3.2 基因工程的基本操作程序（第1课时）-【爱上生物课】2024-2025学年高二生物备课通关优质课件（人教版2019选择性必修3）

第2节基因工程的基本操作程序 第三章基因工程 第一课时 本节聚焦 1.基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？ 2.基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？ 从社会中来 普通棉花 转基因抗虫棉 1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。 思考：1.你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？ 2.培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤呢？ 从社会中来 培育转基因抗虫棉的简要过程 与载体拼接 普通棉花 （无抗虫特性） 棉花细胞 抗虫棉 （有抗虫特性） 导入 抗虫基因 重组DNA分子 1.目的基因的筛选与获取（前提） 2.基因表达载体的构建（核心） 3.将目的基因导入受体细胞（关键） 4.目的基因的检测与鉴定（保证） 提取 苏云金杆菌 第一步：目的基因的筛选与获取 1.目的基因 在基因工程的设计和操作中，用于改变________________或获得________________等的基因。 受体细胞性状 预期表达产物 根据不同的需要，目的基因是不同的，它主要是指_________________。 编码蛋白质的基因 如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。 也可以是一些具有调控作用的因子 资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt 抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。 科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt 抗虫蛋白抵抗虫害。 目的基因——Bt 抗虫蛋白基因（Bt基因 ） 知识拓展：基因的结构 基因1 基因2 基因3 DNA片段 放大 基因通常是 。 非编码区 非编码区 编码区 能转录相应的mRNA，进一步编码（翻译）出蛋白质的DNA区段 不直接编码蛋白质，能调控基因表达 不直接编码蛋白质，能调控基因表达 有遗传效应的DNA片段 ——通常能编码特定的蛋白质 在人类基因组中，非编码区占比超过98%，远超编码区（约2%） 获取目的基因一般获取哪一部分的DNA片段？ 基因编码区 知识拓展：基因的结构 与RNA聚合酶结合位点 RNA聚合酶识别并结合的位点，驱动基因转录出mRNA 启动子 终止子 本质： 位置： 作用： 是一段有特殊序列结构的DNA片段； 位于基因上游； 也是一段有特殊序列结构的DNA片段； 位于基因下游； 终止转录 本质： 位置： 作用： 启动子 终止子 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 1、原核细胞的基因结构 知识拓展：基因的结构 2、真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 识别结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子 非编码序列：包括非编码区和内含子 编码区 非编码区 真核细胞的基因结构 知识拓展：基因的结构 3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 的 编码区是间隔的、 的 相同点 都由能够 的编码区和具有 作用的非编码区组成的 连续 不连续 编码蛋白质 调控 不能编码蛋白质的序列 = 非编码区 原核生物的基因： 不能编码蛋白质的序列 真核生物的基因： = 非编码区+内含子 第一步：目的基因的筛选与获取 2.筛选合适的目的基因 (1)较为有效的方法之一 从相关的___________和___________的基因中进行筛选。 已知结构 功能清晰 实例：Bt 抗虫蛋白基因（Bt 基因）的筛选过程 苏云金杆菌 制成 杀虫剂 掌握目的基因的功能 掌握目的基因的结构 防治棉花害虫 发现杀虫作用与Bt基因有关 掌握Bt基因的序列 深入了解Bt基因的表达产物(Bt抗虫蛋白) Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因。 第一步：目的基因的筛选与获取 Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响。 【思考2】抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？ 【思考1】Bt基因的杀虫机理是怎样的？ 当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。 苏云金杆菌 第一步：目的基因的筛选与获取 2.筛选合适的目的基因 (2)认识基因结构和功能的技术方法 利用测序技术、序列数据库（如GenBank）、序列对比工具(如BLAST)等，找到合适的目的基因。 测序技术 序列数据库 序列比对工具 核苷酸序列比对 氨基酸序列比对 美国国家生物信息中心 测定核酸和蛋白质序列 以碱基顺序或氨基酸残基顺序为基本内容的分子生物信息数据库 把感兴趣的序列跟已经存在的序列数据库进行比较的工具。