1.2.2 微生物的选择培养和计数(练案)-【成才之路】2024-2025学年高中新课程生物选择性必修第三册同步学习指导(人教版2019)

练案［３］ 第 １ 章　 发酵工程 第２节　 第２课时　 微生物的选择培养和计数 基础题组 一、选择题 １．（２０２４·四川成都高二校联考期中）下图是牛 肉膏蛋白胨培养基的配方，据此分析下列相 关叙述错误的是 （Ｂ ） 成分 蛋白胨 牛肉膏 ＮａＣｌ 含量 １０． ０ ｇ ５． ０ ｇ ５． ０ ｇ 操作将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至１ ０００ ｍＬ，调节ｐＨ为７． ０ ～ ７． ２ Ａ．该培养基是液体培养基 Ｂ．该培养基是选择培养基 Ｃ．该培养基中含有维生素 Ｄ．该培养基不适合霉菌生长 ２．（２０２３·山东省烟台市高三适应性测试）噬菌 斑是在固体培养基上由一个噬菌体增殖并裂 解宿主菌后形成透明的溶菌空斑，不同噬菌 体噬菌斑的形态大小不同。工作人员将 ０． １ ｍＬ稀释１０６倍的噬菌体样品与敏感细菌 混合后平铺在平板上培养一段时间，得到如 图所示结果。下列叙述错误的是 （Ｂ ） Ａ．噬菌体样品应有足够的稀释度，以保证初 期一个细菌最多被一个噬菌体吸附 Ｂ．根据培养基上噬菌斑的数量可以计算出敏 感细菌和噬菌体的数量 Ｃ．若平均每个平板的噬菌斑数量为１５０，则该 样品中实际噬菌体数可能高于１． ５ × １０９ 个／ ｍＬ Ｄ．根据培养基上噬菌斑的形状等特征可判断 是否需要进一步纯化噬菌体 ３．原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。 土壤中有些细菌可以以原油中的多环芳烃为 碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能 高效降解原油的菌种，某小组同学设计了相 关实验。下列有关叙述不正确的是（Ｃ ） Ａ．应配制被原油污染土壤的土壤稀释液备用 Ｂ．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基 Ｃ．将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上 Ｄ．在选择培养基上能形成分解圈的为所需 菌种 ４．在做分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从 对应稀释倍数为１０６ 的培养基上筛选出大约 １５０个菌落，而其他同学只筛选出大约５０个 菌落。下列有关叙述，出现科学性错误的是 （Ｄ ） Ａ．甲同学出现这种结果的原因可能是土样不 同，也可能是操作过程出了问题 Ｂ．可以将甲同学配制的培养基在不加土样的 情况下进行培养作为空白对照，以证明培 养基是否受到污染 Ｃ．让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实 验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲 同学无误 Ｄ． Ｂ、Ｃ选项的实验思路都遵循了实验的对照 原则 ５．用１０、１０２和１０３倍稀释液进行涂布培养细菌 后，其菌落平均数为２ ８９０、２７０和５０，则每毫 升样品中菌落总数（涂布平板时所用的稀释 液体积为０． １ ｍＬ）为 （Ｂ ） Ａ． ２． ８９ × １０５个 Ｂ． ３． ８５ × １０５个 Ｃ． ６． ０ × １０５个 Ｄ． ２． ７ × １０５个 ６．（２０２４·福建省漳州市教学质量检测）某学者 用“影印培养法”研究大肠杆菌抗药性形成与 环境的关系：将原始敏感菌种接种在１号培养 基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在１号上印 模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌 落按照原位接种到２号和３号培养基上。待 ３号上长出菌落后，在２号上找到对应的菌 落，然后接种到不含链霉素的４号培养基中                                                                ， —１１５— 培养后再接种到５号培养基上，重复以上步 骤。实验过程如图所示。下列相关叙述错误 的是 （Ｃ ） Ａ．大肠杆菌抗链霉素的变异可能是由基因突 变引起的 Ｂ． １号和５号采用稀释涂布平板法将菌种接 种在相应的培养基上 Ｃ． ４号、８号、１２号培养基中抗性菌落（株）的 比例最大的是４号 Ｄ．大肠杆菌抗药性的形成是在施加链霉素之 前，而发生选择作用是在施加链霉素之后 二、非选择题 ７．（２０２３·湖北宜昌高二校联考期中）研究者从 温泉中筛选出高效产生耐高温淀粉酶的嗜热 菌，其筛选过程如图１所示。回答下列问题： （１）该培养基中必须以　 淀粉　 作为唯一的碳源。 （２）Ⅰ号、Ⅱ号培养基都属于固体培养基，配 置时　 先调ｐＨ后灭菌　 （填“先调ｐＨ后灭 菌”或“先灭菌后调ｐＨ”）。Ⅱ号培养基上的 接种方法为　 平板划线法　 ，从其上挑取单个 菌落进行液体培养后，可借助特定的　 细菌 计数板　 或　 血细胞计数板采用　 显微镜　 进行直接计数，该方法是一种常用的、快速直 观的测定微生物数量的方法。 （３）挑选出能产生耐高温淀粉酶的嗜热菌菌 落的鉴别方法是：将得到的菌悬液转接于同 时含有葡萄糖和淀粉为碳源的固体培养基上 培养，得到若干菌落后用　 碘液　 作显色处 理，得到如图２所示结果，可判断图中　 周围 不显蓝色　 的菌落含有所需菌种。 能力提升 一、选择题 １．下表为培养某种微生物的培养基配方，下列 相关叙述错误的是 （Ｄ ） 成分ＮａＮＯ３ Ｋ２ＨＰＯ４ ＫＣｌ ＭｇＳＯ４· ７Ｈ２Ｏ ＦｅＳＯ４ （ＣＨ２Ｏ）Ｈ２Ｏ 青霉素 含量 ３ ｇ １ ｇ ０． ５ ｇ ０． ５ ｇ ０． ０１ ｇ ３０ ｇ １ Ｌ ０． １万单位 Ａ．依物理性质划分，该培养基属于液体培 养基 Ｂ．由培养基的原料可知，所培养微生物的同 化作用类型是异养型，培养的微生物可以 是酵母菌 Ｃ．培养基中的唯一碳源是（ＣＨ２Ｏ），唯一氮源 是ＮａＮＯ３ Ｄ．若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除 去（ＣＨ２Ｏ），再添加纤维素 ２．某小组的同学为了调查湖水中细菌的污染情 况而进行了实验，包括制备培养基、灭菌、接 种及培养、菌落观察与计数。下列与此实验 相关的叙述中，正确的是 （Ｄ ） Ａ．实验用过的带菌培养基经过加热后才能 倒掉 Ｂ．利用平板划线法对细菌进行分离纯化并 计数 Ｃ．观察细菌培养的实验中，最好是在另一平 板上接种清水作为对照实验 Ｄ．培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分别为细 菌培养提供氮源和碳源 ３．下列关于测定土壤中微生物数量的叙述，不 正确的是 （Ｄ ） Ａ．显微镜直接计数计算的结果比实际值偏大 Ｂ．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形 成一个菌落 Ｃ．采用稀释涂布平板计数法获得的菌落数往 往少于实际的活菌数 Ｄ．统计菌落数目时，只要菌落数目在                                                                       ３０ ～ ３００ —１１６— 的平板都可以计数，并以它们的平均值作 为统计结果 ４．某些土壤细菌可将尿素ＣＨ４Ｎ２ Ｏ分解为ＣＯ２ 和ＮＨ３，供植物吸收和利用，但分解物ＣＯ２不 能为该菌提供营养。下列关于配制分离这一 菌种的选择培养基的成分符合要求的是（Ｂ ） Ａ．仅尿素 Ｂ．尿素＋葡萄糖 Ｃ．仅葡萄糖 Ｄ．牛肉膏蛋白胨 ５．（２０２４·浙江校联考）嗜热菌又称高温细菌， 是一类生活在高温环境中的微生物。研究者 从温泉中筛选高效产生高温淀粉酶的嗜热 菌，其筛选过程如图１所示。