精品解析：山东省菏泽市曹县第一中学2024-2025学年高二下学期期中模拟生物试题

拓展级部 高二生物期中考试 模拟试题 一、单选题 1. 以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是（ ） A. ①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死 B. ②主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌 C. ③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入 D. ④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低 【答案】C 【解析】 【分析】泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。 （1）泡菜的制作流程是：选择原料、配置盐水、调味装坛、密封发酵。 （2）选用火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好的泡菜坛。 （3）原料加工：将新鲜蔬菜修整、洗涤、晾晒、切分成条状或片状。 （4）配制盐水：按照比例配制盐水，并煮沸冷却。原因是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。 （5）泡菜的制作：将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡菜坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖。在坛盖边沿的水槽中注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境。在发酵过程中要注意经常补充水槽中的水。 【详解】A、盐水煮沸是为了杀灭杂菌，沸盐水冷却后再倒入坛中主要是为了防止菜料表面的乳酸菌被杀死，A错误； B、②盐水需要浸没全部菜料，造成无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误； C、③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，为了制造无氧环境，同时可排出初期酵母菌等发酵产生的气体，C正确； D、④检测泡菜中亚硝酸盐的含量，腌制泡菜过程中亚硝酸盐的含量先增多后减少，D错误。 故选C。 2. 镇江陈醋具有“色、香、酸、醇、浓”之特色，其主要工艺流程如下图。相关叙述正确的是（ ） A. 作为工业生产，镇江陈醋的酿制过程需要做到严格无菌 B. “淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，有助于霉菌的糖化等过程 C. 接种醋酸菌后的固态发酵需要“翻缸”，主要目的是抑制杂菌 D. 后发酵时间越长，醋体中风味物质的不断堆积导致醋品更佳 【答案】B 【解析】 【分析】参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、醋酸菌参与果醋制作的工业生产，A错误； B、“淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，为霉菌的糖化等过程提供氧气，B正确； C、醋酸发酵过程中利用的微生物是醋酸菌，发酵需要充足的氧气，所以“翻缸”目的是提供氧气，C错误； D、后发酵时间不能太长，需要适宜，发酵时间越长，可能会产生其他有害的物质或者滋生其他杂菌，D错误。 故选B。 3. 研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（　　） A. a点时取样、蛋白胨氮源培养基 B. b点时取样、角蛋白氮源培养基 C. c点时取样、蛋白胨氮源培养基 D. c点时取样、角蛋白氮源培养基 【答案】D 【解析】 【分析】筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，要用角蛋白氮源培养基。 【详解】研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，所以D正确，ABC错误。 故选D。 4. 安莎霉素主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染。该抗生素是一种产自深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ） 注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落。 A. 经过A处理，试管中大多数放线菌都可产生安莎霉素 B. 在①中进行扩大培养时，接种后需对培养基进行灭菌处理 C. ②和④是完全培养基，③是缺赖氨酸的不完全培养基 D. D菌落不能产生安莎霉素，而E菌落能产生安莎霉素 【答案】C 【解析】 【分析】影印培养法是指确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法。主要操作方法是：用灭菌的丝绒覆盖在一块与培养皿同样大小（或略小）的木制圆柱体上，轻轻地在母种培养皿的菌苔上印一下，把细菌菌落全部转移到丝绒面上，然后将这一丝绒面再印在另外的选择性培养基平板上，获得与原始平板完全相同的接种平板。待培养后，比对各培养皿在相同位置出现相同的菌落，从而筛选出适当的菌株。 【详解】A、基因突变是不定向的，且突变频率很低，紫外线处理后只有极少数放线菌可能成为赖氨酸缺陷型放线菌，能产生安莎霉素，A错误； B、在①中进行菌种的扩大培养时，接种前需对培养基进行灭菌处理，接种后不能灭菌，否则会杀死目标微生物，B错误； C、②和④中所有微生物都能长出菌落，所以②④是完全培养基，③中没有D菌落，说明③具有选择作用，赖氨酸缺陷型放线菌不能在其中生长，所以③是缺少赖氨酸的不完全培养基，C正确； D、D菌落在③中不能生存，在④中可以生存，说明D菌落只能生活在完全培养基中，不能生活在缺赖氨酸的完全培养基中，即D菌落是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，可以产生安莎霉素，而E菌落在③④中均能生存，即这种微生物有无赖氨酸均可生存，所以E菌落不是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，不能产生安莎霉素，D错误。 故选C。 5. 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（ ） A. 乙菌的运动能力比甲菌强 B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基 C. 该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 【答案】B 【解析】 【分析】图中是穿刺接种的方法，根据题干中的信息“硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀”，所以根据黑色沉淀的多少，比较两种菌产生硫化氢的能力。 【详解】A、从图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明了乙菌的运动能力比甲菌强，A正确； B、为不影响菌的运动需选用半固体培养基，B错误； C、根据题意，黑色区域的面积大小反映两种菌运动能力的大小，而不能表示二者产生硫化氢的能力大小，C正确； D、微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。 故选B。 6. 为探究提高“日照蓝莓”品质和产量的新途径，某生物兴趣小组的同学以“日照蓝莓”的主要品种——兔眼蓝莓为实验材料进行脱毒处理，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述正确的是（　　） A. 取材时可选用兔眼蓝莓的芽尖等分生组织作为外植体 B. 用体积分数为70%的酒精和质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液对外植体消毒时，消毒时间尽可能长一些，以避免造成伤害 C. 再分化过程中诱导出芽和诱导生根不需要更换培养基 D. 脱毒后的兔眼蓝莓果实体积更大，产量更高，后代个体中更不易被病毒感染 【答案】A 【解析】 【分析】植物组织培养依据的原理是细胞的全能性。培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞，经脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽最终形成植物体。影响植物细胞脱分化产生愈伤组织的一个重要因素是植物激素。植物激素中细胞分裂素和生长素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。生长素和细胞分裂素的比值高时，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低时，有利于芽的分化、抑制根的形成；比值适中时，促进愈伤组织的生长。 【详解】A、芽尖等分生组织细胞分裂旺盛，且含病毒少，取材时常选用其作为外植体，A正确； B、消毒时间不宜过长，否则容易对外植体造成伤害，B错误； C、再分化过程中诱导出芽和诱导生根所需的植物激素的种类和比例不同，所以需要更换培养基，C错误； D、脱毒后的兔眼蓝莓果实体积更大，产量更高，后代个体含病毒少，但不是不易被病毒感染，D错误。 