精品解析：山东省烟招远市第二中学2024-2025学年高二下学期第一次月考生物试题

2024—2025学年度第二学期期中月考试题 高二生物 注意事项： 1.答卷前，考生务必将自己的姓名、考生号等填写在答题卡和试卷指定位置。 2.回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1. 基于我国传统酸醋工艺，一种以果汁为原料进行液态发酵生产果醋的流程如图。下列叙述错误的是（ ） A. 制取果汁时添加果胶酶可提高果汁产量，处理①加糖可增加碳源 B. 醋酸发酵阶段通入充足的氧气有利于微生物将乙醇转化为乙酸 C. 酒精发酵和醋酸发酵的微生物呼吸方式相同，最适生长温度不同 D. 发酵生产结束后，处理②需根据果醋保存时间选择消毒或灭菌方法 【答案】C 【解析】 【分析】1、酵母菌在有氧和无氧的条件下都能生活：在有氧时，酵母菌大量繁殖，但是不起到发酵效果；在无氧时，繁殖速度减慢，但是此时可以进行发酵。 2、醋酸菌好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。 【详解】A、制取果汁时添加果胶酶可提高果汁产量，因为果胶酶能分解果胶，使不溶性的果胶变成可溶性的半乳糖醛酸，因而可以提高果汁产量，处理①中加糖可增加碳源，为酒精发酵提供充足的底物，A正确； B、醋酸菌是好氧菌，醋酸发酵阶段通入充足的氧气有利于微生物将乙醇转化为乙酸，B正确； C、酒精发酵和醋酸发酵的微生物呼吸方式不同，前者涉及的微生物是酵母菌，利用的是酵母菌的无氧呼吸，后者涉及的微生物主要是醋酸菌，醋酸菌是好氧菌，二者最适生长温度不同，醋酸菌适宜的温度为30～35℃，酵母菌适宜的温度范围是18～30℃，C错误； D、发酵生产结束后，处理②需根据果醋保存时间选择消毒或灭菌方法，D正确。 故选C。 2. 检测空气微生物常采用沉降平板法，具体做法是将牛肉膏蛋白胨培养基的平板置于待测地点，打开皿盖暴露于空气中一段时间后，盖好皿盖置于培养箱中培养、观察并统计菌落数。下列叙述正确的是（ ） A. 该培养基应进行干热灭菌，且需待压力表指针降至“0”后打开排气阀并开盖取物 B. 采样平板和未采样的平板雷在相同条件下培养，一般应在灭菌前调pH C. 平板中每一个菌落数都是由一个活菌繁殖而来 D. 该方法不能准确统计空气中微生物种类与数量，结果往往比实际值偏高 【答案】B 【解析】 【分析】消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 【详解】A、培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌而非干热灭菌，A错误； B、采样平板和未采样的平板需在相同条件下培养，遵循实验设计的无关变量一致原则，一般应在灭菌前调好pH，B正确； C、当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到只是一个菌落，故单菌落可能是由一个或多个细菌繁殖而来的，C错误； D、该方法只能估计空气中微生物种类数量，不能准确统计，单菌落可能是由一个或多个细菌繁殖而来的，结果往往比实际值偏低，D错误。 故选B。 3. 某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭纤维素分解菌的效果，结果如图所示。某同学从100mL细菌原液中取1mL加入无菌水中得到10mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200μL涂布平板，菌落计数的结果为100。下列说法错误的是（ ） A. 据图可知杀菌效果最好的消毒液是A B. 推算细菌原液中细菌浓度为5000个/mL C. 纤维素分解菌将纤维素分解的产物与刚果红生成红色复合物 D. 显微镜直接计数和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，前者大于后者 【答案】C 【解析】 【分析】平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。 【详解】A、A消毒液活菌减少量最多，杀菌效率最高，故A消毒液的杀菌效果最好，A正确； B、若计数结果是100，1mL细菌原液中细菌浓度=（菌落数÷菌液体积）×稀释倍数=（100÷0.2）×10=5000个/mL，B正确； C、鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素可与刚果红生成红色复合物，而纤维素分解后的产物不能和染料形成红色复合物，C错误； D、显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数，菌落计数法计数只计活菌数，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况，故计数结果前者大于后者，D正确。 故选C。 4. 某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗链霉素性状产生的原因，先将原始菌种接种到1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 大肠杆菌抗链霉素的突变是发生在与链霉素接触之后 B. 在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能大于初始接种到该培养基上的活菌数 C. 4号和8号培养液中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大 D. 该实验缺乏对照实验，无法确定抗链霉素性状属于可遗传变异 【答案】C 【解析】 【分析】影印培养法实质上是使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法。通过影印培养法，可以从在非选择性条件下生长的细菌群体中，分离出各种类型的突变种。 【详解】A、大肠杆菌抗链霉素的性状是由基因突变引起的，该突变发生在与链霉素接触之前，链霉素是对其起选择作用，A错误； B、采用稀释涂布平板法将菌种接种在5号培养基上，由于两个或多个细菌可能会形成一个菌落，在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能小于初始接种到该培养基上的活菌数，B错误； C、3号与2号、7号与6号培养基中的菌落数的比值，是抗性菌落占全部菌落的比例，观察实验结果可知，4号与8号培养液中，抗链霉素菌株的比例在逐渐增大，C正确； D、本实验有对照实验，无链霉素的培养基为对照，可以确定抗链霉素性状属于可遗传的变异，D错误。 故选C。 5. 某野生型细菌能通过图1途径合成色氨酸，从而在不含色氨酸的培养基上正常生长繁殖，而其突变株则不能。将突变株TrpB、TrpC、TrpE（仅图1中的某一步受阻）分别划线接种在图示培养基的I、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖，继续培养后发现1区域的两增和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖，而Ⅲ区域菌株不再生长。下列叙述错误的是（ ） A. TrpC菌株继续生长增殖的一端为靠近1区域的一端 B. 3种突变菌株均能将积累的中间产物分泌到细胞外 C. 该培养基中含有少量色氨酸，酸碱度为中性或弱碱性 D. TrpE菌株不再生长是由于缺乏催化吲哚合成色氨酸的酶 【答案】A 【解析】 【分析】基因通过中心法则控制性状，包括两种方式： （1）通过控制酶的合成控制代谢过程，间接控制生物体的性状； （2）可通过控制蛋白质的结构直接控制生物的性状。 【详解】A、依据题图及题干信息“突变株TrpB-、TrpC-、TrpE-分别划线接种在图2培养基的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖”，“继续培养一段时间后发现Ⅰ区域的两端和Ⅱ区域的一端的细菌继续生长增殖”；分析得知：突变株TrpB-，将分支酸转化为邻氨基苯甲酸受阻，但可将邻氨基苯甲酸转化为吲哚，并进一步转化为色氨酸；突变株TrpC-对应Ⅱ区域，将邻氨基苯甲酸转化为吲哚受阻，但可以将分支酸转化为邻氨基苯甲酸，也可以将吲哚转化为色氨酸；突变株TrpE-对应Ⅲ区域，将吲哚转化为色氨酸受阻，但可以将分支酸转化为邻氨基苯甲酸，并进一步转化为吲哚。Ⅰ区域的TrpB-划线上端与Ⅱ区域临近，可利用Ⅱ区域TrpC-合成的邻氨基苯甲酸进一步合成吲哚及色氨酸生长增殖；Ⅰ区域的TrpB-划线下端与Ⅲ区域临近，可利用Ⅲ区域TrpE-合成的吲哚进一步合成色氨酸生长增殖；Ⅱ区域的TrpC-划线上端自身不能合成吲哚，临近的Ⅰ区域TrpB-可利用Ⅱ区域合成的邻氨基苯甲酸合成吲哚并进一步合成色氨酸，无多余的吲哚反馈给Ⅱ区域上端，所以Ⅱ区域的TrpC-划线上端不生长；Ⅱ区域的TrpC-划线下端，可利用临近Ⅲ区域TrpE-合成的吲哚进一步合成色氨酸生长增殖；Ⅲ区域TrpE-由于不能将吲哚转化为色氨酸，所以Ⅲ区域两端不生长增殖，所以Ⅱ区域的TrpC-划线下端靠近Ⅲ区域，可利用临近Ⅲ区域TrpE-合成的吲哚进一步合成色氨酸生长增殖，而不是靠近Ⅰ区域的一端，A错误； B、根据题干信息“继续培养后发现I区域的两端和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖”，说明培养基中3种突变菌株均能将积累的中间产物分泌到细胞外，使其他突变体得以生存，B正确； C、依据题干信息“培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖”，推断培养基中存在少量色氨酸，培养细菌一般将pH调至中性或弱碱性，C正确； D、根据C项分析，TrpE-菌株不再生长是由于缺乏催化吲哚合成色氨酸的酶，导致不能合成吲哚，因此缺乏色氨酸，D正确。 