2026届高三一轮复习生物：微生物的培养技术及应用课件

课堂随练 某酒厂以大米为主原料，利用酵母菌发酵生产米酒，其主要工艺流程如下: 试就生产过程回答下列问题。 (3)在酿酒业中,为了保持酒的风味不变，应让酵母菌进行 (填“无性生殖”或“有性生殖”)，这是利用了 ；为了研制新酒，应让酵母菌进行 (填“无性生殖”或“有性生殖”)，这是利用了 。 无性生殖 无性生殖能保持亲本性状的稳定性 有性生殖后代有较大的变异性 有性生殖 糖化 发酵 后加工（勾兑、储运等） （4）啤酒生产中，发酵后期，如果密封不严，会使啤酒变酸，你知道这是发生了什么变化吗？ 酒精在醋酸菌的作用下被氧化产生乙醛，最后变为醋酸。 食品添加剂 酶制剂 嗜热菌、嗜盐菌可以用来生产洗涤剂，嗜低温菌有助于提高热敏性产品的产量。 二、发酵工程及其应用 3.发酵工程的应用 微生物肥料利用了微生物在代谢过程中产生的　　　、　　　 等来增进土壤肥力，改良土壤结构，促进植株生长。 (3)在农牧业上的应用P27 生产微生物肥料 有机酸 生物活性物质 例如：利用根瘤菌和固氮菌生产的根瘤菌肥、固氮菌肥 发酵工程的应用 利用微生物的代谢产物 微生物农药是利用　　　或　　　 来防治病虫害的。 微生物农药作为　　　　的重要手段 (3)在农牧业上的应用P27 生产微生物农药 生产微生物肥料 微生物 其代谢物 生物防治 微生物或代谢产物 防治病虫害种类 苏云金杆菌 80多种农林害虫 白僵菌 玉米螟、松毛虫 一种放线菌产生的抗生素（井冈霉素） 水稻枯纹病 发酵工程的应用 与化学农药相比，微生物农药具有成本低、无污染、见效慢的特点 微生物含有丰富的　　　。 (3)在农牧业上的应用 生产微生物农药 生产微生物肥料 生产微生物饲料 蛋白质 以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发酵获得了大量的 ，即单细胞蛋白。 微生物菌体 单细胞蛋白=微生物菌体 单细胞蛋白成分：不仅含有丰富的蛋白质，还含有糖类、脂质和维生素等物质,可用作食品添加剂、微生物饲料。 在青贮饲料中添加乳酸菌，可以提高饲料的品质，使饲料保鲜，动物食用后还能提高免疫力。 (4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株________进行后续相关研究，理由是_________________________________________________________________________________________________________________________。 　该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪的能力强，净化效果好 B (4)在其他方面的应用 ②对极端微生物（生活在高温、高压、高盐和低温环境）的利用 ①解决资源短缺和环境污染问题 利用纤维废料发酵生产酒精、乙烯等能源物质 发酵工程正渗透到几乎所有的工农业领域，在助力解决　 和　　 等方面的重大问题上，作出了越来越大的贡献。 粮食、环境、健康 能源 利用嗜热菌、嗜盐菌生产洗涤剂 嗜低温菌有助于提高热敏性产品的产量 发酵工程的应用 课堂小结 食品工业 医药工业 生产传统发酵产品 农牧业 其他方面 生产食品添加剂 发酵工程应用 生产酶制剂 生产药物、疫苗 生产微生物肥料 生产微生物农药 生产微生物饲料 解决资源短缺与环境污染问题 将极端微生物应用于生产实践 利用微生物的代谢产物 利用微生物及其代谢产物 利用微生物 8 1.与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。判断下列相关表述是否正确。 (1)发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵（ ） (2)发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。（ ） (3)在发酵工程的发酵环节中,发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖,也会影响微生物的代谢途径。（ ） (4)通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白。（ ） （5）单细胞蛋白是通过发酵产生的大量微生物分泌蛋白。（ ） × √ √ × 一、概念检测 练习与应用（P28） 单细胞蛋白即微生物菌体，而不是微生物的代谢物 × 都是利用微生物来进行发酵 高考真题演练 1.（2024·江苏·高考真题）关于“利用乳酸菌发酵制作酸奶或泡菜”的实验，下列叙述正确的是（     ） A．制作泡菜的菜料不宜完全淹没在煮沸后冷却的盐水中 B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌 C．发酵装置需加满菜料或牛奶并封装，以抑制乳酸菌的无氧呼吸 D．控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质 为制造无氧环境，制作泡菜的菜料要完全淹没在煮沸后冷却的盐水 巴氏消毒法；如果采用市售未开封的鲜奶,可直接使用，不需要灭菌 利于 D 2.（2024·江西·高考真题）井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变种（JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长）发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于JGs发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（     ） A．JGs可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的基因 B．JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量 C．提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量 D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细胞数量的变化 基因表达的产物是蛋白质，而井冈霉素是JGs发酵生产的一种抗生素 该过程会影响JGs的数量，进而影响井冈霉素的产量 但若浓度过大，反而会降低井冈霉素的产量 D JGs是一种放线菌，菌体呈丝状生长，形成的菌落难以区分 3.啤酒是以麦芽汁为原料，经酿酒酵母发酵制得。传统啤酒酿造过程中，发酵在敞开式发酵池中进行，麦芽汁中接入酵母后通入大量无菌空气，之后会产生大量气体翻腾逸出，在麦芽汁表面形成25～30 cm厚的气泡层(泡盖)，然后停止通气，进入静止发酵阶段。一段时间后可得啤酒。下列说法错误的是 A.用赤霉素溶液浸泡大麦种子可以有效促进α-淀粉酶合成，增加麦芽汁 　中可发酵糖的含量 B.