故选A。 7. 利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是（　　） A. 该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量 B. 植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产 C. 次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养 D. 利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物 【答案】D 【解析】 【分析】由于植物细胞的次生代谢物含量很低，从植物组织提取会大量破坏植物资源，有些产物又不能或难以通过化学合成途径得到，因此人们期望利用植物细胞培养来获得目标产物，这个过程就是细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞分裂的培养条件，提高了多个细胞中次生代谢物的含量，不能提高单个细胞中次生代谢物的含量，A错误； B、利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物，故可通过该技术进行植物细胞产物的工厂化生产，B错误； C、次生代谢物不是植物生长所必需的，其含量少，可以通过增加细胞的数量来增加次生代谢物的产量，C错误； D、有些产物不能或难以通过化学合成途径得到，故可利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物，D正确。 故选D。 8. 一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗 p72 的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是（ ） A. 注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大 B. 单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合 C. 利用该小鼠只能制备出一种抗 p72 单抗 D. p72 部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况 【答案】D 【解析】 【分析】根据题干信息“一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗决定簇只能刺激机体产生一种抗体”，非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 上有多个抗原决定簇，所以可以刺激机体产生多种抗体。每个抗原决定簇刺激产生的抗体是单抗。 【详解】A、单抗的制作需要筛选，而多抗不需要筛选，抗原纯度越高，产生的多抗纯度越高，因此原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响小，A错误； B、单抗制备过程中通常将经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，B错误； C、非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 上有多种抗原决定簇，一个抗决定簇只能刺激机体产生一种抗体，所以向小鼠体内注入p72 后，可以刺激小鼠产生多种抗p72的单抗，C错误； D、p72 部分结构改变只改变了部分抗原决定簇，因此由这部分抗原决定簇产生的抗体失效，但由于还存在由其他抗原决定簇刺激机体产生的抗体，所以多抗仍有效，D正确。 故选D。 9. 抗体结构分为可变区（V区）和恒定区（C区），与抗原特异性结合的区域被称为CDR区，位于V区中。由杂交瘤技术制备的鼠源单抗可诱导人体产生抗单抗抗体（ADAs），从而降低其治疗效果。单克隆抗体经过了四代的发展：小鼠单克隆抗体→嵌合单克隆抗体（将小鼠V区代替人类V区）→人源化单克隆抗体（只有小鼠来源的CDR区，其余由人类免疫球蛋白G框架组成）→全人源单克隆抗体。下列关于单克隆抗体的叙述，正确的是（ ） A. 杂交瘤细胞一般是由小鼠的骨髓瘤细胞和浆细胞融合形成的 B. 嵌合单克隆抗体、人源化单克隆抗体诱发产生ADAs的强度依次升高 C. 人鼠嵌合单抗的制备过程涉及蛋白质工程和细胞工程等生物技术 D. 人编码抗体的基因转移至小鼠中，小鼠表达出的均为完全人源化单抗 【答案】C 【解析】 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、杂交瘤细胞可由骨髓瘤细胞和小鼠的B细胞融合而成，A错误； B、结合题意可知，该技术鼠表达出完全人源化单抗，故嵌合单克隆抗体、人源化单克隆抗体诱发产生ADAs的强度依次降低，B错误； C、人鼠嵌合单抗的制备过程涉及将小鼠 V 区基因与人类抗体基因拼接等蛋白质工程技术，以及细胞融合等细胞工程技术，C正确； D、人编码抗体的基因转移至小鼠中，小鼠表达出的不一定是完全人源化单抗，可能还会受到小鼠自身细胞内一些因素的影响，导致表达产物并非完全符合人源化单抗的预期，D错误。 故选C。 10. 小鼠正常2细胞期胚胎经过电融合诱导形成四倍体胚胎，四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育形成胎盘等胚体以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。将ES细胞和四倍体胚胎聚合形成新的重构胚，可发育成完整小鼠个体，称为四倍体补偿技术。下列说法错误的是（　　） A. 重构胚中的ES细胞具有自我更新能力，但很难分化为胎盘等胚外组织 B. 重构胚发育至桑葚胚或囊胚再移植到生理状态相同的小鼠子宫内才能发育成完整小鼠个体 C. 通过四倍体补偿技术得到的小鼠个体的基因型与供体ES细胞的基因型不同 D. 利用四倍体补偿技术，可将ES细胞经过体外遗传学修饰，得到经过人为修饰的目的小鼠 【答案】C 【解析】 【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。嵌合体-遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体。 【详解】A、据题干信息“ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘”，所以重构胚中的ES细胞具有自我更新能力，但很难分化为胎盘等胚外组织，可分化为处胎盘以外的所有细胞类型，A正确； B、胚胎发育至桑椹（桑葚）胚或囊胚期再移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育，B正确； C、四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织，所以嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型相同，C错误； D、正常小鼠是二倍体，所以两个2细胞期胚胎用灭活病毒等诱导法使细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞，再经胚胎的早期培养可得到四倍体胚胎，可将ES细胞经过体外遗传学修饰，得到经过人为修饰的目的小鼠，D正确。 故选C。 11. “筛选”是生物技术与工程中重要的环节。下列叙述正确的是（　　） A. 用选择培养基筛选微生物，对照组不接种微生物，实验组接种微生物 B. 诱导植物原生质体融合时，观察是否再生细胞壁可筛选异种融合细胞 C. 制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞 D. 胚胎移植前可取囊胚期内细胞团的细胞进行性别鉴定和遗传病筛查 【答案】C 【解析】 【分析】选择培养基是将允许特定种类的微生物生长、同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基。 【详解】A、选择培养基的作用是目的菌能够正常在其上生存，其他微生物不能正常生存，为了确定选择培养基是否具有选择作用，应设计一个在完全培养基上接种的培养皿作对照，即对照组也接种微生物，只是实验组和对照组培养基的成分不同，A错误； B、诱导植物原生质体融合时，观察是否再生细胞壁不能用于筛选异种融合细胞，因为同种融合细胞也会再生出细胞壁，B错误； C、单克隆抗体制备过程中，第一次筛选要用特定选择性培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选要用抗体阳性检测方法从分子水平筛选出产生所需抗体的杂交瘤细胞，即从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞，C正确； D、胚胎移植前可取囊胚期少量滋养层细胞进行性别鉴定和遗传病筛查，D错误。 故选C。 12. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 B. 若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C. 若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D. 