课时提分集训61 基因工程的基本工具和基本操作程序-【金榜题名】2026年高考生物一轮总复习课时提分集训

8.B[A、胚胎分割技术得到的是逢传物质相同的个体，因此不能 移到被侵染的细胞并整合到该翻隐的染色体DNA上，所以Vr 提高遗传的多样性，A错误：B、胚胎分制可增加后代胚陷的数 区基因活化可促进抗冻基因整合到千禧果细胞的染色体DNA 量，捉高繁有率，B正确：C、在进行胚胎分割时，应远择发育良 上，C正确：D、为筛选成功导入抗冻基因的千赫果细胞，最好在 好，形态正常的桑葚胚或囊胚，C错误：D、胚胎分割时要保证内 培养基中源加四环素，可以筛选成功导入抗冻基因的千禧果朝 细胞团的均分，D错误。故选B,门 孢，D错误。故选C。] 9,B[A、桑善胚和囊胚的内朝胞团都未分化，具有全能性，所以供 6,C[A,由图可知，VI的酶切位，点靠近GhMnaA2基因转录的 体FS可取自囊胚的内细胞团或桑甚胚，A正确：B、体胚胎接受 起始端，其转录方向是A·B,A错误；B、①过程得到的表达载体 移植的最佳时机是发育至桑葚胚或囊胚阶段，B错误：C,PS钢 可能为反义表达载体，也可能为正义表达我体，B错误：C、反义 胞类似胚胎干编胞，所以PS细胞可作为供体ES的“替代品”培 GhMnaA2基因转录出来的RNA与正常转录的mRNA互补，从 有嵌合体，C正确：D、胚胎千细胞(ES)存在于早期胚胎中，具有 而阻止其与核糖体结合，脚反义GhMnaA2基因可能道过抑制 分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机 GhMnaA2基因的翻译来保证棉并维长度，C正确：D、用SmaT 体的所有组织和器官甚至个体的潜能，所以供体ES在受体胚胎 和Nt【切割正义表达载体可获得3kb,18kb、28kb,59kb4种 内可分化出成体千细胞，D正确。故法B。门 长度的DNA片段，据此判断左侧SmaI和N0tI之间的长度是 10,C[A、使用促性腺激素对野化单峰单骆驼A处理以进行超数 59kb,A位置的Sa1和N11之间的长度是3kb,B位置处的 排卵，而不是使用性激素处理，A错误：B、从野化单峰骆驼B中 SmaI和NotI之间的长度是18kh,右上角E6位置好处SmaI 莪得的特子需荻能处理才具备与培乔成熟的卵子受精的能力 和NlI之间的长度是28kb。故用NlI切割反义表达载体茨 B错误：C,在进行操作前，需要对代孕母体C进行同期发情处 得的DNA片段的长度应分别为18kb+28kb=46kb和3kb+ 理，以保证受体与供体的生现变化是相同的，进而提升受孕成 59kh=62kb,D错误，故选C。 功率，C正确：D、采用胚胎分割技术产生同卵多胎的可能性是 7.D[A,dTCTP基因经限制酶BmHI和EoRI双酶切，因此 有限的，内胞团分割次数越多，分割后胚胎成活的概率越小。 需要相同的限制酶切割裁体，产生相问的黏性末棉，A正确： D辑误。故选C B、由题意知，从果蝇基因组DNA中扩增果蝇dTCTP基因，最终 11.D[A、胚胎工程一般采用促性腺激素处理A使其超数排卵，A 获得dTCTP釉合蛋白，故dTCTP基因是该项研究中的目的基 错误：B,E后代（由A的卵细胞和C的精子体内受精形成的受 因，B正确：C基因表达救体包括目的基因，启动子、终止子和标 精聊发育彩成)遗传物质来源于A和C,E后代道传性状与A 记基因等，C正确：D、利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到 和C一致，而F后代(A的卵朝胞提供细胞质，B提供细隐核)遗 找体切口处，构建基因表达载体，D错误。故选D门 传物质来源于A和B,F后代道传性状大部分与B一致，少数性 8,A[A、利用PCR获取和扩增耐盐基因SsPSL·需添加两种引 头与A相同，B错误：C、D受依雠性接受来自动物园亚别黑熊 物，四种脱氧被苷酸等组分，A错误：B、构建基固表达载体是基 早A体内的胚胎，所以必须和动物园亚别黑熊早A同期发情处 因工程的核心，B正确：C、为防止杂菌污染，将枝物材科和农杆 理，目的是使体内的生理环境保持一致，提高胚胎的存活弹，而 首共同培养之前，植物材料需要消毒处理，C正确：D,DNA分子 野生亚洲黑熊早B只需要提供体细胞，所以不需要同期发情处 的大小和构象等有关，疑胶中的DNA分子通过柒色，可以在泼 理，C错误：D,A超数排卵排出的细胞必须生长到MⅡ才具有 长为300nm的紫外灯下被检测出来，D正确。故逸A. 受精能力，C的精子获能后才能发生受精，周此A排出的卵子 9,C[A、目的基因两测含有限制酶XhoI,NheI的识别序列，将 必须培养成熟到MⅡ才能与C的获能精子受精，D正确。故 目的基因插入质粒中时，需要用到的限制酶Xho【,NheI切割 选D.] 日的基国和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和质粒连接在一 12,C[A、进行胚胎移植时，供体一般选择逢传性能和生产性能好 起，八正隋：B,将日的基因导入受体细胞时，需要用C+处理大 的个体，受体则对其繁疏能力和健康状况要求较高，A正确： 肠杆菌，使其处于易于吸改周围环境中DNA分子的款态，B正 B、胚胎移植前，需要使用促性腺激素对供体进行超数排卵处 确：C、按图示构建的重组质粒导入大两杆茵后，由于目的基固的 理，使供体蜂性产生更多的卵子，B正确：C、在对囊胚阶段的胚 转录方向和启动子的方向相反，大肠杆菌不能正常表达该目的 胎进行分割时，要注意将内细稳团均等分割，C错误：D、全能性 基因，C错误：D、在含Xgl的培养基上培养导入了重组质粒的 是指翻胞经分裂分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其 大局杆菌，B半乳糖苷酶基因编码产生的仔半乳糖苷酶可分解 他各种细胞的潜能，胚脸千细胞分化形成神经细胞和上皮细胞 Xgal产生蓝色物质，使葡落呈蓝色，D正确。故远C。 等过程能体现了细稳的全能性，D正确。故选C。 10.B[A、根据题意可知，蓝白斑筋选是通过首落呈现的颜色进行 13.ABD[A、过程①可用促性腺激素对陶家特品种母羊A进行 痛选，因此不属于个体水平的稀选，而属于种群水平的绣选，A 超数排卵处理，以茨得更多的卵母细胞，A正确：B、过程②为胚 错误：B、转化过程中，大肠杆首通常用CaC溶液处理，使其处 胎移核，其实是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的 于能吸收周国DNA的状态，从而完成转化，B正确：C、依题意， 转移，B正确：C,桑茸胚阶段还未形成内细胞团，C错误；D,陶 大肠杆菌的质粒上含有青等素杭性基因，平袄中加入青骞素筛 赛特羊D的性状由A羊和B羊共同决定，D正确。故 选出来的首可能是含有带目的基因的重红质粒的首，也可能是 选ABD] 只含大肠杆菌质粒的菌，C错误D、完成转化的菌是带有目的 14.CD[A,iPS如胞和囊胚的内如胞团细驰都具有发育的全能 基因的菌，目的基因的插入破坏了lcZ基固，因此，究成转化的 性，因而可以形成嵌合休，A正确：B、为了获得更多的卯母细 大肠杆蔺涂有到平板上将产生白色斑菌落，D错误。故选B。门 胞，A过程前往往需要超数排卵处理，B过程为胚胎移積，通常 11,B[A、根据GNA一ACA融合基四的两端序列设计合近的引 需要对代孕母鼠进行同期发情处理，B正确：C、体外采集到的 物，可以利用PCR技术检测GNA和ACA基因是否导入棉花 精子可使用含有Ca2+线体的溶液处理使精子莪能，C错误： 朝胞中，A正确：B、由于重组质粒含有卡那霉素的抗性基因，故 D、若小鼠的荣色体数目为40条，大鼠的染色依数目为42条， 将棉花知胞接种在舍卡那霉素的培养基上可韩选出转基因娜 则嵌合体鼠的体细胞在有丝分裂后期染色体数日为8条或80 胞，B错误，C,雪花莲凝集素基因(GNA)和尾穗莧凝集素基图 条，D错误。故选CD。 (ACA)均有BsaB I酶切位点，所以用限制酶Bs阳BI和DNA连 15.C[A、体外受精时获取的精子一：需要经过获能处理才能琴 接酶处理两种基周可获得GNA一ACA融合基因，C正确：D、图 与受精，获取的聊母细胞也需要在体外透行成熟培乔，A辑误： 中质粒与ACA一GNA上都含有KpnI和XhoT的酶切位点， B,①是索胚的内细跑团·胚胎分割时需要用分割针将其均等分 与只用KpnI相比，KnI和XhoI处理融合基国和载体可保 割成2,4或8等份，而不能分割成3等份，B错误：C,根据胚胎 证基因转录方向正确，D正确。故选B。圆 移植的操作流程可加，胚胎移植的实质是早期胚胎在相同环境 12.BCD[A、引物使DNA聚合酶能够从引物的3端开蛤连接脱 条件下空间位置的转移，C正确：D,胚胎移植的理论基础之一 氧核苷酸，PCR扩增融合基因时，在引物的5端添加相应限制 是受体不会对移枝过来的早期胚胎发生免疫排斥反应，所以无 酶的识别序列，A错误：B、由图可知pNZ8149一2RBD和 需对受体进行免疫抑制处理，D错误。故选C。门 pNZ8149一3RBD的城基对分别为4527bp和5193bp,所以RBD 课时提分集训61 长度为5193一4527=666bp,泳道1为双酶切pNZ8149一2RBD, 两个条带大小分别为2507bp和2020bp,所以融合基周3RBD 1.A2.D3.C4.B 的长度为666+2020=2686bp,B正确，C、由图可知，泳道2是 5.C[A,使用很制酶Ⅱ会破杯Vir区的基因，Vir区的基因活化能 现一个条带，其原因是双骑切NZ8149一3RBD后产生的两个 促进TDNA的加工和转移，是TDNA转移整合到受体细胞 片段大小相近，C正确：D、渡实验的目的是“探究RBD的二聚 DNA上必不可少的，不能选限制醉Ⅱ，A错误：B、使用PCR技术 体蛋白和三聚体蛋白能否模椒RBD的天然构象并获得高效免 扩增抗冻基围，只需要知道抗冻基围两端城基序列设计引物即 接原性”，可以从工程薄细胞表面提取蛋白质进行检测，从而进 可，B错误C、农杆菌侵柒植物细胞后，Ti质粒上的T-DNA能转 一步比较两者的免疫原性，D正确。故选BCD。门 699 13.BC[A、将目的基图导入黄花高愈伤组织细胞常用的方法是 段，C正确：D、图中形成的是黏性末端，E.oliDNA连接醉只能 农杆首转化法，A正确：B、图中P为启动子，位于基因的首端， 连接钻性末沸，T4DNA连接晦既可连接平末端，又可连接钻性 作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动转录，B错误： 末瑞，所以可用E.oliDNA连接醉或T4DNA连接酶违接酶切 C,图中还缺少的结构是标记基因，标记基国的作用是鉴别受体 后的日的基因片段和质粒，D正确。故选B。门 细胞中是否含有目的叁因，从而将含目的基因的细胞肺选出 6.D[野生型基国电泳结果有一条带，叶黄化的基园经过限制酶 来，C错误：D、要检测目的基因是否导入冠瘦红织细胞的染色 B处理后，据图分析基因被切成两段长度不一的片段，根据电泳 体IDNA上，可采用PCR技术，D正确。故选BC,] 的原因是根据DNA的长度不一，将DNA进行以条带的形式区 14.【答案】(1)5'GATCGATC 分开来，则F:中条合子既有野生型基因，也有叶黄化的基因，故 (2)BamH1和EcoR I20kb,45kb样品2 电泳条带数目应为3条，D符合题意。故选D。 (3)潮霉素草甘膦抗性基因没有表达 7,D[A、Tag DNA聚合醉只能从引物的3'端开始延仲DNA子 【解析】(1)PCR扩增后的苹甘裤抗性基因包含引物，切割的 链，所以两条子链合成一定都是从5瑞向3瑞延仲，A正确 时候也要包含引物，需要把限制酶识别序列加在5端，扩增产 B、图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长短、碱基组成等 物用BamHI酶到BglⅡ酶进行切割，产生的黏性末端分别是 有关，引物长度越长成者GC含量越高，则复性的温度设置总高， 5-GATC-35-GATC-3 B正确：C、经过5次循环后会产生2一32个，其中只有2个 (2)用BmH1酶到BglⅡ酶切制产生相同的黏性末端，保证正 DNA分子含有最初的模板链，另仅含有第一次复制产生的单链 向连接用的是EoRI酶和Bam日I酶，正向连接的重组质粒 参与形成的DNA分子有8个，因此经过5次复制产生等长的目 会被切去20十25=45kb长度的片役，反向连接的重组质粒会 的基因片段32一10=22个，C正确：D、PCR所需要的引物和原 被切去20kb长度的片段，电泳疑胶中，DNA分子量越大，在凝 料是一次性添加的，在实验过程中不需要补充，D错误。故 胶中收到的阻力越大，迁移距离感短，正向连接的重组质粒被 选D。] 切制后两个片段的大小介于反向连接的重组质粒被初割后两 8.BA、酶①要在高温条件下延仲DNA,所以酶①为时高温的 个片段的大小之间，说明样品2是所需的基因表达载体 DNA聚合酶，由图可知，要得到两条链一样长的DNA单链，应 (3)由图可知，卡那写素抗性基因不在TDNA片段中，剃写素 速捧引物2和引物4，所以引物X和Y应孩为引物2和4，A正 抗性基因在T-DNA片段中，可随T-DNA转移并整合到被侵乘 确：B,引物3和引物1是完全互补的，不能放入同一个体系，B辑 的脚胞的桑色体DNA上，从而使含目的基国的甘蓝植株有抗 误：C,第一阶段要获得的DNA是目的DNA的一段，且不是中间 潮霉素的抗性，所以能在含潮幂素的培养基上筛选含目的基因 的一段，故雾要两次循环可以获得，已正确：D、通过该技术可莪 的甘蓝植株，故步骤①的培养基中添加潮露素，以使痛选出含 得突变的基因，城基因的产物可能是自然界原来不存在的，D正 目的基因的甘蓝枝株。转基因甘蓝植株有一部分具有草甘降 确。故远B。 抗性基园，但没有表现出抗草甘降性状，原因可能是草甘降祝 9.D[A,在酶切阶段，已知序列L.中不能含有酶切时所选限制酶 性基因没有表达，从而使得相应性欢没有表现出来 的识别刷序列，不然会将已知序列I切断，造成序列识别混乱，A 15.【答案】(1)脱氧核苷酸逆（反）转录 正确：B、T:DNA连接酶或E,iDNA连接酶都可以用来连接 (2)8305'XhoI和HindⅢ便于重组DNA分子的筛选 黏性末端，因此环化阶段，可选用E.oliDNA连接酶或T,DNA 连提酶，B正确：C、PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因 (3)TP和P4 【解析】(I)研究人员提取mRNA,然后以mRNA为模板，在 两条链的3端通过碳基互补配对站合，为保证延种的是已知序 列两侧的未知序列，应该选择引物1和引物4，且二者间不能互 逆（反）转汞醉的作用下合成cDNA 补配对，C正确，D、PCR扩增中，将温度调至72℃的日的是时高 (2)PCR过程中第一、二轮德环合成的子链长度均不同，根据半 温的DNA聚合酶将四种脱氧核苷酸，根据碱基互补配对原测合 保留复制特点可知，前两轮循环产生的四个DNA分子的两条 成新的DNA链，D错误。故选D。] 链均不等长，第三轮循环产生的DNA分子存在等长的两条横 1O.B[A、PCR引物一餐是单链DNA,A错误：B,PCR过程中周 #酸链，如分折中的图示。由于第三轮出现两个等长的DNA, 到了援冲液，缓冲液中一般要添加Mg+用于激活DNA聚合 经过第四次复制产生4个等长的DNA,另外有图个DNA通过 酶，B正确：C,复性温度过低会导致引物与模板链的结合不牢 第四次复制也会分别一个等长的DNA,即总共8个。 固，会增加PCR中非特异性条帝，C错误：D、用酶B作用后进 wm 行电浓后得到的2条条带，说明DNA分子上有1个酶B的酶 切位点，且酶切后得到2个片段，若为杂合子，则同时含B、b,酶 肝 m+A一人 切后可获得3个片段，故由结果可判断其为纯合子，D错误：故 选B.] 。m 11,B[A、PCR反应中的每次循环的变性过程DNA分子双链解 螺旋，氢键断裂：复性时，引物与模板链通过形成氢键相钻合 筇一轮循环 第一轮循环 廷伸过程中，游离的胝氧核糖核荇酸与模板链通过形成氢键相 第一轮循环 站合，游离的厩氧核苷酸固定在模板链上，每次循环的变性 PCR技术的原理是DNA双链复制，使DNA以指数形式增加， 复性，延仲过程都重复以上过程，因此，都涉及氢键的形成或断 复制n次后，产生的DAN总数为2"，护增过程中，需要引物与 裂，A正确：B、PCR技术合成的是DNA分子，四此，延仲和后延 DNA单链结合，再进行链的延伸，所以产生的子代DNA链中 仲过程中需要DNA聚合酶，4种脱氧核糖核苷酸，不需要ATP (四种dNTP即可以提供能量又可以原林)，B错误：C、PCR技 都有引物，因此PCR过程中需要消耗引物为21一2个，复制 术中所使用的引物是根据一较已知的病原菌的基因序列合成 4次，雾要引物为30个。 的，因此，PCR应用于临床病原荫检测，所用的引物能与病原菌 引物的设计在5'，选择限制酶时应当保证目的基因插入位，点在 的两条单链DNA特异性站合，C正确：D、后是仲过程是为了让 启动子和终止子之间并保征日的基因的正确连接，应当在 引物延伸完全并让单链产物完全褪火形成双链结构，可使目的 XhoI,HindⅢ、VdeI中远择两种，由于NdeI在质粒上还有 基因的扩增更加充分，D正确。故选B。] 一个酶切位，点，国此不能进择NdeI,应当选择Xh。I和Hind 12.ACD[A、PC利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来 Ⅲ两种限制醉。 控制DNA双链的解聚与结合，A正确：B,进行PCR扩增需要 杭性基因为质粒上的标记基因作用为便于重组DNA分子的 热稳定DNA聚合酶(TagDNA聚合酶)，但不需要解旋酶，B错 防选 误：C,DNA的两条链反向乎行，子链从引物的3端开始延伸， (3)结合免我共沉淀技术的原理及表中结果可知，TP和P4是 则利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列，C正确： 与T蛋白相互作用的蛋白质。 D,基国有特定的硫基序列，通过与受体细胞的基周组序列比 专题突破集训10 对，即可确定T-DNA的墙入位置，D正确。故选ACD。 13.AD[A,图中①过程是逆转录过程，诚过程需要逆转录酶的催 1.C2.A3.D4.A 化，此外还需扩增媛冲液等，A正确B,经逆转最得到的单链 5.B[A、由于引杨只能引导予链从5到3.根据碱基互补配对原 :DNA中不含内拿子等非转录区段，故过程四形成的双链©DNA 则，其中一个引物序列为5'一TGCGCAGT一3'，A正骗：B,根据 中也不含内含子，B错误：C,过程③中，在引物作用下，DNA聚 三种酶的酶切位点，左侧的钻性末端是使用NhI切割形成的， 合酶从引物3端开蛤延伸DNA链，即子链沿着模板使的3'5 右边的黏性末端是用CfI切制形成的，B错送：C、周步骤①的 方向延仲，C错误：D,RT一PCR是将RNA的反转最和cDNA 醉对载体进行醉切，使用了NheI和CfoI进行切割，根据他们 的聚合酶链式扩增相结合的技术，可应用于是否被RNA病毒 的识别位，点以及原本DNA的序列，切割之后至少获得了2个片 感柒的检测，D正确，故迭AD。门 700课时提分集训61 基因工程的基本工具和基本操作程序 一、选择题：每小题给出的四个选项中只有一个符 4.为解决跨物种器官移植出现的免疫排斥反应，研 合题目要求。 究者借助 CRISPR/Cas9 技术对移植的猪心脏进 1.(2024·山东高考) 关于“DNA的粗提取与鉴定” 行了基因编辑，剔除猪的相关基因。 CRISPR/ 实验，下列说法正确的是 () Cas9 系统主要由向导 RNA(sgRNA)，sgRNA 可引导 Cas9 蛋白到特定基因位点进行切割，其 A.整个提取过程中可以不使用离心机 机制如图所示。下列叙述错误的是 () B.研磨液在 $$4 ^ { \circ } C$$ 冰箱中放置几分钟后，应充分摇 匀再倒入烧杯中 Cas9 蛋白 复合体自发寻找结合 C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变 自发组装 切割杷核酸分 D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可 Cas9-sgRNA 复合体 能变蓝的干扰 sgRNA 2.(2025·浙江模拟) 通过PCR扩增可得到含有部 非靶核酸分子 分未知序列的DNA片段的扩增产物， 具体操作 m m 步骤如下图所示，图中白色为未知片段，黑色为 m m被切除片段 靶核酸分子 已知片段，M、N为限制酶的识别序列，下列相关 A.上述需要剔除的基因可能是标明猪细胞身份 叙述错误的是 () 的标签蛋白基因 N M N M a $$N _ { A }$$ B.常选择受精卵作为受体细胞的主要原因是受 DNA M 精卵体积大容易操作 酶切 用酶切开M PCR N M N N N N b C.复合体中， sgRNA 特异性识别目标 D NA， 连接 Cas9 蛋白作用于磷酸二酯键 A.已知片段中没有限制酶N的识别序列 D.sg RNA会因错误结合出现脱靶现象， 一般 B.将最终的 PCR 产物进行测序即可知道未知片 sgRNA 序列越短，脱靶率越高 段的DNA序列 5.科研人员将寒带地区海鱼中的抗冻基因转入千 禧果细胞中，成功培育出抗冻千禧果。下图为培 C.该 PCR 过程中所使用的引物应依据a、b的序 育过程中使用的Ti质粒示意图， 其中Vir区的 列进行设计 基因活化能促进 T-DNA 的加工和转移，下列叙 D.第一步酶切时可更换限制酶，只要所用限制 述正确的是 () 酶的识别序列在已知片段中不存在即可 限制酶Ⅲ 限制酶Ⅱ 3.(2025·湖南衡阳模拟)W是一种具有特定功能 限制酶 的人体蛋白质。某研究小组拟制备乳腺生物反 四环素 抗性基因 T-DNA 应器来获得大量W，基本过程如图所示。下列相 卡那霉 关叙述错误的是 () Vir| 的基因 抗性基茵 w ①表达导入 山羊胚 山羊胚 筛选 选 限制酶Ⅱ 胎成纤 胎成纤 维细胞 维细胞 ② 山 羊 A.构建基因表达载体时，最好选择限制酶 胚 山羊卵 Ⅲ来切割质粒 母细胞 B.利用PCR扩增抗冻基因， 需提前检测抗冻基 A.①过程构建的表达载体含有组织特异性启 因的全部碱基序列 动子 C.Vir区的基因活化促进抗冻基因整合到千禧 B.②过程通常在显微镜下进行去核、注人等操作 果细胞的染色体D NA上 C.该过程培养的山羊所有组织细胞均能分泌w D.利用含卡那霉素的培养基可筛选出成功导人 D.该过程利用了转基因、胚胎移植等工程技术 抗冻基因的千禧果细胞 一562 一 6.(2025·甘肃白银模拟)普通棉花中B甘露糖苷 A.利用PCR获取和扩增耐盐基因SsPSL,需添 酶(GhMnaA2)基因表达出的GhMnaA2能催化 加一种引物，四种核糖核苷酸等组分 半纤维素降解，使棉纤维长度变短。为了培育长 B.构建基因表达载体是培育转基因耐盐红豆草 绒棉，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达 的核心工作 载体（将正义GhMnaA2基因与载体反向连接）， C.将植物材料和农杆菌共同培养之前，植物材 获得了转基因长绒棉新品种，具体过程如图所 料需要消毒处理 示，SmaI,NotI,HindⅢ和BamH I为酶切位 D.凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为 点。用SmaI和NotI切制某正义表达载体可 300nm的紫外灯下被检测出来 获得3kb、18kb、28kb、59kb4种长度的DNA 9.研究人员将目的基因插人质粒，构建重组质粒的 片段。下列叙述正确的是 过程如图所示，再将该重组质粒导入大肠杆菌 Sma I Not I Sma I Not I A GhMnaA2 B LB <Himd围 中。由B半乳糖苷酶基因编码产生的B半乳糖 Not I ① 1E6启动子 反义表达载体 苷酶可分解X-gl产生蓝色物质，使菌落呈蓝 LB 在mdⅢ BamH I 抗生素 启动子 质粒 抗性基因 色，否则菌落为白色。下列叙述错误的是 抗生素 -BamH I 抗性基因 RB Sma I ( RB Sal 巴农杆菌③棉花细胞①转长 EcoR I Xho I 绒棉植株 Nhe I 注：→表示启动子予的启动方向，L,B、RB分别表示T-DNA的左右边界。 B-半乳糖 苷酶基因 四环素 A.正义GhMnaA2基因的转录方向是B→A 抗性基因 B.①过程所得到的表达载体均为反义表达载体 尔启动子 四环素 C.反义GhMnaA2基因可能通过抑制GhMnaA2 复制原点 抗性基因 Nhe I 基因的翻译来保证棉纤维长度 Xho I 个启动子 D.用NotI切割反义表达载体获得的DNA片 目的基因 复制原点 段的长度为21kb和87kb 转录方向◆ 7.翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)是在翻译水平受到 A.将目的基因插入质粒中时，需要用到的酶有 抑制的肿瘤相关蛋白，是一个高度保守且和细胞 XhoI、NheI和DNA连接酶 生长、死亡等功能有关的蛋白。现从果蝇基因组 B.需要用Ca2+处理大肠杆菌，使其处于易于吸 DNA中扩增果蝇dTCTP基因，经限制酶 收周围环境中DNA分子的状态 BamH I和EcoR I双酶切后，插入表达质粒 C.按图示构建的重组质粒导入大肠杆菌后，大肠 pGEX一4T一2上构建基因表达载体，最终表达 杆菌可正常表达该目的基因 有活性的dTCTP融合蛋白。关于该基因表达载 D.在含Xgal的培养基上培养导入了重组质粒 体的构建，下列叙述错误的是 ) 的大肠杆菌，可出现蓝色菌落 A.表达质粒pGEX一4T一2需要用限制酶 10.(2025·浙江金华模拟)大肠杆菌的质粒上含有 BamHI和EcoR I进行双酶切 青霉素抗性基因和lacZ基因，lacZ基因编码的 B.dTCTP基因是该项研究中的目的基因 产物B半乳糖苷酶能催化无色的Xgl生成蓝 C.除了目的基因和标记基因外，该基因表达载 色沉淀，使菌落呈现蓝色，日的基因插入lacZ 体还必须有启动子和终止子 基因中则菌落呈现白色，该过程称为蓝白斑筛 D.将dTCTP基因插入表达质粒pGEX一4T-2 ( 上时，需要用到DNA聚合酶 选。下列叙述正确的是 8.(2025·贵阳二模)红豆草是一种品质优良的豆 A.蓝白斑筛选属于个体水平上的操作 科多年生高蛋白牧草作物，被誉为“牧草皇后”。 B.CCl2溶液处理的大肠杆菌能吸收周围 为提高红豆草的耐盐性，增大种植范围，科研人 DNA从而完成转化 员将盐生植物碱蓬中的耐盐基因SsPSL转入红 C.平板中加入青霉素可以筛选出成功导入重 豆草中，对转基因耐盐红豆草DNA进行PCR, 组质粒的大肠杆菌 再对PCR的产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。下 D.将完成转化的大肠杆菌涂布到平板上将产 列有关叙述错误的是 ) 生蓝色斑菌落 563 二、选择题：每小题给出的四个选项中有一个或多 A.PCR扩增融合基因时，在引物的3'端添加相 个符合题目要求。 应限制酶的识别序列 11.如图所示，研究人员将雪花莲凝集素基因 B.据图可知，融合基因3RBD的长度为2686bp (GNA)和尾穗苋凝集素基因(ACA)与载体 C.泳道2呈现一个条带的原因是酶切pNZ8149 (pB1121)结合，然后导入棉花细胞。下列操作 3RBD后产生的两个片段大小相近 不符合实验目的是 ) D.从工程菌细胞表面提取蛋白质进行检测，从 KpnI BsaB IgsaB IXho IKpnI 而进一步比较两者的免疫原性 卡那霉素 GNA ACA 抗性基因 13.青蒿素是有效的抗疟疾药物，但野生黄花蒿中 pBI 121 青蒿素的产量较低。为缓解青蒿素供应不足的 GNA 门ACA 状况，科学家将基因tms和tmr导人黄花蒿的 Kpn I Xho I Kpn I启动子 愈伤组织，获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程 Kpn'I Xho I 用到的部分结构如图所示。下列叙述错误的是 重组载体 ( A.用PCR技术可检测GNA和ACA基因是否 tms tmr tms:编码产物控制合成生长素 导入棉花细胞中 T-DNA tmr:编码产物控制合成细胞分裂素 B.将棉花细胞接种在含氨苄青霉素的培养基 市：编码产物控制激活T-DNA转移 上可筛选出转基因细胞 Ti质粒 P:启动子 C.用限制酶BsaB I和DNA连接酶处理两种 T:终止子 基因可获得GNA一ACA融合基因 A.将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞常用 D.与只用KpnI相比，KpnI和XhoI处理融 的方法是农杆菌转化法 合基因和载体可保证基因转录方向正确 B.图中P位于基因的首端，作用是DNA聚合 12.科学家将某病毒抗原蛋白的部分编码序列 酶识别和结合的部位，驱动转录 (RBD)拼接成融合基因2RBD和3RBD,探究 C.图中还缺少的结构是标记基因，标记基因的 RBD的二聚体蛋白和三聚体蛋白能否模拟 作用是表达出目的基因产物 RBD的天然构象并获得高效免疫原性。为鉴 D.欲检测目的基因是否导入冠瘿组织细胞的 定重组质粒是否构建成功，将重组质粒用 染色体DNA上可采用PCR技术 NcoI和SacI双酶切处理后电泳，结果如图， 三，非选择题 其中泳道1为双酶切pNZ8149-2RBD,两个条 14.(2025·日照期末)科研人员将除草剂草甘膦抗 带大小分别为2507bp和2020bp。将构建好 性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘 的重组质粒分别导人工程菌中进行表达产物的 蓝植株。培育过程如图1所示。 检测。下列说法正确的是 潮索 抗性基因 BamH I T-DNA 启动子 Ti质粒 20 kb N78149-2RBD 启动子NcoI 2RBD (4527bp) (200kb) Sac I+U-MI RBDRBD ① T-DNA EcoR I 终止子 77149 卡那莓素 抗性基因 基因 终止子 3RBD "“+U-M RBD RBDRBD BamH I BglΠ N78149-3RBD 25不 EcoR (5193bp bp M 1 2 ②农杆菌③其蓝④转基因 愈伤组织甘蓝植株 10000日 蛋白序列 4000■ 注：限制酶识别序列、切割位点 ■■ 2000■ BamH I:-CGATCC-BglII:-A'GATCT- 1000 EcoR I:-CAATTC- 注：U-M为信号肽-细胞壁锚定蛋白序列 图1 564 (1)为便于PCR扩增后的草甘膦抗性基因与 Nde I 质粒连接，需在两个引物的 (填 BamH I “3”或“5′”)端添加限制的识别序列。扩增 抗生素启动消 Nde I Pst I 抗性基因 Xho I 产物经酶切后形成的黏性末端（单链突出末 复制终止子 Hind I 原点 Eco I 端)序列为5' 一3'和 5' -3. Kpn I Xba I 注：图中限制酶的识别序列及切 (2)若目的基因用BamH I和BglⅡ剪切，质粒 割形成的黏性末端均不相同 用BamH I剪切，酶切后的目的基因存在正向 图1 提取的各类抗T蛋白的抗体 与反向两种连接方式，可用 蛋白质结果免疫共沉淀结果 酶对两种重组质粒进行剪切。通过 T蛋白 琼脂糖凝胶电泳技术对产物分别进行分析，结 TP P2 果如图2所示，样品1和样品2中小片段的长 P4 度分别为 kb,图中 (填“样 AD 品1”或“样品2”)为所需的基因表达载体。 图2 样品1样品2 (1)研究人员提取该种癌细胞的总mRNA,以 为原料进行在 酶的催 化下获得总cDNA。 (2)通过PCR技术从总cDNA中扩增出T蛋白 基因。经4轮扩增，产物中等长的T蛋白基因 片段的数量是 个，需要消耗引物 个。为了将T蛋白基因准确连接到下图的 PcDNA3.1质粒载体上，在扩增T蛋白基因时 图2 需要在引物的 (填“5”或“3'”)端添 (3)在过程①的培养基中添加的抗生素为 加 限制酶的识别序列，质粒中抗 ,以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。鉴 生素抗性基因的作用是 定时发现，该过程获得的转基因甘蓝植株有一 (3)免疫共沉淀技术是在体外研究蛋白质之间 相互作用的一种技术。其原理是：抗体A可与 部分具有草甘膦抗性基因，但没有表现出抗草 蛋白质A特异性结合，将抗体A与磁珠偶联， 甘腾性状，原因可能是 磁珠可以使抗体A与蛋白A沉淀下来，若蛋白 (答出一点即可)。 质B与蛋白质A相互作用，那么蛋白B也会被 15.(2025·山东模拟)我国科研人员成功从某种癌 一起沉淀下来，可以通过对沉淀物中的蛋白质 细胞中筛选出标志性蛋白质T。研究中同时发 进行检测最终确定蛋白质之间的相互作用关 现TP,P2、P4和AD四种蛋白质细胞癌变过程 系。研究人员将T蛋白高表达的癌细胞裂解 后，利用抗T蛋白的抗体偶联磁珠，对裂解液 中也存在一定作用，为研究上述四种蛋白与T 中的TP、P2、P,和AD四种蛋白质进行免疫共 蛋白之间的相互作用，科研人员进行了一系列 沉淀，结果如图2。该结果表明与T蛋白相互 实验。 作用的蛋白质是 565