通过比对识别相关的序列，从而能获得目的基因和蛋白质的功能。 基因测序仪 第一步：目的基因的筛选与获取 3.获取目的基因的方法 （1）从生物组织中直接获取 明确了目的基因后，该怎么获得它? 从供体细胞直接获取目的基因常用的方法是“鸟枪法”。 缺点: 工作量大，具有一定的盲目性。 第一步：目的基因的筛选与获取 3.获取目的基因的方法 （2）人工合成 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA(即目的基因) 反转录 合成 反转录法： 根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 目的基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 ①前提： ②方法： DNA 合成仪 基因比较小、核苷酸序列已知 通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因 第一步：目的基因的筛选与获取 （3）从基因文库中获取 3.获取目的基因的方法 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 第一步：目的基因的筛选与获取 ①基因组文库 受体菌 该受体菌群为基因组文库 第一步：目的基因的筛选与获取 ②cDNA文库 如果用某种生物发育的某个时期的mRNA 产生的多种互补DNA（也叫cDNA）片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，那么，这个受体菌群体就叫做这种生物的 。 逆转录 cDNA文库 逆转录 第一步：目的基因的筛选与获取 ②cDNA文库 如果要将人胰岛素基因导入到大肠杆菌中表达，从哪种基因文库获取目的基因较好？为什么？ 从cDNA文库获取目的基因较好。基因组文库的基因含内含子，大肠杆菌缺乏真核基因转录后加工机制（剪切、连接RNA），而cDNA文库不含内含子。 第一步：目的基因的筛选与获取 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 有无非编码区 基因中内含子 基因多少 小 大 无 真核生物有 无 真核生物有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 （在构建表达载体时，必须加入 _________等调控元件才能实现基因的表达） 启动子 使用cDNA文库获得目的基因更加高效，去除了不能编码蛋白质的序列（如非编码区、内含子） 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR（Polymerase Chain Reaction）获取和扩增目的基因 3.获取目的基因的方法 常用 苏云金杆菌 Bt基因 ？ 大量Bt基因 提取 模拟细胞内DNA的复制过程，在体外快速扩增特定的DNA片段。 Bt基因 全称： 原理： 操作环境： 目的： 优点： 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 体外（PCR扩增仪/PCR仪） 对目的基因的核苷酸序列进行大量复制 可以在短时间内大量扩增目的基因 PCR由穆里斯等人于1985年发明，1993年获得诺贝尔化学奖 PCR扩增仪 ①PCR的概念： 第一步：目的基因的筛选与获取 DNA复制的过程 第一步：目的基因的筛选与获取 要点回顾:体内DNA复制 模板： 原料： 能量： 酶： DNA的两条母链 4种游离的脱氧核苷酸 ①条件 ATP DNA聚合酶（形成磷酸二酯键） 解旋酶（解螺旋，打开氢键） ③复制特点: ①边解旋边复制 碱基互补配对原则 （保证复制的准确进行） ②复制原则: ②半保留复制 ④子链的延伸方向： 5'端→3'端 因为 DNA聚合酶只能从5'端向3'端延伸子链。 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 体外复制怎么改进 子链合成需要引物 引物为DNA聚合酶提供了游离的3 ′端，使DNA聚合酶从3 ′端延伸子链。 DNA聚合酶不具有从头合成子链的功能 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 3’ 5’ 引物1 3’ 5’ 引物2 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 解旋酶 用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。 引物结合在模板链的3’端 第一步：目的基因的筛选与获取 是一小段能与DNA母链的一段碱基序列 的短单链核酸。 