将得到的菌悬液 转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培 养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处 理，结果如图２所示。下列说法正确的是 （Ｄ ） Ａ．甲、乙试管为液体培养基，液体培养基能分 离获得嗜热菌单菌落 Ｂ．只有能产生淀粉酶的微生物才能在Ｉ、Ⅱ号 培养基上生长 Ｃ．丙试管中嗜热菌数量迅速增加，培养过程 中需保证充足的营养和室温条件 Ｄ．图２中周围不显蓝色的菌落含有所需的嗜 热菌 ６．（２０２４·河北模拟预测）酿酒酵母菌种的性能 是决定果酒品质的重要因素。如图表示从土 壤中筛选酿酒酵母的过程。下列叙述正确的 是 （Ｄ ） Ａ．图示接种方法为稀释涂布平板法，据结果 推测１ ｇ土壤中酵母菌数最多为１． ６ × １０６ （个） Ｂ．分离、纯化酵母菌时，还可采用平板划线法 且该方法也需要进行③步骤操作 Ｃ．获得酿酒酵母纯培养物的关键是防止杂菌 污染，故应对土壤、培养基及用具进行灭菌 Ｄ．进行步骤⑤时，应用液体培养基培养④中 的酵母菌，并检测酵母菌的数量和酒精 含量 二、非选择题 ７．金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性，在血平板 （培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏 菌落周围的红细胞，使其褪色。下面是某研 究小组测定某水样中金黄色葡萄球菌浓度的 实验操作。请回答下列问题： （１）金黄色葡萄球菌的培养基为质量分数为 ７． ５％的ＮａＣｌ牛肉膏蛋白胨培养基，此培养基 能为金黄色葡萄球菌的生长提供　 碳源、氮 源、水和无机盐　 。培养基中加入质量分数 为７． ５％的ＮａＣｌ利于金黄色葡萄球菌的筛 选，原因是　 不影响金黄色葡萄球菌生长的 同时抑制其他菌的生长　 。 （２）上述培养基的灭菌方法是　 湿热灭菌（高 压蒸汽灭菌）法　 。在制作血平板时需等平 板　 冷却　 后，方可加入血液，以防止　 高温 破坏血细胞　 。 （３）现将１０ ｍＬ菌液进行梯度稀释，依次稀释 成１０、１０２、１０３、１０４倍的４个稀释样液，再取４ 个稀释样液各０． １ ｍＬ分别接种到４组血平板 上（每组３个，每个接种０． １ ｍＬ），所用方法是 　 稀释涂布平板法　 。在血平板上，金黄色 葡萄球菌菌落的周围会出现　 透明圈（溶血 圈）　 。若在１０３倍稀释液的３个血平板上， 金黄色葡萄球菌菌落数分别为３５、３６和３７， 则每升水样中的活菌数约为　 ３． ６ × １０８个　                                                                       。 —１１７— 正确；每次划线的菌种来自上一区域的末端，因此划线的起始 区域菌落最多，由图乙可知，图甲中的ｄ区域菌落多，为划线 的起始位置，Ｄ错误。故选Ｄ。 ７． Ｂ　 平板划线法每次划线前后都需要将接种环灼烧灭菌，Ｂ 错误。 ８．（１）含碳有机物（或脂肪）　 碳源必须是含碳无机物（或碳酸 盐），同时加入硫化物　 选择　 分解者　 生产者 （２）防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染；防止培 养基水分蒸发过快 （３）稀释涂布平板法　 Ｄ （４）每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，最后一次划线 结束时更容易获得单菌落 解析：（１）厌氧菌以“鲸落”肌肉中的脂肪为食，属于异养型微 生物，故培养“鲸落”群落中厌氧菌的碳源必须是含碳有机物 （或脂肪）。硫细菌将硫化物氧化成硫酸盐，并以该过程中释 放的能量合成有机物，即硫细菌为自养型生物，所以要培养硫 细菌，培养基中的成分需要特殊配制，主要体现在碳源必须是 含碳无机物（或碳酸盐），同时加入硫化物。这种人为提供有 利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、ｐＨ等），同时抑制 或阻止其他微生物生长的培养基为选择培养基。（３）使用涂 布器涂布接种微生物的方法为稀释涂布平板法。稀释涂布平 板法接种的微生物会在培养基上形成均匀分布的菌落，而平 板划线法接种的微生物在划线的起始部分菌落连在一起生 长，由图可知，Ａ、Ｂ、Ｃ均形成了均匀分布的单个菌落，属于稀 释涂布平板法接种的，而Ｄ中菌落是连在一起生长的，是通过 平板划线法接种的。 练案［３］ 基础题组 １． Ｂ　 该培养基成分中无琼脂，是液体培养基，Ａ正确；从功能上 说，牛肉膏蛋白胨培养基是通用（基础）培养基，适合绝大多 数细菌生长，不具有选择性，Ｂ错误；牛肉膏和蛋白胨提供了 维生素，Ｃ正确；霉菌适合在酸性培养基中生长，Ｄ正确。故 选Ｂ。 ２． Ｂ　 由题意“噬菌斑是在固体培养基上一个噬菌体增殖并裂 解宿主菌后形成透明的溶菌空斑”可知，噬菌体样品应有足够 的稀释度，以保证初期一个细菌最多被一个噬菌体吸附，Ａ正 确；分析题意可知，噬菌斑是由噬菌体增殖并裂解宿主菌后形 成的，不是细菌增殖造成的，所以不能计算出敏感细菌的数 量，Ｂ错误；若平均每个平板的噬菌斑数量为１５０，则该样品中 计算出噬菌体数量为：１５０ ÷ ０． １ × １０６ ＝ １． ５ × １０９个／ ｍＬ，但实 际过程中，可能一个细菌不止被一个噬菌体吸附，所以该样品 中实际噬菌体数可能高于１． ５ × １０９个／ ｍＬ，Ｃ正确；由题意 “不同噬菌体噬菌斑的形态大小不同”可知，根据培养基上噬 菌斑的形状等特征可判断是否需要进一步纯化噬菌体， Ｄ正确。故选Ｂ。 ３． Ｃ　 被原油污染的土壤中含有更多的能够降解原油的细菌，Ａ 正确；为筛选出能高效降解原油的菌种，选择培养基应以多环 芳烃作为唯一碳源，在该选择培养基上能形成分解圈的为所 需菌种，Ｂ、Ｄ正确；所需的菌种在土壤稀释液中，土壤稀释液 不能进行灭菌，Ｃ错误。 ４． Ｄ　 甲同学获得的菌落数远大于其他同学，可能是由于所取的 土样不同，也可能是由于操作过程中被污染，Ａ正确；被污染 可能是因为培养基灭菌不彻底，或操作过程中没有保证无菌 操作，将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养 作为空白对照，可以证明培养基是否受到污染，Ｂ正确；若题 述结果是土样不同造成的，让其他同学用与甲同学一样的土 壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学操作 正确，Ｃ正确；Ｂ选项的实验思路遵循了实验的对照原则，Ｃ选 项的实验思路遵循了实验的重复原则，Ｄ错误。 ５． Ｂ　 计数时一般选择平均菌落数在３０ ～ ３００之间的平板，题中 所给菌落数在３０ ～ ３００之间的为２７０和５０，应取二者的平均 值进行计算，根据公式每克样品中的菌落数＝（Ｃ ÷ Ｖ）× Ｍ， 故每毫升菌落总数为（２７０ ÷ ０． １ × １０２ ＋ ５０ ÷ ０． １ × １０３）÷ ２ ＝ ３． ８５ × １０５（个）。 ６． Ｃ　 大肠杆菌是原核生物，大肠杆菌抗链霉素的性状可能是由 基因突变引起的，Ａ正确；由图可知，１号和５号采用稀释涂布 平板法将菌种接种在相应选择培养基上，Ｂ正确；４号、８号、 １２号培养基中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大，因 此抗性菌落（株）的比例最大的是１２号，Ｃ错误；微生物的抗 药性突变是自发产生的，环境只能对抗药性突变进行选择，因 此大肠杆菌抗药性的形成是在施加链霉素之前，而发生选择 作用是在施加链霉素之后，Ｄ正确。故选Ｃ。 ７．（１）淀粉 （２）先调ｐＨ后灭菌　 平板划线法　 细菌计数板　 血细胞计 数板　 显微镜 （３）碘液　 周围不显蓝色 解析：（１）分析题意，本实验目的是筛选高效产生耐高温淀粉 酶的嗜热菌，则应以淀粉为唯一碳源，在该培养基上只有能分 解淀粉的微生物能生长。（２）为避免杂菌污染，配置时应先调 ｐＨ后灭菌；据图可知，Ⅱ号培养基中是划线分布，故接种方法 是平板划线法；微生物的直接计数方法是细菌计数板（适用于 细胞小的）或血细胞计数板（适用于细胞大的）；常用的、快速 直观的测定微生物数量的方法是显微镜直接计数。（３）淀粉 与碘液反应呈蓝色，但如果淀粉分解菌中的淀粉酶将淀粉水 解后就不能呈蓝色，则会出现无色的透明圈，故图乙所示情况 中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种。 能力提升 １． Ｄ　 由培养基配方表可知，该培养基中没有加入琼脂，属于液 体培养基，Ａ正确；（ＣＨ２Ｏ）属于有机碳源，因此所培养微生物 的同化作用类型是异养型，培养的微生物可以是酵母菌，Ｂ正 确；能为微生物的生长繁殖提供所需碳元素的物质叫碳源，能 为微生物的生长繁殖提供所需氮元素的物质叫氮源，该培养 基中唯一碳源是（ＣＨ２Ｏ），唯一氮源是ＮａＮＯ３，Ｃ正确；纤维素 分解菌是细菌，青霉素对其具有杀灭作用，故若用该培养基培 养纤维素分解菌，则应除去（ＣＨ２Ｏ）和青霉素，再添加纤维素， Ｄ错误。 ２． Ｄ　 实验用过的带菌培养基，需要用湿热灭菌（高压蒸汽灭 菌）法灭菌后才能倒掉，以免污染环境，Ａ错误；利用平板划线 法可以对细菌进行分离纯化，但是不能计数，应利用稀释涂布 平板法对细菌进行分离纯化并计数，Ｂ错误；要使该实验所得 结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照实 验，Ｃ错误；培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分别为细菌培养 提供氮源和碳源，蛋白胨也可以提供碳源，Ｄ正确。 ３． Ｄ　 利用稀释涂布平板法计数时，当稀释倍数适宜的情况下才 可以计数其菌落数在３０ ～ ３００的平板，稀释倍数不足或过大 时，会影响计数结果，所以Ｄ错误。 ４． Ｂ　 配制该培养基时应选尿素为唯一氮源，同时，该菌不能以 分解物ＣＯ２为营养，即该菌为异养的，应加入葡萄糖来提供碳 源，因此应选Ｂ。 ５． Ｄ　 甲、乙试管为液体培养基，液体培养基不能分离出单菌落， Ａ错误；结合题干可知，只有能产生高温淀粉酶的微生物才能 在Ｉ、Ⅱ号培养基上生长，Ｂ错误；结合题干可知，丙中噬热菌 数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和高温条件，Ｃ 错误；图２中周围不显蓝色的菌落，说明其产生的淀粉酶可以 在高温下分解淀粉，                                                                      所以周围不显蓝色的菌落含有所需的嗜 —１８５— 热菌，Ｄ正确。故选Ｄ。 ６． Ｄ　 图示接种方法为稀释涂布平板法，据结果推测１ ｇ土壤中 酵母菌数为１． ６ × １０６（个），该方法估算值低于真实数值，故１ ｇ土壤中酵母菌数最少为１． ６ × １０６（个），Ａ错误；分离、纯化 酵母菌时，还可采用平板划线法但该方法不需要进行③步骤 操作，Ｂ错误；对土壤灭菌可将其中的酿酒酵母杀死，将不能 获得酿酒酵母的纯培养物，Ｃ错误；用经过④纯化的菌种，需 要检测酵母菌的数量和酒精含量，然后进行步骤⑤，Ｄ正确。 故选Ｄ。 ７．（１）碳源、氮源、水和无机盐　 不影响金黄色葡萄球菌生长的 同时抑制其他菌的生长 （２）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）法　 冷却　 高温破坏血细胞 （３）稀释涂布平板法　 透明圈（溶血圈）　 ３． ６ × １０８个 解析：（１）培养基能为微生物的生长提供碳源、氮源、水和无机 盐。因为金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性，培养基中加入质 量分数为７． ５％的ＮａＣｌ不影响金黄色葡萄球菌的生长，但会 抑制其他菌的生长，因此利于金黄色葡萄球菌的筛选。（２）对 培养基灭菌常用湿热灭菌法或高压蒸汽灭菌法。在制作血平 板时需等平板冷却后，方可加入血液，以防止高温破坏血细 胞。（３）现将１０ ｍＬ菌液进行梯度稀释，依次稀释成１０ ～ １０４ 倍的４个稀释样液，再取４个稀释样液各０． １ ｍＬ分别接种到 ４组血平板上（每组３个，每个接种０． １ ｍＬ），则所用方法是稀 释涂布平板法。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适 量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。因 此在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落的周围会出现透明圈（溶 血圈）。若在１０３组的３个血平板上，金黄色葡萄球菌菌落数 分别为３５、３６和３７，则每升水样中的活菌数约为３５ ＋ ３６ ＋ ３７３ × １０３ × １０． １ × １ ０００ ＝ ３． ６ × １０ ８（个）。 练案［４］ 基础题组 １． Ｄ　 由于发酵的过程是培养同种生物，因此在培养过程中补充 的同种培养液，并且为防止杂菌污染，培养液和空气须先灭 菌，Ａ正确；发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配置、灭 菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离 工程）等，发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，Ｂ正确；搅拌 可增加溶氧量，发酵罐中微生物的生长繁殖、代谢产物的形成 速度都与搅拌速度有关，Ｃ正确；单细胞蛋白是指通过发酵获 得大量的微生物菌体，Ｄ错误。故选Ｄ。 ２． Ｂ　 在菌种选育过程中，性状优良的菌种可以利用人工诱变 （引起基因突变）、自然界中筛选和基因工程等手段生产，Ａ正 确；虽然青霉素是抗生素，可以杀死部分细菌，但不能杀死所 有的细菌，有些细菌能分泌分解青霉素的酶，故在青霉素生产 过程中仍然需要严格灭菌，Ｂ错误；谷氨酸棒状杆菌属于好氧 型细菌，发酵过程中应进行通气和搅拌，以提高培养液中的溶 氧量。当ｐＨ呈酸性时，谷氨酸棒状杆菌就会生成乙酰谷氨酰 胺和谷氨酰胺；当溶氧不足时，生成的代谢产物就会是乳酸或 琥珀酸，Ｃ正确；若发酵工程的产品是微生物细胞本身，可在 发酵结束后采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，若产品 是代谢物，可以根据产物的性质采取蒸馏、萃取、离子交换等 方法提取、分离和纯化产品，Ｄ正确。故选Ｂ。 ３． Ａ　 发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些 特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工 业生产过程的一种技术。发酵工程的基本环节有选育菌种、 扩大培养、配制培养基、灭菌、接种和发酵、产品的分离和纯 化，Ａ正确；发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，Ｂ错误；在 发酵过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度， 以了解发酵进程，同时要严格控制发酵条件，如温度、ｐＨ、溶 解氧，故可能需要适时添加营养物质等，Ｃ错误；现代发酵工 程中，计算机控制系统可以通过负反馈机制，使发酵罐内的发 酵全过程处于最佳状态，Ｄ错误。故选Ａ。 ４． Ｃ　 发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技 术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢 物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培 养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方 面。发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反 应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为 专一的产物。发酵工程在医药、食品、农业、冶金、环境保护等 许多领域都得到广泛应用。Ａ、Ｂ、Ｄ正确，Ｃ错误。故选Ｃ。 ５． Ｄ　 对选育的菌种进行扩大培养，属于接种前的技术环节，不 属于发酵罐内发酵这一环节，Ｄ符合题意。故选Ｄ。 ６． Ｄ　 发酵工程是通过现代工程技术，利用微生物的特定功能， 规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、 产物的分离和提纯等方面，Ａ正确；发酵工程是指利用微生物 的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产 品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，Ｂ正确；农牧业 生产上利用发酵工程生产微生物肥料，增进土壤肥力，改良土 壤结构，促进植株生长，常见的有根瘤菌肥、固氮菌肥等，Ｃ正 确；单细胞蛋白是指利用发酵工程获得的大量的微生物菌体， 而并非微生物的代谢产物，故不需要提取，Ｄ错误。故选Ｄ。 ７． Ｄ　 发酵工程生产的单细胞蛋白是通过发酵获得的大量的微 生物菌体，Ａ错误；性状优良的菌种可以从自然界中筛选出 来，也可以通过诱变育种和基因工程育种方法获得，Ｂ错误； 如果发酵产品是微生物细胞本身，可在发酵结束之后，采用过 滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，即可得到产品。如果产品 是代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措 施来获得产品，Ｃ错误；利用发酵工程生产的微生物肥料利用 了微生物在代谢过程中产生的有机酸、生物活性物质等来增 进土壤肥力、改善土壤结构、促进植株生长，如根瘤菌肥、固氮 菌肥等，Ｄ正确。故选Ｄ。 ８．（１）培养基Ａ　 提供碳源和氮源　 高压蒸汽灭菌　 将未接种 的空白培养基置于适宜条件下培养一段时间，观察是否有菌 落出现 （２）抽样检测　 ２０　 死孢子和活孢子 （３）环境条件的变化不仅会影响菌种的生长繁殖，而且会影响 代谢产物的形成 解析：（１）能观察菌落形态的培养基应为固体培养基，分析图 表可知，在培养基Ａ、Ｂ、Ｃ中只有培养基Ａ含有凝固剂琼脂， 属于固体培养基，故可用于观察菌落形态的是培养基Ａ；蛋白 胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等物质，故培养基Ｃ 中蛋白胨的作用是微生物生长提供碳源和氮源；培养基的灭 菌方法是高压蒸汽灭菌法；检验该培养基灭菌效果的常用方 法是将未接种的空白培养基置于适宜条件下培养一段时间， 观察是否有菌落出现；若没有菌落出现，则说明培养基灭菌合 格，反之说明不合格。（２）结合后文可知，使用的是长和宽均 为１ ｍｍ，深度为０． １ ｍｍ的血细胞计数板，故研究成熟孢子的 密度，可采用抽样检测的方法，用血细胞计数板计数法对培养 基Ｂ中的成熟孢子进行计数；预期密度为每毫升８ × １０７个 活细胞，设４个中方格的孢子数量应不少于ｘ，则有４ｘ ÷ ０ ． １ × １０３ × １００ ＝ ８ × １０７，解得ｘ ＝ ２０；该方法统计的结果 一般是死细菌和活细菌的总和。（３）微生物发酵过程中要 严格控制温度、ｐＨ、溶氧、通气量与转速等发酵条件，因为 环境条件的变化不仅会影响菌种的生长繁殖，而且会影响 代谢产物的形成                                                                      。 —１８６—