若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落 【答案】D 【解析】 【分析】图中质粒内，氨苄青霉素抗性基因（AmpR）内含有AcaI和PvuI的酶切位点，四环素抗性基因（TetR）内含有HindIII、SphI和SalI的酶切位点。 【详解】A、若用HindⅢ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，转录的产物可能不同，A正确。 B、若用PvuⅠ酶切，重组质粒和质粒中都有四环素抗性基因（TetR），因此在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因，B正确； C、DNA凝胶电泳技术可以分离不同大小的DNA片段，重组质粒的大小与质粒不同，能够鉴定重组质粒构建成功与否，C正确； D、SphⅠ的酶切位点位于四环素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重组质粒中含氨苄青霉素抗性基因（AmpR），因此携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）的培养基中能形成菌落，在含Tet的培养基中不能形成菌落，D错误。 故选D。 13. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（ ） A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度 【答案】D 【解析】 【分析】多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，PCR过程一般经历下述三循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。 【详解】A、增加模板DNA的量可以提高反应速度，但不能有效减少非特异性条带，A错误； BC、延长热变性的时间和延长延伸的时间会影响变性延伸过程，但对于延伸中的配对影响不大，故不能有效减少反应非特异性条带，BC错误； D、非特异性产物增加的原因可能是复性温度过低会造成引物与模板的结合位点增加，故可通过提高复性的温度来减少反应非特异性条带的产生，D正确。 故选D。 14. 荧光定量PCR可定量检测样本中DNA含量，其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针并生成荧光分子，即DNA每扩增一次，就有个荧光分子光生成（如图），荧光监测系统随时接收荧光信号变化。下列叙述错误的有（ ） A. 图示引物与胞内DNA复制所用引物的化学本质不同 B. 耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5'→3' C. 一段待扩增的DNA经过4次循环后，等长目标片段所占比例为1/3 D. 反应管内荧光信号到达设定阈值所经历的循环数，与样本DNA浓度呈负相关 【答案】C 【解析】 【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量的原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。 【详解】A、细胞内DNA的复制时，引物为RNA，而PCR反应中所需的引物为DNA，二者化学本质不同，A正确； B、耐高温的DNA聚合酶将脱氧核苷酸连接在引物的3'，故耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5'→3'，B正确； C、一段待扩增的DNA经过4次循环后，共得到24=16个DNA分子，等长目标片段在第3次循环才开始出现，第3次循环产生2个等长目标片段，第4次循环产生22=4个等长目标片段，经过4次循环后等长目标片段共有8个，所占比例为8/16=1/2，C错误； D、由荧光定量PCR技术原理“每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，并且每扩增一次，就有一个荧光分子生成”推测，反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关，反应管内荧光信号到达设定阈值所经历的循环数，与样本DNA浓度呈负相关，D正确。 故选C。 15. 将一段编码序列（CDS）插入到一个载体上，将该载体命名为pVN2024。如图A所示，将CDS插入到载体的SacⅡ位点，该位点位于lacZ基因的MCS区（含多个酶切位点），CDS的终止子上游0.8kb处有一个PstⅠ的酶切位点。为确认CDS的大小和插入方向，科研人员用不同的限制酶切割重组质粒并进行电泳，结果如图B。下列说法错误的是（ ） A载体示意图，方框内表示载体中限制酶识别位点；B不同限制酶切割产物的电泳示意图，M为标准电泳条带 A. SpeⅠ酶切可用于判断CDS插入的方向 B. 与lacZ基因相比，CDS插入时方向相反 C. CDS长度为2.6kb，在距一端0.5kb处有一个EcoRI识别位点 D. 若重组质粒同时用EcoRⅠ和SpeⅠ酶切，电泳能检测到4个不同条带 【答案】A 【解析】 【分析】线性空载体为3.0kb，MCS上有两个EcoRI位点，EcoRI酶切后产生3.0kb、2.1kb、0.5kb共3个片段，说明CDS长度为2.6kb。 【详解】A、由题意可知，CDS的终止子上游0.8kb处有一个PstⅠ的酶切位点，而SpeⅠ酶切后产生的两个片段为4.3kb和1.3kb，由此只能推出CDS上有1个SpeⅠ酶切位点，且位于CDS的中间位置，但不能判断CDS插入的方向，A错误； B、CDS的终止子上游0.8kb处有一个PstⅠ的酶切位点，由图B可知，Pst Ⅰ切割后产生了0.8kb的片段，结合图A可知，Pst Ⅰ位于CDS的终止子位置，则与lacZ基因相比，CDS插入时方向相反，B正确； C、线性空载体为3.0kb，MCS上有两个EcoRI位点，EcoRI酶切后产生3.0kb、2.1kb、0.5kb共3个片段，说明CDS长度为2.6kb，在距一端0.5kb处有一个EcoRI识别位点，C正确； D、由图B可知，重组质粒上有3个EcoRI位点，1个SpeⅠ位点，该重组质粒为一个环状质粒，若重组质粒同时用EcoRⅠ和SpeⅠ酶切，电泳能检测到4个不同条带，D正确。 故选A。 二、不定项选择题 16. 灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害。为了绿色、高效地防治灰霉病，科研人员从灰霉病多发的大棚土壤中取样、分离出多种单菌落并进行扩大培养，随后将各组微生物的无菌发酵滤液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后在平板中央接种灰葡萄孢，通过比较灰葡萄孢菌丝生长情况，从而筛选出高效的灰葡萄孢拮抗菌。相关叙述正确的是（ ） A. 在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌 B. 取无菌发酵滤液的目的是用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用 C. 为筛选出高效拮抗菌，只需要在普通培养基接种等量灰葡萄孢作为对照 D. 灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏的组别对应的微生物即为最高效拮抗菌 【答案】ABD 【解析】 【分析】纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法的过程是：由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释涂布平板法是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。 【详解】A、由题意可知，灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害，因此在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌，A正确； B、取无菌发酵滤液的目的是排除其他杂菌的干扰，利用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用，从而获得专一性的拮抗菌，B正确； C、为筛选出高效拮抗菌，需在普通培养基接种等量不同浓度的灰葡萄孢来进行实验，挑选出对灰葡萄孢拮抗效果最好的拮抗菌，C错误； D、最高效拮抗菌对灰葡萄孢的拮抗效果是最好的，导致灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏，D正确。 故选ABD。 17. 科学家将4个关键基因移植入已分化的肌肉细胞中并表达，使这个细胞成为多能干细胞(iPS细胞)，如图为该实验示意图。下列有关叙述不正确的是（ ） A. 图示过程体现了iPS细胞的全能性 B. iPS细胞所带遗传信息与肌肉细胞相同 C. 关键基因表达使细胞功能趋向专门化，降低了细胞的分化程度 D. 应用该技术可缓解器官移植时器官供应不足的问题 【答案】ABC 【解析】 【分析】分析题图：图示表示将4个关键基因移植入已分化的体细胞中并表达，使这个细胞成为具有类似干细胞的诱导多能干细胞（iPS细胞）。图中①②③表示细胞分化，其实质是基因的选择性表达。用该技术得到的新生器官替换供体病变器官，属于自体移植，不发生免疫排斥反应，这可以大大提高器官移植成功率。 【详解】A、过程①②③表示细胞分化，其实质是基因的选择性表达，该过程并没有体现iPS细胞的全能性，A错误; B、iPS细胞导入了外源基因，其遗传信息与肌细胞不同，B错误； C、关键基因表达过程将改变肌肉细胞的细胞质环境，使细胞成为具有类似干细胞的诱导多能干细胞，降低了细胞的分化程度，减弱了细胞的功能的专门化趋势，C错误； D、用该技术得到的新生器官替换供体病变器官，属于自体移植，不发生免疫排斥反应，这可以大大提高器官移植成功率，D正确。 故选ABC。 18. 猪体内隐藏的病毒少，是人类器官移植的优质供体。为防止免疫排斥，科研人员培育了用于器官移植的基因编辑猪，具体流程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. CMAH基因和β4GalNT2基因可能是抗原决定基因 B. 从1号收集的卵母细胞需在体外培养到MⅡ期再进行去核处理 C. 可用电刺激、Ca2+载体、蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚 D. 胚胎移植前需用促性腺激素对3号进行同期发情和超数排卵处理 【答案】ABC 【解析】 【分析】动物细胞核移植技术的一般步骤：①采集卵母细胞，体外培育到MⅡ期，并进行去核操作；②将供体细胞注入去核的卵母细胞；③通过电融合法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞，形成重构胚；④用物理或化学方法（如电刺激、Ca2+载体、乙醇和蛋白酶合成抑制剂等）激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程；⑤将胚胎移入受体（代孕母动物）体内，并发育成与供体遗传物质基本相同的个体。 【详解】A、由图可知，为防止免疫排斥，在取细胞核时需敲除CMAH基因和β4GalNT2基因，说明二者可能是抗原决定基因，A正确； B、从1号收集的卵母细胞需体外培养到MⅡ中期再利用显微操作进行去核处理，B正确； C、可用电刺激、Ca2+载体、乙醇或蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，C正确； D、胚胎移植前需用孕激素对3号进行同期发情，需要进行超数排卵的是1号，D错误。 故选ABC。 19. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧腺苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢 C. 5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列 D. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G 【答案】AC 【解析】 【分析】1、PCR技术： （1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA核酸合成技术。 （2）原理：DNA复制。 （3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。 （4）条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。 （5）过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。 2、双脱氧测序法的原理：在DNA聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸（dNTP）存在的情况下，如果在四管反应系统中再分别加入四种双脱氧核苷三磷酸（ ddNTP），DNA链合成反应过程中 ddNTP与dNTP处于一种竞争状态，即新合成DNA链既可能掺入正常dNTP，也可能掺入ddNTP并使新合成链终止延伸。这样在每个反应系统中形成的产物是一系列长度不等的多核苷酸片段，这些片段具有相同的起点，即引物的5'端，但有不同的ddNTP终端。 在结束反应后，用四个泳道进行电泳，分别分离各组反应体系中不同长度的DNA 片段，检测DNA片段终止末端位置的碱基种类，从自显影图谱中直接读取到与模板相匹配的新的链序。 【详解】A、利用双脱氧测序法时，PCR反应体系中加入的模板是待测的单链DNA，故只需加入一种引物，A正确； B、电泳时，产物的片段越大，迁移速率越慢。B错误； C、依据分析中双脱氧测序法的原理，可以确定每个泳道中的条带（DNA片段）的3'终端的碱基，如+ddATP的泳道中出现的条带（DNA片段）的3'终端碱基就是A。另外由于每个片段的起始点相同，但终止点不同，因此可以通过比较片段的长度来确定DNA序列中每个位置上的碱基；图示电泳方向为从上→下，即对应的DNA片段为长→短，则对应的DNA测序结果为3'→5'，如对照个体的电泳结果最短的条带为+ddCTP泳道组的条带，则说明该DNA片段5'端第一个碱基为C；因此对照个体的测序结果为5'-CTACCCGTGAT-3'，患者的测序结果为5'-CTACCTGTGAT-3'，C正确； D、对比患者和对照个体的测序结果可知，患者该段序列中某位点的碱基C突变为T，D错误。 故选AC。 20. 人干扰素（IFN）是机体免疫细胞产生的一类细胞因子。用白细胞生产干扰素时，每个细胞最多只能产生100～1000个干扰素分子，而用基因工程技术改造的大肠杆菌发酵生产（原理如图），在1～2天内每个菌体能产生20万个干扰素分子。天然的干扰素在体外保存相当困难，如果将干扰素分子上的一个半胱氨酸变为丝氨酸，在一定条件下可以延长保存时间。下列说法错误的是（　　） A. 基因工程核心步骤需要的工具酶有DNA聚合酶、限制酶、DNA连接酶，其作用部位都是磷酸二酯键 B. 将重组质粒导入大肠杆菌常用显微注射技术 C. 酵母菌或大肠杆菌都可作受体菌，二者生产的干扰素在结构上没有区别 D. 为延长保存时间，对干扰素进行改造，需通过改造干扰素基因来实现 【答案】ABC 【解析】 【分析】基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，此步骤需用到限制酶和DNA连接酶。大肠杆菌是原核生物没有内质网和高尔基体等众多细胞器，将重组质粒导入大肠杆菌常用钙离子处理法。 【详解】A、基因工程核心步骤是基因表达载体的构建，需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶，不需要DNA聚合酶，A错误； B、将重组质粒导入大肠杆菌时，要用Ca2+处理，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，B错误； C、酵母菌是真核生物，大肠杆菌是原核生物，干扰素是糖蛋白，蛋白质的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的，所以二者生产的干扰素在结构上会存在一定的区别，C错误； D、为延长保存时间，对干扰素进行改造，可以利用基因工程生产干扰素，所以需通过改造干扰素基因来实现，D正确。 故选ABC。 三．非选择题 21. 啤酒经酵母菌发酵酿制而成。生产中，需从密闭的发酵罐中采集酵母菌用于再发酵，而直接开罐采集的传统方式会损失一些占比很低的独特菌种。研究者探究了不同氧气含量下酵母菌的生长繁殖及相关调控，以优化采集条件。 （1）酵母菌是兼性厌氧微生物，在密闭发酵罐中会产生___________和CO2。有氧培养时，酵母菌增殖速度明显快于无氧培养，原因是酵母菌进行有氧呼吸，产生大量___________。 （2）本实验中，采集是指取样并培养4天。在不同的气体条件下从发酵罐中采集酵母菌，统计菌落数（图甲）。由结果可知，有利于保留占比很低菌种的采集条件是______。 （3）根据上述实验结果可知，采集酵母菌时O2浓度的陡然变化会导致部分菌体死亡。研究者推测，酵母菌接触O2的最初阶段，细胞产生的过氧化氢（H2O2）浓度会持续上升，使酵母菌受损。已知H2O2能扩散进出细胞。研究者在无氧条件下从发酵罐中取出酵母菌，分别接种至含不同浓度H2O2的培养基上，无氧培养后得到如图乙所示结果。请判断该实验能否完全证实上述推测，并说明理由_____。 （4）上述推测经证实后，研究者在有氧条件下从发酵罐中取样并分为两组，A组菌液直接滴加到H2O2溶液中，无气泡产生；B组菌液有氧培养4天后，取与A组活菌数相同的菌液，滴加到H2O2溶液中，出现明显气泡。结果说明，酵母菌可通过产生__________以抵抗H2O2的伤害。 【答案】（1） ①. 酒精##C2H5OH ②. ATP （2）无氧取样，无氧培养 （3）不能，因为没有“接触 O2 后，酵母菌内源 H2O2 浓度上升”的证据 （4）过氧化氢酶##H2O2 酶 【解析】 【分析】【关键能力】 （1）信息获取与加工 题干关键信息 所学知识 信息加工 酵母菌 兼性厌氧型微生物 无氧条件（密闭发酵罐）：酵母进进行无氧呼吸，产生酒精和CO2 有氧条件：酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖 研究者探究了不同氧气含量下酵母菌的生长繁殖及相关调控 自变量是不同氧气含量，因变量是酵母菌生长分支即相关调控情况 图甲中，无氧取样，无氧培养条件下，菌落数最多，说明该条件下，占比较低的菌种也会产生菌落，有利于保留占比很低菌种 （2）逻辑推理与论证 【小问1详解】 酵母菌在密闭发酵罐中进行无氧呼吸，会产生酒精（C2H5OH）和CO2。有氧培养时，酵母菌进行有氧呼吸，有机物被彻底氧化分解，产生大量能量，而无氧呼吸中有机物不能彻底分解，只产生少量能量，故有氧培养时酵母菌增殖速度明显快于无氧培养。 