故选A。 6. 养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ） A. ①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B. ②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C. ③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D. 粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 【答案】C 【解析】 【分析】由图可知，所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂。图中②筛选的是不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验。 【详解】A、平板划线法无需稀释，A错误； B、由图可知，②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误； C、所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙，C正确； D、由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产生NH3，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。 故选C。 7. 图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述错误的是（ ） A. 步骤①添加纤维素酶或果胶酶去除细胞壁，其原理是酶的专一性 B 步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C. 原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D. 台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养 【答案】B 【解析】 【分析】植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 【详解】A、植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，步骤①添加纤维素酶或果胶酶去除细胞壁，其原理是酶的专一性，A正确； B、步骤②吸取原生质体放入等渗液中清洗，放在无菌水中会导致原生质体吸水涨破，B错误； C、结合图示可知原生质体处于甘露醇和蔗糖溶液之间，因而可推测原生质体的密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间，C正确； D、台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养，染成蓝色的原生质体活性差或死亡，D正确。 故选B。 8. 中药材怀菊含有多种活性物质，具有清热、明目等功效。植物组织培养技术可用于怀菊的脱毒和快速繁殖。下列叙述正确的是（ ） A. 怀菊中含有的次生代谢物通常是怀菊基本生命活动所必需的 B. 怀菊快速繁殖过程中产生的体细胞突变可通过无性生殖遗传 C. 利用怀菊的茎段作为外植体，通过植物组织培养可获得脱毒苗 D. 生芽培养基中细胞分裂素与生长素的比值比生根培养基中的小 【答案】B 【解析】 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、怀菊中含有的初生代谢物通常是怀菊基本生命活动所必需的，而次生代谢物不是怀菊基本生命活动所必需的，A错误； B、怀菊快速繁殖过程中产生的体细胞突变可通过无性生殖遗传，该过程的原理是植物细胞的全能性，B正确； C、利用怀菊的茎尖作为外植体，通过植物组织培养可获得脱毒苗，因为茎尖中几乎不带毒，C错误； D、生芽培养基中细胞分裂素与生长素的比值比生根培养基中的大，进而促进生芽，生长素偏多时有利于生根，D错误。 故选B。 9. 海南龙血树具有药用和观赏价值，可利用植物组织培养技术产生愈伤组织，进而获得该种植株。动物细胞融合技术可将骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，进而制备单克隆抗体。下列有关这两种技术的叙述，正确的是（ ） A. 利用的原理均是细胞的全能性 B. 使用的培养基均需添加葡萄糖和血清 C. 培养时的温度和pH均相同 D. 产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力 【答案】D 【解析】 【分析】(1)植物组织培养利用了植物细胞具有全能性的原理，其流程是：外植体（离体的植物器官、组织或细胞）经脱分化形成愈伤组织，经再分化形成胚状体，长出芽和根，进而形成完整植株。(2)制备单克隆抗体的流程为：①向小鼠体内注射特定的抗原，使其发生免疫，然后从小鼠脾内获得能产生特定抗体的B淋巴细胞。②将小鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。③克隆化培养和抗体检测，从而筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。④将最终筛选出的杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠的腹水中提取单克隆抗体。 【详解】A、利用植物组织培养技术获得海南龙血树，利用的原理是细胞的全能性；制备单克隆抗体使用了动物细胞培养技术和细胞融合技术，这两种技术利用的原理分别是细胞的增殖和细胞膜的流动性，A错误； B、利用植物组织培养技术获得海南龙血树，使用的培养基中添加的是蔗糖，不需添加葡萄糖和血清，B错误； C、由于植物细胞和动物细胞生长所需的适宜温度和pH存在差异，所以培养时的温度和pH均不相同， C错误； D、愈伤组织是外植体（离体的植物器官、组织或细胞）经脱分化形成的，杂交瘤细胞是由骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合后形成的，因此产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力，D正确。 故选D。 10. 下列关于克隆技术的叙述中，错误的是（ ） A. 电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B. 去除植物细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C. 细胞产物工厂化生产的原理是细胞增殖，利用的技术是植物细胞培养 D. 某种植物甲乙两品种的体细胞杂交后代与两品种杂交后代的染色体数目相同 【答案】D 【解析】 【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。 【详解】A、电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合，体现细胞膜的流动性，A正确； B、纤维素酶或者果胶酶去除植物细胞的细胞壁，用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理，将动物组织分散成单个细胞，B正确； C、细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞生长的培养条件，提高总的细胞次生代谢物的含量，细胞产物工厂化生产的原理是细胞增殖，利用的技术是植物细胞培养，C正确； D、某种植物甲乙两品种的体细胞杂交后代染色体数目是两者的染色体数目之和，D正确。 故选D。 11. CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，与特定分子结合后，能抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，从而使机体肿瘤细胞免受T细胞攻击。抗CTLA-4或抗PD-1的单克隆抗体有较好的抗肿瘤效果。科研人员将两种不同的杂交瘤细胞融合得到双杂交瘤细胞（能够悬浮在液体培养基中生长繁殖），可以从培养液中筛选出同时抗CTLA-4和PD-1的双特异性抗体（如图），实验显示疗效更好。下列叙述正确的是（ ） A. 双杂交瘤细胞需要CTLA-4和PD-1刺激，才能产生双特异性抗体 B. 双特异性抗体与肿瘤细胞的结合具有更强的特异性，从而减少副作用 C. 对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，需使用胰蛋白酶处理 D. 