第57课时 微生物的培养技术与应用-【金榜题名】2026年高考生物一轮总复习

金榜题名创新高考总复习生物 教材查漏补缺 >》 ■ 1.(选择性必修3P6)发酵是指 7.果酒和果醋改进装置及其分析 充气口 排气口 2.(选择性必修3P,)醋酸发酵的反应式：O2、 发酵前期充气口打开 排出酒精发酵 糖源充足时： 输入无菌空气，让酵 时产生的 母菌增殖，后期 充气口，进行酒精发 长而弯曲 O2充足、缺少糖源时： 酵；在醋酸发酵时连 排气口通过 接充气泵进行充气 个长而弯曲的 胶管与瓶身连 3.(选择性必修3P,)制作葡萄酒时，要将温度 出料口 接，其目的是 控制在18~30℃的原因是 用来取样，及时监测 防止 发酵进行的情况 。 酿酒酵母的最适生 长温度为 。 制作葡萄醋时，要将温 8.(2022·湖南，21节选)某黄酒酿制工艺流程 度控制在30~35℃的原因是 如图所示，图中加入的菌种a是 工艺b是 (填“消毒”或“灭菌”)，采 4.(选择性必修3P,)在制作果酒的过程中，避 用工艺b的目的是 免发酵液污染需要从发酵制作的过程全面 考虑。例如， 要清洗干净， 米浆水 装入葡萄汁后，盖好瓶盖；每次排气时只需 原料一浸泡蒸煮一糖化灭活发醒压榨酒 ,不要完全揭开瓶盖等。 相 成品b☐灌装-勾兑陈贮煎酒-过滤 5.(选择性必修3P8)某同学在制作泡菜前，查 9.(2023·新课标，35节选)若实验获得一种具 阅资料得知，可以向泡菜坛中加些“陈泡菜 有良好固氨能力的根瘤菌，可通过发酵工程 水”，目的是 。某同学 获得大量根瘤菌，用于生产根瘤菌肥。根瘤 制作出的泡菜“咸而不酸”，造成这个结果最 菌肥是一种微生物肥料，在农业生产中使用 可能的原因是 微生物肥料的作用是 (至少答出两点)。 6.(选择性必修3P27)单细胞蛋白是 请完成课时提分集训56 第57课时 微生物的培养技术与应用 高考目 1.通过配制培养基、灭菌、接种和培养等实验操作获得纯化的酵母菌菌落。2.分离土壤中分 标定位 解尿素的细菌，并进行计数。 核心考点突破 考点一 微生物的基本培养技术 知识储备·夯基 同需求，配制出的供其 的营养 基质。 1.培养基的配制 ②用途：用以 微生物 (1)培养基的概念、用途和类型 ①概念：人们按照微生物对 的不 或积累其 308 第10章生物技术与工程 ③培养基的种类（按物理性质分） 续表 培养基 项目 消毒 灭菌 培养基特点 作用 种类 常用 灭菌法、 消毒法、 微生物的分离与鉴 灭菌法、 加凝固剂，如 方法 消毒法等 定，活菌计数，保藏 灭菌法等 培养基 菌种 (4)注意事项 ①实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料 容器放倒不致流 半固体 出，剧烈震动则 观察微生物的运动、 用具与 接触。 培养基 分类鉴定 ②为避免周围环境中微生物的污染，实验操 破散 作应在超净工作台上并在 附 近进行。 常用于工业生产、微 不加凝固剂 3.微生物的纯培养概念辨析 培养基 生物的扩大培养 接种于培养基内，在合适条件下形成 (2)培养基的配方 培养物 的含特定种类微生物的群体 ①主要营养物质：水、 、氨源、 纯培养物一由单一个体繁殖所获得的微生物群体 ②其他条件：pH、 和氧气。 分散的微生物在适宜的 表 菌落 一面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有 如表： 的子细胞群体 微生物 乳酸 厌氧微 霉菌 细菌 纯培养一获得纯培养物的过程 杆菌 生物 4.纯培养的过程（以酵母菌为例）：包括 特殊 添加 般pH 一般pH调至 等步骤。 需求 调至 (1)制备培养基 配制培养基称取·煮沸一过滤一 2.无菌技术 加葡萄糖、琼脂→定容 (1)目的：获得 的微生物培养物。 制备培养基 灭菌 (2)关键：防止 污染。 (3)消毒与灭菌的比较 项目 消毒 灭菌 倒平板 酒如 →3包 作用较为 的理化 强度因素 的理化因素 倒平板注意事项：a.温度：50℃左右；b.操 作：在 附近；C.冷凝后平板 作用 杀死物体表面或内部杀死物体内外 倒置。 程度 微生物 的微生物 【提醒】 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠， 将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入 芽孢和 培养基，又可以避免培养基中的水分过快 一般不能杀灭 能杀灭 孢子 挥发。 (2)接种和分离酵母菌 微生物培养的器皿 ①平板划线法的原理：通过 在固体 适用 实验操作的空间、操作 接种用具和培养 培养基表面 的操作，将聚集的菌 对象 者的衣着和双手 基等 种逐步 到培养基的表面。经数 次划线后培养，可以分离得到 309 金榜题名创新高考总复习 生物 ②平板划线法的操作步骤 a.