【小问2详解】 由图甲结果可知，无氧/无氧条件下，菌落数最多，因此有利于保留占比很低菌种的采集条件是无氧/无氧。 【小问3详解】 依据图乙结果可知，随着H2O2浓度的持续上升，酵母菌存活率下降（酵母菌受损程度加深），但不能证明酵母菌接触O2的最初阶段，细胞产生的H2O2浓度会持续上升，因为没有“接触 O2 后，酵母菌内源 H2O2 浓度上升”的证据。 【小问4详解】 过氧化氢酶能催化H2O2分解出现明显气泡，因此实验结果说明，酵母菌可通过产生过氧化氢酶以抵抗H2O2的伤害。 22. 基因递送是植物遗传改良的重要技术之一，我国多个实验室合作开发了一种新型基因递送系统（切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，简称CDB法）。图1与图2分别是利用常规转化法和CDB法在某植物中递送基因的示意图。 回答下列问题。 （1）图1中，从外植体转变成愈伤组织的过程属于_____；从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素有生长素和_____，该过程还需要光照，其作用是_____。 （2）图1中的愈伤组织，若不经过共培养环节，直接诱导培养得到的植株可以保持植株A的_____。图1中，含有外源基因的转化植株A若用于生产种子，其包装需标注_____。 （3）图1与图2中，农杆菌侵染植物细胞时，可将外源基因递送到植物细胞中的原因是_____。 （4）已知某酶（PDS）缺失会导致植株白化。某团队构建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体（含有绿色荧光蛋白标记基因），利用图2中的CDB法将该重组载体导入植株B，长出毛状根，成功获得转化植株B．据此分析，从毛状根中获得阳性毛状根段的方法是_____，图2中，鉴定导入幼苗中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是_____，依据是_____。 （5）与常规转化法相比，采用CDB法进行基因递送的优点是_____（答出2点即可）。 【答案】（1） ①. 脱分化 ②. 细胞分裂素 ③. 诱导叶绿素的形成；满足叶绿体利用光能制造有机物的需要 （2） ①. 遗传特性 ②. 转基因标识 （3）Ti质粒中的T-DNA能将外源基因递送到植物细胞中，并与植物细胞的染色体DNA整合到一起 （4） ①. 荧光检测选择带有绿色荧光标记的毛状根 ②. 观察幼苗是否表现出白化特征 ③. PDS缺失会导致植株白化，白化苗的出现意味着通过基因编辑技术成功实现PDS基因的敲除 （5）操作方法简单，不需要借助植物组织培养技术进行操作，且培养周期较短。 【解析】 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【小问1详解】 图1中，从外植体转变成愈伤组织的过程属于脱分化过程，该过程的本质是使细胞失去原来特定的结构和功能；从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素有生长素和细胞分裂素，这两种激素的比值能调控愈伤组织的分化方向，该过程还需要光照，因为叶绿素的形成需要光；且叶绿体利用光能制造有机物，供试管苗生长发育。 【小问2详解】 图1中的愈伤组织，若不经过共培养环节，直接诱导培养得到的植株可以保持植株A的遗传特性。图1中，含有外源基因的转化植株A若用于生产种子，其包装需标注转基因种子，即进行转基因标识。 【小问3详解】 图1与图2中，农杆菌侵染植物细胞时，利用了农杆菌含有的Ti质粒的作用，Ti质粒中的T-DNA能将外源基因递送到植物细胞中，并与植物细胞的染色体DNA整合到一起。 【小问4详解】 已知某酶（PDS）缺失会导致植株白化。某团队构建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体（含有绿色荧光蛋白标记基因），利用图2中的CDB法将该重组载体导入植株B，长出毛状根，成功获得转化植株B，该过程中通过荧光检测选择带有绿色荧光标记的毛状根即为阳性毛状根段，图2中，鉴定导入幼苗中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是观察幼苗是否表现出白化特征，因为PDS缺失会导致植株白化，而白化苗的出现意味着通过基因编辑技术成功实现PDS基因的敲除。 【小问5详解】 与常规转化法相比，采用CDB法进行基因递送的优点主要表现在操作方法简单，不需要借助植物组织培养技术进行操作，且培养周期较短。 23. 某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中，需要表达N蛋白胞外段，制备相应的单克隆抗体，增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。 Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制备，流程如图1 （1）构建重组慢病毒质粒时，选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，目的是________________。用脂质体将重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞，质粒被包在脂质体___________（填“双分子层中”或“两层磷脂分子之间”）。 （2）质粒在包装细胞内组装出由_____________组成的慢病毒，用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。 Ⅱ．N蛋白胞外段单克隆抗体制备，流程如图2 （3）用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠脾组织用___________酶处理，制成细胞悬液，置于含有混合气体的__________中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。 （4）用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行___________培养。用___________技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集___________，提取单克隆抗体。在体外培养液中进行培养时，接种入培养液中杂交瘤细胞的数量是影响单克隆抗体产量的重要因素之一，为探究一定培养液中接种杂交瘤细胞的最佳数量，请写出实验思路：________________________。 （5）利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成___________，实现特异性治疗。 【答案】（1） ①. 检测目的基因是否成功导入受体细胞 ②. 双分子层中 （2）蛋白质外壳和含N蛋白胞外段基因的核酸 （3） ①. 胰蛋白酶或胶原蛋白 ②. CO2的培养 （4） ①. 克隆化 ②. 抗原-抗体杂交 ③. 细胞培养液 ④. 将适宜的动物细胞培养液均分为体积相同的几组（可自设组数），在不同组别中接种不同数量的能产生登革病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞；一定时间后，测定各组培养液中的抗体含量 （5）抗体-药物偶联物ADC 【解析】 【分析】1、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 2、两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）；②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。 3、杂交瘤细胞的特点：既能大量增殖，又能产生特异性抗体。 【小问1详解】 构建重组慢病毒质粒时，为检测目的基因是否成功导入受体细胞，常选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因。重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞需要依赖膜融合，故质粒被包在脂质体双分子层中（即磷脂双分子层）。 【小问2详解】 由于目的基因为N蛋白胞外段基因，在包装细胞内组装出由蛋白质外壳和含有N蛋白胞外段基因的核酸组成的慢病毒，用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。 【小问3详解】 进行动物细胞培养时，需要取小鼠脾组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，制成细胞悬液，置于含有95%空气和5%的CO2混合气体的CO2培养箱中培养。 【小问4详解】 用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行克隆化培养和抗体检测。用抗原抗体杂交技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集细胞培养液，提取单克隆抗体。实验目的是探究一定培养液中接种杂交瘤细胞的最佳数量，其因变量为接种的杂交瘤细胞的数量差异，因变量为单克隆抗体的产量，所以其实验设计思路为：将适宜的动物细胞培养液均分为体积相同的几组；在不同组别中接种不同量的能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞；一定时间后，测定各组培养液中的抗体含量。 【小问5详解】 利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成抗体-药物偶联物ADC，实现特异性治疗。 24. 如图是研究人员培育能生产人血清白蛋白牛乳的转基因母牛的过程。回答下列问题： （1）获能后的精子与卵细胞相遇时，首先它释放出___________，以溶解卵细胞膜外的一些结构。判断卵细胞受精的标志通常是___________。 （2）过程②利用的技术是___________，过程⑤的操作的其优势是___________。在进行⑤之前需要对胚胎进行性别鉴定，题中应选择性染色体组成为___________的胚胎进行操作。 （3）研究人员将早期胚胎进行分割后进行⑤操作，结果接受分割胚胎的其中一头健康母牛发生流产。从胚胎分割的角度分析，造成这种现象的原因可能是___________。 （4）核移植的受体是去核的卵母细胞，卵母细胞中的核是指___________，选用去核卵母细胞做受体不仅因为其体积大易操作，卵黄中营养物质丰富最主要原因为___________。 （5）过程①中的质粒作为常用的载体，需要具备的条件是___________。(答出2点)。 【答案】（1） ①. 多种酶 ②. 观察到极体或雌、雄原核 （2） ①. 体外受精 ②. 充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，大大缩短了供体的繁殖周期 ③. XX （3）桑葚胚或囊胚的内细胞团未均等分割，胚胎发育停滞或无法发育 （4） ①. 纺锤体—染色体复合物 ②. M Ⅱ期的卵母细胞质中含有激发细胞核全能性表达的物质 （5）能在受体细胞中自我复制，或整合到染色体DNA上、具有一至多个限制酶切点、具有标记基因 【解析】 【分析】载体：（1）常用的载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（2）作为载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。（3）天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 【小问1详解】 获能后的精子与卵细胞相遇时，首先会释放顶体酶等多种酶，这些酶能溶解卵细胞膜外的放射冠和透明带等结构，帮助精子穿越这些屏障与卵细胞接触。在受精过程中，观察到极体或雌、雄原核，通常表明卵细胞已经受精。 【小问2详解】 分析题图可知，过程②卵细胞和精子进行体外受精形成受精卵，即过程②利用的技术是体外受精。过程⑤的操作是胚胎移植，其可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。由于图中的目的是要获得乳腺生物发生器，需要获取雌性的胚胎， 因此需要进行性别鉴定，选取染色体组成为XX的胚胎进行移植。 【小问3详解】 胚胎分割时，一般采用发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚，对囊胚期的胚胎进行分割时，要特别注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育，故从胚胎分割的角度分析，造成这种现象的原因可能是桑葚胚或囊胚的内细胞团未均等分割，胚胎发育停滞或无法发育。 【小问4详解】 在核移植中，卵母细胞中的核通常是指纺锤体-染色体复合物，去核操作就是去除这部分结构。选用去核卵母细胞做受体，除了它体积大易操作、卵黄中营养物质丰富外，更重要的是处于MⅡ期的卵母细胞质中存在一些能激发体细胞核全能性表达的物质，有利于重组细胞发育成新个体。 【小问5详解】 载体包括质粒、动植物病毒、噬菌体的衍生物等，质粒作为常用的载体，需要具备的条件是能在受体细胞中自我复制，或整合到染色体DNA上、具有一至多个限制酶切点、具有标记基因。 25. 驹形杆菌可合成细菌纤维素（BC）并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性能优异的生物材料，BC膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表达载体，将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC膜并可实现光控染色的工程菌株，为新型纺织原料的绿色制造及印染工艺升级提供了新思路（图一）。 回答下列问题： （1）研究者优化了培养基的_______（答两点）等营养条件，并控制环境条件，大规模培养工程菌株后可在气液界面处获得BC菌膜（菌体和 BC膜的复合物）。 （2）研究者利用T7 噬菌体来源的RNA聚合酶（T7RNAP）及蓝光光敏蛋白标签，构建了一种可被蓝光调控的基因表达载体（光控原理见图二a，载体的部分结构见图二b）。构建载体时，选用了通用型启动子 PBAD（被工程菌 RNA 聚合酶识别）和特异型启动子PT7（仅被T7RNAP识别）。为实现蓝光控制染色，启动子①②及③依次为________，理由是___________。 （3）光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，其作用为________________________（答两点）。 （4）根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色，其原因是_____。 （5）有企业希望生产其他颜色图案的BC膜。按照上述菌株的构建模式提出一个简单思路______。 【答案】（1）碳源、氮源、无机盐 （2） ①. PT7、PBAD 和PBAD ②. 启动子②和③选用 PBAD可以使工程菌无论有、无蓝光 照射都可表达无活性的T7RNAP，在蓝光照射后，无活性的 T7RNAP 转变为有活性的T7RNAP，与特异性启动子P7识别结合并转录基因1，即可用蓝光控制酪氨酸酶的表达 （3）杀死不含光控表达载体的杂菌，避免杂菌污染；筛选出含光控表达载体的工程菌 （4）蓝光诱导酪氨酸酶基因的表达，酪氨酸酶催化酪氨酸转化为黑色素，蓝光照射不到的部位酪氨酸酶不表达 （5）将酪氨酸酶替换成催化其他色素合成的酶(或将酪氨酸酶替换成不同颜色蛋白) 【解析】 【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定。 【小问1详解】 培养基的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源等，研究者培养工程菌，需要优化培养基的碳源、氮源等营养条件，并控制环境条件。 【小问2详解】 题图二a分析可知，蓝光照射下，T7RNAP N端-nMag与T7RNAP C端结合，导致无活性的T7RNAP变成有活性的T7RNAP，结合图一，蓝光处理后，RNA聚合酶（T7RNAP）识别启动子①使基因1转录获得相应的mRNA，再以其为模板通过翻译过程获得酪氨酸酶，酪氨酸酶从而催化染色液中酪氨酸形成黑色素，可见基因2和3正常表达无活性产物，被蓝光激活后再启动基因1表达，综合上述分析可知，为实现蓝光控制染色，启动子①②及③依次为PT7、PBAD 和PBAD。 【小问3详解】 光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，可杀死不含光控表达载体的杂菌，避免杂菌污染；筛选出含光控表达载体的工程菌。 小问4详解】 由小问2分析可知，细胞中T7RNAP激活，酪氨酸酶表达并合成黑色素，故用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色。蓝光照射不到的部位酪氨酸酶不表达。 【小问5详解】 由小问2分析可知，题干信息的设计思路最终BC膜被染成黑色，希望生产其他颜色图案的BC膜，则需要将酪氨酸酶替换成催化其他色素合成的酶(或将酪氨酸酶替换成不同颜色蛋白)。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 拓展级部 高二生物期中考试 模拟试题 一、单选题 1. 以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是（ ） A. ①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死 B. ②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌 C. ③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入 D. ④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低 2. 镇江陈醋具有“色、香、酸、醇、浓”之特色，其主要工艺流程如下图。相关叙述正确的是（ ） A. 作为工业生产，镇江陈醋的酿制过程需要做到严格无菌 B. “淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，有助于霉菌的糖化等过程 C. 接种醋酸菌后的固态发酵需要“翻缸”，主要目的是抑制杂菌 D. 后发酵时间越长，醋体中风味物质的不断堆积导致醋品更佳 3. 研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（　　） A. a点时取样、蛋白胨氮源培养基 B. b点时取样、角蛋白氮源培养基 C. c点时取样、蛋白胨氮源培养基 D. c点时取样、角蛋白氮源培养基 4. 安莎霉素主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染。该抗生素是一种产自深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ） 注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落。 A. 经过A处理，试管中大多数放线菌都可产生安莎霉素 B. 在①中进行扩大培养时，接种后需对培养基进行灭菌处理 C. ②和④是完全培养基，③是缺赖氨酸的不完全培养基 D. D菌落不能产生安莎霉素，而E菌落能产生安莎霉素 5. 含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（ ） A. 乙菌的运动能力比甲菌强 B. 为不影响菌的运动需选用液体培养基 C. 该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D. 穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 6. 为探究提高“日照蓝莓”品质和产量的新途径，某生物兴趣小组的同学以“日照蓝莓”的主要品种——兔眼蓝莓为实验材料进行脱毒处理，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述正确的是（　　） A. 取材时可选用兔眼蓝莓的芽尖等分生组织作为外植体 B. 用体积分数为70%的酒精和质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液对外植体消毒时，消毒时间尽可能长一些，以避免造成伤害 C. 再分化过程中诱导出芽和诱导生根不需要更换培养基 D. 脱毒后的兔眼蓝莓果实体积更大，产量更高，后代个体中更不易被病毒感染 7. 利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是（　　） A. 该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量 B. 植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产 C. 次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养 D. 利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物 8. 一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗 p72 的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是（ ） A. 注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大 B. 单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合 C. 利用该小鼠只能制备出一种抗 p72 的单抗 D. p72 部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况 9. 抗体结构分为可变区（V区）和恒定区（C区），与抗原特异性结合的区域被称为CDR区，位于V区中。由杂交瘤技术制备的鼠源单抗可诱导人体产生抗单抗抗体（ADAs），从而降低其治疗效果。单克隆抗体经过了四代的发展：小鼠单克隆抗体→嵌合单克隆抗体（将小鼠V区代替人类V区）→人源化单克隆抗体（只有小鼠来源的CDR区，其余由人类免疫球蛋白G框架组成）→全人源单克隆抗体。下列关于单克隆抗体的叙述，正确的是（ ） A. 杂交瘤细胞一般是由小鼠的骨髓瘤细胞和浆细胞融合形成的 B. 嵌合单克隆抗体、人源化单克隆抗体诱发产生ADAs的强度依次升高 C. 人鼠嵌合单抗的制备过程涉及蛋白质工程和细胞工程等生物技术 D. 人编码抗体的基因转移至小鼠中，小鼠表达出的均为完全人源化单抗 10. 小鼠正常2细胞期胚胎经过电融合诱导形成四倍体胚胎，四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育形成胎盘等胚体以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。将ES细胞和四倍体胚胎聚合形成新的重构胚，可发育成完整小鼠个体，称为四倍体补偿技术。下列说法错误的是（　　） A. 重构胚中的ES细胞具有自我更新能力，但很难分化为胎盘等胚外组织 B. 重构胚发育至桑葚胚或囊胚再移植到生理状态相同的小鼠子宫内才能发育成完整小鼠个体 C. 通过四倍体补偿技术得到的小鼠个体的基因型与供体ES细胞的基因型不同 D. 利用四倍体补偿技术，可将ES细胞经过体外遗传学修饰，得到经过人为修饰的目的小鼠 11. “筛选”是生物技术与工程中重要的环节。下列叙述正确的是（　　） A. 用选择培养基筛选微生物，对照组不接种微生物，实验组接种微生物 B. 诱导植物原生质体融合时，观察是否再生细胞壁可筛选异种融合细胞 C. 制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞 D. 胚胎移植前可取囊胚期内细胞团的细胞进行性别鉴定和遗传病筛查 12. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 B. 若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C. 若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D. 若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落 13. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（ ） A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度 14. 荧光定量PCR可定量检测样本中DNA含量，其原理是在PCR反应体系中加入引物同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针并生成荧光分子，即DNA每扩增一次，就有个荧光分子光生成（如图），荧光监测系统随时接收荧光信号变化。下列叙述错误的有（ ） A. 图示引物与胞内DNA复制所用引物的化学本质不同 B. 耐高温DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5'→3' C. 一段待扩增的DNA经过4次循环后，等长目标片段所占比例为1/3 D. 反应管内荧光信号到达设定阈值所经历的循环数，与样本DNA浓度呈负相关 15. 将一段编码序列（CDS）插入到一个载体上，将该载体命名为pVN2024。如图A所示，将CDS插入到载体的SacⅡ位点，该位点位于lacZ基因的MCS区（含多个酶切位点），CDS的终止子上游0.8kb处有一个PstⅠ的酶切位点。为确认CDS的大小和插入方向，科研人员用不同的限制酶切割重组质粒并进行电泳，结果如图B。下列说法错误的是（ ） A载体示意图，方框内表示载体中限制酶识别位点；B不同限制酶切割产物的电泳示意图，M为标准电泳条带 A. SpeⅠ酶切可用于判断CDS插入的方向 B. 与lacZ基因相比，CDS插入时方向相反 C. CDS长度为2.6kb，在距一端0.5kb处有一个EcoRI识别位点 D. 若重组质粒同时用EcoRⅠ和SpeⅠ酶切，电泳能检测到4个不同条带 二、不定项选择题 16. 灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害。为了绿色、高效地防治灰霉病，科研人员从灰霉病多发的大棚土壤中取样、分离出多种单菌落并进行扩大培养，随后将各组微生物的无菌发酵滤液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后在平板中央接种灰葡萄孢，通过比较灰葡萄孢菌丝生长情况，从而筛选出高效的灰葡萄孢拮抗菌。相关叙述正确的是（ ） A. 在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌 B. 取无菌发酵滤液的目的是用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用 C. 为筛选出高效拮抗菌，只需要在普通培养基接种等量灰葡萄孢作为对照 D. 灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏的组别对应的微生物即为最高效拮抗菌 17. 科学家将4个关键基因移植入已分化的肌肉细胞中并表达，使这个细胞成为多能干细胞(iPS细胞)，如图为该实验示意图。下列有关叙述不正确的是（ ） A. 图示过程体现了iPS细胞的全能性 B. iPS细胞所带遗传信息与肌肉细胞相同 C. 关键基因表达使细胞功能趋向专门化，降低了细胞的分化程度 D. 应用该技术可缓解器官移植时器官供应不足的问题 18. 猪体内隐藏的病毒少，是人类器官移植的优质供体。为防止免疫排斥，科研人员培育了用于器官移植的基因编辑猪，具体流程如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. CMAH基因和β4GalNT2基因可能是抗原决定基因 B. 从1号收集卵母细胞需在体外培养到MⅡ期再进行去核处理 C. 可用电刺激、Ca2+载体、蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚 D. 胚胎移植前需用促性腺激素对3号进行同期发情和超数排卵处理 19. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧腺苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢 C. 5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列 D. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G 20. 人干扰素（IFN）是机体免疫细胞产生的一类细胞因子。用白细胞生产干扰素时，每个细胞最多只能产生100～1000个干扰素分子，而用基因工程技术改造的大肠杆菌发酵生产（原理如图），在1～2天内每个菌体能产生20万个干扰素分子。天然的干扰素在体外保存相当困难，如果将干扰素分子上的一个半胱氨酸变为丝氨酸，在一定条件下可以延长保存时间。下列说法错误的是（　　） A. 基因工程核心步骤需要的工具酶有DNA聚合酶、限制酶、DNA连接酶，其作用部位都是磷酸二酯键 B. 将重组质粒导入大肠杆菌常用显微注射技术 C. 酵母菌或大肠杆菌都可作受体菌，二者生产的干扰素在结构上没有区别 D. 为延长保存时间，对干扰素进行改造，需通过改造干扰素基因来实现 三．非选择题 21. 啤酒经酵母菌发酵酿制而成。生产中，需从密闭的发酵罐中采集酵母菌用于再发酵，而直接开罐采集的传统方式会损失一些占比很低的独特菌种。研究者探究了不同氧气含量下酵母菌的生长繁殖及相关调控，以优化采集条件。 （1）酵母菌是兼性厌氧微生物，在密闭发酵罐中会产生___________和CO2。有氧培养时，酵母菌增殖速度明显快于无氧培养，原因是酵母菌进行有氧呼吸，产生大量___________。 （2）本实验中，采集是指取样并培养4天。在不同的气体条件下从发酵罐中采集酵母菌，统计菌落数（图甲）。由结果可知，有利于保留占比很低菌种的采集条件是______。 （3）根据上述实验结果可知，采集酵母菌时O2浓度的陡然变化会导致部分菌体死亡。研究者推测，酵母菌接触O2的最初阶段，细胞产生的过氧化氢（H2O2）浓度会持续上升，使酵母菌受损。已知H2O2能扩散进出细胞。研究者在无氧条件下从发酵罐中取出酵母菌，分别接种至含不同浓度H2O2的培养基上，无氧培养后得到如图乙所示结果。请判断该实验能否完全证实上述推测，并说明理由_____。 （4）上述推测经证实后，研究者在有氧条件下从发酵罐中取样并分为两组，A组菌液直接滴加到H2O2溶液中，无气泡产生；B组菌液有氧培养4天后，取与A组活菌数相同的菌液，滴加到H2O2溶液中，出现明显气泡。结果说明，酵母菌可通过产生__________以抵抗H2O2的伤害。 22. 基因递送是植物遗传改良的重要技术之一，我国多个实验室合作开发了一种新型基因递送系统（切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，简称CDB法）。图1与图2分别是利用常规转化法和CDB法在某植物中递送基因的示意图。 回答下列问题。 （1）图1中，从外植体转变成愈伤组织的过程属于_____；从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素有生长素和_____，该过程还需要光照，其作用是_____。 （2）图1中的愈伤组织，若不经过共培养环节，直接诱导培养得到的植株可以保持植株A的_____。图1中，含有外源基因的转化植株A若用于生产种子，其包装需标注_____。 （3）图1与图2中，农杆菌侵染植物细胞时，可将外源基因递送到植物细胞中的原因是_____。 （4）已知某酶（PDS）缺失会导致植株白化。某团队构建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体（含有绿色荧光蛋白标记基因），利用图2中的CDB法将该重组载体导入植株B，长出毛状根，成功获得转化植株B．据此分析，从毛状根中获得阳性毛状根段的方法是_____，图2中，鉴定导入幼苗中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是_____，依据是_____。 （5）与常规转化法相比，采用CDB法进行基因递送优点是_____（答出2点即可）。 23. 某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中，需要表达N蛋白胞外段，制备相应的单克隆抗体，增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。 Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制备，流程如图1 （1）构建重组慢病毒质粒时，选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，目的是________________。用脂质体将重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞，质粒被包在脂质体___________（填“双分子层中”或“两层磷脂分子之间”）。 （2）质粒在包装细胞内组装出由_____________组成的慢病毒，用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。 Ⅱ．N蛋白胞外段单克隆抗体制备，流程如图2 （3）用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠脾组织用___________酶处理，制成细胞悬液，置于含有混合气体__________中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。 （4）用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行___________培养。用___________技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集___________，提取单克隆抗体。在体外培养液中进行培养时，接种入培养液中杂交瘤细胞的数量是影响单克隆抗体产量的重要因素之一，为探究一定培养液中接种杂交瘤细胞的最佳数量，请写出实验思路：________________________。 （5）利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成___________，实现特异性治疗。 24. 如图是研究人员培育能生产人血清白蛋白牛乳的转基因母牛的过程。回答下列问题： （1）获能后的精子与卵细胞相遇时，首先它释放出___________，以溶解卵细胞膜外的一些结构。判断卵细胞受精的标志通常是___________。 （2）过程②利用的技术是___________，过程⑤的操作的其优势是___________。在进行⑤之前需要对胚胎进行性别鉴定，题中应选择性染色体组成为___________的胚胎进行操作。 （3）研究人员将早期胚胎进行分割后进行⑤操作，结果接受分割胚胎的其中一头健康母牛发生流产。从胚胎分割的角度分析，造成这种现象的原因可能是___________。 （4）核移植的受体是去核的卵母细胞，卵母细胞中的核是指___________，选用去核卵母细胞做受体不仅因为其体积大易操作，卵黄中营养物质丰富最主要原因为___________。 （5）过程①中的质粒作为常用的载体，需要具备的条件是___________。(答出2点)。 25. 驹形杆菌可合成细菌纤维素（BC）并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性能优异的生物材料，BC膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表达载体，将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC膜并可实现光控染色的工程菌株，为新型纺织原料的绿色制造及印染工艺升级提供了新思路（图一）。 回答下列问题： （1）研究者优化了培养基的_______（答两点）等营养条件，并控制环境条件，大规模培养工程菌株后可在气液界面处获得BC菌膜（菌体和 BC膜的复合物）。 （2）研究者利用T7 噬菌体来源的RNA聚合酶（T7RNAP）及蓝光光敏蛋白标签，构建了一种可被蓝光调控的基因表达载体（光控原理见图二a，载体的部分结构见图二b）。构建载体时，选用了通用型启动子 PBAD（被工程菌 RNA 聚合酶识别）和特异型启动子PT7（仅被T7RNAP识别）。为实现蓝光控制染色，启动子①②及③依次为________，理由是___________。 （3）光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，其作用为________________________（答两点）。 （4）根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色，其原因是_____。 （5）有企业希望生产其他颜色图案的BC膜。按照上述菌株的构建模式提出一个简单思路______。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $