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第九单元
生物技术与工程
考点35 发醇工程
题号
5
10
2
6
0
11
难度
★★
★
★★
培养
传统
果
稀释
去
微生
传统
微生
白酒
醋、
无菌
涂布
发醇
泡菜
物的
发醇
对点
选择
发醇
物发
的酿
技术
果酒
制作
技术
与鉴
工程
技术
发醇
应用
定
培养
题号
12
13
14
16
15
17
★★★
难度
★★
★★
★★
★★
★★★
微生物的选
微生物的选
微生物的选
接种量对发
发醇
微生物的选
对点
择培养与计
择培养
择培养
醇的影响
工程
择培养
数
基础过关
1. (2024北京理工大学附中月考)下列关于传统发醇技术应用的叙述,正确的是(
__
A. 利用孔酸菌制作酸奶过程中,先通气培养,后密封发醉
B. 家庭制作果酒、果醋和腐孔通常都不是纯种发醇
C. 果醋制作过程中发液pH逐渐降低,果酒制作过程中情况相反
D. 毛霉主要通过产生脂舫梅、蛋白晦和纤维素参与腐孔发醇
答案:B
解析:孔酸菌是一种严格的厌氧菌,有氧气存在时,其发会受到抑制,因此利用孔酸菌制
作酸奶的过程中,应一直处于密封状态,否则会导致发醇失败,A错误;家庭制作果酒、果
醋和腐孔过程中所用的菌种均来源于自然环境,有多种微生物参与发过程,因此均不是纯
种发醇,B正确;果醋制作过程中,醋酸菌有氧呼吸产生乙酸,随着乙酸浓度的增加,溶液
的pH逐渐降低,果酒制作过程中,醇母菌无氧呼吸产生二氧化碳与酒精,二氧化碳溶于水
形成碳酸,随着二氧化碳浓度的增加,溶液的pH逐渐降低,因此果酒、果醋制作过程中溶
液的pH都逐渐降低,C错误;毛霉主要通过产生脂舫晦和蛋白晦参与腐孔发醉,D错误。
2.某生物兴趣小组欲用如图装置发醇制作杨梅酒和杨梅醋。下列叙述正确的是(
)
1
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夹子1
夫子2
A. 发醇制作杨梅酒时,应打开夹子1并同时关闭夹子2
B. 制作杨梅醋时,同时关闭夹子1和夹子2有利于醋酸菌利用杨梅汗生产杨梅醒
C. 若利用该装置制备杨梅酒后继续制作杨梅醋,应把装置放入温度更低的环境中
D. 向该装置中加入杨梅汗酿制杨梅酒时,上部需留有大约1/3的空间
答案:D
解析:醇母菌在无氧条件下才会产生酒精和CO,因而发醇产生杨梅酒时,需同时关闭夹子
1和夹子2,但发醉过程中需定时打开夹子2放气,A错误:醋酸菌是好氧菌,酿制杨梅醋时
,最好同时打开夹子1和夹子2,B错误;酿制果酒时,需要将温度控制在18~30C,酿制
果醋时,需要将温度控制在30~35C,因而利用此装置制备杨梅酒后欲再制作杨梅醋,需把
此装置放入温度更高的环境中,C错误;向装置中加入杨梅汗酿制杨梅酒时,上部需留有大
约1/3的空间,一方面有利于醇母菌大量繁殖,另一方面防止发醇过程中汗液溢出,D正确。
3.《诗经》中有“中田有庐,疆场有瓜,是剥是范,献之皇祖”的诗句。“剥”和“范”是臆
渍加工的意思。许慎在《说文解字》中解释“范菜者,酸菜也”。下列叙述正确的是
)
A. 泡菜的酸味是泡菜坛中醋酸菌产生的醋酸所导致的
B. 我国各地的环境条件和人们的生活习惯不相同,制作出的泡菜风味也有所差异
C. 为保证泡菜坛内的无氧环境,魔制时应尽量将泡菜坛装满
D. 泡菜魔制过程中飘酸和亚硝酸盐的含量先增加后趋于稳定
答案:B
解析:泡菜的酸味是泡菜坛中孔酸菌无氧呼吸产生的孔酸所导致的,A错误;泡菜脆制时应
装至八成满,以防止发醇液溢出,C错误;脆制过程中亚硝酸盐的含量会先增加后减少再趋
于稳定,酸含量会先增加后稳定,D错误。
4. 获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染,无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开
下列叙述正确的是(
)
A. 巴氏消毒的最大优点是能够杀死牛奶中的全部微生物
B. 对接种室、涂布器、操作者的衣着和双手只应进行消毒处理
C. 玻璃器血、金属用具等可在160~170C的热空气中维持1~2h可以达到灭菌的目的
D. 酒精能使细胞中的蛋白质变性失活,浓度越高,消毒效果越好
答案:C
2
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解析:巴氏消毒最大的优点是杀死牛奶中绝大多数微生物的同时基本不会破坏牛奶的营养成
分,A错误:对接种室、操作者的衣着和双手应进行消毒处理,对涂布器应进行灭菌处理,
B错误;乙醇能使蛋白质变性,75%酒精浓度是常用的消毒浓度,过高浓度杀菌效果不佳,D
错误。
5.(2024云南昆明阶段练习)为筛选出某些特殊微生物,常常需要人为提供有利于目的菌株生
长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长,或在培养基中加入某种指示剂使菌落产生明
显的特征性变化。下列说法错误的是(
)
A. 利用不含氮源的培养基可以初步筛选出固氛微生物
B. 利用以尿素为唯一氮源的培养基可以初步筛选出产的微生物
C. 利用伊红-亚甲蓝固体培养基可以筛选出大肠杆菌菌落
D. 利用含纤维素和刚果红的固体培养基可以初步筛选出产纤维素的微生物
答案:C
解析:培养基中缺乏氮源时,可分离固氮微生物,非固氮微生物因缺乏氮源而无法生存,所
以利用不含氮源的培养基可以初步筛选出固氮征生物,A正确;在以尿素为唯一氮源的培养
基中可以筛选出尿素分解菌,原理是细菌合成的豚晦将尿素分解成氛,氛可以作为细菌生长
的氮源,B正确;伊红-亚甲蓝固体培养基属于鉴别培养基,大肠杆菌的代谢产物能与伊红
-亚甲蓝发生特定的颜色反应,可以鉴定出大肠杆菌荫落,C错误;在含有纤维素的培养基
中加入刚果红,刚果红就会与纤维素结合形成红色复合物,当培养基中的纤维素被分解后,
刚果红一纤维素复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素降解菌为中心的透明圈,从而
可以筛选纤维素分解菌,D正确。
6.(2025山西朔州摸底改编)如表所示是培养尿素分解细菌的配方,以及对土壤样品的稀释及
取样培养的流程图,每支试管装有9mL无菌水,实验中分别从三只试管中取0.1mL涂布在
空白培养基上。下列相关叙述错误的是(
)
KHPOt
葡萄耕
屈素
MgSO:·7HO
NaHPOt
琼脂
21g
1.4g
02g
1g
10g
15g
将上述物质溶解后,用蒸水定容到1000mL
5g上样
1m ImL 1m1mL1m 1ml
E
进
土壤样品
omL
#
A. 在培养细菌时,一般需要将培养基调至酸性
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B. 对土壤样品进行稀释,当稀释到最后一支试管时,总共稀释了107倍
C. 适宜用来计数的是稀释度为105倍的一组,1g土壤中含有68×107个细菌
D. 理论上还应设置一组相同条件下培养的空白培养基,以判断培养基是否污染
答案:A
解析:在培养细菌时,一般需要将培养基调至中性或弱碱性,A错误;据图分析可知,稀释
度为105倍的一组菌落数适中,菌落数在30~300之间,适宜用来计数,则1g土壤中约有(62
+68+743-01×105-68×107个细菌,C正确
7.如图是研究人员从土壤中筛选高效分解石油的细菌的过程示意图,有关叙述错误的是
_~
1m.
。
②在选择培
③
2 ④细分解石油能
养基中培养。
力的鉴定和比较
A. 在配制步骤②、③的培养基时,应先调pH后高压蒸汽灭菌
B. 步骤③的培养基是在牛肉膏蛋白陈培养基的基础上加入石油配制而成
C. 步骤③纯化分解石油细菌的原理是将聚集的细菌分散,可以获得单细胞分裂形成的菌落
D. 若要验证②培养基有选择作用,可在牛肉膏蛋白陈培养基中加入2mL①中上清液作为对
照
答案:B
解析:在配制培养基时,为防止杂菌污染,应先调pH后高压蒸汽灭菌,A正确;步骤③的
培养基是以石油为唯一碳源配制而成的,B错误;步骤③纯化分解石油细菌的原理是将聚集
的细菌分散,可以获得单细胞分裂形成的菌落,C正确。
8.(2024江苏扬州模拟)随着人们对发醇原理的认识,微生物纯培养技术的建立,以及密闭式
发醇罐的设计成功,发醇工程逐步形成。下列关于发醇工程的叙述错误的是(
A. 培养基和发醇设备都必须经过严格灭菌,发醇过程中适时补充灭菌的培养液
B. 发醇过程中的环境条件既会影响微生物的生长繁殖,也会影响微生物代谢产物的形成
C. 发醇产品包括微生物菌体本身或代谢产物,两种产品分离、纯化的方法不回
D. 通过醇母菌发醇,获得大量菌体,从中提取单细胞蛋白作为动物伺料或食品添加剂
答案:D
9.(2024四川成都期中改编)通过发醇,可以转变食材的模样和味道。劳动人民以丰富的经验
和智慧制作出果酒、果醋、泡菜等丰富的发醇食品。请回答下列问题:
(1)微生物种类是制作上述发醇食品的关键,其中利用厌氧细菌进行发醇的是
,检测该发醇产物时,通常利用
(2)通常酿酒醇母最适生长温度约为
试剂在
酸性条件下与之反应呈现
色。将葡萄酒制作成葡萄醋时,需要改变的环境条件是
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(3)以大麦芽、碑酒花和水为主要原料,工业化发醇生产碑酒的流程如下图。回答下列问题
唯酒花
般
酒醉母
发醇工程一般包括菌种的选育、
、培养基的配制、灭菌、接种、发醇、产品的分离、
提纯等方面,发醇工程的中心环节是
加酒花后进行蒸煮的目的是
(答出2点)。醇母
菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在
阶段完成。
(4)泡菜制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。根据实验研究,得到相关数据如
下图所示。据图分析,发醇初期,硝酸盐还原菌的作用
(填“较强”或“较弱”)
亚硝酸盐含量增加。第8天后的泡菜更适于食用,理由是
#_
25
一5
1
发醉时间()
答案:(1)泡菜
(2)28C 重铭酸钾
灰绿 通入无菌空气,将温度提高到30~35C
(3)扩大培养 发醇罐内发醇 产生风味组分、终止梅的进一步作用、对糖浆灭菌
主发醉
(4较强
亚硝酸盐含量较低、酸度较高
综合提升
10.(2024湖北武汉模拟预测)微生物与人类生活有密切的关系,在食品制作、疾病防治、环
境保护等方面有着广泛应用,如传统食品中的酒、面包、泡菜、醋、酱油等就是利用微生物
发醇而成的,发醇过程中防止杂菌污染至关重要。下列说法正确的是(
)
A. 微生物发醇产生了不同的代谢物使得发醇食品具有特殊的味道
B. 家庭酿制葡萄酒时,需要对发醇的原料及发醇容器进行严格灭菌,防止杂菌污染
C. 筛选酿醋菌种时,可在培养基中加入一定量的青霉素,防止杂菌污染
D. 制作泡菜时,“泡菜之水,用花椒和盐煮沸”的目的只是彻底灭菌
答案:A
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解析:在家庭酿酒工艺中发醇瓶是不需要严格灭菌的,发醉的无氧环境和产生的酒精会抑制
大部分微生物的生长繁殖,家庭酿制葡萄酒的菌种来自葡萄本身携带的辞母菌,故不能对发
原料进行灭菌,B错误;酿醋用的菌种是醋酸杆菌,为原核生物,青霉素可以抑制细菌的
生长,筛选酿醋菌种时,不能在培养基中加入青霉素,C错误;“泡菜之水,用花椒和盐煮沸
”的目的是提升泡菜味道,减少水中的溶氧量和消毒杀菌防止杂菌污染,D错误。
11.(2024河北,18,改编)中国传统白酒多以泥害为发醇基础,素有“千年老骞万年糟”“以
容养糟,以糟养泥”之说。多年反复利用的老害池内壁泥中含有大量与酿酒相关的微生物
下列叙述不正确的是(
A. 传统白酒的酿造是在以酿酒醇母为主的多种微生物共同作用下完成的
B. 害池内各种微生物形成了相对稳定的体系,使酿造过程不易污染杂菌
C. 从害泥中分离的酿酒醇母扩大培养时,需在CO2或N2环境中进行
D. 从谷物原料发醇形成的酒糟中,可分离出产淀粉的微生物
答案:C
解析:发醇池是泥质老赛,多年反复利用的老害池内壁害泥中含有大量与酿酒相关的微生物
害池内各种微生物形成了相对稳定的体系,使酿造过程不易污染杂菌,B正确;从害泥中分
离的酿酒母扩大培养时,需在有氧环境中进行,因为醇母菌在有氧条件下可大量繁殖,C
错误;谷物中含有大量淀粉,用谷物原料发醇形成酒糟的过程中,有淀粉分解形成糖浆的过
程,因此,从谷物原料发醇形成的酒糟中,可分离出产淀粉晦的微生物,D正确。
12. (2024天津模拟预测)若棒状杆菌中缺乏将鸟氢酸转化为精氢酸的梅,不能在缺少精氢酸
的培养基上正常生长,则称之为精氢酸依赖型菌。野生型棒状杆菌经诱变、筛选获得精氢酸
依赖型菌的过程如图所示,过程①将紫外线照射处理过的菌液接种在甲培养基上,待培养至
菌落不再增加时,将甲培养基中的菌落转移到乙培养基中继续培养得到如图所示的结果。下
列叙述正确的是(
)
。2
A. 实验过程中用到的培养基和培养I必须采用高压蒸汽灭菌法灭菌
B. 与甲培养基成分相比,乙培养基成分中可能缺少了鸟氛酸
C. 若乙培养基中未出现菌株,则说明紫外线照射未引起基因突变
D. 从甲培养基中选出的B菌株,可直接利用含精氛酸的培养液进行发醇
答案:D
解析:培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌,培养血可采用干热灭菌,A错误;棒状杆菌中缺乏
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将鸟氢酸转化为精氛酸的晦,不能在缺少精氢酸的培养基上正常生长,甲中含有A和B两种
菌落,乙中只含有A一种菌落,说明与甲培养基成分相比,乙培养基成分中可能缺少了精氮
酸,B错误;若乙培养基中未出现菌株,则说明紫外线照射引起基因突变,导致依赖型突变
菌株无法生长,C错误;B菌株能在甲培养基上生长,不能在乙培养基上生长,说明B菌株
是精氢酸依赖型荫,可直接利用含精氛酸的培养液进行发醉,D正确。
13.(②025江西开学考试)煤化工企业产生的焦化废水中的眦院(CHN)具有明显的致痛、致略
和致突变作用,易在生物体内富集,会对人体健康及生态系统产生危害。实验人员从焦化废
水处理系统中分离出甲、乙两种叱院降解菌,采用平板培养法比较二者降解叱唳的能力。回
答下列问题:
(1)配制液体培养基1进行扩大培养;成分如下表所示,将甲菌株、乙菌株分别接种在两瓶液
体培养基I中培养。培养基中能为菌株的生长提供碳源的物质是
,为菌株的生长提
供氢源的物质是
,配制好的培养基要进行灭菌,对培养基灭菌常用的方
法是
成分
MgSO.
NH&NO:
水
含量
10g
5g
10g
1000mL.
(2)配制不含NHLNO(其他条件不变)的液体培养基II,然后在培养基I和培养基II中加入一
定量的_,分别制成平板I、II,并在两平板上打A、B两孔(大小相同),如图1所
示。在无菌条件下,将等量等浓度的甲菌株菌液和乙菌株菌液分别接种到平板1的A和B两
孔处,平板II也进行同样的操作。在相同且适宜的条件下培养一段时间,两个平板的两孔处
的降解圈大小如图2所示。
图1
图2
据图分析能够得出的结论:
(答出2点)。根据图中所示实验结果可知,治理焦化废水中
此院造成的污染应选用的菌株是
(3)实验人员采用显微镜直接计数法和稀释涂布平板法分别对取自平板II中的甲细菌的数量
进行计数,发现测得的细菌数量前者大于后者,其原因是
答案:(1)叱噬 叱唳和NHL&NO; 湿热灭菌法(或高压蒸汽灭菌法)
(2)琼脂 在添加了NHNO;的培养基中,甲菌株和乙菌株对叱庭都有一定的降解能力,且甲
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菌株的降解能力大于乙菌株的:在没有添加NHNO。的培养基中,甲菌株对叱绽的降解能力
有所下降,乙菌株不能降解:庭 甲菌株
(3)前者活菌和死菌一起计数;后者存在多个活菌形成一个菌落的情况,且只计数活菌
解析:(2)制作固体培养基时,需要加入琼脂。根据图2可知,在添加了NHNO;的培养基中
,甲菌株和乙菌株都能生长,对叱喧都有一定的降解能力,由于A孔的降解圈大于B孔的,
说明甲菌株对叱院的降解能力大于乙菌株的;在没有添加NHNO。的培养基中,A孔的降解
圈变小,说明甲菌株对叱喧的降解能力有所下降,而B孔的降解圈与图1的B处孔的大小相
同,说明乙菌株不能降解此院。综上分析,治理焦化废水中叱喧造成的污染应选用甲菌株。
应用创新
14. (2024黑吉辽,19,改编)某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病,其筛选
流程及抗性检测如图。下列操作不正确的是(
)
进来
内生菌菌划线
病原荫斑
抗性检测
A. 在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内,从未感病植株上采集样品
B. 将采集的样品充分消毒后,用蒸水冲洗,收集冲洗液进行无菌检测
C. 将无菌检测合格的样品研磨,经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落
D. 判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小
答案:B
解析:题干信息:某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病,故在大量感染香蕉
枯萎病的香蕉种植园内,从未感病植株上采集样品,A正确;获得纯净的微生物培养物的关
键是防止杂菌污染,将采集的样品充分消毒后,用无菌水冲洗,收集冲洗液进行无菌检测,
B错误;由题图可知,样品研磨后进行了稀释涂布,可见将无菌检测合格的样品研磨,经稀
释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落,C正确;由题图抗性检测可知,判断内生菌的抗性
效果需设置对照组和实验组,对照组不接种内生菌得到病原菌菌斑,实验组接种内生菌得到
病原菌菌斑,然后比较对照组和实验组的菌斑大小,实验组病原菌菌斑越小表明内生菌抗性
效果越好,D正确。
15. 利用杨木生产燃料乙醇的基本流程主要包括原料粉碎、提高纤维素浓度的预处理、释放
单糖的梅解糖化、产生乙醇的微生物发醉、乙醇脱水的蒸工艺等步骤(预处理过程所需的果
胶晦常来自于黑曲霉等微生物)。下图为发醇阶段菌种接种量对发醇结果的影响。下列说法正
确的是(
)
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△-酒精含量 一-残糖含量
一来来
3.5
酒92
一
藉90
_8
0.5
菌种接神量%
A. 培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸性,果胶融是黑曲露分泌的一种单细胞蛋白
B. 在伊红一亚甲蓝培养基上可箭选出高产纤维素的菌株用于梅解化过程
C. 接种的菌种为醇母菌,当接种量为12%左右时,发醇后的酒精含量与残糖含量相等
D. 接种量超过15%时,酒精产量反而有所降低的原因可能是菌种生长消耗大量的糖分
答案:D
解析:培养黑曲霉时,一般需将培养基调至酸性,但单细胞蛋白指微生物菌体,果胶晦不属
于单细胞蛋白,A错误:伊红-亚甲蓝培养基是鉴定大肠杆菌的培养基,本实验应该用刚果
红培养基筛选高产纤维素晦菌株,B错误;酒精发醇的菌种为母菌,当接种量为12%左右
时,发后的酒精含量与残糖含量曲线有交点,但两者的纵坐标数值及单位均不同,故发醇
后二者含量不同,C错误;由图可知,菌种接种量为15%时,对应的酒精含量达到最大值,
接种量超过15%时,菌种数量多,自身的生长会大量消耗反应物,导致酒精产量降低,D正
确。
16.(2025;江苏扬州开学考试)嗜盐单胞菌是一类嗜盐微生物,能够在高pH、高盐和高温等极
端条件下生长。聚轻基脂防酸能(PHA)是由微生物利用多种碳源发醇产生的高分子聚的总
称,它具有类似于合成塑料的物化特性及合成塑料所不具备的生物可降解性等许多优秀性能。
下图为实验室利用嗜盐单胞菌生产PHA的工艺流程,下列说法错误的是(
)
单
揽祥器
#
菌
,p词
[其他营养物
,空气)
温度调节
盐
密或餐厨 预
PH分
纯化
备□
开放式发系统
A. 使用嗜盐单胞菌能够节约资源,还能建立抗杂菌污染的开放式发醇系统
B. 实验室用嗜盐单胞菌发醇产生PHA时,需要提供无氧等发条件
C. 发醇过程中,要及时添加必需的营养组分,严格控制温度等发醇条件
D. 可在发结束之后,采用分离和提纯等方法将PHA从发醇液中分离出
答案:B
。
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解析:嗜盐单胞菌是一类盐微生物,能够在高pH、高盐和高温等极端条件下生长,所以使
用盐单胞菌能够节约淡水资源,即便在没有灭菌的情况下也很难感染杂菌,A正确;图示
用盐单胞菌发醇产生PHA时有提供空气,所以提供的是有氧发醇条件,B错误;PHA是
嗜盐单胞菌的代谢产物,在发醇后应采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品,D正确。
17.(2024辽宁沈阳质量监测)氮浓度过高是引起水体富营养化的主要原因之一,水体富营养
化严重影响了水生生物的正常生长。为此,科研人员分离、纯化出三类细菌,通过这三类细
菌的作用,将水体中过量的按盐、亚硝酸盐及硝酸盐转化为氮气释放到大气中,从而降低了
水体富营养化,反应过程如下,回答下列问题
亚酸细菌
硝酸细菌
反硝化细菌
NO-2
NO-3'
NH
2
(1)科研人员在配制筛选亚硝酸细菌的培养基时,应以
为唯一氮源。
(2)在培养亚硝酸细菌过程中需进行振荡培养,目的是
,培养若干天后,应选择培养瓶中亚礴
酸盐含量
的培养液,采用
法将其接种于含有格里斯试剂(注
格里斯试剂可与亚硝酸盐反应生成红色物质。)的固体培养基上,得到分布均匀的单菌落,再
选择周围红色较深的单菌落,用液体培养基培养,使亚硝酸细菌的数量进一步增多。在上述
过程中选择周围红色较深的单菌落的原因是
(3)在上述研究的基础上,科研人员又筛选并纯化得到反硝化细菌12株,对其产气能力和培
养液中硝酸盐含量(用总氢表示)的测定结果如下,据此分析,科研人员在选择反硝化细菌用
于水体净化时,最好选择
菌株,原因是
培养时间/d
7_8
3
14~15
产气
产气
产气情况
产气
菌株
D2、D6、D10、D12
D3、D4、D8、D9 D1、D5、D7、D11
答案:(1)按盐(或NH+4或NH)
显著升高(或高
(②)使目的菌与培养液中的营养成分充分接触:增大培养液中的O.含量
稀
10
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