3.2基因工程的基本操作程序课件-2024-2025学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

选择性必修3 生物技术与工程 2019 基因工程 基因工程的基本操作程序 76 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 目的基因的筛选与获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 植物细胞：农杆菌转化法、花粉管通道法 动物细胞：显微注射法 微生物细胞：Ca2+处理法 分子水平上的检测 个体生物学水平上的鉴定 第3章 基因工程 76 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 核心 第3章 基因工程 76 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 77 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 77 第2节 基因工程的基本操作程序 优点：可以在短时间内大量扩增目的基因 (体外用耐高温的DNA聚合酶) 2种 两种引物的要求：①引物自身不能环化；②两种引物之间不能互补配对；③引物长度不宜过短，防止引物随机结合 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 77 第2节 基因工程的基本操作程序 延伸时需要加入两种引物，原因是：DNA是反向平行的双链，DNA聚合酶只能从引物3´端延伸DNA链，用两种引物才能确保DNA两条链同时被扩增。 1. 2. 3. 第3章 基因工程 78 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 3.过程 第3章 基因工程 78 第3章 基因工程 mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。 80 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 这种方法针对性差，完全靠运气也无法确定哪些基因导入了受体植物。 第3章 基因工程 80 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 “首先” “然后” “再利用” 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 81 第2节 基因工程的基本操作程序 1. 2. ① ② 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 81 第2节 基因工程的基本操作程序 (1)受体细胞 (2)载体 (3) ① ② 受体细胞为体细胞 受体细胞为受精卵 若要利用农杆菌转化法转化单子叶植物细胞，可采取添加酚类物质，其目的是：吸引农杆菌移向受体细胞，有利于目的基因成功转化 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 81 第2节 基因工程的基本操作程序 将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上 第1次拼接 第2次拼接 第1次导入 第2次导入 植物组织培养 用农杆菌感染时，优先选择受伤的(受伤的/完好的)叶片与重组质粒的农杆菌培养，选用该叶片的理由是：叶片伤口处的细胞可释放大量的酚类物质，可吸引农杆菌。 第3章 基因工程 82 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 是否出现凝胶电泳条带 是否出现杂交带 个体水平： ①检测生物是否具有该蛋白质赋予的某种特性以及具有该特性的程度。 ②活性比较实验:将基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能活性是否相同。 第3章 基因工程 82 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 显微注射法 Ca2＋处理法(感受态细胞法) 微生物作为受体细胞的优点： 繁殖周期短 体积小易于培养操作 多为单细胞 遗传物质相对较少 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 83 第2节 基因工程的基本操作程序 如果棉田周围存在大量天然庇护所，靶标害虫棉铃虫、红铃虫等并未对转Bt基因的抗虫棉产生明显抗性。 （1）基因策略：经常将两种或两种以上的Bt基因(如CrylAa和CrylAc基因)同时转入棉花细胞，这样既可以提高杀虫活性，又可以延缓害虫抗性的产生和发展，还可以通过不同基因间的互补作用扩大抗虫范围。 （2）田间策略：这是在种植时采取的措施，如提供庇护所、与其他作物轮作或套种等。 （3）国家宏观调控策略 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 83 第2节 基因工程的基本操作程序 √ × × D 外源基因插入基因组中可能为单位点插入，或者同一染色体多位点插入，或者不同染色体多位点插入。大多数情况下，插入的位点难以做到定点插入；插入的拷贝数也是随机的。因此，外源基因在转基因植物中的遗传是很复杂的。 第3章 基因工程 84 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 ① ② ③ ④ 第3章 基因工程 84 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 84 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 84 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 85 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 85 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 85 第2节 基因工程的基本操作程序 可以在紫外灯下直接观察到DNA条带的分布及粗细程度来评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带。 2.如果扩增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。如果扩增结果不止一条条带，可能的原因有：引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易形成二聚  体；退火温度过低；DNA聚合酶的质量不好等。 第3章 基因工程 86 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 86 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 86 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 第3章 基因工程 $$