作业(三) 微生物的选择培养和计数-【精讲精练】2024-2025学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程知能达标训练（人教版2019）

作业(二) 微生物的选择培养和计数 [基础达标练] A.取土壤用的小铁铲和盛土样的信封在使用前 1.最常用的接种微生物的方法是平板划线法和稀 都需要灭菌 释涂布平板法,下列关于二者的比较,正确的是 B.测定土壤中细菌的数量一般选用1×10{}、1× 10{③}、1×10{倍的稀释液进行平板培养 C.鉴定分解尿素的细菌,利用了尿素可被分解产 平板划线法 稀释涂布平板法 生氛,从而使培养基pH升高的原理 ① 需在无菌条件下操作 不需要无菌操作 D.每隔24h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳 定时的记录作为结果 ② 培养基中不加琼脂 培养基中加有琼脂 6.(2024·唐山期末)某生物兴趣小组同学进行了 不可计算菌液中的活可计算菌液中的活 微生物的分离与培养实验,实验结果如下图所 ③ 菌数 菌数 示。下列相关叙述正确的是 C ④ 需要接种环 需要涂布器 透明圈、 A.③④ B.②④ C.①④ D.②③ 2.下列关于微生物数量测定的相关叙述,正确的是 C A.当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一 甲 乙 个菌落 A. 甲为选择培养基,接种后应立即倒置 B.利用显微镜直接计数时,可使用普通的载玻片 B.欲获得强分解效果的菌落,可选择图甲中透明 完成计数 圈直径与菌落直径比值大的I菌落 C.平板划线法除用于分离微生物外,也常用于统 C.图乙接种方式为平板划线法,划线前必须将菌 计细菌数目 液进行梯度稀释,方可获得单菌落 D.应尽量选菌落数少的平板来统计,以确保一个 D.图乙第二次及之后的划线起点为上次划线的 菌落来自单个细菌 末端,每次划线前后都要灼烧接种环,共需灼 3.在筛选纤维素分解菌的培养基中加入刚果红染 烧3次 料,研究者观察到几个有透明圈的菌落。据图分 7. 下列有关微生物数量测定的叙述,不正确的是( 析正确的是 C ) A.稀释涂布平板法可用于分离微生物和统计样 -透明圈 品中活菌数目 菌落① B.样品稀释度直接影响平板的菌落数目 -菌落② C.利用细菌计数板或血细胞计数板通过显微镜 直接计数 -菌落③ D.细菌计数板或血细胞计数板的计数原理不同 A.透明圈内的刚果红染料已被分解 8.某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌 B. 菌落②中的菌株降解纤维素能力最强 的分离和计数”的实验,操作流程如图所示。 C.图中菌落可能是细菌也可能是真菌 下列相关叙述正确的是 D.图中培养基可用牛肉膏、蛋白陈配制 ### 0.5ml.0.5ml.0.1mL 4.下列有关微生物实验室培养的说法,正确的是 A.利用血细胞计数板可以直接统计待测菌液中 的活菌数目 10g土样 90mL无菌水土填悬浮液 4.5mL无菌水纯化培养 B.培养不同微生物的培养基都要将pH调至中性 A.取距地表约3~8cm的土壤样品时必须在酒 或微碱性 精灯火焰旁 C.分离纤维素分解菌时最好以纤维素作为培养 B.图中振荡的目的主要是为了增加分解尿素的 基中的唯一碳源 细菌的浓度 D.稀释涂布平板法只可以用于分离微生物,不能 C.用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面的过 用来统计样品中活菌的数目 程中不再灭菌 5.(2024·邢台期末)下列有关土壤中分解尿素的 D.由图示菌落计数结果可知10克土样中的菌株 细菌的分离和计数的实验操作,错误的是( 数约为1.6×10个 5 ·生物学·选择性必修3 生物技术与工程(配BJ版) [素能提升练] 次。若用稀释涂布平板法进行接种,在涂布平 9.(不定项)某生物兴趣小组做了如下实验,先在培 板时,滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的 养I底部倒入以尿素为唯一氢源的基本培养基, 原因是 待凝固。利用稀释涂布平板法接种菌液,培养一 段时间后,基本培养基上生长出菌落。再向培养 (4)用三种菌株对结秆进行处理,并在第5天和 III内轻轻倒上一薄层完全培养基,再次培养后实 第10天对稻秆和结秆中含有的纤维素、半纤维 验结果如图所示。下列说法正确的是 素以及木质素等组分的降解情况进行了测定 结果如图。据图分析可知,三种菌株对 完全培养基 的降解作用最强。与第5天结果相比 第10天结秆各组分中 的降解率变化 1 )基本培养基 最大。 (中间一层含菌) 培养II的正面,小型菌 选 培养I的侧面 落是第二次长起来的 . A.虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含 有水、碳源、氮源和无机盐 B.再经培养后,会长出形态较小的新菌落,它们 3号1号 2号3号 都是能分解尿素的菌株 10天 C.若用基本培养基分离纤维素的分解菌,则配方 12.为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定 中应该以纤维素作为唯一碳源 了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分 D.若用含特定生长因子的完全培养基作第二层, 离等工作。回答下列问题: 也可直接分离到相应的营养缺陷型菌株 10.(不定项)(2024·临沂 高二质检)生长图形法 甲 -菌落 是一种测定微生物营养 需求的简便方法。为探 A B 1 究某热菌所需生长因 用 (1)通常培养基采用 法灭菌;在制备固体 子的种类,研究小组把 培养基的倒平板操作时,待平板冷却至 该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他 左右时,应将平板倒过来放置,这样做的目的是 必需营养物质的培养基混合后倒成平板,然后 在平板上划分数区,将甲、乙、丙三种生长因子 (2)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的 分别添加到不同区域,培养结果如图所示,下列 细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后 说法正确的是 的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目 A.倒成平板后直接培养可判断有无污染 的是 ;然后,将1mL B.倒成平板后不需要进行灭菌处理 水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接 C.图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙 D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选 人0.1mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的 菌落数分别为39、38和37,据此可得出每升水 11.(2024·广州检测)分离筛选降解纤维素能力强 样中的活菌数为 个。 的微生物,对于解决结秆等废弃物资源的再利 (3)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌 用和环境污染问题具有重要意义。研究人员用 操作时,接种环通过 灭菌,在第二次及 化合物A、硝酸盐、磷酸盐、疏酸盐、KC1、醇母膏 以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始 等配制的培养基,成功地筛选到了能产生纤维 素晦的微生物。请回答下列问题: 划线,这样做的目的是 (1)培养基中加入的化合物A是 (4)示意图A和B中, 本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进 表示的是用稀释 行选择培养,目的是 涂布平板法接种培养后得到的结果。 (5)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中 (2)为了筛选出能产生纤维素的微生物,可向 并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振 培养基中加入 ,等培养基上长出菌落 荡培养,结果发现:振荡培养的细菌比静置培养 后,能产生纤维素的菌落周围会出现 的细菌生长速度快。分析其原因:振荡培养能 提高培养液中 (3)为在培养基表面形成单个菌落,将平板分为 的含量,同时可使菌体 与培养液充分接触,提高 5个区域进行划线,理论上需要灼烧接种环 的利用率。 ___ 。区的细菌最致密，如果连在一起则有可能影响 一步稀释后再接种，以便于菌落计数与分离。 