3.1 重组DNA的基本工具-2024-2025学年高二生物同步备课课件（人教版2019选择性必修3）

3.1 重组DNA的基本工具 1.基因是什么？ 2.基因的功能是什么？ 基因通过控制蛋白质的合成，直接或间接控制生物的性状。 转录 DNA mRNA 蛋白质 翻译 （RNA聚合酶） ——体现相关的生物性状 知识回顾——基因 基因是有遗传效应的DNA片段。 ①DNA中文全称:　　　　　　　 ②组成元素:　　　　　　　　 ③基本单位:　　　　　　　　　 脱氧核糖核酸 C H O N P 脱氧核糖核苷酸 = 磷酸 + 脱氧核糖 + 含氮碱基 脱氧 核糖 含氮碱基 磷酸 1′ 4′ 3′ 2′ 5′ A T G C 脱氧核苷酸 (4种) 鸟嘌呤脱氧核苷酸 胞嘧啶脱氧核苷酸 胸腺嘧啶脱氧核苷酸 腺嘌呤脱氧核苷酸 知识回顾——基因 脱氧 核糖 A 磷酸 脱氧 核糖 G 磷酸 脱氧 核糖 T 磷酸 T 磷酸 脱氧 核糖 C 磷酸 脱氧 核糖 A 磷酸 脱氧 核糖 氢键 磷酸二酯键 单个脱氧核苷酸如何连接成脱氧核苷酸链的呢？ 知识回顾——基因 DNA的结构特点： 5’ 3’ 3’ 5’ ② 和 交替连接，排列在外侧，构成 ； 排列在内侧。 ③两条链上的碱基通过 连接成碱基对，且遵循 。 ①DNA是由两条单链组成的，这两条链 按 方式盘旋成双螺旋结构。 反向平行 脱氧核糖 磷酸 碱基 基本骨架 氢键 碱基互补配对原则 知识回顾——基因 我国是棉花的生产和消费大国。在棉花种植过程中常常会受到一些害虫的侵袭，其中以棉铃虫最常见。 大量施用农药 × 抗虫基因 转基因 基因工程 能不能将“杀虫基因”导入到棉花细胞，使棉花自身产生抗虫蛋白来抵抗棉铃虫呢？ 基因工程 指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术。 ①操作环境： ②操作水平： ③原理： ④结果： ⑤意义（优点）： DNA 分子水平 基因重组 赋予生物新的遗传特性，创造出人类需要的新的生物类型和生物产品。 定向改造生物性状；克服远缘杂交不亲和障碍。 体外环境 基因工程基础理论的分析 【问题1】为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？ ①DNA分子的基本组成单位相同，都是4种脱氧核苷酸； 脱氧 核糖 含氮碱基 磷酸 DNA平面结构 DNA立体结构 ②空间结构相同，都是规则的双螺旋结构。 ③都遵循碱基互补配对原则 【问题2】为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达？ ①基因是控制生物性状的独立遗传单位。 相同的遗传信息在不同生物体内表达出相同的蛋白质。 基因工程基础理论的分析 ②遗传信息的传递都遵循中心法则。 ③生物界共用一套遗传密码。 从社会中来 番木瓜容易受番木瓜环斑病毒的侵袭。当番木瓜被这种病毒感染后，产量会大大下降。 科学家通过精心设计，用“分子工具”培育出了转基因番木瓜，它可以抵御番木瓜环斑病毒。DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”。 科学家究竟用到了哪些“分子工具”？ 这些“分子工具”各具有什么特征呢？ 转基因番木瓜（左）与非转基因番木瓜（右） 从社会中来 转基因番木瓜 培育抗番木瓜环斑病毒的木瓜 抗番木瓜环斑病毒基因提取 抗番木瓜环斑病毒基因与载体DNA连接 抗番木瓜环斑病毒基因导入受体细胞 准确切割DNA分子 将DNA片段连接起来 将体外重组好的DNA分子导入受体细胞 “分子手术刀” “分子缝合针” “分子运输车” 剪 接 运 分子工具 细菌 细菌 细菌 限制性内切核酸酶 限制酶就是细菌的一种防御性工具。当外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效，以保证自身的安全。 一、限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 能识别 的特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 一、限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，又称 。 限制酶 1.来源： 2.种类： 主要来自原核生物 数千种 限制酶不是一种酶，而是一类酶。 3.作用特点： 专一性 大多数限制酶识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、八个或其他数量的核苷酸组成。 双链DNA分子 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ G 限制酶 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 磷酸二酯键 T G C C G T A A 5' 3' 5' 3' 一、限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 一、限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 4.识别序列 EcoR Ⅰ 5’…G-A-A-T-T-C…3’ 3’…C-T-T-A-A-G…5’ Sma Ⅰ 5’…C-C-C-G-G-G…3’ 3’…G-G-G-C-C-C…5’ BamH Ⅰ 5’…G-G-A-T-C-C…3’ 3’…C-C-T-A-G-G…5’ Taq Ⅰ 5’……T-C-G-A……3’ 3’……A-G-C-T……5’ 呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列。 在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。 限制酶所识别的序列的特点是： 拓展——限制酶的命名 EcoRⅠ 属名Escherichia首字母 种名coli 前两个字母 R型菌株 从中分离的第一个限制酶 EcoR Ⅰ：大肠杆菌（Escherichia coli）R型菌株中分离出的第一个限制酶； 阅读72页资料卡“限制酶的命名”，说说EcoRⅠ各个字母的代表含义。 一、限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 实例1：EcoR I 限制酶能特异性识别 5'-GAATTC-3' 序列，并在 G 与 A 之间切割。 5′ 3′ 5′ 3′ T A C G T A C T G A A T 5′ 5′ 3′ 3′ C T 5′ 3′ 5′ 3′ T A G C A G A T T A 中轴线 黏性末端 （5'AATT-3' ） 当限制酶在它的识别序列的中心轴线两侧将 DNA 分子的两条链分别切开时，产生的是黏性末端。 一、限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 5.切割结果 : 实例2：Sma I 限制酶能特异性识别 5'-CCCGGG-3' 序列，并在 C 与 G 之间切割。 5′ 3′ 5′ 3′ C G C G C G C G C G C G 中轴线 5′ 3′ 5′ 3′ C G C G C G C G C G C G 5′ 3′ 5′ 3′ 平末端 当限制酶在它的识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 5.切割结果 : 一、限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 形成黏性末端或平末端 1.下面哪项不具有限制酶识别序列的特征（ ） A．GAATTC CTTAAG B．GGGGCCCC CCCCGGGG C．CTGCAG GACGTC D．CTAAATC GATTTAG D 2.下列黏性末端属于由同种限制酶切割而成的是( ) ① ② A.①② B.①③ C.①④ D.②③ ③ 　④ 倒转180°，完全相同则为同一种限制酶切割 B 【现学现用】 3.写出下列限制酶切割形成的黏性末端 BamHⅠ________ EcoRⅠ________ HindⅢ________ BglⅡ________ GATC AATT AGCT GATC 思考：同种限制酶切割的黏性末端一定相同吗？不同种限制酶切出的黏性末端一定不同吗？ ①不同DNA分子用同一种限制酶切割形成的黏性末端都相同。 【解析：酶具有专一性，识别的序列相同】 ②不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端。（比如BamHⅠ、BglⅡ） 4.结合右图，推断限制酶切一次可断开 个磷酸二酯键， 产生 个游离的磷酸基团，消耗 分子水。 2 2 2 5.下图甲是一个DNA片段，箭头处代表不同限制酶的切点，据图回答： (1)用EcoR Ⅰ 酶切，能得到 种DNA片段； (2)用PstⅠ 完全酶切，能得到 种DNA片段； 2 3 (3)要想获得抗病基因必须要用限制酶切 个切口？可产生 个黏性(平)末端？ 2 4 用同种限制酶切割(EcoRⅠ) T G A A T T C G A C T T A A G C A G A A T T C T T C T T A A G A 缺口怎么办 完全互补的黏性末端能通过氢键暂时连接在一起，但并不稳定。 DNA连接酶 — “分子缝合针” 恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 想一想：把两种来源不同的DNA分子进行拼接，应该怎样处理呢？ 1.作用： 将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 5′ 3′ T A C G T A C T G A A T 5′ 3′ 5′ 3′ C G C G C G 5′ 3′ C G C G C G 切口 切口 切口 C T 5′ 3′ 5′ 3′ T A G C A G A T T A 5′ 3′ 5′ 3′ C G C G C G C G C G C G 二、DNA连接酶—“分子缝合针” 不是连接氢键（氢键的形成不需要酶的催化） 2.种类： 种类 来源 功能 缝合 和 ； 缝合__________和_______________ 结果 E.coli DNA 连接酶 T4 DNA 连接酶 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 二、DNA连接酶—“分子缝合针” 黏性末端 平末端 （连接平末端效率远低于T4 DNA连接酶） 黏性末端 平末端(效率低) 大肠杆菌 T4噬菌体 二、DNA连接酶—“分子缝合针” 3.E·coli DNA连接酶的连接作用 注意：两个DNA片段要具有互补（相同的）黏性末端才能连接起来 4.T4 DNA连接酶的连接作用 二、DNA连接酶—“分子缝合针” DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ DNA连接酶 DNA连接酶 A T A G T C C G A A T T 连接两个DNA片段 DNA连接酶作用示意图： C A A T T G A G T A T C DNA聚合酶 DNA聚合酶作用示意图： 以DNA的一条链为模板，连接单个脱氧核苷酸形成单链 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 底物 产物 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要DNA的一条链作模板 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 4种游离的脱氧核苷酸 具有互补黏性末端或平末端的DNA片段 【现学现用】 1.DNA连接酶是重组DNA技术中常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是（ ） A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键 B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键 C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键 D.DNA连接酶只能连接双链DNA片段互补的黏性末端 C 磷酸二酯键 DNA片段 也能连接平末端 2.以下是几种不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确的是（ ） A.以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的 B.②片段是在识别序列为 的限制酶作用下形成的 C.①和④两个片段在DNA聚合酶的作用下可形成重组DNA分子 D.限制酶和DNA连接酶作用的部位都是磷酸二酯键 D ①和④相同 DNA连接酶 3.如表列举了几种限制酶的识别序列及其切割位点(箭头表示相关酶的切割位点)。如图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是（ ） A.BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键 B.Sau3AⅠ和BamHⅠ切割的序列产生的片段能够相连，连接后的片段还能被Sau3AⅠ切割 C.DNA连接酶能连接②⑤，不能连接②④ D.T4 DNA连接酶能连接①③，且连接效率高 B 1.作用： 将外源基因送入受体细胞, 在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 2.种类： 质粒 动植物病毒 噬菌体 （最常用） 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有 能力的 。 自我复制 环状双链DNA分子 它们来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大的差别。 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 复制原点 目的基因 插入位点 氨苄青霉素抗性基因 ①能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。 ②有一个至多个限制酶切割位点 EcoR Ⅰ Sma Ⅰ . . . ③具有标记基因 图1-1 ④对受体细胞无害 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 3.★作为载体所具备的条件 （便于目的基因插入） （便于重组DNA分子的筛选） 真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，导入了载体并成功表达了的受体细胞才能够生存。 标记基因的筛选原理 思考·讨论：请同学找到两条片段上EcoRI的识别序列和切割位点。 …TATCGTACGATAGGTACTTAA …ATAGCATGCTATCCATG AATTCGGCATAC… GCCGTATG… …TCCTAG …AGGATCTTAA GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG AATTCCATAC… GGTATG… GAGCCATACTTAA AATTCTCGGTATG 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？ 剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。 2.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对?如果不能，可能是什么原因造成的？ 如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对，可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。 3.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？ 不能。 因为基因的长度一般在100个碱基对以上。 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 4.用EcoR Ⅰ切下图含有目的基因的DNA片段，能成功不？ 双酶切：用2种酶分别对目的基因和运载体切割。 …ATCGAATCATCCCGGGCATTAGTG…CCAAGTCTCTGGAATTCACGATTAG… …TAGCTTAGTAGGGCCCGTAATCAC…GGTTCAGAGACCTTAAGTGCTAATC… 不能 …GGGCATTAGTG…CCAAGTCTCTGG… …CCCGTAATCAC…GGTTCAGAGACCTTAA… 双酶切产生不同末端： 选择限制酶切割位点的基本原则 切割目的基因时： 切割质粒时： 能切下目的基因且不破坏目的基因 至少保留一个完整的标记基因，便于筛选 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1.某细菌质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转入成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，如图所示是外源基因插入位置（插入点有a、b、c）示意图，请根据表中提供的细菌生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是（ 　 　） 插入点 细菌在含氨苄青霉素的培养基上的生长状况 细菌在含四环素的培养基上的生长状况 ① 能生长 能生长 ② 能生长 不能生长 ③ 不能生长 能生长 A. ①是a和b；②是a；③是b B．①是c；②是b；③是a C．①是a和b；②是b；③是a D．①是c；②是a；③是b B 【现学现用】 2.(不定项)图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是(　　) AC A.图甲中的质粒用BamHI切割后，含有2个游离的磷酸基团 B.在构建重组质粒时，可用PstI和BamHI切割质粒和外源DNA C.在构建重组质粒时，可用PstI和HindⅢ切割切割质粒和外源DNA D.导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长 （一）实验原理 0 0.14 NaCI浓度（mol/L） DNA溶解度 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 DNA不溶于酒精， 但某些蛋白质溶于酒精 DNA能溶于物质的量浓度为 2 mol/L的NaCl溶液 在一定温度下， DNA被二苯胺试剂染成蓝色 初步分离 DNA和蛋白质 溶解DNA 鉴定DNA 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 （二）材料用具 1.实验材料的选取 富含DNA的材料，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜和猪肝等 材料： 【思考】能否选用牛、羊、马、猪等哺乳动物的红细胞做实验材料？ 不能 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，几乎不含DNA 。 【思考】能否选用鸡血细胞做实验材料？ 能 鸡是鸟类动物，成熟的红细胞中有细胞核。 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 2.试剂： 试剂 研磨液 体积分数为95%的酒精 二苯胺 2mol/L 的NaCl溶液 蒸馏水 溶解并提取DNA 析出DNA 溶解DNA 鉴定DNA，要现配现用 研磨液成分 作用 SDS 使蛋白质变性 EDTA 抑制DNA酶的活性 Tris-HCl缓冲液 使DNA呈稳定状态 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 （二）材料用具 1.通过研磨释放DNA： 称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨 研磨的目的？ 破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中 注意事项？ 研磨时间不宜太长： 有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶： 研磨不宜太用力： 思考：若是动物细胞，该如何获取DNA滤液？ 动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。 （三）实验步骤 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量 有利于充分研磨 防止DNA被破坏 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 过滤能用滤纸代替吗？ 不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。 方法一：在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。 方法二：直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心 5min，再取上清液放入烧杯中。 思考：（1）上清液中除 DNA 之外，可能含有哪些杂质？ 可能含有核蛋白、多糖等杂质 （2）低温放置几分钟有什么作用？ ①抑制核酸水解酶的活性，进而抑制 DNA 降解； ②抑制 DNA 分子运动，使 DNA 易形成沉淀析出； ③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。 2．去除滤液中的杂质 方法一：在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分； 思考：（1）搅拌时应轻缓、并沿一个方向？ 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子 （2）酒精预冷的作用？ ①低温可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； ②低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出； ③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少断裂。 方法二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。 3.冷却酒精析出DNA 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 4.DNA的鉴定 实验组 对照组 水浴加热 取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。 蓝色 （四）结果分析 ①材料中的核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。 ②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。 ③二苯胺最好现用现配，否则二苯胺变成浅蓝色，影响鉴定效果。 1.怎么确认实验提取出来的是DNA所含杂质较少？若鉴定结果呈现蓝色比较浅，说明什么问题？ 观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。若鉴定结果蓝色比较浅，可能是因为所提取的DNA含量低，或在实验操作过程中出现了失误。 2.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。 四、探究•实践：DNA的粗提取与鉴定 以血液为实验材料时： 每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。 1.（不定项）下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是( 　　) A．羊的成熟红细胞可作为提取DNA的材料 B．提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的洗涤剂和食盐 C．预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解 D．在沸水浴条件下,DNA与二苯胺反应呈现蓝色   BCD 【现学现用】 2.（不定项）关于“DNA的粗提取与鉴定”实验,下列说法错误的是 (　 　) A．整个提取过程中可以不使用离心机 B．研磨液在４℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中 C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变 D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰 BCD 一、概念检测 1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是（ ） A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键 B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键 C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键 D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端 2.在重组DNA技术中,将外源基因送入受体细胞的载体可以是 （ ） A.大肠杆菌的质粒 B.切割DNA分子的酶 C.DNA片段的黏性末端 D.用来识别特定基因的DNA探针 C A 【练习与应用】 二、扩展应用 1.想一想，为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？ 细菌中限制酶之所以不切割自身的DNA，一是因为细菌中不具备限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开（DNA分子被甲基化保护）。这样，尽管细菌中含有某种限制酶，也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA入侵。 (1)哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶speⅠ切割A片段产生的DNA片段相连接？为什么？ (2)不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义？ XbaⅠ。因为XbaⅠ与SpeⅠ切割产生了相同的黏性末端。 识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时，扩大了切割位点的选择范围。 2.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶speⅠ进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ , XbaⅠ、EcoRⅤ和XhoⅠ进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。 Lavf56.40.101 Tencent APD MTS $$