3.1 重组DNA技术的基本工具-【爱上生物课】2024-2025学年高二生物备课通关优质课件（人教版2019选择性必修3）

看到这张图片你能想到什么可以改善我们生活的愿望吗？ 树：不能发光 萤火虫：能发光 愿望 发光树 如果能得到这种到了晚上自己能发光的树该多好啊！ 基因工程的理论基础 我国是棉花的生产和消费大国，但棉花种植中易受虫害，其中以棉铃虫最为主，可以使棉花产量减少三分之一，甚至绝收。 抗虫基因 转基因 基因工程 杂交育种？ 同种生物之间进行 诱变育种？ 在原有基因上发生基因突变，产生新基因——等位基因 不定向 苏云金杆菌中存在一种毒蛋白基因（Bt基因），编码出的毒蛋白能杀死害虫。 苏云金杆菌 思考：如何培育出自身就能抵抗虫害的棉花呢? 若使用农药不仅会提高生产成本，还会造成农产品和环境污染。 基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。 操作对象： 操作水平： 原理： 结果： 意义： 基因（DNA） DNA 分子水平 基因重组 创造出人类需要的新的生物类型和生物产品 定向改造生物遗传特性；克服远缘杂交不亲和障碍 水母的绿色荧光蛋白基因 基因工程的理论基础 基因工程的理论基础 【问题探究1】为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？ （1）DNA的基本组成单位都是 。 （2）DNA分子都遵循 配对原则。 （3）双链DNA分子的空间结构都是 。 【问题探究2】为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达？ （1） 是控制生物性状的独立遗传单位。 （2）遗传信息的传递和表达都遵循 。 （3）生物界共用一套 。 四种脱氧核苷酸 规则的双螺旋结构 基因 中心法则 遗传密码 碱基互补 相同的遗传信息在不同生物体内表达出相同的蛋白质。 番木瓜容易受番木瓜环斑病毒的侵袭。当番木瓜被这种病毒侵染后，产量会大大下降。科学家通过精心设计，用“分子工具”培育出了转基因番木瓜，它可以抵御番木瓜环斑病毒。 思考： DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”。如何获得转基因番木瓜?需要什么工具?这些“分子工具”各具有什么特征呢？ 从社会中来 转基因“华农1号”番木瓜 第1节重组DNA技术的 基本工具 第三章基因工程 本节聚焦 1、重组DNA技术所需的三种基本工具是什么?它们的作用分别是什么? 2、基因工程载体需要具备什么条件? “分子手术刀” 准确切割DNA分子 “分子缝合针” “分子运输车” 将DNA片段连接起来 将体外重组好的DNA分子导入受体细胞 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 1. 定义： 3. 来源： 2. 种类： 识别双链 DNA 分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 4. 作用： 切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，又称限制酶。 主要是原核生物，可人工合成 数千种 还记得磷酸二酯键在哪吗？ 请在图中标记出来。 限制酶不是一种酶，而是一类酶。 酶的专一性 5' 3' 5' 3' T A G G T A T C C A 磷酸二酯键 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 思考： 2.根据你所掌握的知识你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么？ （旁栏思考） 1.如何理解限制性内切核酸酶命名的由来？ 限制外源遗传物质的扩散 “内切”表明酶在DNA链内部切割（而非从末端开始） 作用于核酸，限制酶特指切割DNA的酶。 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，所以它在长期的进化过程中形成了套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效，以保证自身的安全。 3.为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？ 提示：原核细胞内DNA分子不具备这种限制酶的识别序列，或者甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 5. 限制酶的识别序列 大多数限制酶的识别序列由 组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。 6个核苷酸 思考：四种限制酶识别的特定序列有何特点？ 特点1：都可以找到一条中心轴线； 特点2：中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的，称为回文序列。 下面哪项不具有限制酶识别序列的特征（ ） A．GAATTC B．GGGGCCCC CTTAAG CCCCGGGG C．CTGCAG D．CTAAATC GACGTC GATTTAG D 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 拓展——限制酶的命名： 阅读72页资料卡“限制酶的命名”，说说EcoRⅠ各个字母的代表含义。 EcoRⅠ 属名Escherichia首字母 种名coli前两个字母 R型菌株 从中分离的第一个限制酶 例如：流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)d株中先后分离到3种限制酶，则分别命名为: Hind I Hind II Hind III 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 6.切割结果 : （1）实例1——EcoRⅠ限制酶切割 *EcoRⅠ识别序列为GAATTC *EcoRⅠ切割部位为GA之间的磷酸二酯键 黏性末端 黏性末端 （2）实例2——SmaⅠ限制酶切割 *SmaⅠ识别序列为CCCGGG *SmaⅠ切割部位为CG之间的磷酸二酯键 平末端 DNA两条单链的切口处，伸出几个核苷酸，刚好能互补配对，这样的切口叫黏性末端。 切口处是平整的，这样的切口叫平末端。 1.写出下列限制酶切割形成的末端序列 BamHⅠ EcoRⅠ__________________________ Hind Ⅲ Bgl Ⅱ _________________________ -G -CCTAG -G -CTTAA -A -TTCGA -A -TCTAG or GATCC- G- or AATTC- G- or AGCTT- A- or GATCT- A- 1、同种限制酶切割产生的黏性末端是否相同？ 2、不同限制酶切割产生的黏性末端是否一定不同？ 相同。 可能相同 酶具有专一性，识别的序列相同 （比如BamHⅠ、BglⅡ） 同尾酶：识别的靶序列不同，但是酶切后形成的黏性末端相同 2. 请判断：以下黏性末端是由 种限制酶作用产生的。 3 T T A A G C T T A A C G A A T T G C 可断开2个磷酸二酯键； 产生2个游离的磷酸基团； 产生2个黏性末端； 消耗2分子水。 