3.2 基因工程—常考知识点梳理-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3

基因工程需要记住的考点 1. 基因工程的基本操作程序有：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 2.获取目的基因的方法有：通过化学方法直接人工合成；通过基因文库获取；从细胞中直接提取；利用PCR获取和扩增目的基因。 3.基因工程操作步骤中核心环节是基因表达载体的构建，构建基因表达载体的目的是： 使目的基因在受体细胞中稳定存在并且遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 4.基因表达载体上标记基因的作用是：便于重组DNA分子的筛选。 启动子的作用是：RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录。 终止子的作用是：终止目的基因转录。 复制原点作用：DNA复制的起始点，使外源基因在受体细胞中能自我复制。 在目的基因前接入乳腺中特异性表达基因的启动子目的是：确保目的基因在乳腺细胞中表达。构建基因表达载体时所用限制酶特点是：能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 构建基因表达载体时往往同时用两种限制酶切割质粒和目的基因原因是：防止目的基因和质粒自身环化，使目的基因和质粒正向连接。 5.将目的基因导入植物细胞常用方法：农杆菌转化法； 将目的基因导入动物细胞常用方法：显微注射法（受体是受精卵）； 将目的基因导入微生物细胞常用方法：Ca2＋处理法（感受态细胞：一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态）。 农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，Ti质粒上的T-DNA作用是：通过T-DNA转移，将目的基因带入被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 6.在目的基因的检测与鉴定中，需要检测目的基因和mRNA时,所用的基因探针是：用放射性同位素或荧光分子标记的含目的基因的单链DNA片段。 检测目的基因和mRNA所用技术：PCR技术。 检测目的基因原理：DNA分子杂交；检测目的基因是否转录出mRNA原理：分子杂交。 7.PCR技术的全称是：聚合酶链式反应； 其原理是：DNA半保留复制； PCR每次循环一般分为哪三步：变性、复性（退火）和延伸。 PCR反应体系中需要加入的物质有：DNA模板、2种引物、4种dNTP(4种脱氧核苷酸）、TaqDNA聚合酶、缓冲液、Mg2+等。 其中dNTP作用是：作为原料，也提供能量； Mg2+作用：激活DNA聚合酶。 8.PCR变性（温度约90℃到94℃左右）目的是：使双链DNA解旋为单链。 复性（温度约50℃至55℃左右的）目的是:使两种引物分别与两条单链DNA结合。 延伸（温度约72℃）目的是：（72℃是TaqDNA聚合酶最适反应温度），在TaqDNA聚合酶作用下，把4种脱氧核苷酸连接在引物3’端之后，形成互补的DNA子链。 9.PCR循环程序中，在变性前设置一次预变性（94℃，5min）目的是：使模板DNA完全解旋。 PCR循环中最后一次循环的延伸步骤设置成10min目的是：使未完全延伸的产物实现充分延伸。 10.PCR技术中要加入引物，引物的作用是：使DNA聚合酶能够从引物的3’端连接脱氧核苷酸，形成互补的DNA子链。 在进行PCR时通常在引物的5’端加限制酶识别序列，而不在3'端添加的原因是：使引物的3’端与模板链严格互补配对，且DNA聚合酶只能在3’端添加脱氧核苷酸，形成磷酸二酯键，保证子链从5’向3’方向延伸。 11.PCR扩增目的基因，至少经过几次循环得到等长DNA(目的基因）：3次； 经过n次循环得到等长DNA分子数共有：2n-2n； 经过n次循环共消耗引物的分子数：2n＋1－2； 经过n次循环消耗其中一种引物的分子数：2n－1 12.PCR产物的鉴定方法是：琼脂糖凝胶电泳 在凝胶中影响DNA在其中的迁移速率的因素主要有：DNA的分子大小、DNA分子的构象、凝胶的浓度等。 若电泳结果没有任何条带，从PCR操作过程角度解释可能原因是：复性温度太高、引物自连、引物互连等。 1 学科网（北京）股份有限公司 $$