将接种环放在火焰 b.在火焰旁冷却接种环， 上灼烧，直到接种环 同时，拔出装有酵母菌 的金属丝烧红 培养液的试管的棉塞 (1)用图中字母和箭头表示平板划线操作的 正确步骤： (2)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种 环吗？为什么 d.在火焰附近用接 c.将试管口 种环蘸取一环菌液 通过火焰 (3)在第二次以及其后的划线操作时，为什 么总是从上一次划线的末端开始划线？ e.将试管口通 ￡.在火焰附近将培养皿打 过火焰，并塞 开一条缝隙，用接种环在 (4)接种结束后，为什么要将一个未接种的 上棉塞 培养基表面迅速划三至五 条平行线，盖上皿盖 培养基和一个已接种的培养基放在一起培 养，未接种的培养基表面如果有菌落生长， g灼烧接种环，待其冷却后，从第一 次划线的末端开始作第二次划线。重 说明了什么？ 复以上操作，作第三、四、五次划线。 注意不要将最后一次的划线与第一次 的划线相连 (3)培养酵母菌 典型例题·研磨 将接种后的平板和一个 的平板倒 考向一 微生物的基本培养技术 置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养 【例1】(2024·山东高考)酵母 24~48h。 菌在合成色氨酸时需要3种酶 判断正误 X、Y和Z,trpX、trpY和trpZ (1)培养基一般都含有水、碳源、氨源和无机 分别为相应酶的编码基因突变 trpZ 盐，有时还需要加入一些特殊的物质 ( 的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不 (2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免 能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物 培养基溅到皿盖上 积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3 (3)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁 种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸 热快速挑取菌落 ) 的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种 (4)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进 酶在该合成途径中的作用顺序为( ) 行清洁和灭菌 A.X→Y→Z B.Z→Y→X 3关键考能·提升 C.YX→Z D.Z-X-Y 【例2】(2023·北京高考)自然界中不同微生 发酵生产啤酒的过程中，杂菌产生的微量副 物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌 产物是啤酒“上头”的原因之一，可采用平板 具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使 划线法对酵母菌进行纯化。如图是平板划 细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水 线操作的示意图，据图回答下列问题： 样中分离出有溶菌特性的细菌。 310 第10章生物技术与工程 (1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡 (3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合 萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主 适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊 要为细菌提供 和维生素等。 水样 后，依次分别涂布于不同的 (2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含 浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌 有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体 的菌落周围会出现 。采用这种 培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间 方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。 后，薄层变浑浊（如图），表明 (4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提 出一个假设，该假设能用以下材料和设备加 以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、 培 培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养 薄层 箱) 考点二 微生物的选择培养和计数 衫知识储备·夯基 操作步骤： 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1mL10g土样 1.区分选择培养基与鉴别培养基 种类 特点 用途 举例 x0 110 110 10 x10' 110 1×10 允许 以尿素为 从众多微 唯一氮源 9mL无菌水 90mL无菌水 选择 生物中分 的培养基 培养基 同时 ②涂布平板操作步骤 离所需的 分离得到 微生物 尿素分 解菌 取菌液：取0.1mL菌液，滴加到 表面 涂布器 根据微生物的代 涂布器消毒：将涂布器浸在盛有 的 谢特点在培养基 用伊红一 烧杯中 鉴别 鉴别不同 中加入某种指示 亚甲蓝培 种类的微 培养基剂或化学药品， 养基鉴别 生物 进而产生特定的 大肠杆菌 涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上灼烧， 待酒精燃尽、涂布器后 颜色或其他变化 再进行涂布 【提醒】 常见选择培养基举例：(1)缺少氮 源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微 涂布平板：用涂布器将 均匀地涂布 在培养基表面。涂布时可转动 生物。 培养皿，使涂布均匀 (2)含青霉素的培养基可淘汰细菌，筛选出 真菌。 (2)微生物的数量测定方法 (3)无有机碳源的培养基可筛选出自养微 ①显微镜直接计数法 生物。 2.微生物的选择培养和数量测定 利用特定细菌计数板或血细胞计数板， 原理 在显微镜下观察、计数然后再计算一 (1)稀释涂布平板法步骤 定体积的样品中微生物的数量 ①系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种 到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细 方法 用细菌计数板或血细胞计数板计数 胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微 生物细胞数量减少，细胞得以分散。 缺点 不能区分死菌与活菌而使计数结果偏大 311 金榜题名创新高考总复习生物 【提醒】显微镜直接计数法本身不能区分 (3)实验结果分析与评价 细菌的死活，但是通过一定的辅助处理，可 有无杂 以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液 无菌落生长 ·未被杂菌污染 菌污染 进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来 的判断 有菌落生长 →被杂菌污染 对活菌进行计数。 培养基 选择培养基上的菌落数 选择培养 ②间接计数法一活菌计数法（即稀释涂布 是否具 目远 牛肉膏蛋白胨 一基具筛选 平板法) 筛选作 培养基上的菌落数目 作用 用 a.原理：当样品的稀释度 时，培养 样品稀 得到3个或3个以上菌落 操作 基表面生长的一个 ,来源于样品稀 释评价 数目在 的平板 成功 释液中的 。 通过统计平板上的 重复组 比较各 若选取同一种土样，统 菌落数，就能推测出样品中大约含有多少 的结果 重复组 计结果应接近 活菌。 判断正误 b.计数原则：为了保证结果准确，一般选择 (1)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统 菌落数为 的平板进行计数。 计的菌落数就是活菌的实际数 c.误差分析：用此种方法统计的菌落数目往 (2)统计菌落数目时为保证结果准确，一般选 择菌落数目最多的平板进行统计 () 往比活菌的实际数目 (填“高”或 (3)利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实 “低”)，因为 现细菌的分离和计数 () (4)利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就 3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实 是活菌的数量 验操作 3产关键考能·提升 (1)实验原理 在发酵生产啤酒过程中，要随时检测培养液 ①土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因 中的酵母菌数量、产物浓度等，以了解发酵 为它们能合成； 分离 ②配制以为唯一氨源的培养基，能够 进程。甲、乙、丙三位同学用稀释涂布平板 原理 在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素 法测定同一培养液的酵母菌数。在对应稀 的细菌 释倍数为106的培养基中，得到以下三种统 (2)实验流程 计结果。 (1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统 ①土壤取样：从酸碱度接近中性的潮湿土壤中，铲去表 层土，取距地表cm的土壤层 计的菌落数为230，该同学的统计结果是否 真实可靠？为什么？ ②样品的稀释：通常选用一定稀释范围的样品液进行 培养，以保证获得菌落数为 的 平板进行计数 a接种：用 法接种： (2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统 ③微生 b.培养条件： ℃培养1-2天； 计的菌落数分别为21、212、256，该同学将 物的培 ©观察：根据菌落的特征区分微生物： 21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果 养与观 d计数：每隔24小时统计一次菌落数目，选取 的处理是否合理？为什么？ 察 时的记录作为结果 ④计算：计算单位体积中的菌体数 312 第10章生物技术与工程 (3)在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3 C.可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直 个平板？ 径”的值来筛选目的菌株 D.获得的几丁质酶可用于防治某些有害的 甲壳类动物、昆虫等生物 (4)为什么要选取菌落数目稳定时的记录作 考向三微生物的分离与计数 为结果？ 【例5】（不定项）(2021·江苏高考)为提高 株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于石油 为唯一碳源的固体培养基上，以致死率为 (5)丙同学在稀释倍数为10的培养基中测 90%的辐照剂量诱变处理。下列叙述不合 得平板上菌落数的平均值为234个（涂布平 理的是 () 板时所用稀释液的体积为0.1mL),那么稀 A.将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低 释倍数为106的试管中细菌的浓度是 培养基污染的概率 个/mL。每克样品中的细菌数 B.涂布用的菌浓度应控制在30~300个/mL 是 个。 C.需通过预实验考察辐射时间对存活率的 【归纳总结】 影响，以确定最佳诱变时间 计算公式：每克样品中的菌株数=(C÷V)×M D.挑取培养基上长出的较大单菌落，纯化后 进行降解效率分析 C代表某一稀释 V代表涂布平板 【例6】（不定项）(2025·济南模拟)研究人员 M代表稀 度下平板上生长 时所用的稀释液 释倍数 拟从新鲜蚯蚓粪中分离筛选出对番茄枯萎 的平均菌落数 的体积(mL) 病有良好抑制效果的拮抗细菌。将蚯蚓粪 典型例题·研磨 加入无菌水中制成悬浮液，利用甲培养基进 行筛选纯化后，将获得的不同菌株分别接种 考向二目标微生物的筛选与鉴定 至乙培养基扩大培养，48h后进行“平板对 【例3】(2024·浙江高考)脲酶催化尿素水解， 峙实验”：在丙培养基的空白平板一侧放置 产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍 一直径为5mm的番茄枯萎病菌的菌块，在 后失去活性。下列叙述错误的是 ( 平行另一侧放置相同大小的滤纸片，实验流 A.镍是组成脲酶的重要元素 程如下图。下列说法正确的是 ) B.镍能提高尿素水解反应的活化能 番茄枯萎病菌菌块 C.产脲酶细菌可在以NH,CI为唯一氮源的 培养基生长繁殖 滤 D.以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选 悬浮液 甲培养基 乙培养基 丙培养基 (已稀释) 产脲酶细菌 【例4】(2025·江苏泰州一模)科研人员试图 A.I过程使用的接种方法是平板划线法， 从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株， I一Ⅲ过程均需要无菌操作 通过微生物培养获得几丁质酶，用于生物防 B.对照组滤纸片用无菌水处理，实验组滤纸 治。下列相关叙述错误的是 ( 片用拮抗菌菌液处理 A.土壤样品应加到以几丁质为唯一碳源的 C.应培养至对照组病菌菌落长满丙培养基 选择培养基中培养 时开始测量并计算抑制率 B.目的菌的纯化和计数可以使用平板划线 D.选择丙培养基上直径大的病菌菌落对应 法或稀释涂布平板法 的拮抗菌作为日的菌 313 金榜题名创新高考总复习生物 教材查漏补缺 1,(选择性必修3P1o)培养基的化学成分包括 7.(2021·广东，21节选)基于菌株H嗜盐、酸 等。 碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种 2.(选择性必修3P1)无菌技术的选择：对于一些 不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设 不耐高温的液体，如牛奶，可使用 法； 为60g/L,pH为10，菌株H可正常持续发 用 消毒水源；培养基一般采用 酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是 法进行灭菌：培养皿可以采用 法灭 菌；接种环可以采用 法灭菌。 3.(选择性必修3P13)平板划线操作的第一步 (答出两点即可)。 灼烧接种环是为了 8.(2023·全国乙，37节选)在粉碎的秸秆中接 :每次划线前灼烧接种 种菌T,培养一段时间后发现菌T能够将秸 环是为了 秆中的纤维素大量分解，其原因是 从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌 种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线 9.(2022·河北，23节选)枯草芽孢杆菌为好氧 结束后灼烧接种环，能 微生物，液体培养时应采用 (填 “静置”或“摇床震荡”)培养。培养过程中抽 4.(选择性必修3P16)选择培养基是指 样检测活菌数量时，应采用 (填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数 5.(选择性必修3P19)检测培养物中是否有杂 法”)，其原因是 菌污染的方法是 判断选择培养基是否起到筛选作用的方法 10.(2021·湖南，21节选)简要写出测定大熊 是 猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验 思路： 6.(2023·新课标，35节选)从豆科植物的根瘤 中分离根瘤菌进行培养，可以获得纯培养 物，此实验中的纯培养物是 请完成课时提分集训57 314(3)提示接种单一高质量纯种、严格的消毒灭菌措花，培养基典型例题 营养物质协调、严格的发酵条件控制等，都使碑酒的产量和质量 【例I】A[ABCD,添加少量色氨酸，突变体菌袜可以生长，色氨 明显提高 酸合成途径的中间产物积累后可排出胞外，进入培养基后，通过 典型例题 扩散，从而给其他突变型提供代谢原料，帮助其长出明显的菌 【例5】D[A、基因表达的产物是蛋白质，而并冈每素是JG5发 落。rpX,rpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸 酵生产的一种氯基寡糖类抗生素，A错误：B、JGs接入发酵罐前 依赖型突变体，据图可知，rpX不能为rpY和rpZ提供原朴， 需要扩大培养，孩过程会影响JG5的数量，进而影响井冈霉素的 trpY不能为trpZ提供原补，trpZ可以为t伊pX、1rpY的生长提供 产量，B错误：C,在一定范图内提高JGs发酵培养基中营养物质 原料，推测3种酶在该合成途径中的作用顺序为X·Y·Z。故 的求度，会提高井冈霉素的产量，但若求度过大，反而会降低井 选A. 冈霉素的产量，C错误：D,JGs是一种放线菌，菌体生丝状生长， 【例2】【答案】(1)氨源，碳源 形成的首落难以区分，因此稀释涂布平板法不室用于监控JG5 (2)A菌能在培养平板中生长紧殖 发酵过程中活如胞数量的变化，D正确。故选D,门 (3)稀释溶菌陶 【例6】D[A,黑曲客利用糖类发酵产生柠襟酸时需要充足的 (4)假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂 氧，相同菌体密度下，菌球体越大越不利于菌体与氧气接触，拧 【解析】(1)蛋白陈主要为细前提供氨源、碳源和维生素等。 檬酸产生逢率越授，A正确：B,蔺体内铵离子浓度升高时，可解 (2)将含有一定浓度A菌的少量培养基领倒在国体培养平板上， 除柠檬酸对其合成途径的反绩柳制，发酵中期添加一定量的硫 凝因形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培 酸按，提高按离子求度，菌体内可提高柠檬酸产量，B正确：C、发 养平板中生长繁殖。 酵过程中H下降导致细首生命活动所必需的酶失活，可抑制大 (3)将含菌量较高的湖泊水样稀择后，依次分别涂布于不同的浑 部分细菌的生长，C正璃：D、发酵结来后，将过滤所得的圆体物 浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶 质进行分离，纯化、求缩、干燥等一系列操作后才能获得柠檬酸 菌图 产品，D错误，故选D,] (4)根据实验实验材料和设备，圆形德纸小片可用于吸收某种物 教材查漏补缺 质，离心机可用于分离菌体和细首分泌物，为探究P首溶解破坏 1,人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转 A菌的方式，可假设P蔺通过分泌某种化学物质使A菌溶解 化为人类所需要的产物的过程 破裂。 2.C,He0,+20,鹰.2CH,C00H+2C0,+2H,0+能量 考点二知识储备 1,特定种类的微生物生长抑制或阻止其他种类微生物生长 C,H,OH+O,CH,COOH+H,O+能量 2.(1)②培养基酒精冷却菌液(2)②a.足够高单菌落 3.温度是影响酵母菌生长的重要因素28℃醋酸菌的最适生长 一个话菌b.30~300c,低当两个或多个细胞连在一起时 温度为30~35℃ 平板上观察到的只是一个菌落 4.榨汁机、发酵瓶拧松瓶盖 3.(1)限酶尿素(2)3~830~300稀释涂布平板30-37 5,增加乳酸菌的数量加盐太多，盐浓度过高，杀死了乳酸菌等微 菌落数日稳定(3)对照的培养皿中对照的培养皿中少于 生物 30-300 6.以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发醇 判断正误 获得的大量的微生物南体 (1)× 提示当两个或多个轲胞连在一起时，平核上观察到的 7.关闭CO2空气中微生物的污染 是一个菌落，故稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实 8.酵母菌消毒杀死黄酒中的大多数微生物，并延长其保存期 际数目少 9,促进植株生长，增加作物产量：能够减少化肥的使用，改良土壤， (2)×提示统计菌落数日时为保证结果准确，在同一稀释度 减少污染，保护生态环境 下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值 (3)X提示利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现每 第57课时微生物的培养技术与应用 菌的分离，但平板划线法不能用于蹬生物的计数。 考点一知识储备 (4)×提示显微镜直接计数法不能区分细葡的死活，因此绕 1.(1)①营养物质生长繁殖②培养、分离、鉴定，保存代谢物 计的站果一般是活首数和死菌教的总和 ③固体琼脂液体(2)①碳源无机盐②特殊营养物质 关键考能 维生素酸性中性或弱碱性无氧 (1)提示 不可靠：为增加实脸的说服力与准确性，应设置童复 2.(1)纯净(2)杂菌(3)温和强烈一部分所有煮沸 实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平 巴氏湿热干热灼烧(4)①周围的物品②酒精灯火焰 均值。 3.固体培养基一定形态结构 (2)提示不合理：撒生物计教时，如果实验中出现重复实验的 4,配制培养基，灭菌、接种、分离和培养(1)湿热灭菌法酒精灯 站果差别很大的情况，应分析实脸过程中可能的影响因素，找出 火焰(2)①接种环连续划线稀释分散单菌落 (3)未 差异的原因，而不能简单地将结果会弃后进行计数。 接种 (3)提示作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对 判断正误 实验结果的影响，增强实脸结果的说服力。 (1)/ (4)提示尽量馆小就计的葡落敦与实际活菌数的差佳，因为繁 (2)×提示例平板时，用耨指和食指将培养皿打开一条精大 殖慢的酋休开始看不出明显的菌落特征。 于瓶口的缝隙，将维形瓶中的培养基(10~20mL)倒入培养皿， (5)2.34×1032.34×10 立即盖上培养皿的皿盖，不能打开皿盖。 典型例题 (3)X提示接种环灼烧灭菌后，应冷却后再挑取落，以免 【例3】B[A、根据题意，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组 高温杀死首种 成脲酶的重要元素，A正确：B、联酶值化尿素水解的机理为降低 (4)×提示对实验操作的空间，操作者的衣着和手，选行济 化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降 洁和消毒 低尿素水解反应的活化能有关，B错误：C、产脲酶幅酋可利用 关键考能 NHCI里的氨源进行代谢活动，因此产佩酶细薄可在以NHC] (1)d-b-f-a-e-c-h-g 为唯一氨源的培养基生长繁殖，C正确：D、产脲酶细菌能利用藤 (2)提示需要：划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上 酶催化尿素分解产生NH,NH可作为细苗生长的氯源，不能 残留的菌种，避免污染环境和感染操作者 产脲酶的细葡则无法分解尿素获得氨源，因此以尿煮为唯一氨 (3)提示划线后，线条未端菌种的数目比线条起始处要少，每 源的培养基可用于每选产脲酶细菌，D正确。故选B。门 次从上一次划线的末端开始，能使首种的数目随着划线次数的 【例4】B[A,据题意可知，要从土娘中筛选出能高效降解几丁 增加而逐步减少，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。 质的前株，那么应该用以儿几丁质为唯一碳源的选择培养基培养， (4)提示培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基 A正确：B,目的茵的纯化和计数可以使用稀释涂布平板法，平板 经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的：若有菌落 划线法只能用于目的菌的能化，不能计数，B错误：C,水解圈直 生长，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新 径/菌幕直径的值可以表示孩菌水解能力的大小，术解图直径 制备 菌落直径的值越大，说明该菌降解几丁质能力越强，反之越萌 633 因此可依据单菌落周国“水解图直径/菌落直径”的值来诺选目关键考能 的菌株，C正确：D、几丁质为广泛存在于甲壳类动物的外壳，昆 (1)提示叶柄或橄叶分化程度低，全能性高，容易诱导形成感 虫的甲壳和真首的胞壁中，图此获得的几丁质酶可用于防治某 伤组织，进而培养成完整植林 些有害的甲壳类动物、昆虫等生物，D正确。故选B.] (2)提示植物组织培养是在细胞有丝分裂和细胞分化的基础 【例5】AB[A、培养基应先灭菌再分装于培养皿中，A错误： 上实现的，此过程并没有生殖朝胞的产生，所以是无性繁殖。 B、涂布时所用菌液一般为0.1mL,平板上的首落数应为30~ (3)提示培养物一旦受到微生物的污菜，这些微生物会和外植 300,涂布用的菌求度应控制在300~3000个/mL,B错误C,需 体争夺培养基中的营养物质，并且严生大量对外植体有害的物 通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，再进行正式实脸，以 质，导致外植体死亡 确定最佳诱变时间，C正确：D,石油降解菌能分解石油获得碳 典型例题 源，彩成菌落，挑取培养基上长出的较大单菌落，纯化后进行降 【例1】D[A,在脱分化过程中，1号培养基中的愈伤组织是排列 解效摩分析，以获得能高效降解石油的菌种，D正确。门 不规则的薄壁组织围块，A错误：B、愈伤组织阁弛分化时可能会 【例6】ABC[A、据图可知，甲培养基中是各种线的分布，故步骤 发生基因突变，但基因重组发生在减数分裂过程中，而愈伤组织 I使用的接种方法是平板划线法；餐生物分离和培养的关键就 细胞的分化过程是有丝分裂，所以不会发生基因重组，B错误。 是防止杂菌污染，故I,Ⅱ、Ⅲ都需要进行无随操作，A正确： C,3号培养基用于诱导生根，其细胞分裂素求度与生长素浓度的 B、本实验的目的是探究枯杭细菌是否对香茄枯菱病有良好抑 比值应该小予1，C错误：D、百合分生区附近的病毒极少，甚至无 制，故实脸组滤纸片用括抗菌菌液处理，对照组滤纸片用无菌水 病毒，因此可以作为该研究中的外植体，D正确：故送D。] 处理，B正确：C,由于对那组没有用括抗茵菌液处理，故培养至 【例2】D[A、芽尖等分生红织分裂旺轰，且含病毒少，取材时常 对照组枯萎病首菌落长满时，通过对滴加粘抗随液处理组的统 选周其作为外植体，入正确：B,培养基中有大量的营养物质容易 计后，开始测量并计算抑制率，C正确：D、为达到阶段一的目的， 被细菌污染，加入抗生素可降箴杂菌的污乘，B正确：C、将丛生 应选择“平板对峙实验”培养后番茄枯菱病菌菌落直径小的铜 芽切割后转移到新的培养基上维续进行扩大培养称为继代培 菌，因为番茄枯萎病莺菌落直径越小，说明抑制效果越好，D错 养，其又可分为第二代培养、第三代培养等。大多数植物每隔 4一6周进行一次继代培养，每进行一次继代培养，培养物一般能 误。故选ABC.] 增殖3一4倍。正因为培养物可以不断继代培养，所以离体繁殖 教材查漏补缺 建度比常规方法通常要快数万倍，可实现快递繁殖，C正确： 1.水，无机盐，碳源、氨源 D,提高生长素和细胞分裂素的比值可促进愈伤组织形成根而不 2.巴氏消毒氯气湿热灭菌干热灭菌灼烧灭菌 是芽，D错误。故选D。门 3.避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结 考点二 知识储备 束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的南种 1.(1)细胞壁纤维素酶果胶酶(2)原生质体电融合法离 直接来源于上次划线的末端及时杀死接种环上残留的随种， 心法聚乙二醇(PEG)融合法(3)细胞壁(M)脱分化再 避免细菌污染环境和感染操作者 分化 4.在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止 2.不同来源 新植物体 其他种类微生物生长的培养基 3.生殖隔离 远缘 5.同时培养灭菌后的未接种的培养基，观察是否有菌落产生配 判断正误 制牛肉膏蛋白陈培养基作为对照，观察选择培养基上的菌落数 (1)× 提示诱导植物翻胞融合前应先用酶解法去除翻胞壁。 是否远少于牛肉膏蛋白陈培养基上的菌落数目 (2)X提示用纤维素酶和果胶酶酶解法获得的原生质体仍 6.由根缩菌繁殖形成的单菌落 含有全套的道传信息，仍具有全能性。 7.盐浓度为60g/1的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡：pH为 (3)√(4) 10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制 (5)X提示杭物体细胞杂交是指将不问来源的杭物体细胞 8.菌T能够分泌纤维素酶 在一定条件下融合成条种细胞，并把泰种如胞培育成新植物体 9.摇床震荡稀释涂布平板法用稀释涂布平板法在培养基上看 的技术。 到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将 关键考能 死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内 1.提示 分别是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 10.将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1mL涂布到若 2.提示 可以形成3种融合细胞：甲甲，甲乙，乙乙。符合要求的是 干个平板（每个稀释度至少涂布三个平板），对菌落数为30一 甲乙 300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猎新鲜粪便中红 3,提示有四个染色体组，是四停体。 维素分解菌活菌数 4.提示从结果上看，杂种植株的遗传物质来自两个亲本，具有双 亲的道传性状。从染色体红成上看属于柒色体数目变异， 第58课时植物细胞工程 典型例题 考点一知识储备 【例3】B[A,酶解是为了去除植物细胞的细胞壁，过程①中酶 1.细胞分子细胞器 处理的时间不同，说明两种亲本的细胞壁结构有差异，A正确： 2.产生完整生物体分化成其他各种细胞全套基因选择性地 B,过程②为原生质体的融合，常用PEG诱导原生质体融合，灭 表达 活的仙台病毒可诱导动物细隐融合，不能用于植物，B错误： 3.(1)植物器官、组织或细胞完整植株(2)全能性(3)离体培 C,过程①税分化和⑤再分化的培养基中均需要添加生长素和 胞分裂素，但在两个过程中比例不同，C正确：D、植物两是植物 养的植物器官、组织或细胞愈伤组织①结构和功能未分 甲和植物乙体细胞杂交形成的个体，应具备两者的遗传物质，因 化②不定形的薄壁组织③芽、根(4)无菊水次氯酸钠 此可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株，D正 无菌水0.5~1cm1/3~1/2愈伤组织封口膜生芽 确，故选B。] 生根封口膜生长(5)根芽芽根愈伤组织 【例】D[A、大豆叶片加胞是楂物细舱，具有加胞壁，其知胞壁 判断正误 的成分是纤维素和果胶，所以制备原生质体，需用纤维素酶和果 (1)X 提示外植体需要消毒处理，不能灭荀处理。 胶酶进行处理，A正确：B、生物膜的功能特点是具有选择透过 (2)×提示愈伤组织是外植体经靓分化过程形成的。 性，所以膜具有选择透过性，B正确：C、原生质体可以再生出新 (3)X提示在税分化阶段一般需要避光处理，再分化阶段需 的细胞壁，C正确：D、分离出的原生质体具有全能性，可用于枝 要光照处理 物体细胞杂交，为杂种植林的获得提供了理论基础，D错误。故 (4)×提示植物激素中生长素和知胞分裂素是启动朝胞分 选D.] 裂，脱分化和再分化的关键激素，它们的浓度，比例等都会影响 考点三知识储备 植物细胞的发育方向，植物组织培养过程中应根据需要训整生 1.高效、快速地实现种苗的大量繁殖保持优良品种的遗传特性 长本和细胞分裂素的比例。 植物顶端分生区附近（如茎尖） (5)×提示同一株绿色开花梳物体细胞和生殖细胞（花粉） 2.染色体变异单倍休纯合二倍休稳定遗传育种的年限 经如织培养获得的楂株基固型不同。 体细胞诱变遗传突变基因突变新基因某些性状 (6)/ 3.必需植物细胞培养生产速度快 634