实验21DNA的粗提取。实验目的，学习和了解DNA的粗提取和鉴定的方法。实验材料，新鲜鸡血实验试剂、预制的鸡血细胞悬液，遇冷的95%酒精溶液。蒸馏水，二摩尔每升，氯化钠溶液。二苯胺试剂，0.015摩尔每升，氯化钠溶液。实验器材，带铁圈的铁架台、镊子、电炉石棉网、玻璃棒，100毫升2桶，十毫升两桶。100毫升烧杯，500毫升烧杯。20毫升试管，两只漏斗、试管夹、纱布、滤纸。方法步骤，一、提取机械细胞的细胞核物质。向盛有5毫升预制的机械细胞悬液的烧杯中加入蒸馏水20毫升，并用玻璃棒沿一个方向快速烧有力，快速搅拌五分钟，使血细胞加速破裂。然后将放有单层纱布的漏斗，将细胞液过滤至500毫升的烧杯中。取其滤液。2溶解细胞核。内的DNA，将物质的量浓度二摩尔每升的氯化钠溶液加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌一分钟，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。3、析出含DNA的粘稠物，沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿逆时针方向不停的轻轻搅拌。这时烧杯中有絮状物出现，继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多，当粘稠物不再增加时，停止加入蒸馏水。这时溶液中氯化钠的量浓度相当于0.14摩尔每升。4、滤取含DNA的粘稠物，用放有多层纱布的漏斗过滤步骤三中的溶液至500毫升的烧杯中。含DNA的粘稠物被留在纱布上。五将DNA的粘稠物再溶解，取一个100毫升的烧杯，向烧杯内注入物质的量浓度为二摩尔每升的氯化钠溶液20毫升，用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹在氯化钠溶液中。用玻璃棒沿一个方向不停的搅拌三分钟，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。6、过滤含有DNA的氯化钠溶液。取一个100毫升的烧杯，里面装有20毫升二摩尔每升氯化钠溶液，用放有两层纱布的漏斗过滤烧杯中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。7、提取含杂质较少的DNA。在上述滤过的溶液中加入冷却的体积分数为95%的酒精溶液50毫升。并用玻璃棒沿逆时针方向搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸去上面的水分。这种丝状物主要成分就是DNA。8DNA的鉴定。取两只编号为12的20毫升的试管，向两支试管中各加入物质的量浓度为0.015摩尔每升的氯化钠溶液5毫升。然后用镊子将丝状物放入一号试管中用玻璃棒搅拌一号试管中的溶液，使丝状物溶解。然后向两支试管中各加入4毫升二苯胺试剂。混合均匀后将试管置于沸水中加热五分钟。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。可以观察到一号试管中溶液颜色变蓝。实验结论，一号试管中溶液颜色变蓝，说明提取物中含有DNA物质。注意事项，一、实验材料的选择。鸡血是理想材料之一，因机械经济且易致得，鸡血红细胞、白细胞都具有细胞核，含大量的DNA。哺乳动物的红细胞没有细胞核，d na含量较低，因而不宜做实验材料。2、盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器，鸡血细胞破碎以后，释放出的DNA含量本来少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少，因此实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程DNA的损失。3、充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后，必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，加速机械细胞破裂，释放出DNA。4、沉淀DNA时必须用冷酒精，实验前酒精在冰箱至少5摄氏度中至少存放24小时。5、在DNA析出的步骤中用玻璃棒搅拌时，注意动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。