双特异性抗体可以靶向作用两种受体分子，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果 【答案】D 【解析】 【分析】单克隆抗体的制备过程：①给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，然后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；②诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合；③利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；④进行克隆化培养和专一抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；⑤用培养基培养筛选出来的杂交瘤细胞或将其注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、杂交瘤细胞是由已免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融合，无需接触抗原就能产生双特异性抗体，A错误； B、由题意可知：CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，双克隆抗体应该与T细胞结合，而不是肿瘤细胞，B错误； C、杂交瘤细胞是悬浮培养的细胞，细胞之间并未接触，若要传代培养，细胞培养液直接离心，去除上清液培养基，加入新鲜培养基即可，不用胰蛋白酶处理，C错误； D、根据抗原-抗体特异性结合的原理可知，双特异性抗体可靶向作用于T细胞表面的CTLA-4和PD-1，避免这两类受体分子与特定分子结合后抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果，D正确。 故选D。 12. 种间体细胞核移植（iSCNT）将供体动物体细胞与来自不同种、科、目或纲的家畜（驯养动物）的去核卵母细胞融合并激活，以获得较多的重构胚，进而获得动物个体，是体细胞核移植（SCNT）中极具潜力的研究方向之一。由于多种野生动物数量稀少且呈持续下降趋势，因此采集精子或卵子开展常规辅助生殖较为困难，甚至无法完成，而从活体或死后不久的野生动物体内采集体细胞利用iSCNT技术获得动物个体，可在一定程度上维持濒危动物数量。下列叙述正确的是（ ） A. 同一野生动物经iSCNT技术获得的多个重构胚中，遗传物质可能不完全相同 B. 若从野生动物体内采集的体细胞数目较少，可先用添加动物血清的固体培养基培养 C. iSCNT技术的原理是动物细胞具有全能性，操作过程中可用Ca2+激活重构胚 D. iSCNT技术必须通过显微操作将供体细胞的细胞核取出，然后注入去核的卵母细胞 【答案】A 【解析】 【分析】1、动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新的胚胎，继而发育成动物个体的技术，其原理是动物细胞核具有全能性； 2、重构胚是指人工重新构建的胚胎，具有发育成为完整个体的能力。可以用物理或化学方法（如电刺激、Ca2+载体、乙醇和蛋白酶合成抑制剂等）激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程。 【详解】A、在种间体细胞核移植（iSCNT）过程中，去核的卵母细胞来自不同种、科、目或纲的家畜（驯养动物），获得的重构胚胎的细胞质遗传物质可能不同，因此同一野生动物经iSCNT技术获得的多个重构胚中，遗传物质可能不完全相同，A正确； B、若从野生动物体内采集到的体细胞数目较少，可先用添加动物血清的液体培养基进行培养，以增加体细胞的数目，B错误； C、种间体细胞核移植（iSCNT）技术的原理是动物细胞核具有全能性，操作过程中可用Ca2+载体激活重构胚，C错误； D、在进行核移植时，可以通过显微操作技术，将供体细胞注入去核的卵母细胞，D错误。 故选A。 13. 动物细胞培养时操作不当会造成“黑胶虫”细菌的污染，该菌对氯霉素敏感。下列叙述正确的是（ ） A. 配制细胞培养基时，加血清（含细胞生长必需的蛋白）和氯霉素后湿热灭菌 B. 在加入氯霉素防治“黑胶虫”污染过程中，需要考虑细胞和细菌生长双重因素 C. 考察“黑胶虫”污染程度时，应取细胞培养液，直接涂布在平板上培养后计数 D. 采用更换培养基、胰蛋白酶处理和分瓶培养等操作可清除“黑胶虫”污染 【答案】B 【解析】 【分析】微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵，其中消毒和灭菌是常用的防止杂菌入侵的方法。 微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、配制细胞培养基时，湿热灭菌后通过过滤灭菌加入血清（含细胞生长必需的蛋白）和氯霉素，A错误； B、在加入氯霉素防治“黑胶虫”污染过程中，需要考虑细胞和细菌生长双重因素，保证动物细胞的正常生长，同时抑制细菌的生长，B正确； C、考察“黑胶虫”污染程度时，应取细胞培养液，稀释后涂布在平板上培养，待菌落数目稳定后计数，C错误； D、采用更换培养基、胰蛋白酶处理和分瓶培养等操作都不能清除“黑胶虫”污染，D错误。 故选B。 14. “筛选”是生物技术与工程中常用的技术手段。下列叙述错误的是（ ） A. 胚胎移植前，需对通过体外受精或其他方式得到的胚胎进行质量筛选 B. 发酵生产中，性状优良的菌种可以从自然界中筛选 C. 培育转基因抗虫棉时，需从分子水平及个体水平进行筛选 D. 制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生多种抗体的杂交瘤细胞 【答案】D 【解析】 【分析】1、单克隆抗体制备的两次筛选：①利用选择培养基筛选得到杂交瘤细胞(去掉未 杂交的细胞以及自身融合的细胞)；②进行抗体检测，筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞。    2、胚胎移植前，需对通过体外受精或其他方式得到的胚胎进行质量筛选，此时胚胎应发育到桑葚胚或囊胚阶段。 3、培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的   检测与鉴定。 【详解】A、胚胎移植前，需对通过体外受精或其他方式得到的胚胎进行质量筛选，挑取质量好，活性强的胚胎进行培养或保存，可以提高胚胎移植成功的概率，A正确； B、用于发酵工程的性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得，B正确； C、培育转基因抗虫棉时，在将目的基因导入受体细胞后，需要从分子水平上鉴定目的基因（Bt基因）是否成功导入、稳定存在和表达，还需要通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来从个体水平上确定Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性和评估其抗性程度，从而筛选出有较好抗虫特性的转基因抗虫棉。所以，培育转基因抗虫棉时，需从分子水平及个体水平进行筛选，C正确； D、制备单克隆抗体时，在筛选出杂交瘤细胞后，需要进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，上述筛选过程中涉及的抗体检测属于分子水平的筛选，因此，制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞，D错误。 故选D。 15. Hv-Lv肽链是抗体与抗原识别并结合的关键结构。为筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链，将编码Hv-Lv肽链的DNA片段与丝状噬菌体固有外壳蛋白p的基因连接并一起表达，最后用固定化抗原筛选（过程如图）。下列说法错误的是（ ） A. Hv-LvDNA片段上游需要设计并连接启动子 B. Hv-LvDNA片段上需连接标记基因 C. 实验目标是获得筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链 D. 实验过程须严格遵循生物防护措施 【答案】B 【解析】 【分析】基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。 （4）目的基因的检测与鉴定。 【详解】A、启动子位于基因的上游，是RNA聚合酶识别 与结合的位点 ，可用于驱动基因的转录，故Hv-LvDNA片段上游需要设计并连接启动子，A正确； B、Hv-Lv肽链是抗体与抗原识别并结合的关键结构，而Hv-LvDNA可表达出Hv-Lv肽链，该技术中Hv-LvDNA属于目的基因，无需连接标记基因，B错误； C、根据题干“为筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链”可知，实验目标就是获得筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链，C正确； D、实验过程须严格遵循生物防护措施，尽可能避免可能会带来的安全问题，D正确。 故选B。 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 16. 甲、乙、丙、丁四个生物兴趣小组分别按如下流程进行科学探究活动，据此分析错误的（ ） 甲：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒 乙：植物组织→形成愈伤组织→长出丛芽→生根→试管苗 丙：让豆腐长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制→获得腐乳 丁：剪碎动物组织→胰蛋白酶处理→细胞悬液→原代培养→传代培养 A. 甲组在发酵时打开排气口的间隔时间可逐渐缩短 B. 乙组形成的愈伤组织加上人工种皮可以制成人工种子 C. 丙组所加卤汤中，可加少量白酒，提高风味 D. 