江苏省淮安市协作体联盟校2024-2025学年高二下学期4月期中生物试题

期中考试答案 1、 选择题（每题2分，共30分） 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C B D A D C B B C B 题号 11 12 13 14 15 答案 C A A C D 2、 多选题（每题3分，漏选1分 ，错选0分，共12分） 16 17 18 19 ABD ABD BCD BC 三 填空题（共58分） 20．（10分）(1) 倒平板 50℃左右 未在酒精灯火焰附近倒平板 (2)涂布器 (3) ① bcd (4) 大于 直接在皿底 抗生素 IV对于野生型测试菌具有较强的抑制作用，但测试菌中已经出现能抵抗抗生素 IV 的抗性突变株(2分) 21、（12分）(1)聚乙二醇（PEG） 再生出细胞壁 脱分化 再分化 生长素 细胞分裂素（最后2个顺序可颠倒） (2)植物细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性 单倍体育种 (3)6 幼苗B 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 22、（10分）(1)动物细胞培养 动物细胞融合 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞 (2)细胞融合是随机的 克隆化培养、抗体检测（2分） (3)血清和抗生素（2分，顺序不可颠倒） (4)抗原—抗体杂交 （5）特异性强，灵敏度高，可大量制备 23、（12分）(1) 动物细胞培养(早期胚胎培养) 胚胎移植 有性 (2)③④⑤②① (3)促性腺激素 胚胎 使供、受体母牛具有相同的生理状况 早期胚胎在生理状态相同的条件下空间位置的转移 (4)D、E 胎儿 (5)不确定 白面绵羊 24（14分）(1) 引物（或P1、P2）和模板（或质粒1） 既作为原料又提供能量（2分） (2) 5’ BamHⅠ、EcoRⅠ DNA连接 (3)感受态 四环素 (4)4、5、7的电泳结果接近（或大于）2071bp（2分） LacZ (5)X-gal 蔗糖和X-gal（2分） 学科网（北京）股份有限公司 $$ 期中考试解析 1．C 【分析】果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是异养兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是18～30℃、前期需氧，后期不需氧；果醋制作菌种是醋酸菌，属于原核细胞，适宜温度为30～35℃，需要持续通入氧气。 【详解】A、根据酶的专一性，可以用纤维素酶和果胶酶进行酶解以破坏细胞壁，A错误； B、果酒制作菌种是酵母菌，是利用酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理，因此果酒发酵时要密封发酵，B错误； C、果酒发酵时有二氧化碳产生，而果醋发酵时无气体产生，果酒发酵时，发酵液产生的气泡最多于果醋发酵时，C正确； D、果酒、果醋不能采用湿热灭菌法杀灭所有的微生物后装瓶，因为湿热灭菌会破坏产品的口感和品质，D错误。 2．B 【分析】分析题意和图示可知：①是倒平板，②是用接种环沾取菌液，③是进行平板划线，④是培养。制备固体培养基的基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板。 【详解】A、配制好的培养基应先调pH后进行高压蒸汽灭菌，A错误； B、培养与纯化酵母菌的过程中，为了防止杂菌污染，需要在酒精灯的火焰旁进行，因此①②③步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行，B正确； C、每次划线前后都要对接种环进行灼烧处理，因此步骤④中接种环共需6次灼烧处理，C错误； D、完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入恒温培养箱中培养，D错误。 故选B。 3．D 【分析】培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 【详解】A、培养基①是液体培养基，培养基②是固体培养基，培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂，A正确； B、步骤A通过紫外线诱发基因突变获得赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌原材料，可能是基因突变引起相关酶缺乏，从而自身不能合成所需氨基酸，B正确； C、培养基③是不添加赖氨酸的普通培养基，培养基④是添加赖氨酸的普通培养基，所以培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸，C正确； D、培养基④上，甲能在④普通培养基上生长，但不能在③不添加赖氨酸的普通培养基上生长，因此甲是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来，D错误。 故选D。 4．A 【分析】1、果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，前期需氧，后期不需氧。 2、果醋制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是需氧型细菌，属于原核细胞，条件是30~35℃，一直需氧，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 3、泡菜的制作的菌种是乳酸菌，代谢类型为异养厌氧型，乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。 【详解】A、泡菜制作过程中，盐水浓度过高会抑制乳酸菌的发酵活动，导致乳酸产生减少，从而泡菜会显得咸而不酸，A正确； B、传统制作果酒时，葡萄不能过度清洗，因为葡萄表面的野生酵母菌是果酒发酵的关键微生物，过度清洗会将这些酵母菌冲掉，导致发酵失败或杂菌污染，B错误； C、制作酱油主要依赖黑曲霉分泌的蛋白酶，而不是脂肪酶，C错误； D、果酒发酵过程中，酵母菌分解糖产生酒精和二氧化碳，同时会产生有机酸，导致pH值逐渐下降，果醋发酵过程中，醋酸菌将酒精转化为醋酸，pH值也会持续下降，D错误。 