3、请结合图示，推断限制酶切割一次可断开几个磷酸二酯键？ 产生多少个游离的磷酸基团？产生几个黏性末端？消耗几分子水？ 要想获得某个特定性状的目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切2个切口， 产生4个黏性(平)末端。 不能，限制酶只能识别并切开双链DNA分子。 4.限制酶能切开RNA分子的磷酸二酯键吗？ --ATGCATGCAT……CCAGAATTCCCA ……TCCCTAAGAATTC CCATCCCAGATG …… CATGCATCCATGC--- --TACGTACGTA……GGTCTTAAGGGT……AGGGATTCTTAAGGGTAGGGTCTAC …… GTACGTAGGTACG--- Bt蛋白基因 3’ 5’ 5’ 3’ 苏云金杆菌DNA片段中的部分基因 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ Bt蛋白基因 5’ 3’ 3’ 5’ EcoRⅠ识别 5'-GAATTC-3' 序列，并在G与A之间切割。 苏云金芽孢杆菌DNA片段中的部分基因 【思考】把两种来源不同的DNA分子进行拼接，应该怎样处理呢？ 用同种限制酶切割(EcoRⅠ) T G A A T T C G A C T T A A G C A G A A T T C T T C T T A A G A 缺口怎么办 只能用同种酶切割吗？ 完全互补的黏性末端能通过氢键暂时连接在一起，但并不稳定。 DNA连接酶 — “分子缝合针” 恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 二、DNA链接酶——“分子缝合针” 1. 作用： 将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 5′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 5′ 5′ 5′ 5′ T4 DNA 连接酶 T4 DNA连接酶和E.coli DNA连接酶 E.coli DNA连接酶 2. 种类： 两种连接酶都可连接互补黏性末端与平末端， 但E.coli DNA连接酶连接平末端效率远低于T4 DNA连接酶 【新旧衔接】DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ T4 DNA 连接酶 E.coli DNA连接酶 二、DNA链接酶——“分子缝合针” 旁栏思考（P72）：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ DNA连接酶 DNA聚合酶 相同 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要DNA的一条链作模板 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 DNA复制、基因工程 DNA复制、基因工程 在两个DNA片段间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸连接到已有DNA片段，形成磷酸二酯键 二、DNA链接酶——“分子缝合针” 拓展：几种相关酶的比较 项目 DNA连接酶 限制酶 DNA聚合酶 解旋酶 DNA酶 作用部位 作用对象 作用结果 磷酸二酯键 将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 氢键 DNA片段 DNA 单个的脱氧 核苷酸 DNA DNA 将两个DNA片段连接成完整的DNA分子 切割双链DNA分子 将单个的脱氧核苷酸连接到DNA单链末端 将双链DNA分子局部解旋为单链 及时训练 1.以下是几种不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确的是（ ） A.以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的 B.②片段是在识别序列为 的限制酶作用下形成的 C.①和④两个片段在DNA聚合酶的作用下可形成重组DNA分子 D.限制酶和DNA连接酶作用的部位都是磷酸二酯键 如何将外源基因运入细胞呢？ ①④是由同一种限制酶切割而成的 C G DNA连接酶 D 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 将外源基因送入受体细胞, 在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 1.作用： 2.种类： 种类 用途 不同点 质粒、噬菌体 植物病毒 动物病毒 将外源基因导入各种受体细胞 将外源基因导入植物细胞 将外源基因导入动物细胞 它们来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别 动物病毒 噬菌体 是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我 能力的环状双链DNA分子。 复制 真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 3.运载体需具备的条件： 条件①：具有一个或多个限制酶切割位点； 条件②：能在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；使外源基因在受体细胞中稳定存在并复制，以扩增外源基因的数量 条件③：具有标记基因，便于重组DNA分子的筛选。 条件④：载体DNA必须是安全的，对受体细胞无害。 问题3：我们用肉眼看不到载体是否进入受体细胞，为了便于筛选重组DNA分子，载体需要具备什么条件？ 问题2：要使携带的外源基因在受体细胞中稳定存在，载体需要具备什么条件？ 问题1：载体要与目的基因连接，需要具备什么条件？ 供外源基因插入其中 如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、荧光蛋白基因等 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。 不能被酶切破坏 便于重组DNA筛选与鉴定 DNA复制的起始位点，并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点（酶切位点） 4.最常用的载体——质粒： 真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过 改造的。 人工 终止子: 转录的终点，在转录过程中起调控作用。 终止子: 转录的终点，在转录过程中起调控作用。 质粒DNA分子质量一般为拟核的0.5%~3% 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 5.标记基因的筛选原理 载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，导入了载体并成功表达了的受体细胞才能够生存。如图所示： 导入 受体细胞 培养 加入氨苄青霉素 ①导入重组质粒的受体细胞存活并繁殖 ②导入普通载体的体细胞存活并繁殖 含有氨苄青霉素抗性基因载体（如质粒） 目的基因一定成功重组到质粒上了吗？ 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 无法存活 存活；白色 存活；蓝色 如何提高筛选的准确性？ LacZ 基因表达产生的β-半乳糖甘酶能够分解 X-gal 产生蓝色物质，从而使菌落呈蓝色；否则菌落呈白色。 请分析下列3种大肠杆菌在含 X-gal 和青霉素的固体培养基上的存活情况及菌落颜色。 5.标记基因的筛选原理 重组DNA导入受体细胞不是100%，而且导入率较低 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 重组DNA分子 请你根据图3-3中的相关信息找到两条片段上EcoRI 的识别序列和切割位点。 然后，用剪刀进行“切割”。待切割位点全部切开后，将从下面那条DNA链上切下的片段重组到上面那条DNA链的切口处，并用透明胶条将切口粘连起来。 …TATCGTACGATAGGTACTTAA …ATAGCATGCTATCCATG AATTCGGCATAC… GCCGTATG… …TCCTAG …AGGATCTTAA GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG AATTCCATAC… GGTATG… GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 重组DNA分子 1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？ 剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。 2.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对? 如果不能，可能是什么原因造成的？ 如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对，可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。 3.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？ 不能。 因为基因的长度一般在100个碱基对以上。 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 4. 将所有DNA片段混合拼接后，除了我们想要的重组质粒外，还会产生什么样的DNA分子？ 目的基因与目的基因相连；质粒与质粒相连； 目的基因与质粒反向连接。 目的基因与目的基因相连 质粒与质粒相连 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 正向连接 反向连接 转录方向 转录方向 模板链 模板链 反向连接将导致最终表达产物不相同！ 如何解决这些问题呢？ 以上是“单酶切法”带来的问题！ 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 用同一种限制酶分别切割质粒和外源DNA构建重组DNA的方法，称为“单酶切法”。如使用限制酶EcoRⅠ分别切割质粒和外源DNA，其结果如下： 用两种能产生不同黏性末端的限制酶分别同时切割质粒和外源DNA。 黏性末端1只能与3相连、黏性末端2只能与4相连，这种方法叫做“双酶切法”。 “双酶切法”可以防止质粒和目的基因的自身环化以及目的基因与质粒的反向连接。 小结 E.coli DNA连接酶 ③ 有一个至多个限制酶切割位点 质粒、噬菌体、动植物病毒 作用部位： 种类 DNA连 接酶 切开DNA分子的磷酸二酯键 主要存在于原核生物中 具有专一性（能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列） T4 DNA连接酶 ① 对受体细胞无害 ② 能自我复制或整合到宿主DNA上。 ④ 常有特殊的标记基因 运载 工具 条件 种类： 磷酸二酯键 限制酶 作用部位： 来源： 特点： 作用结果： 产生黏性末端或平末端 重组DNA技术的基本工具 DNA的粗提取与鉴定 实验设计思路：DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。 思考：1、从哪里提取DNA？ 2、如何从细胞中提取DNA，有哪些困难？ 细胞 细胞内成分复杂，且真核生物的DNA和蛋白质结合形成染色体，难以分离提纯。 DNA不溶于酒精溶液 但某些蛋白质溶于酒精 DNA能溶于物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液 在一定温度下（沸水浴），DNA被二苯胺试剂染成蓝色 初步分离DNA和蛋白质 溶解DNA 鉴定DNA 1、实验原理 DNA的粗提取与鉴定 DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菜花和猪肝等。 (1)选材： (2)试剂： ①研磨液 ②体积分数为95%的酒精 ③2mol/L 的NaCl溶液 ④二苯胺试剂 ⑤蒸馏水 ——溶解并提取DNA ——析出DNA ——溶解DNA ——鉴定DNA，要现配现用 2、材料用具 猪血（哺乳动物的成熟红细胞）无细胞核和线粒体，几乎不含DNA，不适合； 鸡血中红细胞有核DNA，且核DNA的量较多，适合。 鸡血中加入柠檬酸钠，可防止血液凝固。 思考：猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA的材料？操作时如何防止血液凝固？ 研磨液成分 作用 SDS 使蛋白质变性 EDTA 抑制DNA酶 Tris-HCl缓冲液 稳定DNA DNA的粗提取与鉴定 DNA的粗提取与鉴定 3、实验步骤 取材研磨 过 滤 DNA析出 DNA鉴定 1.称取约30g洋葱，切碎放入研钵中，倒入10mL ，充分研磨。 研磨液 防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量 研磨效果好（有利于充分研磨） (4)研磨不宜太用力 (2)研磨时间不宜太长： (3)有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶： 破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中 (1)研磨的目的： DNA的粗提取与鉴定 3、实验步骤 2.（方案一）在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液 到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取 。 （方案二）将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min的转速下 5min，再取 放入烧杯中。 过滤 上清液 离心 上清液 取材研磨 过 滤 DNA析出 DNA鉴定 问题1：过滤的纱布能用滤纸代替吗？ 不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。 问题2：上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？ 可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。 DNA的粗提取与鉴定 3、实验步骤 取材研磨 过 滤 DNA析出 DNA鉴定 问题1：此步骤的目的是？ 使蛋白质等溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。 问题2：酒精预冷的作用？ ①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； ②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出； ③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。 问题3：为什么搅拌时应轻缓、并沿一个方向目的？ 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子 3.在上清液中加入体积相等的 溶液,静置2~3min，溶液中出现的 就是粗提取的DNA 。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。或将溶液倒入塑料离心管中离心，取 晾干。 预冷的酒精 白色丝状物 沉淀物 DNA的粗提取与鉴定 3、实验步骤 取材研磨 过 滤 DNA析出 DNA鉴定 实验组 对照组 沸水浴加热 加入2mol/L氯化钠溶液 不加入丝状物 加入4ml二苯胺试剂 加入2mol/L氯化钠溶液 加入丝状物 加入4ml二苯胺试剂 4.将丝状物或沉淀物溶于 溶液中，加 入 试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。 二苯胺 2mol/L的NaCl 现配现用！棕色瓶保存。 评价结果： （1）DNA纯度：看提取物颜色 （2）DNA的量：看与二苯胺反应颜色的深浅 DNA的粗提取与鉴定 4、结果分析与评价 （1）你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？ 观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。 二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。 本实验粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。 （2）你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？ DNA的粗提取与鉴定 4、结果分析与评价 ①材料中的核物质没有充分释放出来， 如研磨不充分或蒸馏水的量不够。 ②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。 ③二苯胺最好现用现配，否则二苯胺变成浅蓝色，影响鉴定效果。 以血液为实验材料时： 每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。 利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法： 动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。 （3）与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。 练习与应用 一、概念检测 1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是（ ） A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键 B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键 C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键 D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端 2.在重组DNA技术中，将外源基因送入受体细胞的载体可以是（ ） A.大肠杆菌的质粒 B.切割DNA分子的酶 C.DNA片段的黏性末端 D. 用来识别特定基因的DNA探针 C A 练习与应用 二、扩展应用 1.想一想，为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？ 迄今为止，在基因工程操作中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的。微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，可以将外源入侵的DNA降解。 细菌中限制酶之所以不切割自身的DNA，一是因为不具备限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开（DNA分子被甲基化保护）。这样，尽管细菌中含有某种限制酶，也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA入侵。 练习与应用 二、扩展应用 2.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶Spe I进行切割，B片段分别用限制酶Hind Ⅲ、Xba I、EcoR V和Xho I进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。 （1）哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶SpeI切割A片段产生的DNA片段相连接?为什么? XbaⅠ。因为XbaI与SpeI切割产生了相同的黏性末端。 练习与应用 二、扩展应用 （2）不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义? 识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时，切割位点的选择范围扩大。 例如，我们选择了用某种限制酶切割载体，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列，那么用该限制酶切割含有目的基因的DNA片段时，目的基因就很可能被切断；这时可以考虑用合适的同尾酶（目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别序列）来获取目的基因。 感谢观看 Lavf58.29.100 Bilibili VXCode Swarm Transcoder v0.7.28 Lavf56.40.101 Tencent APD MTS Lavf55.48.100 Lavf55.48.100 Lavf58.20.100 Bilibili VXCode Swarm Transcoder v0.3.79 $$