质是改造相应基因来实现，B正确：CD、将AK中第352位 (2)①④②⑤③ 苏氨酸变成弄亮氧酸，DHDPS中第104位天冬酰胺变成异亮氨 (3)G/鸟嘌呤C/胞嘧啶 酸，会导致改造后的AK和DHDPS的空间结构改变，与赣意酸 (4)引物t和引物d使DNA聚合酶从引物的3'端开始连接脱 结合的能力降低，但改造后的AK和DHDPS的活性基本不变，C 氧核苷酸复性温度过低、引物特异性不高 错误，D正确。故选C门 (5)XmdL,BglⅡ 701