故选A。 5．D 【分析】啤酒发酵的过程分为主发酵和后发酵两个阶段，其中酵母菌的繁殖大部分糖的分解和代谢物的生成在主发酵完成。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能获得澄清、成熟的啤酒。 【详解】A、发酵工程一般是利用单一菌种进行发酵，传统发酵技术利用的微生物往往不是单一菌种，比如酿酒过程中除了酵母菌，可能还有其他微生物参与，所以发酵工程与传统发酵技术的主要区别是菌种是否单一，A正确； B、酵母菌是单细胞微生物，可采用过滤、沉淀等方法将酵母菌从培养液中分离出来，B正确； C、检测啤酒酿造过程中活体酵母菌的密度常用的是稀释涂布平板法或血细胞计数板计数法等，C正确； D、酸性重铬酸钾溶液对发酵液有影响，检测酒精应从产物中进行检测，而不是将酸性重铬酸钾溶液加入发酵液中，D错误。 故选D。 6．C 【分析】植物组织培养的应用：微型繁殖、作物脱毒(选材应该选择茎尖组织)、制造人工种子、单倍体育种(最大的优点是明显缩短育种年限，得到的全为纯种)、筛选突变体、细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、组织培养所用培养基中生长素与细胞分裂素的比值较高时利于根的分化，生长素和细胞分裂素比值低时有利于芽的分化，说明培养基中生长素与细胞分裂素的比值影响了分化方向，A正确； B、由于茎尖分生组织无成熟液泡，不易形成冰晶，因此可采用超低温冷冻脱毒法对外植体进行消毒，B正确； C、经超低温冷冻脱毒培养的马铃薯只是脱毒，并没有获得抗病毒的能力，C错误； D、植物的顶端分生区病毒极少甚至无病毒，因此可将马铃薯茎尖接种在培养基中，经过人工培养可获得脱毒苗，D正确。 故选C。 7．B 【分析】植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织（高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织），愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。 【详解】A、外植体的取材部位、培养基组成和激素种类等都会影响愈伤组织的形成，A正确； B、紫杉醇是植物体内的次生代谢物，B错误； C、用液体培养基扩大培养愈伤组织生产紫杉醇时，通常要通入无菌空气，以保证无菌环境，C正确； D、同一株植物不同部位的组织细胞经诱导培养获得的植株基因型不一定相同，比如花粉粒最终获得的是单倍体植物，D正确。 故选B。 8．B 【分析】胚胎移植的生理基础：（1）供体与受体相同的生理变化，为供体的胚胎植入受体提供了相同的生理环境；（2）胚胎在早期母体中处于游离状态，这就为胚胎的收集提供了可能；（3）子宫不对外来胚胎发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能；（4）胚胎遗传性状不受受体任何影响。 【详解】A、天然抗原可直接刺激B细胞，但通常需要通过抗原呈递细胞呈递给辅助性T细胞，再由辅助性T细胞进一步起作用，A错误； B、通过显微操作技术可以去除卵母细胞的细胞核和第一极体，获得去核卵母细胞，B正确； C、将目的基因与获能的精子溶液，在一定的温度等条件下培养一段时间后，使精子携带有目的基因，然后进行人工授精，目的基因导入鲫鱼受精卵后，经培养便可获得转基因动物，无需进行胚胎移植，C错误； D、移植后的囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化，D错误。 故选B。 9．C 【分析】动物和人体内少数具有分裂和分化能力的细胞称为干细胞，干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等。 【详解】A、动物和人体内少数具有分裂和分化能力的细胞称为干细胞，存在于多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等，A正确； B、iPS细胞最初是由成纤维细胞转化而来，后来发现已分化的T细胞和B细胞等均能被诱导为iPS细胞，B正确； C、诱导iPS细胞分化的实质是基因选择性表达的结果，没有形成个体，不能体现全能性，C错误； D、用患者自己的体细胞通过体外诱导成胰岛细胞，并将胰岛细胞细胞移植回病人体内，由于移植的细胞是由病人自身细胞得到的，理论上可以避免免疫排斥反应，D正确。 故选C。 10．B 【分析】1、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养； 2、动物细胞培养需要的条件有：①无菌、无毒的环境；②营养；③温度和pH；④气体环境：95%空气+5%CO2； 3、据图可知，图示为肾脏上皮细胞培养过程示意图，图中甲表示剪碎肾脏组织块，乙表示制成细胞悬液，丙表示原代培养，丁表示传代培养。 【详解】A、甲剪碎肾脏组织块→乙制成细胞悬液过程，丙→丁是传代培养，需要将接触抑制的细胞分开，两个过程都需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，分散成单个细胞，A正确； B、细胞培养应在含有95%空气和5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是用于维持培养液的pH，B错误； C、丙表示原代培养，丙过程会出现细胞贴壁和接触抑制现象，C正确； D、上述细胞培养过程的得到多个细胞，原理是细胞增殖，但结果并未得到完整的个体或分化为各种细胞，故没有体现细胞的全能性，D正确。 故选B。 11．C 【分析】动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。由此可见，克隆动物的形成需采用核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术，属于无性生殖。 【详解】A、据图分析，将胎猴体细胞中的细胞核取出，移植到去核的卵母细胞中形成重构胚，应用了动物体细胞核移植技术，A正确； B、采集到的母猴卵母细胞需要在体外培养至MⅡ期，才能用于核移植，B正确； C、不能使用梯度离心的方法（可以去核）激活重构胚，可以使用电刺激等方法，C错误； D、克隆小猴的线粒体DNA来自于去核的卵母细胞，不可能来自代孕母猴，D正确。 故选C。 12．A 【分析】动物细胞培养技术的应用：(1)生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。(2)基因工程中受体细胞的培养。(3)用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。(4)科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究.如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据。 【详解】A、哺乳动物胚胎移植，一般是将培养到桑椹胚或囊胚阶段的胚胎进行移植，而不是培养到原肠胚阶段，因为原肠胚细胞已经出现明显分化，此时进行胚胎移植不利于胚胎的进一步发育和着床，A错误； B、干细胞具有分裂和分化能力，培养干细胞并诱导其分化，可用于治疗因细胞损伤或病变导致的疾病，如用造血干细胞治疗白血病等，B正确； C、通过培养正常细胞，观察药物对这些细胞的影响，能够评估药物的有效性和安全性，这是药物研发过程中的重要环节，C正确； D、杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体，培养杂交瘤细胞可制备单克隆抗体，单克隆抗体可用于癌症及免疫相关疾病的诊断、治疗等，D正确。 故选A。 13．A 【分析】获能后的精子与卵子相遇时，首先它释放出多种酶以溶解卵细胞膜外的一些结构，同时借助自身的运动接触卵细胞膜。在精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜外的透明带会迅速发生生理反应，阻止后来的精子进入透明带然后精子入卵。精子入卵后，卵细胞膜也会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内。精子入卵后，精子的尾部脱落，并且原有的核膜破裂；随后精子形成一个新的核膜，最后形成一个比原来精子核还大的核，叫做雄原核，与此同时，精子入卵后被激活的卵子完成减数第二次分裂，排出第二极体后，形成雌原核，雌原核一般略小于雄原核。 【详解】AB、受精阶段，精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜外的透明带迅速发生生理反应，形成阻止多精入卵的第一道屏障，精子入卵后，卵细胞膜也会立即发生生理反应，形成第二道屏障，即图中X过程，精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体，形成雌原核，精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体，形成雌原核，故Y过程既形成了雌原核，又形成了第二极体，A正确、B错误； C、精子入卵主要指精子头部外膜与卵细胞膜融合，C错误； D、在实际胚胎工程操作中，常以观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志，D错误。 故选A。 14．C 【分析】基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 【详解】A 、从转基因抗虫棉中分离出的蛋白质能与小鼠产生的抗体发生特异性结合，所以该蛋白质相当于抗原，A正确。 B 、由图可知，二抗是与一抗结合的，且带有特殊标记，所以二抗可能是带有放射性同位素标记的一抗的抗体，B正确。 C 、若未显示出杂交带，有可能是目的基因导入了受体细胞，但目的基因没有表达，而不是目的基因未导入受体细胞，C错误。 D 、图示操作是通过抗原 - 抗体杂交技术来检测转基因棉花是否产生了 Bt 毒蛋白，D正确。 故选C。 15．A 【分析】DNA的溶解性： （1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低），利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 （2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。 【详解】A、过程②过滤后，纱布为残留的组织和细胞结构，DNA在滤液中，应取滤液，A正确； B、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，过程⑤加入酒精后，蛋白质溶解，DNA析出，因此离心后弃上清取沉淀，B正确； C、酶活性的发挥需要适宜的温度等条件，将过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精的目的是抑制DNA酶的活性，避免DNA被水解，C正确； D、将析出的丝状物先溶于5ml 2mol/L NaCl溶液中，然后加入4mL二苯胺试剂，混匀后沸水浴中加热可出现蓝色，D错误。 16．ABD 【分析】发酵指人们借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体本身、或者直接代谢产物或次级代谢产物的过程。 【详解】A、面粉主要成分是淀粉，主要元素是CHO，不能为发酵菌种生长提供氮源，A错误； B、乳酸菌属于厌氧菌，翻曲会导致氧气增多，不利于乳酸菌生长繁殖，B错误； C、加入盐水会导致微生物渗透失水死亡，故可抑制酱醅中有害微生物，并调节酱油风味，C正确； D、煮沸消毒法只是消灭部分微生物，不能彻底杀灭所有微生物，D错误。 故选ABD。 17．ABD 【分析】每克样品中的菌落数= (C÷V )×M，其中C代表某一稀释度下的平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)， M代表稀释的倍数。 