单个菌落的分离效果；在②一④区域中划线前 平板培养基属于固体培养基，该培养基需要 都要对接种环进行灼烧灭菌，保证每次划线的 加入凝固剂，如琼脂等。(3)图2为平板划线 菌种来自上一区域的末端，划线结束灼烧接种 法，随着划线次数的增加，菌种进一步被稀释， 环是为了防止菌种污染环境和感染操作者。 在图中③区域更容易获得单菌落。 10.ACD莱籽粕中含有35%~45%的蛋白质， 答案(1)蛋白胨、苯酚(2)增加 稀释后再 麸皮富含纤雏素，莱籽粕与麸皮可为微生物 接种凝固剂(3)③ 提供碳源和氮源，A正确；对培养基灭菌应在 作业（三）微生物的选择培养和计数 接种前，接种后再灭菌，菌种将被全部杀死， B错误；据图可知，与对照组相比，黑曲霉菌发： 1.A两种方法都需要在无菌条件下操作，①错 酵莱籽粕中单宁含量最低，说明黑曲霉菌对 误；两种方法都需要配制固体培养基，均需要 单宁的去除效果最为理想，C正确；对照组为 添加琼脂，②错误；平板划线法不能对菌落进 不接种微生物的固体培养基，目的是作为对 行计数，稀释涂布平板法能进行活菌计数， 照，D正确。 ③正确；平板划线法的接种工具是接种环，稀 11.解析(1)马铃薯琼脂培养基常用于真菌的筛 释涂布平板法的接种工具是涂布器，④正确， 选，因此酵母菌的纯培养可使用马铃著琼脂 A符合题意。 培养基：培养基中加入链霉素可以抑制细菌 2.A利用显微镜直接计数时，需要使用特定的 (原核微生物)的生长，培养基应采用湿热灭菌 细菌计数板或血细胞计数板来计数，B错误；平 法灭菌。(2)单菌落一般是由单一个体繁殖形 板划线法只用于分离微生物，不能用于统计细 成的纯培养物。平板划线法通过接种环在固 菌数目，C错误；利用平板计数时，需要选择菌 体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌 落数为30一300的平板计数，D错误。 种逐步稀释分散到培养基表面，经数次划线：3.C根据分析可知，透明圈不显红色的原因是 培养，可以分离得到单菌落。(3)初始氧气浓 其中的纤雏素已被分解，A错误；菌落①形成 度高时，酵母菌进行有氧呼吸的时间长，酒精 的透明圈直径与菌落直径之比最大，说明菌落 发酵的起始时间较晚（或初始氧气浓度高，酵 ①降解纤维素能力最强，B错误：根据题千信息 母菌有氧呼吸大量繁殖，在酒精发酵的初期 不能判断图中菌落的微生物类型，可能是细菌 产生酒精的速率较快)，因此初始氧气浓度较 也可能是真菌，C正确；图中培养基应以纤雏素 高的是a。 为唯一碳源，不可用牛肉膏、蛋白胨配制， 答案(1)马铃薯琼脂细菌（原核微生物） D错误。 湿热 4.C利用血细胞计数板，不能区分死菌与活菌， (2)单一个体繁殖通过接种环在固体培养基 A错误；不同的微生物培养需要的pH是不同 表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀 : 的，如培养细菌时需将培养基的pH调至中性 释分散到培养基表面，经数次划线培养，可以 或微碱性，B错误：纤维素分解菌可以将纤维素 分离得到单菌落 分解，而其他微生物不能，因此筛选纤维素分 (3)a初始氧气浓度高，酵母菌进行有氧呼吸 解菌时，要将土壤稀释液接种到以纤雏素作为 的时间长，酒精发酵的起始时间较晚（或初始 唯一碳源的固体培养基，C正确；稀释涂布平板 氧气浓度高，酵母菌有氧呼吸大量繁殖，在酒 法既可以用于分离微生物，也可以用来统计样 精发酵的初期产生酒精的速率较快) 品中活菌的数目，D错误。 12.解析(1)培养基成分中的有机物均可以提供 :5.B取土壤用的小铁铲和盛土样的信封在使用 碳源，即蛋白胨、苯酚均可以作为碳源。(2)分 前都需要灭菌，A正确；土壤中细菌比真菌多， 析实验可知，实验目的是筛选酚降解菌，因此 在测定土壤中细菌的数量时，一般选用1× 将采集到的样品接种培养。苯酚用量应随转 10,1×105和1×106倍的稀释液进行平板培 接次数增加而逐渐增加，以达到富集酚降解 养，B错误；鉴定分解尿素的细菌的原理是该种 菌的目的。若图1平板中菌落过于密集，应进 细菌能产生脲酶，脲酶能将尿素分解产生氨， 29 ⑧e 从而使培养基PH升高，使酚红指示剂变红， : 中生长，A正确；制备平板时，先灭菌再倒平 C正确：为防止遗漏菌落，应选取菌落数目稳定 板，故倒成平板后不需要进行灭菌处理，B正 时的记录作为结果，D正确。 确：图中菌落生活在乙丙区域之间，说明同时 6.B甲培养基可以筛选微生物，属于选择培养 需要乙和丙，C错误；不同菌种所需生长因子 基，接种后等菌液被培养基吸收后再倒置， 不同，可利用生长图形法筛选菌种，D正确。 A错误：透明圈越大，说明分解菌的分解能力 :11.解析(1)由题千信息分析可知，该实验是为 越强，所以应选择图甲中透明圈直径与菌落直 了分离筛选降解纤雏素能力强的微生物，故培 径比值大的Ⅱ菌落，B正确：图乙接种方式为平 养基中加入的化合物A是纤雏素。本实验将 板划线法，划线前不需要将菌液进行梯度稀 样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择 释，C错误；图乙第二次及之后的划线起点为上 培养，目的是增加能产生纤雏素酶的微生物的 次划线的末端，接种前需要灼烧接种环，每次 数量。(2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生 划线前后都要灼烧接种环，所以共需灼烧4次，： 物，在培养基中加入刚果红，其可与培养基中 D错误。 的纤雏素形成红色复合物，当纤维素被分解 7.D稀释涂布平板法除用于分离微生物外，也常 后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以 用来统计样品中活菌的数目，A正确：利用稀释 纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选出 涂布平板法计数时，样品稀释度直接影响平板的 纤维素分解菌。(3)为在培养基表面形成单个 菌落数目，B正确；细菌计数板或血细胞计数板 菌落，将平板分为5个区城进行划线，理论上 都是通过显微镜直接计数的，C正确；细菌计数： 需要灼烧接种环6次。若用稀释涂布平板法 板或血细胞计数板的计数原理相同，D错误。 进行接种，在涂布平板时，滴加到培养基表面 8.C土壤取样时不用在酒精灯火焰旁，A错误； 的菌液量不宜过多的原因是培养基表面的菌 振荡的目的主要是为了使分解尿素的细菌均： 液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。 匀分布在悬浮液中，B错误；用涂布器将菌液均 (4)据图分析可知，三种菌株对半纤雏素的降 匀涂布在培养基表面的过程中不再灭菌，C正 解作用最强。与第5天的结果相比，第10天 确；图示平板中有16个菌落，该过程中稀释的 秸秆各组分中纤雏素的降解率变化最大。 倍数为100×10×10×10，最后只取了0.1mL 答案(1)纤维素增加能产纤维素酶的微生 进行涂布稀释，因此由图示菌落计数结果可知 物的数量(2)刚果红透明圈(3)6培养 10克土样中的菌株数约为16×105÷0.1=1.6 基表面的菌液会出现积液，导致菌体堆积，影 ×107个，D错误。 响分离效果(4)半纤维素纤维素 9.ACD虽然各种培养基的具体配方不同，但一 :12.解析(1)微生物培养过程应该进行无菌操 般都含有水、碳源、氮源和无机盐，A正确；初 作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌；倒平 次利用底层基本培养基培养的菌落是能分解 板操作的最适温度为培养基冷却至50℃左 尿素的菌株，再经培养后长出形态较小的新菌 右，将平板倒置的作用是防止皿盖上的水珠 落，它们都是在完全培养基上生长的，不能分 落入培养基，造成污染。(2)为了检测培养基 解尿素的菌株，B错误：若用基本培养基分离纤 灭菌是否彻底，应该取若干灭菌后的空白平 维素的分解菌，则配方中应该以纤雏素作为唯 板先行培养一段时间。根据题意分析，3个平 一碳源，C正确；底层不添加特定生长因子，营 板的菌落数分别是39、38和37，且水样稀释 养缺陷型菌株不会生长，若用含特定生长因子 了100倍，体积为0.1ml,因此每升水样中的 的完全培养基作为第二层，这些菌株就会在其 活菌数=(39+38+37)÷3÷0.1×100×1000 上生长，选出底层不生长，第二层生长的菌株 =3.8×107(个)。(3)在采用平板划线法分离 就可直接分离得到相应的营养缺陷型菌株， 菌种的过程中，对接种环常用的灭菌方法是 D正确。 灼烧灭菌：在第二次及以后的划线时，总是从 10.ABD平板上不含任何生长因子，若倒成平 上一次划线的末端开始划线，目的是将聚集 板后直接培养，出现菌落说明已被杂菌感染， 的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁 因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基 殖而来的单菌落。(4)据图分析可知，图中A 30 @ 表示的是用平板划线法接种培养后得到的结 :5.C为防止杂菌污染，甲中涂布前要将涂布器 果，B表示的是用稀释涂布平板法接种培养后 灼烧，冷却后才能取菌液，若灼烧后立即取菌 得到的结果。(5)根据题意分析，振荡培养不 液，高温会将菌体杀死，A正确：对于浓度较高 仅提高了培养液中溶解氧的含量，还可使菌 的菌液，如果稀释倍数太低，会导致多个菌体 体与培养液充分接触，提高营养物质的利用 聚集在一起繁殖，因此所得的菌落不一定是由 率，使细菌生长速度加快。 单一的细胞或孢子繁殖而成，B正确；平板划线 答案(1)高压蒸汽50℃防止皿l盖上的 的过程中，最后一次划线的末端处形成的菌落 水珠落入培养基，造成污染(2)检测培养基 才是由单一细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才 平板灭菌是否合格3.8×107(3)灼烧将 符合要求，C错误：连续划线中，除了第一次划 聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 线外，每一次划线的起，点都是上一次划线的末 (4)B(5)溶解氧营养物质 端，其目的是使菌体的密度越来越小，保证最 后划线末端处的菌落是由单一细胞或孢子繁 阶段测评卷（一）微生物技术的综合应用 殖而成，D正确。 1.B由题图可知，5%食盐溶液组亚硝酸盐含量 ：6.B制作果酒时，取新鲜葡萄，用清水冲洗1~2 变化最大，峰值最高，A错误；盐浓度较高时， 次，再去除枝梗，反复冲洗会使附着于葡萄皮 硝酸盐还原菌受抑制，从而抑制硝酸盐还原为 上的野生酵母菌数量减少，延长发酵时间， 亚硝酸盐，因此发酵初期7%食盐溶液组亚硝 A错误；在果酒制作过程中，酵母菌进行呼吸 酸盐含量较低，B正确：发酵后期，亚硝酸盐含 作用产生的CO2溶于水中，会导致发酵液pH 量较少，是食用泡菜的最佳时间，C错误：泡菜 逐渐降低，C错误；发酵液中酒精浓度一般较 发酵过程中检测亚硝酸盐含量的目的是把握 低，其主要原因是酒精浓度过高会抑制酵母菌 取食泡菜的最佳时期，D错误。 的生命活动，D错误。 2.B当缺少糖源时，醋酸菌可将乙醇转化为乙：7.B倒平板后无需间歌晃动，A错误；图中I 醛，再将乙醛变为醋酸，同时乙醇还可抑制杂 区、Ⅱ区的细菌数量太多，Ⅲ区的细菌数量较 菌繁殖，A正确：酵母菌一般以出芽的方式繁 少，可从Ⅲ区挑取单菌落，B正确：Ⅲ区中存在 殖，醋酸菌以二分裂的方式进行增殖，B错误； 单菌落，该实验结果能达到菌种纯化的目的， 酵母菌发酵过程中先通气使其大量繁殖，再密 C错误：刚果红能与纤维素形成红色复合物，但 闭发酵生产乙醇：醋酸菌为好氧细菌，需持续 不能和纤维素水解后的纤雏二糖和葡萄糖形 通入无菌空气，C正确：酒精发酵的适宜温度范 成红色复合物，因此菌落周围的纤维素被降解 围是18~30℃，醋酸发酵的适宜温度范围为 后，不能被刚果红染成红色，D错误。 3035℃，D正确。 8.D“坛口覆一盖，浸于水中”目的是阻止空气 3.D果酒发酵需要的温度低于果醋发酵需要的 进入坛内，有利于保持坛内的无氧环境，A错 温度，A错误；先制果酒再制果醋，一般先供氧 误；“坛沿外水须隔日一换，勿令其千”的目的是 使酵母菌大量繁殖，然后在无氧条件下进行果 阻止空气进入，保持坛内的无氧环境，B错误； 酒发酵，最后供氧进行果醋发酵，B错误；自然 “霉花”指泡莱的白膜，主要是由蔬莱表面带有 发酵的菌种中常带有较多的杂菌，获得的产品 的酵母菌增殖形成的，C错误：“泡菜之水，用花 品质不一定更好，C错误：适当加大接种量，所 椒和盐煮沸”的目的包括提升泡菜味道、赶出 需菌种数量增加，可以提高发酵速率，D正确。 水中氧气和消毒杀菌防止杂菌污染，D正确。 4.C制作的葡萄酒酸味较重，是由于发酵温度：9.C在用甲装置制作果酒的后期（酒精生成阶 变高，醋酸菌进行了醋酸发酵，A错误；制作果 段)，要适时拧松瓶盖释放酵母菌无氧呼吸产 醋时，在液体培养基的表面将会形成菌膜，不 生的CO2,C错误。 会形成单茵落，B错误：乳酸菌是厌氧生物，故：10.C培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有 制作泡莱时，坛盖边缘水槽需保持有水以保证 能利用纤维素的微生物才能生长繁殖，从而 坛中无氧环境，C正确；为防止污染，榨汁机和 筛选出纤维素分解菌，A正确；对培养基灭菌 发酵瓶在使用前都必须严格消毒，D错误。 采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，对接种环采 31