静止发酵阶段酵母菌主要进行无氧呼吸 C.泡盖的形成是由于酵母菌有氧呼吸产生CO2，能将麦芽汁与空气隔绝 D.麦芽汁仅能为酿酒酵母的发酵过程提供碳源和水 D 还能提供氮源、无机盐、维生素 4.大本p309-6（2022湖北，13）废水、废料经加工可变废为宝。某工厂利用果糖生产废水和沼气池废料生产蛋白质的技术路线如图所示。下列叙述正确的是（　　） A．该生产过程中，一定有气体生成 B．微生物生长所需碳源主要来源于沼气池废料 C．该生产工艺利用微生物厌氧发酵技术生产蛋白质 D．沼气池废料和果糖生产废水在加入反应器之前需要灭菌处理 A 酵母菌细胞呼吸会产生CO2 果糖生产废水（含糖类多） 需氧（搅拌） 沼气生产利用的是厌氧微生物，在连续搅拌反应器中，厌氧微生物会被抑制，不用灭菌 5．下图是啤酒生产的主发酵阶段工艺流程，相关叙述错误的是 （ ） A．过程a的目的是获得大量的淀粉酶，过程b温度不宜过高 B．过程d的主要目的是为酵母菌发酵提供可溶性糖 C．过程f是发酵工程的中心环节，需要严格控制温度、pH和溶氧量等D．过程g通常采用高温蒸煮法进行消毒 典题演练•破解高考 D 会影响品质，采用过滤的方法，除去啤酒中的大部分微生物，延长保质期 杀死种子胚，但不使淀粉酶失活 1. 在青霉素的发酵生产过程中，人们遇到了两个问题。请你运用所学知识或查阅资料，并发挥想象力，提出解决这些问题的思路。 (1) 青霉素发酵是高耗氧过程，如何能够保证在发酵过程中给微生物持续高效地供氧呢？(提示：血红蛋口具有携带O2的能力) 可以用基因工程的方法，将血红蛋白基因转入青霉素生产菌来提高菌体对氧的吸收和利用率。 (2) 在青霉素发酵过程中，总有头孢霉素产生。人们通过对青霉素生产菌代谢途径的研究发现，在青霉素与头孢霉素的合成过程中，它们有一个共同的前体，这个前体经过两种不同酶的作用分别合成两个产物。如何改造青霉素生产菌使其只生产青霉素呢？ 敲除催化头孢霉素产生的酶的基因或者抑制催化头孢霉素产生的酶的基因的表达，则它们的共同前体只能合成一种产物 1.2微生物的培养技术及应用（一） 高压蒸汽灭菌 液体培养基 无细胞结构 原核细胞 真核细胞 真菌：酵母菌、毛霉等； 原生生物：草履虫、变形虫等 微生物的类群 病毒：噬菌体等DNA病毒；新冠病毒等RNA病毒 细菌、蓝细菌、放线菌等 1.微生物的概念： _____________________________的统称。 难以用肉眼观察的微小生物 本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。 2._______________，____________________________是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。 防止杂菌污染 获得纯净的微生物培养物 培养微生物应做到: (1）提供微生物生长繁殖所需合适的营养和环境条件 (2）确保其它微生物无法混入 (3)将需要的微生物分离出来 配制培养基 无菌技术 微生物的纯培养 （一）培养基的配制 P9 1.培养基概念： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 3.培养基类型： 2.培养基作用： 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 按物理性质划分： 按化学成分划分： 按用途划分： 固体培养基 液体培养基 天然培养基 合成培养基 鉴别培养基、基础培养基 选择培养基、 半固体培养基 一.微生物的基本培养技术 ⑴按物理性质划分： 固体培养基 液体培养基 琼脂 分离、计数、鉴定等 扩大培养、 工业生产 琼脂 P9微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长形成肉眼可见的菌落 半固体培养基 观察菌体的运动等 注意：仅作为凝固剂，一般不能被微生物利用，不能为微生物生长提供能量和碳源。 p14摇床、振荡、搅拌的目的？ 增加培养液中O2含量，有利于充分利用营养物质 20 ①加入伊红美蓝的培养基P30： ②加入刚果红的培养基P20： 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 的培养基。（分离出一种或一类微生物） 鉴别大肠杆菌 鉴别纤维素分解菌 ③加入酚红指示剂的培养基： 鉴别尿素分解菌 (2)按培养基的功能划分：P16 ①以尿素为唯一氮源的培养基P18： ②添加某种抗生素的培养基： ③以纤维素为唯一碳源的培养基P20： ④不加氮源的无氮培养基： ⑤不加含碳有机物的培养基： 挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落 基础培养基 鉴别培养基 选择培养基 含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质 在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用于鉴别不同类型微生物的培养基 分离尿素分解菌 分离筛选某抗生素抗性菌株 分离纤维素分解菌 分离固氮菌 分离自养型微生物 变红 培养基的类型及用途 划分标准 培养基种类 特点 用途 物理性质 化学成分 用途 不加凝固剂 加凝固剂，如琼脂 工业生产 观察微生物的运动、 分类鉴定 微生物分离、计数、鉴定、保藏菌种 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 培养基成分明确 分类、鉴定 允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 培养、分离出特定微生物 在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物 鉴别不同种类微生物 天然培养基 合成培养基 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 选择培养基 鉴别培养基 一、培养基的配制 4.培养基的营养成分： （1）一般都含有碳源、氮源、水、无机盐 碳源 无机碳源：CO2、CO32-、HCO3- 有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等 自养微生物 异养微生物 氮源 无机氮源：铵盐、硝酸盐、NH3等 有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等。 无机盐 功能：调节pH 维持渗透压 水 功能：良好的溶剂 细胞结构的重要组成成分、参与化学反应等 有机碳既是碳源又是能源。 ①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_________； 一、培养基的配制 4.培养基的营养成分： （2）特殊条件： 满足微生物对_____________________________的需求 ④培养厌氧微生物时，需要提供_______的条件。 ②培养霉菌时，需要将培养基调至_______； ③培养细菌时，需要将培养基调至________________； 维生素 酸性 中性或弱碱性 无氧 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源（主要）、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 碳源、氮源（主要）和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000ml 水 pH、特殊营养物质、氧气 特殊营养物质： 维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等 牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。 为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。 (1)如果培养基里没有有机碳源，则培养的是自养型微生物；若含有有机碳源，则为异养型微生物。 (2)并非所有微生物的培养基中都必须含有碳源、氮源，培养自养微生物不需要添加碳源（微生物可以利用空气中的二氧化碳），培养固氮微生物不需要添加氮源（固氮菌可固定空气中的氮）。 (3)微生物最常用的碳源是糖类；最常用的无机氮源是铵盐和硝酸盐。 (4)病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活。目前不能利用人工培养基来培养病毒，只有接种在活细胞或组织中，病毒才能增殖。 小结： 【基础过关】 (1)所有的培养基中都要加入琼脂。( ) (2)是碳源的物质不可能同时是氮源 。( ) (3)培养霉菌时一般需将培养基调至碱性。( ) (4)培养厌氧型微生物时，除需要提供无机碳源之外，还需要提供无氧的条件。( ) × × × × (5)凡碳源都提供能量。（ ） (6)除水以外的无机物只提供无机盐（ ） (7)无机氮源也可能提供能量。（ ） (8)培养基只能用于培养微生物。（ ） × × √ × 碳源的类型要看其同化作用类型，若为自养型则提供无机碳源，若为异养型则需要提供有机碳源。 如：蛋白胨含有C、N元素，既可作为碳源也可作为氮源。 培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物 如：氨是硝化细菌的无机氮源，氨的氧化也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。 可能提供碳源、氮源 CO2是光能自养型细菌的碳源，但不提供能量 1、下表为某培养基的配方,下列叙述正确的是( )。 从物理性质看该培养基属于液体培养基 该培养基中属于碳源的物质只有葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨 该培养基缺少特殊营养物质 该培养基调节合适的pH后就可以直接接种使用 练习与应用 2、下列可以作为自养型微生物氮源的是( )。 A. N2、尿素 B.牛肉膏、蛋白胨 C.尿素、酵母粉 D.铵盐、硝酸盐 碳源、氮源、 特殊营养物质 ①提供无机盐； ②调节pH 染色剂 A D 1.概念： _________________的培养微生物的操作技术 2.类型： 主要包括______和_______。 （1）对实验操作的_____、操作者的__________，进行清洁和消毒。 （2）将用于微生物培养的______、___________和________等进行灭菌。 还能有效避免操作者被微生物感染。 防止杂菌污染 消毒 灭菌 空间 衣着和手 器皿 接种用具 培养基 二、无菌技术 注意：实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。 培养皿 接种环 培养基 二、无菌技术 接种室、接种箱或超净工作台可用紫外线照射30min（破坏DNA结构） 100℃煮沸5-6 min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。 对象：不耐高温的液体，如：牛奶（高温会破坏牛奶的营养成分） 62-65℃消毒30 min或72-76℃处理15s或80-85℃处理10-15s （1）常用的消毒方法 用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源等 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药物消毒 紫外线消毒 指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 消毒： 2.无菌技术的类型： 在照射前，适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。 教材P10〔相关信息〕 生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。 芽孢 有些细菌在恶劣的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。在适宜条件下，可萌发形成繁殖体。 芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。 孢子 细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。脱离母体后能发育成新个体。 二、无菌技术 灭菌： 2.无菌技术的类型： 指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。 二、无菌技术 类型 适用范围 操作方法 消 毒 灭 菌 较为温和理化方法，杀死部分微生物 强烈的理化方法，杀死所有微生物(包括芽孢、孢子) 煮沸消毒法 日常生活 100 ℃煮沸5～6 min 巴氏消毒法 不耐高温的液体 62-65℃消毒30 min或72-76℃处理15s或80-85℃处理10-15s 化学药物 生物活体、水源等 擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源 紫外线 紫外线照射30 min 灼烧灭菌 接种工具(涂布器、接种环)、试管口或瓶口等 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 干热灭菌 耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等 物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h 湿热灭菌 培养基等,生产和实验室常用 高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min 接种室、实验室、超净工作台 1.