【详解】A、本实验的目的是从土壤中分离分解尿素的微生物，而蛋白胨主要提供氮源和维生素等，所以蛋白胨不能作为配制本培养基的原料，A正确； B、题图中菌液稀释10倍时需要加入1 mL菌液和9 mL无菌水，B正确； C、培养基配置的基本过程：计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板，因此实验的合理程序为“计算→称量→溶解→调pH→灭菌→倒平板→接种土壤样本→菌落计数”，C错误； D、根据图解可知，对菌液进行稀释时共稀释了106倍，分别接种了3个培养皿，一段时间后，三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则该1 g土壤样本中约有分解尿素的细菌(54＋46＋50)÷3×106＝5×107个，D正确。 故选ABD。 18．BCD 【分析】切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，简称限制酶。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今分离的限制酶有数千种，它们能够识别双链 DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 【详解】A、限制酶均能特异性地识别核苷酸序列，但识别的核苷酸序列不一定是6个或4个，大多数限制酶识别6个核苷酸序列，少数限制酶识别序列由4或8个核苷酸组成，A错误； B、④→⑤为植物组织培养过程，需要先避光培养一段时间，利于形成愈伤组织，之后再给予合适的光照条件，使其发育为正常植株，B正确； C、若只用同一种限制酶切割质粒和目的基因，则获得目的基因片段需要切断目的基因两侧，共4个磷酸二酯键，切开质粒需要断开环状质粒的一处，共2个磷酸二酯键，即至少需要断开6个磷酸二酯键，而在重组时，连接目的基因和质粒需要用到DNA连接酶，要连接两个切口，共4个磷酸二酯键，C正确； D、⑤只要表现出抗虫性状就表明抗虫基因已整合到植物细胞染色体上且成功表达，即植株发生了定向的基因重组，D正确。 故选BCD。 19．BC 【分析】PCR技术是聚合酶链式反应的缩写，是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。 【详解】A、PCR进行过程中，DNA子链是从5'→3'进行的，所以引物1的模板应为N链，A错误； B、整合GFP基因后，核酸片段变长，2号个体只有大片段，所以是Gata3-GFP基因纯合子，4号个体只有小片段，是野生型，B正确； C、据图可知，因启动子在左侧，转录从左向右，转录时是沿着模板链的3'-5'，据此推测Gata 3-GFP基因转录是以N链为模板，C正确； D、若用引物1和引物3进行PCR，杂合子和Gata3-GFP基因纯合子都能扩增出相应的片段则不能区分杂合子和纯合子，D错误。 故选BC。 20.【答案】(1) 倒平板 50℃左右 未在酒精灯火焰附近倒平板 (2)涂布器 (3) ① bcd (4) 大于 直接在皿底 抗生素 IV对于野生型测试菌具有较强的抑制作用，但测试菌中已经出现能抵抗抗生素 IV 的抗性突变株 【分析】关于药敏试验所用的琼脂平板制备过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板。分析题意可知，将含有抗菌药物的纸片贴在培养基表面，一段时间后在纸片周围会形成透明的抑菌圈，抑菌圈越大，抑菌效果越好。 【详解】（1）分析图1可知，图1中进行的是将锥形瓶中的培养基导入培养皿中，故该操作为倒平板，倒平板时需待培养基冷却至50℃左右时方可进行，若温度偏低，培养基凝固不易倒出且不利于形成均匀平整的平板。倒平板时要防止杂菌污染，故需要在酒精灯火焰附近操作。 （2）微生物接种方法一般有平板划线法和稀释涂布平板法，后者可以使菌落布满整个平板，故若使用纸片扩散法进行药敏试验，需用涂布器采用稀释涂布平板法接种测试菌。 （3）接种后的平板在培养时的放置应如图2中①所示，即倒置培养，这样做的原因包括防止皿盖上的冷凝水滴落，造成培养基污染；有利于观察菌落辨别菌落特征；移动培养皿时，不容易造成皿盖打开而暴露培养基。 （4）MIC是药敏试验中评价抗生素药效的常用指标，定义为某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度。分析图3可知，抗生素I的透明圈明显小于抗生素III，因此对于该试验所用测试菌而言，抗生素I的MIC大于抗生素III的MIC。测量菌落和抑菌圈直径时应直接在皿底测量，不能打开皿盖造成杂菌污染。图3所示在含有抗生素IV的纸片周围出现了较大的抑菌圈，抑菌圈中存在有若干个测试菌的菌落。在相关实验操作均严谨规范的情况下出现这种现象，排除杂菌污染的可能，则可能原因是由于抗生素IV对于野生型测试菌具有较强的抑制作用，但测试菌中已经出现能抵抗抗生素IV的抗性突变株，故而能存活形成菌落。 21、（12分）(1)聚乙二醇（PEG） 再生出细胞壁 脱分化 再分化 生长素 细胞分裂素（最后2个顺序可颠倒） (2)植物细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性 单倍体育种 (3)6 幼苗B 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 【分析】题图分析，图1利用植物体细胞杂交技术培育杂种植物植株，具体过程包括诱导植物细胞融合成杂种细胞和植物组织培养技术培育成杂种植株两过程。过程①是通过酶解法去除细胞壁获得原生质体a和b，过程②通过物理或化学方法（如聚乙二醇试剂）诱导原生质体融合成c，过程③是再生细胞壁形成杂种细胞d，过程④是脱分化过程形成愈伤组织e，过程⑤是再分化生成完整植株。过程④和⑤是植物组织培养技术培育完整植株。分析图2：Ⅰ是植物组织培养；Ⅱ是单倍体育种；Ⅲ是花粉细胞融合。 【详解】（1）植物体细胞杂交中诱导原生质体融合，常用的化学方法是聚乙二醇（PEG）融合法。原生质体融合成功的标志是再生出细胞壁，意味着新的杂种细胞结构完整。过程④形成愈伤组织需要经过脱分化过程，即将已分化的细胞失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程；愈伤组织形成D（胚状体等结构）需要经过再分化过程，即愈伤组织在一定条件下分化形成各种组织和器官。培养基中生长素和细胞分裂素的浓度会影响植物细胞的发育方向，不同浓度比例可诱导细胞脱分化、再分化以及根或芽的分化等。 （2）图1培育杂种植株的过程应用的原理一是植物细胞的全能性，即已分化的细胞仍然具有发育成完整植株的潜能；二是细胞膜具有一定的流动性，这是原生质体能够融合的基础。 图2中培育植物体B的育种方法Ⅱ是花药离体培养，属于单倍体育种的一部分，通过花药离体培养得到单倍体植株，再经过秋水仙素等处理使染色体加倍得到纯合植株。 （3）番茄是二倍体，体细胞中共24条染色体，马铃薯是四倍体，体细胞中共48条染色体。图1是植物体细胞杂交，所以杂种植株中含有番茄和马铃薯的所有染色体，共有6个染色体组。图2的幼苗A和植物体A，都是有丝分裂来的，染色体数目与番茄韧皮部细胞一致，都是24条；幼苗B是花粉有丝分裂发育而来，染色体数目只有番茄体细胞的一半（12条），随后用秋水仙素处理，染色体数目加倍，所以植物体B染色体数是24条；植物体C是两个花粉融合后培养而来，所以体细胞中含有24条染色体。图1技术（植物体细胞杂交技术）在育种方面的意义在于打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，能够将不同物种的优良性状集中到一起。 22.(1)动物细胞培养 动物细胞融合 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞 (2)细胞融合是随机的 克隆化培养、抗体检测（2分） (3)血清和抗生素（2分，顺序不可颠倒） (4)抗原—抗体杂交 （5）特异性强，灵敏度高，可大量制备 【知识点】动物细胞融合与单克隆抗体的制备 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】（1）制备单克隆抗体依赖的生物技术有动物细胞培养和动物细胞融合（诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合）等技术；步骤①中，灭活的CPV属于抗原，用灭活的CPV免疫小鼠，小鼠会产生体液免疫，产生B淋巴细胞。所以用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞。 （2）步骤②是诱导细胞融合，由于该过程中细胞融合是随机的，故可能得到多种类型的杂交细胞，如可能得到B细胞-B细胞型、骨髓瘤-骨髓瘤细胞型等；最终筛选得到足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞需要经过两次筛选过程，分别是选择培养基培养（第一次筛选）和克隆化培养、抗体检测（利用抗原-抗体的特异性结合原理，出现阳性反应的即可）。 （3）为补充细胞生长所需的未知营养物质和防止杂菌污染，需要在培养液中添加血清（含有细胞所必须的物质）和抗生素（避免杂菌污染）。 （4）对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行抗原—抗体杂交检测，若出现杂交带，则证明感染。 23.(1) 动物细胞培养(早期胚胎培养) 胚胎移植 有性 (2)③④⑤②① (3)促性腺激素 胚胎 使供、受体母牛具有相同的生理状况 早期胚胎在生理状态相同的条件下空间位置的转移 (4)D、E 胎儿 (5)不确定 白面绵羊 【分析】分析题图：左侧为胚胎移植的基本程序：①对供、受体的选择和处理；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查．对受体母牛进行是否妊娠的检查。中间A到E为早期胚胎发育过程，其中1为内细胞团；2为囊胚腔；3为滋养层．右侧为克隆羊的培育过程，其中a为核移植过程，b为胚胎移植过程。 【详解】（1）试管牛和克隆羊的培育过程中都用到了动物细胞培养、胚胎移植技术等；试管牛的培育采用了体外受精技术，因此产生试管牛的生殖方式属于有性生殖。 （2）受精过程为：精子释放多种酶，包括顶体反应、穿越放射冠、穿越透明带（透明带反应）→精子入卵，卵细胞膜发生生理反应，拒绝其他精子进入卵内，卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）、卵子完成减数第二次分裂并释放第二极体→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂开始。因此，其正确的顺序为③④⑤②①。 （3）受体母牛和供体母牛做同期发情处理目的是使供、受体母牛具有相同的生理状况，以保证胚胎移植入相同的生理环境；超数排卵技术的处理措施是对供体母牛注射促性腺激素。 （4）胚胎移植的适宜时期为桑椹胚（桑葚胚）或囊胚期，即图中D、E为时期； （5）生物性状主要由细胞核决定，所以克隆羊多利的性状和白面绵羊最接近。 24（14分）(1) 引物（或P1、P2）和模板（或质粒1） 既作为原料又提供能量（2分） (2) 5’ BamHⅠ、EcoRⅠ DNA连接 (3)感受态 四环素 (4)4、5、7的电泳结果接近（或大于）2071bp（2分） LacZ (5)X-gal 蔗糖和X-gal（2分） 【分析】PCR技术： （1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。 （2）原理：DNA复制。 （3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一对引物。 （4）条件：Mg2+、模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。 （5）过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。 【详解】（1）在PCR反应体系中，需加入引物（P1、P2）、Taq酶、4种脱氧核苷酸（dNTP）、缓冲液、Mg2+，引物能使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，dNTP的作用除了能为反应提供原料，还能提供能量。 （2）HindⅢ会破坏tetr基因，XmaⅠ会破坏复制原点，为保证sacB基因和质粒2定向连接，应用限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ切割目的基因和质粒，引物是根据目的基因两端的DNA序列设计的，因此设计引物P1、P2时，需在引物5'端添加限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ的识别序列，过程②为基因表达载体的构建，基因表达载体的构建需要限制酶和DNA连接酶。 （3）过程③为将目的基因导入受体细胞，导入目的基因时，首先用Ca2+处理大肠杆菌使其成为感受态细胞。重组质粒的标记基因为tetr（四环素抗性基因），筛选导入质粒3的大肠杆菌时需在培养基中添加四环素。 （4）sacB基因是目的基因，sacB基因中含有2071bp，4、5、7的电泳结果接近（或大于）2071bp，说明4、5、7对应的菌株中含有目的基因，说明泳道4、5、7对应的菌株可能转化成功。引物是根据目的基因两端的DNA序列设计的，目的基因（tetr-sacB）两端均为LacZ基因，因此需在引物5′端分别添加LacZ基因两端的同源序列。 （5）LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物，过程⑦为筛选LacZ基因敲除菌株，因此，若LacZ基因被敲除，则在含有四环素和X-gal培养基中出现白色菌落。sacB基因是蔗糖致死基因，则添加蔗糖起到选择作用，LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物，则添加X-gal起到筛选作用，所以在培养基中添加蔗糖和X-gal可筛选LacZ基因回补菌株。 答案第1页，共2页 答案第1页，共2页 学科网（北京）股份有限公司 $$ 淮安市高中协作体联盟校2024～2025学年第二学期高二年级期中考试 生物试卷 考试时间：75分钟 总分：100 1、 单项选择题：共15题，每题2分，共30分。每题只有一个选项最符合题意。 1.青梅果实中含有大量的活性物质，常制作成具有保健功能的青梅饮品，其中青梅酒和青梅醋深受人们 喜爱，其制作流程如下图。相关叙述正确的是 （ ） B A.常用胰蛋白酶和果胶酶处理细胞破碎物，提高果汁出汁率 B.乙醇为挥发性物质，故果酒发酵过程中空气的进气量不宜太大 C.果醋发酵为有氧发酵，发酵液产生的气泡量明显少于果酒发酵时 D.果酒、果醋常采用湿热灭菌法杀灭所有的微生物后装瓶，延长保质期 2.下图为实验室培养和纯化酵母菌的部分操作步骤，下列说法正确的是 （ ） A.配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌后再调pH B.①②③步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行 C.步骤④中接种环共需5次灼烧处理 D.将接种后的平板直接放入培养箱中培养 3.赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌在科研领域中具有广泛的应用价值。下图表示科研人员利用野生大肠杆菌，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷型突变菌株的流程图，其中A、B、C为操作步骤。已知野生大肠杆菌可以在普通培养基上生长繁殖，但赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌不能，下列叙述错误的是 （ ） 注：原位影印是指用无菌绒布轻盖在已经长好菌落的培养基②上，然后不转动任何角度，将②上的菌落按原位“复印”至新的培养基③和④上。 A.培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂 B.赖氨酸缺陷型可能是基因突变引起相关酶缺乏，从而自身不能合成所需氨基酸 C.培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸等特殊营养物质 D.培养基④上，乙是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来 4.下列有关发酵技术的叙述，正确的是 （ ） A.制作泡菜过程中，泡菜盐水浓度过高可能会导致泡菜咸而不酸 B.传统制作果酒时，葡萄要尽量清洗干净，以免杂菌污染使果酒变质 C.以大豆为主要原料制作酱油，应选择分泌脂肪酶能力强的黑曲霉 D.果酒和果醋发酵过程中均有pH值先升高后明显下降的现象 5.发酵工程在农牧业、食品工业等方面均有广泛的应用。下列关于发酵工程的叙述，错误的是 （ ） A.发酵工程与传统发酵技术的主要区别是菌种是否单一 B.可采用过滤、沉淀的方法将酵母菌从培养液中分离出来 C.检测啤酒酿造过程中活体酵母菌的密度时，可采用稀释涂布平板法 D.向发酵液中加入一定量的酸性重铬酸钾溶液可以检测是否产生酒精 6.超低温冷冻脱毒法是先用超低温对细胞进行选择性破坏，再用植物组织培养技术获得脱毒植株的方法。以马铃薯茎尖为材料，采用超低温冷冻脱毒法可获得脱毒苗。下列叙述错误的是 （ ） A.植物组织培养所用培养基中生长素与细胞分裂素的比值影响了分化方向 B.该技术利用了茎尖分生区组织细胞无成熟大液泡、不易形成冰晶的特性 C.经超低温冷冻脱毒培养的马铃薯比未脱毒的马铃薯抗病毒能力更强 D.用茎尖能够获得脱毒苗的原因是植物顶端分生区病毒极少或无病毒 7.珍稀植物红豆杉因能产生具有良好抗癌作用的紫杉醇而闻名。下图所示为相关实验流程，相关叙述错误的是 （ ） A.诱导愈伤组织需要考虑外植体的取材部位、培养基组成和激素种类等 B.利用植物细胞培养技术获得初生代谢产物紫杉醇能避免大量破坏野生红豆杉种群 C.用液体培养基扩大培养愈伤组织生产紫杉醇时，通常要通入无菌空气 D.同一株植物不同部位的组织细胞经诱导培养获得的植株基因型不一定相同 8.下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述，正确的是 （ ） A.制备单克隆抗体时，天然抗原通常可直接刺激多种B细胞和辅助性T细胞 B.体细胞核移植可通过显微操作技术去除卵母细胞的细胞核和第一极体 C.将目的基因导入鲫鱼受精卵后体外培养获得早期胚胎，再进行胚胎移植 D.囊胚进一步扩大导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫做孵化 9.如下图为诱导多能干细胞（iPS细胞）用于治疗糖尿病的示意图，下列叙述错误的是 （ ） A.干细胞存在于多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等 B.除图中的成纤维细胞，已分化的T细胞和B细胞等均能被诱导为iPS细胞 C.诱导iPS细胞分化的实质是动物细胞核具有发育的全能性 D.