引物的概念： 细胞外（PCR）一般以DNA单链为引物 （不切除） 细胞内的DNA复制通常以RNA单链为引物 （后续被酶切除） 引物的本质： 互补配对 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 拓展延伸：引物 -3′ 5′- 3′- -5′ 子链延伸 -5′ 3′- 5′- -3′ 子链延伸 第一步：目的基因的筛选与获取 体内DNA复制参与的组分 在DNA复制中的作用 PCR中参与的组分 反应还需要其它条件： 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 （通常为小的单链RNA） 无需解旋酶，用高温代替 DNA（目的基因）模板 4种脱氧核苷酸(dNTP) 耐高温的DNA聚合酶(Taq酶） 引物（通常与两条模板链结合的2种短的单链DNA） 如缓冲液（一般添加Mg2+）、和控温设备 ②PCR的进行需要的条件： dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、dCTP） 打开DNA双链，破坏氢键 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 功能：①提供原料；②提供能量 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 ③PCR的过程： 变性 复性 延伸 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 ③PCR的过程： 耐高温的DNA聚合酶(Taq酶） 4种脱氧核苷酸（DNTP） 引物 待扩增的DNA片段（模板） 5’ 5’ 变性 复性 延伸 温度上升到90℃以上，双链DNA解聚为单链 当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。 长度相同但C-G含量高的引物需要设定的复性温度较高 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 ③PCR的过程： 当温度超过______以上时， 断裂，双链DNA解聚为两条 。 (1)变性： 氢键 单链DNA 变性 90℃ 待扩增的DNA片段 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 不需要解旋酶 思考：变性的温度为何是90℃以上的一个温度范围，而不是95℃？ 因为变性的温度与氢键的数量有关。当氢键数量越多时，所需温度就越高；反之，当氢键数量越少时，所需温度也就越低。 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 ③PCR的过程： 3’ 5’ 3’ 5’ 引物1 5’ 3’ 引物2 5’ 3’ 思考：为什么需要引物？ 引物结合在模板链的什么位置？ ①因为Taq酶不能从头开始添加核苷酸。 ②引物结合在DNA模板链 3'端位置，引导子链从 5'端→3'端方向复制。 当温度下降 到左右时， 种引物通过 与两条单链DNA结合。 (2)复性： 碱基互补配对 50℃ 两 便于引物与互补DNA链结合 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 ③PCR的过程： 当温度上升到______左右时，溶液中的4种_____________在耐高温的______________ __________的作用下，根据_____________原则合成新的DNA链。 脱氧核苷酸 DNA聚合酶 72℃ (3)延伸： (Taq酶) 3’ 5’ 3’ 5’ 引物1 5’ 3’ 引物2 5’ 3’ Taq酶 3’ Taq酶 3’ 思考1：为什么温度要上升至72℃？ 72℃是Taq酶的最适温度 碱基互补配对 思考1：Taq酶结合在引物的3’还是5’端？ Taq酶结合在引物的3’端 第一步：目的基因的筛选与获取 ③PCR的过程： 第二轮循环的产物 第三轮的产物 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 第一轮循环的产物 3’ 5’ 3’ 5’ 【特别提示】PCR扩增过程中引物、原料需要源源不断的加入。 第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物； 第二轮循环的产物作为第三轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第三轮的产物； DNA扩增成指数形式扩增（约为2n，其中n为扩增循环的次数） 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 ①DNA分子有_____个 ②总链数_____条 ③不含引物的链数：___ ④含引物的链数_____ ⑤含引物1或2的链数：______ ⑥仅含引物1的DNA数：______ ⑦仅含引物2的DNA数：______ ⑧引物1、2均含有的DNA数：_____ ⑨不含引物的DNA数：______ ⑩需要引物的总数：______ 2n 2n+1 2 2n+1-2 循环n次： 2n-1 1 1 2n-2 0 2n+1-2 ★ 第一步：目的基因的筛选与获取 （4）利用PCR获取和扩增目的基因 PCR过程可以在 中自动完成，完成以后， 常采用 来鉴定PCR的产物 琼脂糖凝胶电泳 PCR扩增仪 第一步：目的基因的筛选与获取 5’ 3’ 5’ 5’ 第一次循环 第二次循环 3’ 5’ 第三次循环 3’ 3’ 1.利用PCR技术扩增目的基因，在第几次循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段（即出现完整的目的基因）？ [思考讨论] 第一步：目的基因的筛选与获取 [思考讨论] 一般不是； 扩增的是两种引物之间所对应的特定DNA片段； 2.PCR 扩增的是完整的模板 DNA 分子吗？ 设计引物时必须依据： 目的基因的核苷酸序列 3.由此可知在扩增目的基因时，引物是根据什么来设计的？ PCR进行的前提条件是： 已知目的基因的DNA序列 第一步：目的基因的筛选与获取 [思考讨论] 4.用PCR可以扩增mRNA吗？ mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。 1.逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子； 2.核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA； 3.以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子，即cDNA [P79旁栏思考] 第一步：目的基因的筛选与获取 [拓展延伸] 问题1：复性的过程一定是引物与DNA模板链结合吗？ ①引物与DNA模板结合 ②解开的两条模板链重新结合 ③引物与引物结合 加入过量的引物，引物与模板之间的碰撞结合机会，远远高于模板互补链之间的碰撞机会。 在设计引物时，避免引物之间的碱基序列互补 问题2：怎样提高复性时引物与模板配对结合率， 而不是模板链之间配对结合呢？ 问题3：如何避免引物与引物结合？ 第一步：目的基因的筛选与获取 要求：1.写出互补链的碱基序列，并注明方向。 2.从①－④中选择2个合适的位置设计引物，写出引物的部分序列，并注明方向。 5’-ATG …… ATC GAG ACC GGT …… TAA-3’ 3’-TAC …… TAG CTC TGG CCA …… ATT-5’ ① ② ③ ④ 3’… ATT-5’ 5’-ATG… 3’ 问题4：根据查询的Bt基因编码链序列，尝试设计引物。 1、PCR扩增时至少需要____种引物，原因是________________________________________ 2 2、设计引物的要求： ①2种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是：_______________________________。 ②同种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是：_________________________ 防止引物自身配对折叠 防止引物之间配对， 导致引物不能与模板链结合 DNA的两条链是反向平行的（序列不同） 第一步：目的基因的筛选与获取 [拓展延伸] ① ② Bt基因 CT•••GGT- 5’ 引物1 引物2 5' -TCC•••AA ① ② 请你为Bt基因设计合适的引物 ••••ATA- 5’ 引物1 【拓展】 DNA的复制的原料--dNTP dNTP 是脱氧核苷三磷酸的缩写，N 是指 A、T、G、C 四种含氮碱基，包括dATP、dGTP、dTTP、dCTP。它们是由两个磷酸分子和一个脱氧核苷酸组成的，其结构简图如下： P P P ～ ～ N 脱氧核糖 A T G C 脱氧核苷酸 dNTP 为子链合成供能。 dATP dGTP dCTP dTTP 第一步：目的基因的筛选与获取 PCR技术 DNA复制 相同点 原则 原料 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞内（主要在细胞核内） 耐高温的DNA聚合酶 解旋酶、DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 PCR技术与DNA复制过程比较 及时训练 PCR无需解旋酶，用高温代替 1.下列有关体内DNA复制与PCR技术比较的叙述，错误的是 A.二者子链的延伸方向相同，均为5′端→3′端 B.二者均需要解旋酶破坏氢键来实现解旋 C.体内DNA复制需要能量，PCR反应也需要能量 D.二者遵循的碱基互补配对原则相同 √ 及时训练 7/8 2.下图表示利用PCR技术扩增目的基因的部分过程，其原理与细胞内DNA复制类似。下列叙述错误的是 A.耐高温的DNA聚合酶总将游离的脱氧核苷酸连接到3′端 B.在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段 C.引物之间或引物自身发生碱基互补配对，则不能有效扩增目的基因 D.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物A的DNA片段占3/4 √ 小结 1、目的基因的筛选： 从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选 2、目的基因的获取： 人工合成、基因文库、利用PCR获取和扩增目的基因等 DNA半保留复制 原理: PCR反应体系（条件） 过程: 3、利用PCR获取和扩增目的基因 DNA模板（目的基因） 4种脱氧核苷酸（dNTP） 引物：一小段DNA单链，与DNA母链的一段碱基序列互补配对 酶：耐高温的DNA聚合酶（Taq酶） 缓冲液、温控条件等 变性（ 90℃以上，双链DNA解聚为单链） 复性（ 50℃左右，引物与两条单链DNA结合） 延伸（ 72℃左右，Taq酶合成新的DNA链。 ） 思考 获得了足量的Bt基因后，能否直接将游离的Bt蛋白基因送入棉花细胞？ （1）游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解； （2）就算可以进行转录并翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。 核心工作——基因表达载体构建 第二步：基因表达载体的构建 ---基因工程的核心 1.构建基因表达载体的目的： 2.基因表达载体的组成 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代； （2）使目的基因能够在受体细胞中表达和发挥作用。 各个元件有什么作用？ 第二步：基因表达载体的构建 复制原点： DNA复制的起始位点 标记基因：作用为鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 启动子： 本质：有特殊序列结构的 片段 位置：基因的 。 功能： 识别和结合的部位，驱动基因转录出 。 DNA 上游 RNA聚合酶 mRNA 抗生素抗性基因，荧光蛋白基因等。 终止子： 本质：有特殊序列结构的 片段 位置：基因的 。 功能：终止 。 DNA 下游 转录 目的基因：能控制表达所需要的特殊性状 必须插到 和 之间 启动子 终止子 有时为了满足需要，在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。 第二步：基因表达载体的构建 目的基因应该插入什么位置？ 目的基因插入位点不是随意的：基因表达载体需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入 ，若目的基因插入启动子部位，启动子将失去原功能。 启动子和终止子之间的部位 诱导型启动子： 诱导型启动子 诱导物 作用 激活或抑制 目的基因表达 启动子 终止子 起始密码子 终止密码子 本质 位置 功能 DNA片段 DNA片段 mRNA上 三个相邻的碱基 mRNA上 三个相邻的碱基 目的基因上游 目的基因下游 mRNA首端 mRNA尾端 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 终止转录 翻译的起始信号（编码氨基酸） 翻译的结束信号（不编码氨基酸） 启动子、终止子、起始密码子、终止密码子的比较 第二步：基因表达载体的构建 3.基因表达载体的过程 DNA分子 （含目的基因） 限制酶处理 带有黏性末端或平末端的切口 带有相同黏性末端或平末端的目的基因片段 DNA连接酶 重组DNA分子 （重组质粒） 同种 载体 （质粒） 目的基因 限制酶 切割位点 标记基因 启动子 限制酶切割位点 终止子 复制原点 限制酶 限制酶 DNA连接酶 重组 DNA分子 [思考]如果用一种限制酶分别切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶处理后会出现几种产物？（单酶切法） 单酶切法缺点：质粒重新环化、目的基因自身环化、质粒与目的基因 反向连接 载体 目的基因 自连 片段间的连接 目的基因自连 质粒自连 目的基因与质粒连接 目的基因与目的基因连接 质粒与质粒连接 1 1’ 2 2’ 反向连接 2 1’ 1 2’ 1 2 2’ 1’ 正向连接 双酶切法：选择两种不同的限制酶同时对含目的基因的DNA片段和载体切割。 限制酶a切割 a b DNA连接酶 连接 限制酶b切割 限制酶a切割 限制酶b切割 a b 双酶切的优点: 防止质粒、目的基因自身环化 B.防止质粒与目的基因随意连接 52 及时训练 不需要终止密码子 √ 3.下列关于基因表达载体构建的叙述，错误的是 A.启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，组成它的基本单位是脱氧核 苷酸 B.基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止密码子、标记基因 等组件 C.人工构建的诱导型启动子，当诱导物存在时，可激活或抑制目的基因 的表达 D.由于受体细胞不同，基因表达载体的构建也有所差别 及时训练 4.图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述不正确的是 A.在构建重组质粒时，可用PstⅠ和Hind Ⅲ 切割质粒和外源DNA B.在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因 C.若只用PstⅠ处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反 向连接 D.导入重组质粒的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长 √ 被PstⅠ切割后，氨苄青霉素抗性基因被破坏了 及时训练 5、设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。 (1）第1组： ； 第2组： 。 引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效 引物Ⅰ′自身内部部分碱基发生互补配对而失效 （2）在DNA聚合酶的作用下，两条子链的延伸方向都是 。 DNA聚合酶只能特异地复制处于　　 之间的DNA序列，若这个过程中消 耗了引物62个,则进行了 轮的DNA复制。 （3）若用PCR技术扩增图示目的基因， 应选用的引物是 。 两个引物 从子链的5′端向3′端延伸 5 (2n+1-2)=62 引物甲、引物丙 感谢观看 Lavf58.20.100 EVCapture4.1.9软件录制 Lavf57.25.100 本视频由湖南一唯信息科技开发的EV录屏软件录制，www.ieway.cn Lavf57.83.100 $$