下列有关以CO2为唯一碳源的自养微生物所需营养物质的描述中，错误的是(　　) A.铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮素 B.碳源物质不是该微生物的能源物质 C.水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质 D.琼脂是该微生物的营养要素之一 解析　铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮素，A正确； 以CO2为唯一碳源的自养微生物，二氧化碳不是该微生物的能源物质，B正确；水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质，C正确； 琼脂是凝固剂，不是该微生物的营养要素之一，D错误。 D （2018全国Ⅱ）在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题: (1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具      (填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。  (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是                         。 (3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能                   。在照射前,适量喷洒                                     ,可强化消毒效果。  (4)水厂供应的自来水通常是经过            (填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。  (5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因是                       。  可以 在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少 破坏DNA结构 苯酚或煤酚皂溶液等消毒液 氯气 未将锅内冷空气排尽 1.相关概念 2.微生物纯培养的步骤 (1)培养物： (2)纯培养物： (3)纯培养： 获得 的过程。 配制培养基 灭菌 接种 分离 培养 三、微生物的纯培养 在微生物学中，将接种于 内，在合适条件下形成的含 的群体。 由 所获得的微生物群体。 纯培养物 培养基 特定种类微生物 单一个体繁殖 念珠菌 霉菌 酵母菌 一 微生物的纯培养 三 （注：单菌落属于种群；不同菌落的大小、形状、隆起程度、颜色等不同，是鉴定菌种的重要依据） 平板划线法、稀释涂布平板法 （3）将单个微生物分散在固体培养基上的方法： (1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 (2)单菌落：一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 微生物群 分散或稀释 单个微生物 单菌落 繁殖 在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征 （二）纯培养的步骤： 培养基：用高压蒸汽灭菌锅湿热灭菌 培养皿：在干热灭菌箱内干热灭菌 一 微生物的纯培养 三 ①配制培养基 ②灭菌 ③倒平板 1.制备培养基 P12 称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。（有时需调pH） ③倒平板 待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 ①拔出锥形瓶的棉塞 ②将瓶口迅速通过火焰 ③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖 ④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置 目的：既可以防止培养基表面的水分过快挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 目的：防止瓶口微生物污染培养基 温度高于50℃会烫手；低于50℃，若不及时操作，琼脂会凝固。（琼脂在44℃会凝固）可以用手触摸锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可开始倒平板。 思考讨论： 1.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。 2.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？ 2. 接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。 (1)原理： 单个微生物 微生物群 单菌落 连续划线 分散或稀释 生长繁殖 (2)方法：“平板划线法” ①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红 ②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞 ③试管口通过火焰 ④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 ⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞 ⑥在火焰附近将培养皿打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线 “平板划线法”实验操作 划3个平板（重复实验）；1个不划线（空白对照） 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次 ②每次划线前接种环进行灭菌，待冷却后再开始画线 ③划线首尾不能相接（最后一次划线不要与第一次划线相连） ④划线结束后,接种环也要灭菌，培养皿倒置培养 （3）平板划线法注意事项 分区划线法（最常用） 冷却 冷却 冷却 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者 杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞 杀死接种环上原有微生物 思考讨论： （1）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ （2）在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 线条末端微生物的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。 (3)为什么最后一次的划线与第一次的划线不能相连？ 最后一次的划线已经将微生物稀释成单个的细胞，如果与第一次的划线相连则增加了微生物的数目，达不到纯培养的目的。 43 3.培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h. 结果分析与评价 1、未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？ 在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染或灭菌不彻底。 思考：设置未接种平板组的意义是什么？ 通过观察未接种平板是否有菌落存在以确定培养基是否被污染或灭菌是否彻底。 1.若要按照如图d进行划线，那么在接种划线的操作过程中，共灼烧了几次接种环？ 图d中共划了5个区域，在每次划线前后均需要对接种环灼烧灭菌，因此共需要灼烧接种环6次。 2.判断：每次划线都要从上一次划线的起始端开始(　　) × 在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线。 3.判断：经培养后，只有在最后一次划线上才会出现单菌落(　　) 在稀释度高的区域都会出现单菌落，不一定只有在最后一次划线上才会出现单菌落。 × × √ × 46 × √ √ 47 　课后练习 1. 判断下列相关表述是否正确。 （1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（ ） （2）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（ ） × × 2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？ 晒干——降低食品的水分含量； 腌制——通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖； 低温储存——通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。 营养物质浓度过高，渗透压高，会导致细胞失水 含有代谢废物 考点二：微生物的选择培养和计数 （一）实验室中微生物筛选的原理： 人为提供 的条件（包括 、 和 等），同时 。 有利于目的菌生长 抑制或阻止其他微生物的生长 营养 温度 pH （二）概念： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 （三）类型： 一、选择培养基 （2）利用改变培养条件进行选择培养。 （1）利用营养缺陷进行选择培养 （3）利用添加某种化学物质进行选择培养 举例： （2）利用改变培养条件进行选择培养。 70～80℃的高温 分离出耐高温的水生栖热菌 使用将pH调至酸性的培养基 分离出耐酸菌（霉菌） （1）利用营养缺陷进行选择培养 不加有机碳源的培养基 分离出自养型微生物 不加有机氮源的培养基 分离出固氮菌 （3）利用添加某种化学物质进行选择培养 加入青霉素 分离出酵母菌、霉菌等真菌（青霉素会杀死细菌） 一、选择培养基 加入高浓度食盐 分离出金黄色葡萄球菌（耐高盐） 探究·实践 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 讨论： 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 设计一种选择培养基,尿素作为唯一氮源 区别：只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。 (细菌生长的氮源) 尿素 NH3 脲酶 尿素分解菌 二、微生物的选择培养 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 用平板划线法接种培养结果的图片如下。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？ 　 不能，平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。 二、微生物的选择培养 1.概念：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法---稀释涂布平板法。 （一）稀释涂布平板法： (1)铲取土壤，将样品装入纸袋中。 (2)将10g土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的是试管中，依次等比稀释。 （1）土壤取样 （2）梯度稀释 （3）涂布平板 （4）恒温培养 1×10 1 mL 1 mL 1×107 1×106 1×105 1×104 1×103 1×102 9 mL 无菌水 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 90mL无菌水 二、微生物的选择培养 55 二、微生物的选择培养 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 微量移液器 （3）涂布平板 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 三、微生物的数量测定 ①分离微生物 ②统计样品中活菌的数目 1.稀释涂布平板法 (1)原理 (2)操作过程 ①一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品进行培养。 ②在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 数量测定方法： 稀释涂布平板法——间接计数法 显微镜直接计数法——直接计数法 57 (3)注意事项： 统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是 菌落。因此，统计结果一般用 而不是用活菌数来表示。 少 一个 菌落数 下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析，每克土壤中的菌株数约为多少？ 约为1.7×109个。 1×102 1×106 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)， M代表稀释倍数。 实例1：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ （80+90+100）/3 0.1 × 105 =9 ×107个 用稀释涂布平板法接种培养的结果如图所示。与平板划线法相比，为什么稀释涂布平板法可以用于细菌的计数？ 稀释涂布平板法会进行等比稀释，在合适的稀释倍数下，均匀涂布得到的菌落互不接触，可以确定菌落的密度，再通过计算可以得知原液的菌落数。 比较 平板划线法 稀释涂布平板法 主要步骤 工具 用途 单菌落的获得 结果 共同点 平板划线法和稀释涂布平板法的比较 涂布器 接种环 都能获得单菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征 分离纯化菌种，获得单菌落（不能计数） 分离纯化菌种，获得单菌落，可以计数 接种环在固体培养基表面连续划线 ①系列梯度稀释操作； ②涂布平板操作 一般从最后划线的区域挑取 稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落 1、尿素容易保存，是目前使用量较大的一种化学氮肥，尿素分子并不能直接被农作物吸收，只有被尿素分解菌分解成氨之后才能被植物利用。下图是从土壤中分离、计数尿素分解菌的过程，有关分析正确的是 A．若②过程稀释了10倍，则乙锥形瓶里盛有9mL无菌水 B．③的接种方法可用平板划线法或稀释涂布平板法 C．a、b、c培养基可以用牛肉膏蛋白胨培养基 D．若①②过程稀释了10倍，a、b、c培养基上的菌落数依次为57、58、56个，则10g土样中的尿素分解菌数量为5.7×109个 D A．3号试管的稀释倍数为1×103倍 B．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号试管的10倍 C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个 D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低 2.下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　　) 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是1个菌落 D 1×104倍 不一定，可能是5号试管的10倍 (168＋175＋167)÷3÷0.1 ×106＝1.7×109个 探究•实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 （1）实验目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。 ②计数每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。 （2）实验原理 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 （3）实验设计 实验组与对照组如何设置？ 实验组：________________________ 对照组：__________________________ 空白对照：_________________________ 在以尿素为唯一氮源的选择培养基上接种菌液 在完全培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）上接种菌液 ①不接种菌液的完全培养基②不接种菌液的选择培养基 检测培养基是否有杂菌污染 检测选择培养基是否有筛选作用 原则：确保菌落数在30∼300之间。 梯度稀释 不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。 测细菌数：一般用104、105、106稀释液。 测放线菌：一般用103、104、105稀释液。 测真菌数：一般用102、103、104稀释液。 思考: 在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？ 选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数 选择培养基（平行重复原则） 牛肉膏蛋白胨培养基 另外，还要有两个空白对照，即不接种菌液的选择培养基和不接种菌液的完全培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。 每个浓度设置4个平板 判断选择培养基是否具有筛选作用 ①实验组： 1、2、3号是接种的选择培养基➯ ②对照组： 4号是接种的牛肉膏蛋白胨培养基➯ 5号是不接种菌液的选择培养基➯ 6号是不接种菌液的牛肉膏蛋白胨培养基➯ 预期实验结果：前3组实验组 （“部分”“所有”）菌种能生长； 第4组得到 （“部分”“所有”）菌种能生长； 第5,6组正常情况下 （填“有”“无”）菌落。 用以分离并计数能分解尿素的细菌。 用以判断选择培养基是否具有选择作用。 用以验证培养基是否被杂菌污染 用以验证培养基是否被杂菌污染 部分 所有 无 完全培养基上所有菌种都生长 选择培养基上部分菌种才能生长 4.微生物的培养与观察 ①培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。 ②观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。 ③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 实验流程： 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 探究.实验 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。 稀释度 104 105 106 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 每个平板的菌落数 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察 菌落计数 土壤取样 制备培养基 实验流程： 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 探究.实验 设计如下表格记录不同菌落的特征（形状、大小、颜色）。 稀释度 菌落形状 菌落大小 菌落颜色 104 105 106 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察 菌落计数 土壤取样 制备培养基 内容 现象 结论 有无杂菌污染的判断 空白对照组的培养基中无菌落生长 菌落形态多样，菌落数偏高 选择培养基是否有筛选作用 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目 样品的稀释操作 得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板 操作成功 重复组的结果 若选取同一土样，统计结果应接近 五、结果分析与评价： 探究.实验 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 未被杂菌污染 被杂菌污染 选择培养基具有筛选作用 探究.实验 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 思考：选择培养基中长出来的菌落一定全部都是能够分解尿素的细菌吗？你如何鉴定该微生物是否一定可以分解尿素呢？ 还需要进一步的鉴定 不一定都是分解尿素的细菌，可能是自生固氮菌或利用分解尿素的细菌的代谢物进行生长繁殖的微生物。 拓展延伸 本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌,对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。 需要用“鉴别培养基” 一、原理： 脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 呈碱性，遇酚红指示剂呈 色。 红 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂变红，说明该细菌能够分解尿素。 筛选 鉴别 ①液体培养基可以直接看液体的变色情况； ②固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。 2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40% ~ 60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。 （1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。 练习与应用 实验组：________________________ 对照组：__________________________ 空白对照：_________________________ 在以纤维素为唯一碳源的选择培养基上接种菌液 在完全培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）上接种菌液 不接种菌液的牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基 2.请回答下列问题。 （3）有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤 纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。 可以选择纤维素含量丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。 可行，这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境,腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。 （2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？ 课后习题·拓展应用 高效降解菌株（如：纤维素分解菌）的挑选要求？ 挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落 摇床、振荡、搅拌的目的？ 在液体的选择培养基中培养（选择培养、扩大培养）的目的？ 筛选出纤维素分解菌并富集培养 增加培养液中O2含量，有利于充分利用营养物质 1.刚果红可以与纤维素、淀粉等多糖形成红色复合物。在CMC-Na（羧甲基纤维素钠）为唯一碳源的固体培养基上，微生物繁殖的速度很慢，加入适量土豆汁后繁殖速度加快。这是由于微生物本身酶系统的影响，一般情况下，微生物会优先利用淀粉，淀粉耗尽才会利用纤维素。从利于筛选纤维素分解菌的角度考虑，添加土豆汁的浓度不宜太____（填"高"或"低"）。实验结果显示，相对于只能分解淀粉的菌落，纤维素分解菌的菌落周围有更明显的透明圈，原因是？     随着淀粉的耗尽，纤维素分解菌还能继续分解利用纤维素，菌落周围形成更明显的透明圈 高 甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1.甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。该同学的统计结果 (填“可靠”或“不可靠”)。若不可靠，应如何改进？ 2.乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理 (填“合理”或“不合理”)。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应 ，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。 为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。 不可靠 不合理 分析实验过程中可能的影响因素（如操作是否规范、培养基配制是否合理等） 统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。 三、微生物的数量测定 2.显微镜直接计数法： 是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定容积里样品中微生物的数量。 ①优点：________ ②缺点 （1）统计结果一般是_____________________ ，不能区分死菌与活菌,因此计数的结果比实际值大。 快速直观 活菌数和死菌数的总和 显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，因此一般用来统计总菌数。但通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数。如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。 血细胞计数板常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等； 细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数； （2）不适于对运动细菌的计数。（3）个体小的细菌在显微镜下难以观察。 79 微生物的计数方法比较 内容 显微镜直接计数法 稀释涂布平板法 主要用具 计数依据 优点 缺点 操作较复杂且有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌株数＝ 每毫升原液含菌株数＝ 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板 涂布器、培养基等 菌株本身 培养基上菌落数 快速、操作简单 计数的是活菌 不能区分死菌与活菌 每个小方格中细胞数×400 ×104×稀释倍数 平均菌落数/涂布平板时所用稀释液体积×稀释倍数 =每个中方格中细胞数×中方格数×104×稀释倍数 80 3、滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现深紫色或黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 大肠杆菌菌落呈黑色或深紫色,有金属光泽 原理： 伊红—美蓝培养基(EMB)是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为大肠杆菌的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色或黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。 复习与提高P30 1.如图所示，自来水经滤膜过滤后，转移到牛肉膏蛋白胨培养基上，适宜条件下培养48 h，染色后统计变色菌落数目为165个。下列说法正确的是 A.若培养基含伊红—亚甲蓝，大肠杆菌菌落呈蓝绿色 B.自来水中大肠杆菌浓度是33个·L－1，比真实值偏大 C.为了提高准确度，需设重复实验，但不用空白对照 D.若培养基菌落数目大于300，可适当减少自来水量 D 深紫色 偏小，2个或多个大肠杆菌可能长成1个菌落 (2020·全国Ⅰ卷)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基,甲的组分为无机盐、水和S,乙的组分为无机盐、水、S和Y。 回答下列问题: (1)实验时,盛有水或培养基的摇瓶通常采用______________的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_______。甲、乙培养基均属于_____培养基。  高压蒸汽灭菌　　 琼脂 选择 (2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107 个/mL,若要在每个平板上涂布100 μL 稀释后的菌液,且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个,则至少应将摇瓶M中的菌液稀释__________倍。  104 100 μL=0.1mL (3)在步骤⑤的筛选过程中,发现当培养基中的S超过某一浓度时,某菌株对S的降解量反而下降,其原因可能是_____________ _______ 。  S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长 (4)上述实验中,甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同,但都能为细菌的生长提供4类营养物质,即________________ __，其中为细菌提供碳源的物质是 。 水、碳源、氮源和无机盐 S (2021河北)葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。 (2)为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.1mL稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则每克皮渣中微生物数量为__________个。 (3)皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至_______ ___性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是_______________________________________________________。培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为________。 8.8×106 中性或偏碱 使培养基不透明，从而使醋酸菌菌落周围出现透明圈 碳源 (4)皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌_____________________________。（简要写出实验步骤和预期结果） 实验步骤：将平板置于无氧环境下继续培养，观察菌落形态和透明圈大小 预期结果：若菌落继续生长，且透明圈增大，则为兼性厌氧型的乳酸菌菌落;若菌落不能继续生长，透明圈不再扩大，则为醋酸菌菌落 3.(2022河北高考真题节选)番茄灰霉病菌严重影响番茄生产，枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌具有抑制作用的蛋白质。为探究枯草芽孢杆菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者设计了相关实验。回答下列问题： (1)检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的抑制作用时，取适量 菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片（直径5mm）在 菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，数秒后取出滤纸片， 培养皿倒置培养后测量 大小以判定抑菌效果。 (2)枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应采用 （填“静置”或“摇床震荡”）培养。培养过程中抽样检测活菌数量时，应采用 (填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”)， 其原因是 。 番茄灰霉病菌 枯草芽孢杆菌 抑菌圈 摇床震荡 稀释涂布平板法 用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内 提示：液体培养基和固体培养基都含有水，它们的区别为是否含有凝固剂。 2．获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。 (　) 3．用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行消毒。 (　) 提示：用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行灭菌。 判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”) 1．液体培养基含有水，而固体培养基不含水。 (　) 提示：培养基分装到培养皿之前要进行灭菌。 5．平板冷凝后应将平板倒置，防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。 (　) 6．转换划线角度后需要灼烧接种环再进行划线。 (　) 4．培养基分装到培养皿后进行灭菌。 (　) $$