将分化得到的胰岛细胞移植回病人体内治疗，理论上可避免免疫排斥反应 10.如图为肾脏上皮细胞培养过程示意图，已知肾脏上皮细胞属于需要贴附于某些基质表面才能生长增殖的细胞。下列相关叙述错误的是 （ ） A．甲→乙、丙→丁过程可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 B．细胞培养应在含有95%空气和5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸 C．丙过程会出现细胞贴壁和接触抑制现象 D．上述细胞培养过程的原理是细胞增殖，没有体现细胞的全能性 11.我国科学家培育克隆小猴的简要流程如图所示。下列叙述错误的是 （ ） A.克隆小猴的培育应用了动物体细胞核移植等技术 B.采集到的母猴卵母细胞需要在体外培养至MⅡ期 C.重构胚需用梯度离心或化学物质处理等方法激活 D.克隆小猴的线粒体DNA不可能来自代孕母猴 12.动物细胞培养技术在生物制药、疾病治疗等领域中发挥着重要作用。关于动物细胞培养技术的应用， 下列叙述错误的是 （ ） A.培养哺乳动物受精卵至原肠胚阶段，用于胚胎移植 B.培养干细胞并诱导分化，用于治疗细胞损伤或病变 C.培养正常细胞并观察药物对其的影响，评估药物的疗效和安全性 D.培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体，用于癌症及免疫性疾病的治疗 13.下图表示精子入卵后，发生(或引起的)一系列变化形成受精卵的过程，下列叙述正确的是 （ ） A．图中X指卵细胞膜反应，Y指卵子的减数分裂Ⅱ B．经图中Y过程只形成了雌原核 C．精子入卵主要指整个精子进入卵细胞内 D．观察到两个极体或雌、雄原核标志着受精完成 14.实验小组从苏云金芽孢杆菌中提取Bt毒蛋白，注射到小鼠体内使小鼠产生相应的抗体，再从转基因抗虫棉中提取蛋白质电泳分离后和抗体杂交，然后加入带有特殊标记的抗体以显示出杂交带，具体过程如图所示，下列说法错误的是 （ ） A.从转基因抗虫棉中分离出的蛋白质相当于抗原 B.二抗可能是带有放射性同位素标记的一抗的抗体 C.若未显示出杂交带，则说明目的基因未导入受体细胞 D.图示操作的目的是检测转基因棉花是否产生Bt毒蛋白 15.南通某生物兴趣小组的同学用猪肝进行DNA的粗提取与鉴定实验，主要实验流程如下图。相关叙述不 正确的是 （ ） A.过程②过滤后应取滤液 B.过程⑤加入酒精后，也可将溶液倒入离心管离心后取沉淀物 C.过滤液放入4℃冰箱或加入预冷的酒精都可抑制DNA酶的活性 D.提取到的丝状物直接加入二苯胺试剂中，沸水浴加热后变蓝 二、多项选择题：共4题，每题3分，共12分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对者得3分， 选对但不选全的得1分，错选或不答的得0分。 16.图示以黑曲霉为主要菌种利用自然发酵法酿造酱油的流程，下列叙述错误的有 （ ） A.加入的面粉可为发酵菌种生长提供所需的碳源和氮源 B.通风和翻曲可促进曲种中黑曲霉、酵母菌和乳酸菌等的生长繁殖 C.加入盐水可抑制酱醅中有害微生物的生长并调节酱油风味 D.采用煮沸消毒法可彻底杀灭生酱油中的微生物以提高成品安全性 17.某兴趣小组试图从土壤中分离分解尿素的细菌，流程如下图所示。下列说法正确的有 （ ） A.该实验配制的培养基中不含蛋白胨 B.图中菌液稀释10倍时所加的无菌水的量都为9mL C.实验的合理顺序是“计算→称量→溶解→灭菌→调pH→倒平板→接种土壤样本→培养→计数” D.三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1g土壤样本中约有分解尿素的细菌5×107个 18.下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。下列相关叙述正确的是 （ ） A.切割质粒的限制酶均特异性地识别6个或4个核苷酸序列 B.④→⑤需要先避光培养一段时间后，再给予合适的光照条件 C.获得基因表达载体的过程中，至少需要限制酶断开6个磷酸二酯键、DNA连接酶连接4个磷酸二酯键 D.⑤表现出抗虫性状说明植株发生了定向的基因重组 19.某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata 3基因一端，如图 甲所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，交配以期获得Gata 3-GFP基因纯 合子小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，设计了引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产 物电泳结果如图乙所示。下列叙述正确的是 （ ） A.据甲图分析，进行PCR扩增时，用引物1的模板为M链 B.2号条带的小鼠是Gata 3-GFP基因纯合子 C.Gata 3-GFP基因转录是以N链为模板 D.选用引物1和引物3进行PCR，能更好的区分杂合子和纯合子 三、非选择题：共5题，共58分。除特别说明外，每空1分。 20.(10分）药物敏感试验简称药敏试验，旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感程度，以指导临床合理选用抗生素。纸片扩散法（Kirby-Bauer test）是药敏试验一种常用的方法，在纸片周围会形成透明的抑菌圈。请回答下列问题： （1）关于药敏试验所用的琼脂平板制备过程，图1所示操作称为 ，该操作需待培养基冷却至 时方可进行，该图示操作存在错误，请指出错误之处 （2）若使用纸片扩散法进行药敏试验，需将平板上布满测试菌，则在接种环节需使用的接种工具是 （3）接种后的平板在培养时的放置应如图2中 （选填“①”或“②”）所示，这样放置的原因是 a.有利于水分蒸发，保持培养基干燥 b.防止皿盖上的冷凝水滴落，造成培养基污染 c.有利于观察菌落辨别菌落特征 d.移动培养皿时，不容易造成皿盖打开而暴露培养基 （4）某研究小组将含有相同浓度抗生素 I~IV 的四个纸片分别贴放在生长有测试菌的琼脂平板上，在合适的温度条件下孵育16h，结果如图3所示。 ①MIC是药敏试验中评价抗生素药效的常用指标，其定义为某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度。根据图 3实验结果可知，对该测试菌而言，抗生素I的MIC （选填“大于”“小于”或“等于”）抗生素III的MIC； ②测量菌落和抑菌圈直径时应 （选填“打开皿盖”“直接在皿盖上”“直接在皿底”）测量； ③在相关实验操作均严谨规范的情况下，在含有抗生素IV的纸片周围出现了较大的抑菌圈，但抑菌圈中存在有个别菌落。试对上述现象的成因做出分析：_________________________________________(2分) 21.（12分）科学家利用植物体细胞杂交技术，将番茄叶片细胞制成的原生质体和马铃薯块茎细胞制成的原生质体融合，成功地培育出了“番茄一马铃薯”杂种植株，如图1所示，其中①～⑤表示过程，a～f表示细胞、组织或植株。育种工作者还利用番茄进行了如图2所示的三组实验。据图回答下列问题： (1)图1的过程②中，常用的化学诱导方法是 融合法；过程③成功的标志是_______________；过程④形成愈伤组织需要经过______过程，愈伤组织形成f需要经过_______过程。培养基中____________、___________的浓度会影响植物细胞的发育方向。 (2)图1培育杂种植株的过程主要应用的原理是_______________、_______________；图2培育植物体B的育种方法Ⅱ称为______________。 (3)番茄是二倍体，体细胞中共24条染色体，马铃薯是四倍体，体细胞中共48条染色体。则图1的杂种植株的叶肉细胞中含有____________个染色体组。图2中幼苗A、幼苗B、植物体A、植物体B、植物体C的叶肉细胞中，染色体数目不是24的是____________。图1技术在育种方面的意义在于_________________ 22.（10分）犬细小病毒（CPV）主要感染幼犬，传染性极强，死亡率也高。利用小鼠制备抗CPV单克隆抗体的基本流程如图所示。回答下列问题： （1）制备单克隆抗体依赖的生物学技术有 和 。步骤①中，用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是 （2）经过步骤②后获得的是多种类型的杂交细胞，原因是 。对杂交细胞用特定的选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞进行 （2分），经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞。 （3）体外培养杂交瘤细胞后从培养液中提取到抗CPV单克隆抗体。杂交瘤细胞的培养液中有各种营养物 质，还需要添加 （2分）以补充细胞生长所需的未知营养物质和防止杂菌污染。 （4） 对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行 检测。 （5） 单克隆抗体的特点：__________________________________________________ 23.（12分）长期以来，优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机。下图1、2、3分别是牛胚胎移植、早期胚胎培养及克隆羊培育流程图，请据图完成下列问题：     （1）在试管牛和克隆羊的培育过程中都必须用到的生物技术有_____________、__________________；其中产生试管牛的方式是_________生殖。 （2）与受精有关的过程有：①第一次卵裂开始；②核膜消失，雌、雄原核融合，形成合子；③精子释放多种酶；④精子入卵，卵细胞膜发生生理反应，拒绝其他精子进入卵内；⑤雌雄原核形成。正确的顺序为__________________（填序号）。 （3）超数排卵技术的处理措施是对供体母牛注射__________________；冲卵实质上是用特定装置，将供体母牛子宫内的_______冲洗出来。同期发情处理的目的是__________________，这是胚胎移植成功的关键；胚胎移植的实质是__________。 （4）从A到E中，适宜于胚胎移植时期有_______；图中标号1为内细胞团，它将来可发育为___________（5）试管牛E的性别_______（公牛、母牛、不确定）,克隆羊多利的性状和_______（黑面绵羊\白面 绵羊）最接近。 24.（14分）同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补，研究基因的功能。下图是科研人员利用该方法对大肠杆菌tacZ基因进行敲除与回补的相关过程，其中tetr是四环素抗性基因，sacB基因（2071bp）是蔗糖致死基因，LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。 请回答下列问题： (1)过程①PCR除需要加入Taq酶、dNTP、缓冲液、Mg2+外，还需加入 ，所加dNTP的作用有 _______________________（2分）。 (2)为保证sacB基因和质粒2定向连接，设计引物P1、P2时，需在引物______端添加限制酶________________（填种类）的识别序列；过程②需要限制酶和 酶。 (3)过程③中，需先用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为__________细胞。筛选导入质粒3的大肠杆菌时需在培养基中添加 。 (4)下图是对质粒3转化菌落进行PCR验证时的产物电泳结果，泳道4、5、7对应的菌株可能转化成功，判断的理由_______________________（2分）,过程⑤PCR中设计引物P3、P4时，需在引物5′端分别添加 __________基因两端的同源序列。    (5)过程⑦中，在含有四环素和___________的培养基中出现了白色菌落，即为筛选出的敲除LacZ基因菌株。过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对LacZ基因进行回补，筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加_____________________(2分) 10 学科网（北京）股份有限公司 $$