丁组由原代培养到传代培养时可能需用胰蛋白酶处理 【答案】AB 【解析】 【分析】1、酵母菌在有氧和无氧的条件下都能生活：在有氧时，酵母菌大量繁殖，但是不起到发酵效果；在无氧时，繁殖速度减慢，但是此时可以进行发酵。 2、植物组织培养的过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成胚状体，进一步发育植株）。 3、腐乳的发酵在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，它是一种丝状真菌，新陈代谢类型是异养需氧型。 【详解】A、果酒需酵母菌的无氧呼吸产生，在产生酒精的同时还产生CO2，故要打开排气口，随发酵时间延长，发酵过程逐渐减缓直至停止，可逐渐延长打开排气口的间隔时间，A错误； B、在胚状结构外包裹人工胚乳和人工种皮制成人工种子，B错误； C、丙组所加卤汤中，可加少量白酒，提高风味，卤汤中酒精的含量应控制在12%左右，C正确； D、传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，D正确。 故选AB。 17. 植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分票能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如下图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两种亲本的细胞壁结构有差异 B. 过程②中常采用灭活的病毒或PEG诱导原生质体融合 C. 过程④和⑤的培养基中均需要添加相同比例的生长素和细胞分裂素 D. 可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株 【答案】BC 【解析】 【分析】1、植物体细胞杂交技术将来自两个不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞（植物体细胞杂交技术），把杂种细胞培育成植株（植物组织培养技术）。其原理是植物细胞具有全能性和细胞膜具有流动性。杂种细胞再生出新的细胞壁是体细胞融合完成的标志，细胞壁的形成与细胞内高尔基体有重要的关系。植物体细胞杂交技术可以克服远源杂交不亲和的障碍、培育作物新品种方面所取得的重大突破。2、分析题图：图示为甲、乙两种植物细胞融合并培育新植株的过程，其中①表示去壁获取原生质体的过程；②③表示人工诱导原生质体融合以及再生出新细胞壁的过程；④表示脱分化形成愈伤组织；⑤表示再分化以及个体发育形成植株丙的过程。 【详解】A、酶解是为了去除植物细胞的细胞壁，过程①中酶处理的时间不同，说明两种亲本的细胞壁结构有差异，A正确； B、过程②为原生质体的融合，常用PEG诱导原生质体融合，灭活的仙台病毒可诱导动物细胞融合，不能用于植物，B错误； C、过程④脱分化和⑤再分化的培养基中均需要添加生长素和细胞分裂素，但在两个过程中比例不同，C错误； D、植物丙是植物甲和植物乙体细胞杂交形成的个体，应具备两者的遗传物质，因此可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株，D正确。 故选BC。 18. 黑猪具有耐粗饲、产仔率高、抗病力强等优良特征，加之皮薄骨细、肉质优、口感佳，因此备受消费者喜爱。然而，由于黑猪生长速度慢，几临濒危，急需进行种质资源保护。体细胞核移植技术因具有继承亲本完整性状、实验周期短、保种效力强的优点而备受关注。如图表示培育克隆猪的流程。下列叙述正确的是（ ） A. 幼仔猪细胞核遗传物质绝大部分来自黑猪，少部分来自甲猪 B. ①可用电刺激或Ca2+载体等方法激活重构胚，重构胚具有发育成完整个体的潜力 C. ②表示胚胎移植，进行该过程前需对代孕乙猪进行同期发情处理，使生理状态相似 D. 甲猪卵母细胞去核前，需将其在体外培养至MⅡ期，有助于细胞核全能性的表达 【答案】BCD 【解析】 【分析】动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。 【详解】A、幼仔猪细胞核遗传物质来自黑猪，细胞质遗传物质来自甲猪，A错误； B、过程①可用用物理或化学方法（如电刺激、Ca2+ 载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等）激活重构胚，重构胚具有发育成完整个体的潜力，B正确； C、将重构胚培养至桑葚胚或囊胚期后，需经胚胎移植至代孕母猪子宫内进一步发育为个体。过程②表示胚胎移植，进行该过程前需对代孕乙猪进行同期发情处理，使生理状态相似，C正确； D、从甲猪获取卵母细胞后，需将其在体外培养至MⅡ期，通常用显微操作法去核，有助于细胞核全能性的表达，D正确。 故选BCD。 19. 非雷奇金淋巴瘤是一种因B细胞发生突变而无法发育成熟所导致的血液癌症。未成熟的B细胞表面可表达CD20（一种蛋白质），而造血干细胞和其他正常的细胞不表达CD20。科学家针对CD20研制出利妥昔单抗（一种单克隆抗体）用于消灭该类肿瘤细胞。下列关于利妥昔单抗的制备及作用的叙述，错误的是（ ） A. 向小鼠注射CD20基因并从脾脏中分离B淋巴细胞 B. 用选择培养基可筛选能分泌抗CD20抗体的杂交瘤细胞 C. 体外大量培养杂交细胞，通过裂解细胞分离利妥昔单抗 D. 利妥昔单抗可以与突变的B细胞表面的CD20抗原结合 【答案】ABC 【解析】 【分析】单克隆抗体制备的两次筛选：①利用选择培养基筛选得到杂交瘤细胞（去掉未 杂交的细胞以及自身融合的细胞）；②进行抗体检测，筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞。单克隆抗体的特点：特异性强、灵敏度高、可大量制备。 【详解】A、制备利妥昔单抗时，应向小鼠注射CD20蛋白并从脾脏中分离免疫的B淋巴细胞，A错误； B、筛选能分泌抗CD20抗体的杂交瘤细胞需要进行抗体检测，选择培养基可用于筛选杂交瘤细胞，B错误； C、体外大量培养杂交瘤细胞后，可从细胞培养液中分离利妥昔单抗，C错误； D、利妥昔单抗可特异性识别突变的B细胞表面的CD20，与突变的B细胞结合，最终导致该类细胞死亡，D正确。 故选ABC。 20. 某研究小组构建了能表达ACTA1-GFP融合蛋白的重组质粒，该重组质粒的部分结构如下图所示。下列叙述错误的是（ ） 注：F1和F2表示上游引物，R1和R2表示下游引物 A. RNA聚合酶与启动子结合，调控ACTA1基因和GFP基因的表达 B. 仅用F2和R1一对引物，即可确定ACTA1基因插入方向是否正确 C. ACTA1基因转录的模板链是a链，引物F1与a链的部分序列相同 D. 若用引物F2和R2进行PCR，能更好地区分ACTA1-GFP基因纯合子和杂合子 【答案】C 【解析】 【分析】基因工程的关键步骤是构建基因表达载体，基因表达载体主要由启动子、目的基因、标记基因和终止子组成，其中标记基因用于筛选重组DNA分子，可以是四环素、氨苄青霉素等抗性基因，也可以是荧光蛋白基因或产物能显色的基因。 【详解】A、据图可知，ACTA1基因和GFP基因位于启动子和终止子之间，故RNA聚合酶与启动子结合，调控ACTA1基因和GFP基因的表达，A正确； B、据图可知，引物F2与R1结合部位包含ACTA1基因的碱基序列，因此推测为了确定ACTA1基因连接到质粒中且插入方向正确，进行PCR检测时，若仅用一对引物，应选择图甲中的引物F2和R1，B正确； C、ACTA1基因转录的模板链是a链，引物F1与b链均可以和a链互补配对，二者部分序列相同，C错误； D、若用引物F2和R2进行PCR，可根据电泳条带数目能更好地区分ACTA1-GFP基因纯合子和杂合子，D正确。 故选C。 第Ⅱ卷（非选择题） 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 21. 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。回答下列问题。 （1）下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的____________培养基，原因是____________。通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭面，灭菌的方法有_____________（答出2点即可）。 培养基类型 培养基组分 Ashby培养基 甘露醇（C6H14O4）、KH2PO4、MgSO4H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸馏水、琼脂 LB培养基 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸馏水、琼脂 （2）若在④的平板上统计的菌落的平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为______________个。 （3）将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机含量，结果如图所示： [注]CK：对照处理组；N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有氮全营养液，成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）；CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液）。对用组（CK）的处理为____________。 【答案】（1） ①. Ashby ②. Ashby培养基中没有氮源，只有固氮菌能在该培养基生存 ③. 干热灭菌和高压蒸汽灭菌 （2）1.26×107 （3）每盆土壤浇50 mL无氮植物营养液 【解析】 【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。 2、微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【小问1详解】 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，为了分离土壤中自生固氮菌，应以空气中的氮气为唯一氮源，培养基中不能含有其它氮源，LB培养基中有蛋白胨和酵母提取物，可以提供氮源，因此步骤④应选其中的Ashby培养基。通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭面，灭菌的方法有干热灭菌和高压蒸汽灭菌。 【小问2详解】 已知平板上统计的菌落的平均数量为126个，每克土壤中含有的固氮菌为126÷0.1×104=1.26×107个。 【小问3详解】 本实验的目的是鉴定菌种CM12固氮的能力，检测指标是土壤微生物有机氮含量，N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有氮全营养液，成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）；CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液）。设置对照组时需要排除无关变量对实验的影响，故对照组（CK）的处理为每盆土壤浇50mL无氮植物营养液。 22. 甲植物细胞核基因具有耐盐碱效应，乙植物细胞质基因具有高产效应。某研究小组用甲、乙两种植物细胞进行体细胞杂交相关研究、基本过程包括获取原生质体、诱导原生质体融合、选融合细胞、杂种植株再生和签定，最终获得高产耐盐碱再生植株。回答下列问题。 （1）根据研究目标，在甲、乙两种植物细胞进行体细胞杂交前，应检验两种植物的原生质体是否具备再生的能力。为了便于观察细胞融合的状况，通常用不同颜色的原生质体进行融合，若甲植物原生质体采用幼苗的根为外植体，则乙植物可用幼苗的____________为外植体。 （2）在获取原生质体时，常采用____________酶进行去壁处理。在原生质体融合前，需对原生质体进行处理，分别使甲原生质体的____________和乙原生质体的____________失活。对处理后的原生质体在显微镜下用____________（仪器）计数，确定原生质体密度。两种原生质体1:1混合后，通过添加适宜浓度的PEG进行融合；一定时间后，加入过量的培养基进行稀释，稀释的目的是____________。 （3）将融合原生质体悬浮液和液态的琼脂塘混合，在凝固前倒入培养皿，融合原生质体分散固定在平板中，并独立生长、分裂形成愈伤组织。同一块愈伤组织所有细胞源于____________。下列各项中能说明这些愈伤组织只能来自杂种细胞的理由是哪几项____________ A.甲、乙原生质体经处理后失活，无法正常生长、分裂 B.同种融合的原生质体因甲或乙原生质体失活而不能生长、分裂 C.培养基含有抑制物质，只有杂种细胞才能正常生长、分裂 D.杂种细胞由于结构和功能完整可以生长、分裂 （4）愈伤组织经____________可形成胚状体或芽。胚状体能长出_____________，直接发育形成再生植株。 （5）用PCR技术鉴定再生植株。已知甲植物细胞核具有特异性DNA序列a，乙植物细胞质具有特异性DNA序列b；M1、M2为序列a的特异性引物，N1、N2为序列b的特异性引物。完善实验思路： I.提取纯化再生植株的总DNA，作为PCR扩增的____________。 Ⅱ.将DNA提取物加入PCR反应体系，____________为特异性引物，扩增序列a；用同样方法扩增序列b。 Ⅲ.得到的2个PCR扩增产物经____________后，若每个PCR扩增产物在凝胶中均出现了预期的_____个条带，则可初步确定再生植株来自杂种细胞。 【答案】（1）叶 （2） ①. 纤维素酶和果胶 ②. 细胞质 ③. 细胞核 ④. 血细胞计数板 ⑤. 降低PEG浓度，使其失去融合作用 （3） ①. 同一个杂种融合原生质体 ②. ABD （4） ①. 再分化 ②. 根和芽 （5） ①. 模板 ②. M1、M2 ③. 凝胶电泳 ④. 1 【解析】 【分析】1、植物组织培养过程：离体的植物组织经过脱分化形成愈伤组织，经过再分化愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 2、植物体细胞杂交可以克服植物有性杂交不亲和性、打破物种之间的生殖隔离，操作过程包括:原生质体制备、原生质体融合、杂种细胞筛选、杂种细胞培养、杂种植株再生以及杂种植株鉴定等步骤。 【小问1详解】 在植物体细胞杂交中，原生质体需要具备再生细胞壁的能力，这样才能进一步发育成完整的细胞和植株。为便于观察融合状况，选择不同颜色的原生质体，若甲用幼苗根（颜色较浅），乙可用幼苗的叶（通常有颜色便于区分）为外植体。 【小问2详解】 植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，在获取原生质体时，所以常用纤维素酶和果胶酶进行去壁处理。甲植物细胞核基因具有耐盐碱效应，乙植物细胞质基因具有高产效应，在原生质体融合前，需对原生质体进行处理，分别使甲原生质体和乙原生质体的细胞质基因和细胞核基因失活，融合后具有甲植物的细胞核基因和乙植物的细胞质基因。对处理后的原生质体在显微镜下用血细胞计数板计数，确定原生质体密度。两种原生质体1：1混合后，通过添加适宜浓度的PEG进行融合；一定时间后，加入过量的培养基进行稀释，稀释的目的是降低PEG浓度，使其失去融合作用。 【小问3详解】 将融合原生质体悬浮液和液态的琼脂糖混合，在凝固前倒入培养皿，融合原生质体分散固定在平板中，并独立生长、分裂形成愈伤组织。同一块愈伤组织所有细胞源于同一个杂种融合的原生质体。对于愈伤组织只能来自杂种细胞的理由： A、甲、乙原生质体经处理后失活，单独的甲或乙原生质体无法正常生长、分裂，只有融合形成杂种细胞才有可能正常生长分裂，A正确； B、同种融合的原生质体，如甲原生质体与甲原生质体融合，因甲原生质体细胞质失活，或乙原生质体与乙原生质体融合，因乙原生质体细胞核失活，都不能生长、分裂，只有杂种细胞结构和功能完整可以生长分裂，B正确； C、题干未提及培养基有抑制物质，C错误； D、杂种细胞整合了甲植物有活性的细胞核和乙植物有活性的细胞质，结构和功能完整可以生长、分裂，D正确。 故选ABD。 【小问4详解】 愈伤组织经再分化可形成胚状体或芽，胚状体能长出根和芽，进而直接发育成再生植株。 【小问5详解】 Ⅰ．提取纯化再生植株的总DNA，作为PCR扩增的模板。 Ⅱ．将DNA提取物加入PCR反应体系，M1、M2为特异性引物，扩增序列a；用同样的方法扩增序列b。 Ⅲ．得到的2个PCR扩增产物经凝胶电泳后，若每个PCR扩增产物在凝胶中均出现了预期的1个条带，则可初步确定再生植株来自于杂种细胞。 23. 单克隆抗体免疫疗法能够抑制恶性肿瘤的发展。奥加伊妥珠单抗是一种新型的抗体一药物偶联物，由识别肿瘤细胞表面CD22蛋白的单克隆抗体和具有细胞毒性的卡奇霉素结合组成；卡妥索单抗是一种双特异性抗体，其制备原理与作用原理如下图所示： （1）单克隆抗体制备涉及关键的动物细胞工程技术手段是__________，杂交瘤细胞具有__________特点。 （2）奥加伊妥珠单抗在治疗肿瘤过程中，单克隆抗体主要发挥_______的作用。 （3）制备卡妥索单抗时，杂交瘤细胞A和B融合后，可向培养液添加__________（物质）用于筛选产生卡妥索单抗的杂交瘤细胞AB。 （4）科研人员推测奥加伊妥珠单抗和卡妥索单抗联合给药对恶性肿瘤的抑制效果更好。为验证这一推测，某兴趣小组设计如下实验方案：将培养好的癌细胞悬液对无胸腺裸鼠（简称裸鼠）进行皮下接种，接种后2周可观察各裸鼠背部长出肿块，证明实验接种成功，将上述处理的裸鼠随机分为2组：生理盐水组和奥加伊妥珠单抗+卡妥索单抗组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药后每两日测量并记录1次肿瘤体积。请完善上述实验方案的不足之处：_____________。（答两点） 【答案】（1） ①. 动物细胞融合技术、动物细胞培养技术 ②. 能大量增殖并产生足够数量的特定抗体 （2）靶向运输（或靶向运载） （3）EpCAM和CD3 （4）应补充单独添加奥加伊妥珠单抗和单独添加卡妥索单抗的两组给药实验组；在分组给药前应先测量每只小鼠的肿瘤体积并记录；卡妥索单抗通过识别T细胞表面的CD3分子增强特异性，题干中给的实验小鼠是不含T细胞的裸鼠，无法验证卡妥索单抗的作用。（4分，任答其中两点即可） 【解析】 【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体，通常采用杂交瘤技术来制备；单克隆抗体的作用，作为诊断试剂盒、用于治疗疾病和运载药物。 【小问1详解】 动物细胞融合技术、动物细胞培养技术是单克隆抗体制备涉及关键的动物细胞工程技术手段，单个B淋巴细胞能产生特定抗体但不能大量增殖，瘤细胞能大量增殖但不能产生抗体，两者融合后的杂交瘤细胞能大量增殖并产生足够数量的特定抗体，利于单克隆抗体的制备。 【小问2详解】 奥加伊妥珠单抗在治疗肿瘤的过程中，单克隆抗体主要发挥靶向运输的作用。 【小问3详解】 卡妥索单抗是一种双特异性抗体，可与EpCAM和CD3蛋白特异性结合，杂交瘤细胞A和B融合后，可向培养液添加EpCAM和CD3用于筛选产生卡妥索单抗的杂交瘤细胞AB。 【小问4详解】 分析实验，题中所设计的实验应补充单独添加奥加伊妥珠单抗和单独添加卡要索单抗的两组给药实验组；在分组给药前应先测量每只小鼠的肿瘤体积并记录。卡妥索单抗通过识别T细胞表面的CD3分子增强特异性，题干中给的实验小鼠是不含T细胞的裸鼠，无法验证卡妥索单抗的作用。 24. 我国科学家通过培育小鼠孤雌单倍体胚胎干细胞，成功获得了“1母亲0父亲”的雌性小鼠，且能正常生殖产生后代，这在世界上属首例，其有关技术路线如下图。请分析回答： （1）为了获得更多的卵母细胞，研究人员需对母鼠进行超数排卵处理，该过程中用到的动物激素是______。 （2）在第1阶段体外构建孤雌单倍体胚胎干细胞时，应将取自囊胚的______分散后制成细胞悬液，置于含有______的混合气体的培养箱中进行细胞培养；在第2阶段原核形成时卵母细胞已完成了减数分裂，理由是______。 （3）该研究团队将精子注入去核的MII期的卵母细胞，最后培养出孤雄单倍体胚胎干细胞，这里去掉的“核”是指______。 （4）印记基因包括父系印记基因和母系印记基因，是可以区分精子和卵细胞的基因组。Rasgrf1基因是小鼠细胞中的父系印记基因，正常情况下来自父本的该基因处于不表达状态。研究发现，这种不表达状态与基因的某种表观遗传调控相关。为获得孤雌生殖的个体，对Rasgrf1基因进行的最佳处理方式是______（填序号）。 ①甲基化修饰②去甲基化③敲除④诱导突变 【答案】（1）促性腺激素 （2） ①. 内细胞团 ②. 95%空气和5% CO2 ③. 图中有两个极体、雌原核和雄原核 （3）纺锤体—染色体复合物 （4）① 【解析】 【分析】分析图示，图示是科学家通过培育小鼠孤雌单倍体胚胎干细胞，获得“1母亲0父亲”的雌性小鼠的过程，共包括两个阶段，据此分析作答。 【小问1详解】 超数排卵是指应用外源促性腺激素，诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子。 【小问2详解】 聚集在胚胎一端的细胞形成内细胞团，将来发育为胎儿的各种组织，沿透明带内壁扩展和排列的细胞称为滋养层细胞，将来发育为胎膜和胎盘，所以体外构建孤雌单倍体胚胎干细胞时，最好取囊胚的内细胞团细胞；体外培养动物细胞应置于含有95%空气和5% CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养；图中第2阶段，孤雌单倍体胚胎干细胞入卵后，形成雄原核的同时，卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体，形成雌原核，第2阶段原核形成的图中有两个极体、雌原核和雄原核，说明卵母细胞已完成了减数分裂。 【小问3详解】 卵母细胞中的“核”是纺锤体—染色体复合物。 【小问4详解】 根据题意，在正常情况下，来自父本的Rasgrf1基因处于不表达状态是由于表观遗传调控，而这种调控通常是通过甲基化实现的。在孤雌生殖时，为了模拟该父系印记基因的不表达状态，对Rasgrf1基因的最佳处理方式是进行甲基化修饰，①正确。 25. 甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题： （1）强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被____________识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用____________酶组合，将片段和Ti-质粒切开后构建重组表达载体。T-DNA在该实验中的作用是____________。 （2）将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入____________进行筛选，筛选出的愈伤组织经____________形成丛芽，最终获得多个玉米株系a1、a2、a3、a4。通过对a1、a2、a3、a4四株甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定结果如图2，其中a1株系P蛋白表达量较低的原因可能是____________。 （3）在PCR反应体系中，需加入Taq酶、模板基因、缓冲液、Mg2+等外，还需加入____________等。PCR的反应程序为：94℃3min;94℃30s,58℃30s,72℃50s,30个循环。在循环之前的94℃3min处理为预变性；循环中72℃处理的目的是____________缓冲液中Mg2+的作用是____________。 【答案】（1） ①. RNA聚合酶 ②. BamHⅠ和SacⅠ ③. 将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上 （2） ①. 潮霉素 ②. 再分化 ③. a4株系玉米中可能没有导入目的基因或目的基因未表达 （3） ①. 引物，4种脱氧核苷酸（dNTP） ②. Taq酶从引物起始进行互补链合成 ③. 激活耐高温DNA聚合酶活性 【解析】 【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 【小问1详解】 强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被RNA聚合酶识别并结合，驱动基因的持续转录。 为使P基因在玉米植株中超量表达，需要将P基因导入到玉米细胞中，因此需要首先构建基因表达载体，则P基因和Ti质粒需要相同的限制酶切位点，结合图示可知，BamHⅠ后面有强启动子不能丢弃，EcoRⅠ和NotI限制酶会破坏目的基因，因此选择BamHⅠ和SacⅠ限制酶的组合。 T-DNA是可转移的DNA，T-DNA可将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上，随着玉米染色体DNA的复制而复制，从而使目的基因在受体细胞中稳定的保存。 【小问2详解】 农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，潮霉素抗性基因位于T质粒的T-DNA，随T-DNA整合到玉米细胞的染色体上，所以将农杄菌浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入潮霉素进行筛选，并以此为特性进行筛选，将筛选出的愈伤组织经过再分化（细胞分化）形成丛芽，从而获得多个转基因玉米株系。 a4株与野生型的P蛋白表达量基本相同，可能原因是a4株系玉米中导入目的基因或目的基因未表达； 【小问3详解】 PCR技术指是体外扩增DNA的技术，其需要的条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；据此可推测，在PCR反应体系中，需加入Taq酶/耐高温DNA聚合酶、模板基因、缓冲液、Mg2＋等外，还需加入引物、4种脱氧核苷酸等。 PCR的反应程序为：94℃ 3min；94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 50s，30个循环。在循环之前的94℃ 3min处理为预变性；循环中72℃处理的目的让子链延伸，即使Taq酶从引物的3’端起始进行子链的延伸。缓冲液中经常加入Mg2+，作用是激活耐高温DNA聚合酶活性。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $$ 2024—2025学年度第二学期期中月考试题 高二生物 注意事项： 1.答卷前，考生务必将自己的姓名、考生号等填写在答题卡和试卷指定位置。 2.回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1. 基于我国传统酸醋工艺，一种以果汁为原料进行液态发酵生产果醋的流程如图。下列叙述错误的是（ ） A. 制取果汁时添加果胶酶可提高果汁产量，处理①加糖可增加碳源 B. 醋酸发酵阶段通入充足的氧气有利于微生物将乙醇转化为乙酸 C. 酒精发酵和醋酸发酵的微生物呼吸方式相同，最适生长温度不同 D. 发酵生产结束后，处理②需根据果醋保存时间选择消毒或灭菌方法 2. 检测空气微生物常采用沉降平板法，具体做法是将牛肉膏蛋白胨培养基的平板置于待测地点，打开皿盖暴露于空气中一段时间后，盖好皿盖置于培养箱中培养、观察并统计菌落数。下列叙述正确的是（ ） A. 该培养基应进行干热灭菌，且需待压力表指针降至“0”后打开排气阀并开盖取物 B. 采样平板和未采样的平板雷在相同条件下培养，一般应在灭菌前调pH C. 平板中每一个菌落数都是由一个活菌繁殖而来 D. 该方法不能准确统计空气中微生物种类与数量，结果往往比实际值偏高 3. 某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭纤维素分解菌的效果，结果如图所示。某同学从100mL细菌原液中取1mL加入无菌水中得到10mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200μL涂布平板，菌落计数的结果为100。下列说法错误的是（ ） A. 据图可知杀菌效果最好的消毒液是A B. 推算细菌原液中细菌浓度为5000个/mL C. 纤维素分解菌将纤维素分解产物与刚果红生成红色复合物 D. 显微镜直接计数和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，前者大于后者 4. 某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗链霉素性状产生的原因，先将原始菌种接种到1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 大肠杆菌抗链霉素的突变是发生在与链霉素接触之后 B. 在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能大于初始接种到该培养基上的活菌数 C. 4号和8号培养液中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大 D. 该实验缺乏对照实验，无法确定抗链霉素性状属于可遗传变异 5. 某野生型细菌能通过图1途径合成色氨酸，从而在不含色氨酸的培养基上正常生长繁殖，而其突变株则不能。将突变株TrpB、TrpC、TrpE（仅图1中的某一步受阻）分别划线接种在图示培养基的I、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖，继续培养后发现1区域的两增和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖，而Ⅲ区域菌株不再生长。下列叙述错误的是（ ） A. TrpC菌株继续生长增殖的一端为靠近1区域的一端 B. 3种突变菌株均能将积累的中间产物分泌到细胞外 C. 该培养基中含有少量色氨酸，酸碱度为中性或弱碱性 D. TrpE菌株不再生长是由于缺乏催化吲哚合成色氨酸酶 6. 养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ） A. ①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落 B. ②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验 C. ③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙 D. 粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少 7. 图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述错误的是（ ） A. 步骤①添加纤维素酶或果胶酶去除细胞壁，其原理是酶的专一性 B. 步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C. 原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D. 台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养 8. 中药材怀菊含有多种活性物质，具有清热、明目等功效。植物组织培养技术可用于怀菊的脱毒和快速繁殖。下列叙述正确的是（ ） A. 怀菊中含有的次生代谢物通常是怀菊基本生命活动所必需的 B. 怀菊快速繁殖过程中产生的体细胞突变可通过无性生殖遗传 C. 利用怀菊的茎段作为外植体，通过植物组织培养可获得脱毒苗 D. 生芽培养基中细胞分裂素与生长素的比值比生根培养基中的小 9. 海南龙血树具有药用和观赏价值，可利用植物组织培养技术产生愈伤组织，进而获得该种植株。动物细胞融合技术可将骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，进而制备单克隆抗体。下列有关这两种技术的叙述，正确的是（ ） A. 利用的原理均是细胞的全能性 B. 使用的培养基均需添加葡萄糖和血清 C. 培养时的温度和pH均相同 D. 产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力 10. 下列关于克隆技术的叙述中，错误的是（ ） A. 电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B. 去除植物细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C. 细胞产物工厂化生产的原理是细胞增殖，利用的技术是植物细胞培养 D. 某种植物甲乙两品种的体细胞杂交后代与两品种杂交后代的染色体数目相同 11. CTLA-4和PD-1均是T细胞表面的受体分子，与特定分子结合后，能抑制T细胞活性甚至使T细胞凋亡，从而使机体肿瘤细胞免受T细胞攻击。抗CTLA-4或抗PD-1的单克隆抗体有较好的抗肿瘤效果。科研人员将两种不同的杂交瘤细胞融合得到双杂交瘤细胞（能够悬浮在液体培养基中生长繁殖），可以从培养液中筛选出同时抗CTLA-4和PD-1的双特异性抗体（如图），实验显示疗效更好。下列叙述正确的是（ ） A. 双杂交瘤细胞需要CTLA-4和PD-1刺激，才能产生双特异性抗体 B. 双特异性抗体与肿瘤细胞的结合具有更强的特异性，从而减少副作用 C. 对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，需使用胰蛋白酶处理 D. 双特异性抗体可以靶向作用两种受体分子，增强细胞免疫达到更好的抗肿瘤效果 12. 种间体细胞核移植（iSCNT）将供体动物体细胞与来自不同种、科、目或纲的家畜（驯养动物）的去核卵母细胞融合并激活，以获得较多的重构胚，进而获得动物个体，是体细胞核移植（SCNT）中极具潜力的研究方向之一。由于多种野生动物数量稀少且呈持续下降趋势，因此采集精子或卵子开展常规辅助生殖较为困难，甚至无法完成，而从活体或死后不久的野生动物体内采集体细胞利用iSCNT技术获得动物个体，可在一定程度上维持濒危动物数量。下列叙述正确的是（ ） A. 同一野生动物经iSCNT技术获得的多个重构胚中，遗传物质可能不完全相同 B. 若从野生动物体内采集的体细胞数目较少，可先用添加动物血清的固体培养基培养 C. iSCNT技术的原理是动物细胞具有全能性，操作过程中可用Ca2+激活重构胚 D. iSCNT技术必须通过显微操作将供体细胞的细胞核取出，然后注入去核的卵母细胞 13. 动物细胞培养时操作不当会造成“黑胶虫”细菌的污染，该菌对氯霉素敏感。下列叙述正确的是（ ） A. 配制细胞培养基时，加血清（含细胞生长必需的蛋白）和氯霉素后湿热灭菌 B. 在加入氯霉素防治“黑胶虫”污染过程中，需要考虑细胞和细菌生长双重因素 C. 考察“黑胶虫”污染程度时，应取细胞培养液，直接涂布在平板上培养后计数 D. 采用更换培养基、胰蛋白酶处理和分瓶培养等操作可清除“黑胶虫”污染 14. “筛选”是生物技术与工程中常用的技术手段。下列叙述错误的是（ ） A. 胚胎移植前，需对通过体外受精或其他方式得到的胚胎进行质量筛选 B. 发酵生产中，性状优良的菌种可以从自然界中筛选 C. 培育转基因抗虫棉时，需从分子水平及个体水平进行筛选 D. 制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生多种抗体的杂交瘤细胞 15. Hv-Lv肽链是抗体与抗原识别并结合的关键结构。为筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链，将编码Hv-Lv肽链的DNA片段与丝状噬菌体固有外壳蛋白p的基因连接并一起表达，最后用固定化抗原筛选（过程如图）。下列说法错误的是（ ） A. Hv-LvDNA片段上游需要设计并连接启动子 B. Hv-LvDNA片段上需连接标记基因 C. 实验目标是获得筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链 D. 实验过程须严格遵循生物防护措施 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 16. 甲、乙、丙、丁四个生物兴趣小组分别按如下流程进行科学探究活动，据此分析错误的（ ） 甲：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒 乙：植物组织→形成愈伤组织→长出丛芽→生根→试管苗 丙：让豆腐长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制→获得腐乳 丁：剪碎动物组织→胰蛋白酶处理→细胞悬液→原代培养→传代培养 A. 甲组在发酵时打开排气口的间隔时间可逐渐缩短 B. 乙组形成的愈伤组织加上人工种皮可以制成人工种子 C. 丙组所加卤汤中，可加少量白酒，提高风味 D. 丁组由原代培养到传代培养时可能需用胰蛋白酶处理 17. 植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分票能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状植物丙，过程如下图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两种亲本的细胞壁结构有差异 B. 过程②中常采用灭活的病毒或PEG诱导原生质体融合 C. 过程④和⑤的培养基中均需要添加相同比例的生长素和细胞分裂素 D. 可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株 18. 黑猪具有耐粗饲、产仔率高、抗病力强等优良特征，加之皮薄骨细、肉质优、口感佳，因此备受消费者喜爱。然而，由于黑猪生长速度慢，几临濒危，急需进行种质资源保护。体细胞核移植技术因具有继承亲本完整性状、实验周期短、保种效力强的优点而备受关注。如图表示培育克隆猪的流程。下列叙述正确的是（ ） A. 幼仔猪细胞核遗传物质绝大部分来自黑猪，少部分来自甲猪 B. ①可用电刺激或Ca2+载体等方法激活重构胚，重构胚具有发育成完整个体的潜力 C. ②表示胚胎移植，进行该过程前需对代孕乙猪进行同期发情处理，使生理状态相似 D. 甲猪卵母细胞去核前，需将其在体外培养至MⅡ期，有助于细胞核全能性的表达 19. 非雷奇金淋巴瘤是一种因B细胞发生突变而无法发育成熟所导致的血液癌症。未成熟的B细胞表面可表达CD20（一种蛋白质），而造血干细胞和其他正常的细胞不表达CD20。科学家针对CD20研制出利妥昔单抗（一种单克隆抗体）用于消灭该类肿瘤细胞。下列关于利妥昔单抗的制备及作用的叙述，错误的是（ ） A. 向小鼠注射CD20基因并从脾脏中分离B淋巴细胞 B. 用选择培养基可筛选能分泌抗CD20抗体的杂交瘤细胞 C. 体外大量培养杂交细胞，通过裂解细胞分离利妥昔单抗 D. 利妥昔单抗可以与突变的B细胞表面的CD20抗原结合 20. 某研究小组构建了能表达ACTA1-GFP融合蛋白的重组质粒，该重组质粒的部分结构如下图所示。下列叙述错误的是（ ） 注：F1和F2表示上游引物，R1和R2表示下游引物 A. RNA聚合酶与启动子结合，调控ACTA1基因和GFP基因的表达 B. 仅用F2和R1一对引物，即可确定ACTA1基因插入方向是否正确 C. ACTA1基因转录的模板链是a链，引物F1与a链的部分序列相同 D. 若用引物F2和R2进行PCR，能更好地区分ACTA1-GFP基因纯合子和杂合子 第Ⅱ卷（非选择题） 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 21. 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。回答下列问题。 （1）下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的____________培养基，原因是____________。通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭面，灭菌的方法有_____________（答出2点即可）。 培养基类型 培养基组分 Ashby培养基 甘露醇（C6H14O4）、KH2PO4、MgSO4H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸馏水、琼脂 LB培养基 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸馏水、琼脂 （2）若在④的平板上统计的菌落的平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为______________个。 （3）将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机含量，结果如图所示： [注]CK：对照处理组；N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有氮全营养液，成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）；CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液）。对用组（CK）的处理为____________。 22. 甲植物细胞核基因具有耐盐碱效应，乙植物细胞质基因具有高产效应某研究小组用甲、乙两种植物细胞进行体细胞杂交相关研究、基本过程包括获取原生质体、诱导原生质体融合、选融合细胞、杂种植株再生和签定，最终获得高产耐盐碱再生植株。回答下列问题。 （1）根据研究目标，在甲、乙两种植物细胞进行体细胞杂交前，应检验两种植物的原生质体是否具备再生的能力。为了便于观察细胞融合的状况，通常用不同颜色的原生质体进行融合，若甲植物原生质体采用幼苗的根为外植体，则乙植物可用幼苗的____________为外植体。 （2）在获取原生质体时，常采用____________酶进行去壁处理。在原生质体融合前，需对原生质体进行处理，分别使甲原生质体的____________和乙原生质体的____________失活。对处理后的原生质体在显微镜下用____________（仪器）计数，确定原生质体密度。两种原生质体1:1混合后，通过添加适宜浓度的PEG进行融合；一定时间后，加入过量的培养基进行稀释，稀释的目的是____________。 （3）将融合原生质体悬浮液和液态的琼脂塘混合，在凝固前倒入培养皿，融合原生质体分散固定在平板中，并独立生长、分裂形成愈伤组织。同一块愈伤组织所有细胞源于____________。下列各项中能说明这些愈伤组织只能来自杂种细胞的理由是哪几项____________ A甲、乙原生质体经处理后失活，无法正常生长、分裂 B.同种融合的原生质体因甲或乙原生质体失活而不能生长、分裂 C.培养基含有抑制物质，只有杂种细胞才能正常生长、分裂 D.杂种细胞由于结构和功能完整可以生长、分裂 （4）愈伤组织经____________可形成胚状体或芽。胚状体能长出_____________，直接发育形成再生植株。 （5）用PCR技术鉴定再生植株。已知甲植物细胞核具有特异性DNA序列a，乙植物细胞质具有特异性DNA序列b；M1、M2为序列a的特异性引物，N1、N2为序列b的特异性引物。完善实验思路： I.提取纯化再生植株的总DNA，作为PCR扩增的____________。 Ⅱ.将DNA提取物加入PCR反应体系，____________为特异性引物，扩增序列a；用同样的方法扩增序列b。 Ⅲ.得到的2个PCR扩增产物经____________后，若每个PCR扩增产物在凝胶中均出现了预期的_____个条带，则可初步确定再生植株来自杂种细胞。 23. 单克隆抗体免疫疗法能够抑制恶性肿瘤的发展。奥加伊妥珠单抗是一种新型的抗体一药物偶联物，由识别肿瘤细胞表面CD22蛋白的单克隆抗体和具有细胞毒性的卡奇霉素结合组成；卡妥索单抗是一种双特异性抗体，其制备原理与作用原理如下图所示： （1）单克隆抗体制备涉及关键的动物细胞工程技术手段是__________，杂交瘤细胞具有__________特点。 （2）奥加伊妥珠单抗在治疗肿瘤的过程中，单克隆抗体主要发挥_______的作用。 （3）制备卡妥索单抗时，杂交瘤细胞A和B融合后，可向培养液添加__________（物质）用于筛选产生卡妥索单抗的杂交瘤细胞AB。 （4）科研人员推测奥加伊妥珠单抗和卡妥索单抗联合给药对恶性肿瘤的抑制效果更好。为验证这一推测，某兴趣小组设计如下实验方案：将培养好的癌细胞悬液对无胸腺裸鼠（简称裸鼠）进行皮下接种，接种后2周可观察各裸鼠背部长出肿块，证明实验接种成功，将上述处理的裸鼠随机分为2组：生理盐水组和奥加伊妥珠单抗+卡妥索单抗组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药后每两日测量并记录1次肿瘤体积。请完善上述实验方案的不足之处：_____________。（答两点） 24. 我国科学家通过培育小鼠孤雌单倍体胚胎干细胞，成功获得了“1母亲0父亲”的雌性小鼠，且能正常生殖产生后代，这在世界上属首例，其有关技术路线如下图。请分析回答： （1）为了获得更多的卵母细胞，研究人员需对母鼠进行超数排卵处理，该过程中用到的动物激素是______。 （2）在第1阶段体外构建孤雌单倍体胚胎干细胞时，应将取自囊胚的______分散后制成细胞悬液，置于含有______的混合气体的培养箱中进行细胞培养；在第2阶段原核形成时卵母细胞已完成了减数分裂，理由是______。 （3）该研究团队将精子注入去核的MII期的卵母细胞，最后培养出孤雄单倍体胚胎干细胞，这里去掉的“核”是指______。 （4）印记基因包括父系印记基因和母系印记基因，是可以区分精子和卵细胞的基因组。Rasgrf1基因是小鼠细胞中的父系印记基因，正常情况下来自父本的该基因处于不表达状态。研究发现，这种不表达状态与基因的某种表观遗传调控相关。为获得孤雌生殖的个体，对Rasgrf1基因进行的最佳处理方式是______（填序号）。 ①甲基化修饰②去甲基化③敲除④诱导突变 25. 甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题： （1）强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被____________识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用____________酶组合，将片段和Ti-质粒切开后构建重组表达载体。T-DNA在该实验中的作用是____________。 （2）将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入____________进行筛选，筛选出的愈伤组织经____________形成丛芽，最终获得多个玉米株系a1、a2、a3、a4。通过对a1、a2、a3、a4四株甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定结果如图2，其中a1株系P蛋白表达量较低的原因可能是____________。 （3）在PCR反应体系中，需加入Taq酶、模板基因、缓冲液、Mg2+等外，还需加入____________等。PCR的反应程序为：94℃3min;94℃30s,58℃30s,72℃50s,30个循环。在循环之前的94℃3min处理为预变性；循环中72℃处理的目的是____________缓冲液中Mg2+的作用是____________。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $$