高二生物期中模拟卷（浙科版2019，选必3全册）-学易金卷：2024-2025学年高中下学期期中模拟考试

2024-2025学年高二生物下学期期中模拟卷 参考答案 1、 选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。每小题只有一个选项符合题目要求。 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C A C D B A B A C A 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 D C A B D D C B B C 题号 21 22 23 24 25 答案 B D A C B 二、非选择题：本题共4小题，除注明外，每空1分，共50分。 26（12分）．(1) 酵母菌 含有 重铬酸钾 酸性 灰绿 C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量 C2H5OH＋O2 CH3COOH＋H2O＋能量 (2)琼脂/凝固剂 (3)支持A的观点，乳酸菌代谢过程中不产生气体（2分） (4)在不同浓度的农药S溶液中，接种相同量的微生物M，一定时间后测定农药S的剩余量，并计算出降解率（2分） 27（12分）．(1)不能 (2) 聚乙二醇诱导法、高Ca2+-高pH诱导法 一定的流动（性） (3) 脱分化 再分化 (4) 植物组织培养（或组培） 全能（性） (5) 19 （2分） 秋水仙素 d（2分） 28（13分）．(1) 95%空气和5%CO2 定期更换培养液 (2) 对小鼠进行免疫，使其产生相应的B淋巴细胞 灭活病毒 (3) ③④ 克隆化培养 既能无限增殖，又能产生相应抗体的杂交瘤细胞（2分） (4)动物细胞融合、动物细胞培养（2分） (5) 癌胚抗原和长春碱抗原 双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，精准杀死癌细胞（2分） 29（13分）．(1)启动子、终止子 (2) EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ 反向连接 (3) 能 不能 (4) T-DNA 抗人血清蛋白（HSA）的抗体 (5) 乙、丙 3 (6) 显微注射 受精卵 性别和年龄 （2分） 1 学科网（北京）股份有限公司 $$2024-2025学年高二生物下学期期中模拟卷 生物答题卡 姓 名： 准考证号： 贴条形码区 注意事项 1。答题前，考生先将自己的姓名，准考证号填写清楚，并认真核准 考生禁填： 缺考标记 ▣ 条形码上的姓名、准考证号，在规定位置贴好条形码。 违纪标记 2.选择题必须用2B铅笔填涂：非选择题必须用0.5mm黑色签字笔 以上标志由监考人员用2B铅笔填涂 答题，不得用铅笔或圆珠笔答题：字体工整、笔迹清晰。 3. 请按题号顺序在各题目的答题区域内作答，超出区域书写的答案 选择题填涂样例： 无效：在草稿纸、试题卷上答题无效。 正确填涂■ 保持卡面清洁，不要折叠、不要弄破。 错误填涂1×11√11八 选择题：本大题共25小题，每小题2分，共50分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合 题目要求的。 1JAIIBIICIIDI 6.JAIIBIICIIDI I1JAIIBIICIIDI 16.1AIIBIICIIDI 2.JAIIBIICIIDI 7JAIIBIICIIDI 12AIIBIICIID] 17JAIIBIICIIDI 3.1AIIBIICIIDI 8A11B11C11D 13A11B11C11D1 181AIIBIICIIDI 4.AIIBIICIID] 91AIIBIICIIDI 14A11B11C11D1 19.A11B11C1ID1 51AIIBIICIIDI 10.AIIBIICIIDI 151AIIBIICIID] 20.1AJIBIICIIDI 21JAIIBIICIIDI 22.1AJIBIICIIDI 23.JAIIBIICIID] 24.1AIIBIICIIDI 25.1AIIBIICIIDI 二、非选择题：本题共4小题，除注明外，每空1分，共50分。 26.(12分) (1) (2》 (3) (4) ■ 请在各题目的答题区域内作答，超出黑色矩形边框限定区域的答案无效！ 27.(12分) (1) (2) (3) (4) (5) 28.(12分) (1) (2) (3) (4) (5) 29.(13分) (1) (2) (3) (4) (5) 6………………○………………外………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… ………………○………………内………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… 此卷只装订不密封 ………………○………………内………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… ………………○………………外………………○………………装………………○………………订………………○………………线………………○……………… … 学校：______________姓名：_____________班级：_______________考号：______________________ 2024-2025学年高二生物下学期期中模拟卷 （考试时间：90分钟 试卷满分：100分） 注意事项： 1．本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答第Ⅰ卷时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。写在本试卷上无效。 3．回答第Ⅱ卷时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．测试范围：浙科版2019选必3。 5． 难度系数：0．7 6．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．下列有关果酒、果醋制作的叙述，正确的是（　　） A．果酒制作所需要的适宜温度较高 B．制作果酒时长期通氧可提高酒精产量 C．使用的主要菌种分别是酵母菌、醋酸菌 D．使用的菌种都具有核糖体、细胞核 2．下列有关平板划线操作的叙述，错误的是（    ） A．在第二次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 B．从第二次划线开始，每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种 C．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免污染环境和感染操作者 3．紫花苜蓿易使家畜患鼓胀病，我国科学家利用另一种植物百脉根培育抗鼓胀病的苜蓿新品种F，主要流程如图所示。下列叙述错误的是（　　）    A．该育种方法可以打破生殖隔离，实现种间基因交流 B．融合的原生质体再生细胞壁的过程与高尔基体有关 C．诱导甘蓝根尖细胞与白菜叶肉细胞原生质体融合,观察到叶绿体即可筛选出异种融合细胞 D．从D到F需更换培养基，通常使愈伤组织先生芽后生根 4．植物组织培养技术常用于商业化生产：其过程一般为：无菌培养物的建立→培养物增殖→生根培养→试管苗移栽及鉴定。下列相关叙述错误的是（    ） A．为获得无菌培养物，外植体要消毒处理后才可接种培养 B．愈伤组织是由一团薄壁细胞组成，无特定形态 C．提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值，有利于诱导生根 D．用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异 5．下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述错误的是（　　） A．过程②的去核可以保证重组细胞的核遗传物质全部来自甲牛 B．丁牛的性别由甲牛和乙牛提供的遗传物质共同决定 C．用电融合法可使供体细胞与去核卵母细胞融合形成重组细胞 D．利用该技术可以克隆一批遗传背景相同的动物，用于致病基因的研究 6．通过细胞培养构建的人造皮肤在治疗大面积烧伤时具有较好的应用前景，下列叙述正确的是（    ） A．由于对细胞所需的营养物质未全部研究清楚，培养时通常加入血清 B．选择非患者细胞进行培养获得人造皮肤，可以降低免疫排斥的发生 C．细胞培养获得人造皮肤的过程中，可加入纤维素酶处理贴壁的细胞 D．细胞培养时需置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱 7．下列有关基因工程的工具的叙述，正确的是（　　） A．基因工程的载体都是质粒 B．限制酶和其他酶一样具有专一性，只能识别特定的核苷酸序列 C．噬菌体可以作为动物基因工程的载体 D．天然质粒均可以直接用作载体将目的基因送入受体细胞 8．下列有关将目的基因导入受体细胞的叙述，正确的是（　　） A．将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法 B．原核生物有繁殖快、遗传物质少等特点，可用于生产各种有生物活性的蛋白质 C．基因枪法是将目的基因导入动物细胞中最为有效的方法 D．可将含有目的基因的植物病毒作为载体导入Ca2＋处理后的大肠杆菌细胞 9．据统计，从20世纪90年代至今，全世界包括基因制药在内的生物技术药物的销售额以年均30%的速度增长，生物制药已成为21世纪的朝阳产业，下列有关说法不正确的是（    ） A．我们可以利用转基因技术使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂” B．对于基因制药，我们应该科学地认识和评估，保障公众的知情权 C．利用转基因技术还可以进行基因治疗，现在技术已经完全成熟 D．由于转基因生物的安全问题，国家应建立相应的评估及预警机制 10．转基因产品的安全性一直是人们关注的焦点。下列哪项是对待转基因技术的理性态度（　　） A．转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用，同时也存在一定风险 B．转基因技术是按照人们的意愿对生物进行的设计，不存在负面影响 C．大量引入国外转基因作物与本地近缘作物品种杂交 D．转基因技术如果被恐怖分子利用将可能导致人类灭绝，应停止转基因研究 11．下图为技术人员利用石榴进行传统发酵制作石榴酒和石榴醋的简要流程图。下列有关叙述正确的是（　　） A．去皮除隔膜后将石榴籽清洗干净，然后破碎榨汁 B．调整石榴汁的成分后，需将石榴汁装满发酵罐再接种酵母菌 C．石榴酒发酵过程中持续通入无菌空气可促进酵母菌产生酒精 D．制作石榴醋和石榴酒的过程中，发酵液的pH均会有所下降 12．米醋是一种营养价值较高的调味品，《醒园录》中有“赤米不用舂，洗净蒸饭，拌曲发香，用水或用酒泼皆可发，……俟月余可用。如有发霉，用铁火针烧极红淬之。”的记载。下列有关米醋酿制的说法正确的是（    ） A．“不舂”保留稻壳的目的是为后续发酵提供菌种 B．米饭“拌曲”后要密封，有利于产生酒精和醋酸 C．“用水或用酒泼皆可发”，说明利用糖和乙醇都可以酿醋 D．为防止霉菌感染，米醋制作时温度应控制在30℃以下 13．科学家将马铃薯和西红柿进行植物体细胞杂交，成功获得了杂种植株。下列分析正确的是（　　） A．可将植物细胞置于含纤维素酶和果胶酶的略高渗溶液中以获得原生质体 B．可用电融合法、高Ca2+-低pH融合法诱导原生质体融合 C．杂种细胞再分化的过程中需平衡激素的种类方可获得杂种植株 D．原生质体由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质构成 14．图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述错误的是（    ） A．步骤①常用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 B．步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C．原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养 15．为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞染色体丢失的问题，研究者在单克隆抗体的制备过程中增加了一个步骤，如下图所示。除了抗原刺激之外，用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B淋巴细胞，并使之成为“染色体核型稳定”的细胞株。这样的细胞株能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。下列相关分析不合理的是（    ）    A．杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降 B．B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的淋巴结和脾脏等 C．骨髓瘤细胞应该无法在HAT选择培养基中存活 D．杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力 16．狂犬病病毒（RABV）具有较高的致死率，注射疫苗是预防狂犬病的最有效措施，目前主要采用生物反应器培养Vero细胞（非洲绿猴肾上皮细胞），扩增RABV，再纯化病毒等步骤制备狂犬病疫苗。下图表示培养过程测定的相应数值（培养一定时间后接种RABV，病毒滴度指单位体积培养液中病毒数量）。下列叙述不正确的是（    ）    A．应在无菌、无毒的环境中培养Vero细胞 B．换瓶培养时，需用胰蛋白酶处理Vero细胞 C．接种病毒的时间可能为培养Vero细胞的第4天 D．第六天细胞密度开始下降只与培养液有关 17．逆转录PCR(RT-PCR）是以mRNA为模板逆转录形成DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增的技术。如图为利用RT-PCR扩增人乳铁蛋白基因的部分过程，相关叙述错误的是（    ） A．由于基因的选择性表达，人乳铁蛋白基因mRNA应从人乳腺细胞中提取获得 B．过程①②所需的酶分别是逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶，原料均为脱氧核苷酸 C．过程③获得的人乳铁蛋白基因不具有起始密码子、终止密码子的对应序列 D．RT-PCR中，引物P1、P2的长度会影响复性温度以及扩增产物的数量和纯度 18．某质粒中氨苄青霉素抗性基因（AmpR），四环素抗性基因（TetR）和多种限制酶的识别位点如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．基因工程的载体也可选用噬菌体和动植物病毒 B．质粒和目的基因用ScaI和HindⅢ切割，用四环素进行筛选 C．质粒和目的基因用SalⅠ和SphⅠ切割，用氨苄青霉素进行筛选 D．质粒和目的基因用ScaⅠ和PUuⅠ切割，用四环素进行筛选 19．下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（    ）    A．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂 B．⑨计数得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较多 C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求 D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌 20．花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。通过蛋白质电泳技术分析了亲本亟待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2所示。下列有关叙述正确的是（    ）    A．图1培育杂种植株所用的技术体现了细胞膜具有一定流动性原理和基因突变原理 B．②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是成功的标志 C．只考虑细胞两两融合，图1培育出的植株体细胞中最多含有72条染色体，减数分裂时最多可形成18个四分体 D．可将病菌悬浮液均匀喷施于图2中的3和5植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株 21．基因组印记（通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达）阻碍了哺乳动物的“孤雌生殖”。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个第二极体注入修饰后的次级卵母细胞（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（    ） A．基因组印记会阻碍次级卵母细胞与精子或第二极体的结合 B．需对代孕母鼠进行同期发情处理后，再进行胚胎移植，受体对移植来的胚胎几乎不发生免疫排斥 C．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，所以其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同 D．移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化 22．蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应 的 DNA 片段结构示意图，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（　　）    A．为了使 PCR 技术获取的取蛛丝蛋白基因与质粒成功连接，应在设计的引物 3′端加限 制酶识别序列 B．若从该 DNA 片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏 2 个磷酸二酯键 C．若一个蛛丝蛋白基因扩增了4 次，则共消耗引物 32 个 D．在 PCR 仪中至少需经过 6 次循环才可获得 32 个符合要求的目的基因 23．从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→富集培养（使菌体数量增多）→纯种分离→性能测定，如图a、b是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述正确的是（    ） A．可使用液体培养基进行富集培养 B．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌 C．获得图a所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌3次 D．利用图b计算出样品中菌体浓度为5．85×108个/ml，则接种稀释液的稀释倍数为107倍 24．体外受精技术是提高动物繁殖能力的有效措施，该技术还可为胚胎移植提供可用的胚胎。下列关于体外受精和胚胎移植的叙述，错误的是（    ） A．在精子的刺激下，卵子完成减数分裂II，排出第二极体后形成雌原核 B．精子入卵后细胞膜会迅速发生生理反应，阻止其他精子进入卵细胞 C．对奶牛胚胎进行分割时，应选择发育良好、形态正常的原肠胚进行均等分割 D．“设计试管婴儿”利用了体外受精技术、胚胎移植技术和遗传学诊断技术 25．研究发现，大豆GmNF-YA19基因在干旱胁迫中有响应。科研人员利用PCR扩增GmNF-YA19基因，构建GmNF-YA19基因表达载体并转化烟草，实验过程如图1、2所示下列说法错误的是（    ）    A．PCR扩增GmNF-YA19基因的前提是根据已知核苷酸序列合成两种引物 B．为获得能正确表达目的基因的重组质粒，应选用限制酶KpnI、EcoRI进行切割 C．终止子为一段DNA序列，其作用是使转录在所需要的地方停下来 D．重组质粒转化烟草后，可使用含氨苄青霉素的培养基来筛选目的细胞 第Ⅱ卷 二、非选择题：本题共4小题，共50分。 26（12分）．根据相关知识，回答下列问题： (1)以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程如图1所示，请分析回答： ①图1中甲过程利用的微生物是 ，其细胞结构中 （填“含有”或“不含”）线粒体。甲过程发酵温度控制在18~30℃，经过10～12d，样液中是否含有酒精，可以用 来检验，其原理是在 条件下，该物质和酒精反应呈现 色。 ②酵母菌产生果酒的反应式 ③利用苹果酒制作苹果醋的反应简式是 。 (2)与获得单菌落的培养基相比，对土壤微生物进行扩大培养时，所配制的培养基中不能有 。 (3)市场上购买的真空包装酸菜，在没有漏气的状态下发生了“胀袋”现象，同学怀疑是杂菌污染导致的，同学B怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，你支持谁的观点并说明理由： 。 (4)科研人员从土壤中分离出来一种能降解农药S的微生物M，用于修复被农药S污染的土壤。为了进一步探究微生物M的降解能力与农药S浓度的关系，请简要写出实验设计思路： 。 27（12分）．白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞染色体数目分别为20、18。“白菜甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强、易于贮藏等优点。如图为“白菜甘蓝”的培育过程，请回答问题。 (1)植物体细胞杂交技术培育“白菜甘蓝”， （能/不能）用白菜、甘蓝体细胞直接融合。 (2)由原生质体A、B形成原生质体C的过程中，可使用 （写出2种即可）化学法诱导融合，该融合过程体现了细胞膜具有 性。 (3)由细胞D得到愈伤组织的过程叫作 ；由愈伤组织得到根、芽等器官的过程叫作 。 (4)由细胞D得到一个完整的杂种植株，采用的细胞工程技术是 ，该过程体现了细胞D具有 性。 (5)分别取白菜、甘蓝的花粉经细胞融合培育出二倍体“白菜甘蓝”，该植株的大多数体细胞中染色体数目为 。这种二倍体“白菜甘蓝”植株高度不育，可用化学试剂 （填试剂名称）诱导产生可育的四倍体“白菜甘蓝”，该变异类型属于 （从下列选项中选择填空）。 a.基因突变        b.基因重组 c.染色体结构变异  d.染色体数目变异 28（13分）．双特异性抗体（BsAb）是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原相结合，双特异性抗体在自然状态下并不存在，可以通过细胞融合技术人工制备实现。长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1是科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图示。回答下列问题。 (1)在体外进行动物细胞培养时为了维持培养液的pH，应该将细胞置于含有 的混合气体的CO2培养箱中培养，同时为了防止有害代谢物的积累，可采用 的方法，以便清除代谢物。 (2)用癌胚抗原作为抗原注射小鼠的目的是 ，一段时间后，将提取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合，该过程可采用的不同于植物原生质体融合的诱导因素是 。 (3)②、③、④存活的细胞中，只含有杂交瘤细胞的是 ，④过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，对其进行 和抗体检测，经多次筛选，其目的是筛选获得 。 (4)图1注射长春碱后，经筛选后可获取单克隆杂交一杂交瘤细胞，结合所学知识分析方框内相关的动物细胞工程技术有 。 (5)图1过程获得的双特异性抗体能结合的抗原有 ，该双特异性单克隆抗体能够准确抗肿瘤的作用机理 。 29（13分）．人的血消蛋白（HSA）具有重要的医用价值，研究人员欲用乳腺生物反应器来大量生产HSA。图1为HSA基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，其中Amp表示氨苄青霉素抗性基因，Neo’表示新霉素抗性基因，箭头表示切割形成末端完全不同的4种限制酶的切割位点。HSA只能从血浆中制备，以基因工程技术获取重组HSA(rHSA）的三条途径如图2所示。请回答下列问题：    (1)人工构建pBR322质粒除了含特定限制酶切割位点、标记基因、复制原点外，还必须有 （答出两点）等。 (2)据图1分析，在构建基因表达载体时，选择限制酶 切割质粒和目的基因，可提高目的基因和载体的正确连接率。双酶切法的优点之一是避免质粒与目的基因之间的 。 (3)为了排除普通受体细胞（未导入质粒）、空质粒受体细胞（导入pBR322质粒而非重组质粒）的干扰，目的基因导入后进行了进一步筛选：制备甲、乙两种培养基，甲培养基中有新霉素，乙培养基中有氨苄青霉素，含重组质粒的受体细胞在甲培养基上 （从“能”“不能”中选填）生存，在乙培养基上 ’.（从“能”“不能”中选填）生存。 (4)将农杆菌与水稻受体细胞混合后共同培养，旨在让Ti质粒的 进入水稻受体细胞。为检测目的基因的表达情况，可提取受体细胞的蛋白质，用 进行杂交实验。 (5)据下图分析，利用PCR技术获取HSA基因时，应选择甲、乙、丙、丁四种引物中的 ，需扩增 次后得到HSA目的基因。    (6)科学家培养出一种转基因羊，其膀胱上皮细胞可以合成人血清白蛋白并分泌到尿液中。其培育方法中将重组质粒通过 法导入山羊的 细胞。与乳腺生物反应器相比，膀胱生物反应器不受 限制，受体来源更广泛。 试题 第7页（共8页） 试题 第8页（共8页） 试题 第1页（共8页） 试题 第2页（共8页） 学科网（北京）股份有限公司 $$2024-2025学年高二生物下学期期中模拟卷 生物·答题卡 姓 名： 准考证号： 贴条形码区 注意事项 1,答题前，考生先将自己的姓名，准考证号填写清楚，并认真核准 考生禁填： 缺考标记 条形码上的姓名、准考证号，在规定位置贴好条形码。 ▣ 违纪标记 ☐ 2.选择题必须用2B铅笔填涂：非选择题必须用0.5m黑色签字笔 以上标志由监考人员用2B铅笔填涂 答题，不得用铅笔或圆珠笔答趣：字体工整、笔迹清嘶。 3.请按题号顺序在各题目的答题区域内作答，超出区域书写的答案 选择题填涂样例： 无效：在草稿纸、试题卷上答题无效， 正确填涂■ 4. 保持卡面清洁，不要折叠、不要弄破。 错误填涂I×1【1【/1 “、 选择题：本大题共25小题，每小题2分，共50分。在每小趣给出的四个选项中，只有一项是符 合题目要求的。 LAJIBJICJIDI 6[AIIBIICIID] 11[A][B]IC]ID] 161AJIBJICJID] 2JAJIBIICJID] 7AJIBIICIID] 12AJIBIIC]ID] 17AJIBIICIIDI 3AJ[BI[CIID] 8AIIBIIC][D] 13[AI[BIICIID] 18[A][B]ICIID] AJIBIICJID] 9.AJ[BIICI[DI 14AI[BIICI[D] 1[A][BI[CIID] 51AJIBJICIID] 10.AJIBI[C][DI 151AIIBJICIID] 20.[A]IB]ICIID] 21[AJBJICI[DI 22AJIBJICIIDI 23[AJIB]ICI[D] 24AJIBIICIIDI 251AJBIICI[DI 二、 非选择题：本题共4小题，除注明外，每空1分，共50分。 26.(12分) (1) (2 (3 请在各题目的答题区域内作答，超出黑色矩形边框限定区域的答案无效！ 27.(12分) (1) (2) (3) (4) (5) 28.(12分) (1) (2) (3) (4) (5) 29.(13分) (1) (2) (3) (4) 2024-2025学年高二生物下学期期中模拟卷 （考试时间：90分钟 试卷满分：100分） 注意事项： 1．本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答第Ⅰ卷时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。写在本试卷上无效。 3．回答第Ⅱ卷时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．测试范围：浙科版2019选必3。 5． 难度系数：0．7 6．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．下列有关果酒、果醋制作的叙述，正确的是（　　） A．果酒制作所需要的适宜温度较高 B．制作果酒时长期通氧可提高酒精产量 C．使用的主要菌种分别是酵母菌、醋酸菌 D．使用的菌种都具有核糖体、细胞核 2．下列有关平板划线操作的叙述，错误的是（    ） A．在第二次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 B．从第二次划线开始，每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种 C．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免污染环境和感染操作者 3．紫花苜蓿易使家畜患鼓胀病，我国科学家利用另一种植物百脉根培育抗鼓胀病的苜蓿新品种F，主要流程如图所示。下列叙述错误的是（　　）    A．该育种方法可以打破生殖隔离，实现种间基因交流 B．融合的原生质体再生细胞壁的过程与高尔基体有关 C．诱导甘蓝根尖细胞与白菜叶肉细胞原生质体融合,观察到叶绿体即可筛选出异种融合细胞 D．从D到F需更换培养基，通常使愈伤组织先生芽后生根 4．植物组织培养技术常用于商业化生产：其过程一般为：无菌培养物的建立→培养物增殖→生根培养→试管苗移栽及鉴定。下列相关叙述错误的是（    ） A．为获得无菌培养物，外植体要消毒处理后才可接种培养 B．愈伤组织是由一团薄壁细胞组成，无特定形态 C．提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值，有利于诱导生根 D．用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异 5．下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述错误的是（　　） A．过程②的去核可以保证重组细胞的核遗传物质全部来自甲牛 B．丁牛的性别由甲牛和乙牛提供的遗传物质共同决定 C．用电融合法可使供体细胞与去核卵母细胞融合形成重组细胞 D．利用该技术可以克隆一批遗传背景相同的动物，用于致病基因的研究 6．通过细胞培养构建的人造皮肤在治疗大面积烧伤时具有较好的应用前景，下列叙述正确的是（    ） A．由于对细胞所需的营养物质未全部研究清楚，培养时通常加入血清 B．选择非患者细胞进行培养获得人造皮肤，可以降低免疫排斥的发生 C．细胞培养获得人造皮肤的过程中，可加入纤维素酶处理贴壁的细胞 D．细胞培养时需置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱 7．下列有关基因工程的工具的叙述，正确的是（　　） A．基因工程的载体都是质粒 B．限制酶和其他酶一样具有专一性，只能识别特定的核苷酸序列 C．噬菌体可以作为动物基因工程的载体 D．天然质粒均可以直接用作载体将目的基因送入受体细胞 8．下列有关将目的基因导入受体细胞的叙述，正确的是（　　） A．将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法 B．原核生物有繁殖快、遗传物质少等特点，可用于生产各种有生物活性的蛋白质 C．基因枪法是将目的基因导入动物细胞中最为有效的方法 D．可将含有目的基因的植物病毒作为载体导入Ca2＋处理后的大肠杆菌细胞 9．据统计，从20世纪90年代至今，全世界包括基因制药在内的生物技术药物的销售额以年均30%的速度增长，生物制药已成为21世纪的朝阳产业，下列有关说法不正确的是（    ） A．我们可以利用转基因技术使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂” B．对于基因制药，我们应该科学地认识和评估，保障公众的知情权 C．利用转基因技术还可以进行基因治疗，现在技术已经完全成熟 D．由于转基因生物的安全问题，国家应建立相应的评估及预警机制 10．转基因产品的安全性一直是人们关注的焦点。下列哪项是对待转基因技术的理性态度（　　） A．转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用，同时也存在一定风险 B．转基因技术是按照人们的意愿对生物进行的设计，不存在负面影响 C．大量引入国外转基因作物与本地近缘作物品种杂交 D．转基因技术如果被恐怖分子利用将可能导致人类灭绝，应停止转基因研究 11．下图为技术人员利用石榴进行传统发酵制作石榴酒和石榴醋的简要流程图。下列有关叙述正确的是（　　） A．去皮除隔膜后将石榴籽清洗干净，然后破碎榨汁 B．调整石榴汁的成分后，需将石榴汁装满发酵罐再接种酵母菌 C．石榴酒发酵过程中持续通入无菌空气可促进酵母菌产生酒精 D．制作石榴醋和石榴酒的过程中，发酵液的pH均会有所下降 12．米醋是一种营养价值较高的调味品，《醒园录》中有“赤米不用舂，洗净蒸饭，拌曲发香，用水或用酒泼皆可发，……俟月余可用。如有发霉，用铁火针烧极红淬之。”的记载。下列有关米醋酿制的说法正确的是（    ） A．“不舂”保留稻壳的目的是为后续发酵提供菌种 B．米饭“拌曲”后要密封，有利于产生酒精和醋酸 C．“用水或用酒泼皆可发”，说明利用糖和乙醇都可以酿醋 D．为防止霉菌感染，米醋制作时温度应控制在30℃以下 13．科学家将马铃薯和西红柿进行植物体细胞杂交，成功获得了杂种植株。下列分析正确的是（　　） A．可将植物细胞置于含纤维素酶和果胶酶的略高渗溶液中以获得原生质体 B．可用电融合法、高Ca2+-低pH融合法诱导原生质体融合 C．杂种细胞再分化的过程中需平衡激素的种类方可获得杂种植株 D．原生质体由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质构成 14．图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述错误的是（    ） A．步骤①常用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 B．步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C．原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养 15．为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞染色体丢失的问题，研究者在单克隆抗体的制备过程中增加了一个步骤，如下图所示。除了抗原刺激之外，用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B淋巴细胞，并使之成为“染色体核型稳定”的细胞株。这样的细胞株能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。下列相关分析不合理的是（    ）    A．杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降 B．B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的淋巴结和脾脏等 C．骨髓瘤细胞应该无法在HAT选择培养基中存活 D．杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力 16．狂犬病病毒（RABV）具有较高的致死率，注射疫苗是预防狂犬病的最有效措施，目前主要采用生物反应器培养Vero细胞（非洲绿猴肾上皮细胞），扩增RABV，再纯化病毒等步骤制备狂犬病疫苗。下图表示培养过程测定的相应数值（培养一定时间后接种RABV，病毒滴度指单位体积培养液中病毒数量）。下列叙述不正确的是（    ）    A．应在无菌、无毒的环境中培养Vero细胞 B．换瓶培养时，需用胰蛋白酶处理Vero细胞 C．接种病毒的时间可能为培养Vero细胞的第4天 D．第六天细胞密度开始下降只与培养液有关 17．逆转录PCR(RT-PCR）是以mRNA为模板逆转录形成DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增的技术。如图为利用RT-PCR扩增人乳铁蛋白基因的部分过程，相关叙述错误的是（    ） A．由于基因的选择性表达，人乳铁蛋白基因mRNA应从人乳腺细胞中提取获得 B．过程①②所需的酶分别是逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶，原料均为脱氧核苷酸 C．过程③获得的人乳铁蛋白基因不具有起始密码子、终止密码子的对应序列 D．RT-PCR中，引物P1、P2的长度会影响复性温度以及扩增产物的数量和纯度 18．某质粒中氨苄青霉素抗性基因（AmpR），四环素抗性基因（TetR）和多种限制酶的识别位点如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．基因工程的载体也可选用噬菌体和动植物病毒 B．质粒和目的基因用ScaI和HindⅢ切割，用四环素进行筛选 C．质粒和目的基因用SalⅠ和SphⅠ切割，用氨苄青霉素进行筛选 D．质粒和目的基因用ScaⅠ和PUuⅠ切割，用四环素进行筛选 19．下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（    ）    A．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂 B．⑨计数得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较多 C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求 D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌 20．花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。通过蛋白质电泳技术分析了亲本亟待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2所示。下列有关叙述正确的是（    ）    A．图1培育杂种植株所用的技术体现了细胞膜具有一定流动性原理和基因突变原理 B．②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是成功的标志 C．只考虑细胞两两融合，图1培育出的植株体细胞中最多含有72条染色体，减数分裂时最多可形成18个四分体 D．可将病菌悬浮液均匀喷施于图2中的3和5植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株 21．基因组印记（通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达）阻碍了哺乳动物的“孤雌生殖”。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个第二极体注入修饰后的次级卵母细胞（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（    ） A．基因组印记会阻碍次级卵母细胞与精子或第二极体的结合 B．需对代孕母鼠进行同期发情处理后，再进行胚胎移植，受体对移植来的胚胎几乎不发生免疫排斥 C．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，所以其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同 D．移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化 22．蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应 的 DNA 片段结构示意图，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（　　）    A．为了使 PCR 技术获取的取蛛丝蛋白基因与质粒成功连接，应在设计的引物 3′端加限 制酶识别序列 B．若从该 DNA 片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏 2 个磷酸二酯键 C．若一个蛛丝蛋白基因扩增了4 次，则共消耗引物 32 个 D．在 PCR 仪中至少需经过 6 次循环才可获得 32 个符合要求的目的基因 23．从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→富集培养（使菌体数量增多）→纯种分离→性能测定，如图a、b是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述正确的是（    ） A．可使用液体培养基进行富集培养 B．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌 C．获得图a所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌3次 D．利用图b计算出样品中菌体浓度为5．85×108个/ml，则接种稀释液的稀释倍数为107倍 24．体外受精技术是提高动物繁殖能力的有效措施，该技术还可为胚胎移植提供可用的胚胎。下列关于体外受精和胚胎移植的叙述，错误的是（    ） A．在精子的刺激下，卵子完成减数分裂II，排出第二极体后形成雌原核 B．精子入卵后细胞膜会迅速发生生理反应，阻止其他精子进入卵细胞 C．对奶牛胚胎进行分割时，应选择发育良好、形态正常的原肠胚进行均等分割 D．“设计试管婴儿”利用了体外受精技术、胚胎移植技术和遗传学诊断技术 25．研究发现，大豆GmNF-YA19基因在干旱胁迫中有响应。科研人员利用PCR扩增GmNF-YA19基因，构建GmNF-YA19基因表达载体并转化烟草，实验过程如图1、2所示下列说法错误的是（    ）    A．PCR扩增GmNF-YA19基因的前提是根据已知核苷酸序列合成两种引物 B．为获得能正确表达目的基因的重组质粒，应选用限制酶KpnI、EcoRI进行切割 C．终止子为一段DNA序列，其作用是使转录在所需要的地方停下来 D．重组质粒转化烟草后，可使用含氨苄青霉素的培养基来筛选目的细胞 第Ⅱ卷 二、非选择题：本题共4小题，共50分。 26（12分）．根据相关知识，回答下列问题： (1)以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程如图1所示，请分析回答： ①图1中甲过程利用的微生物是 ，其细胞结构中 （填“含有”或“不含”）线粒体。甲过程发酵温度控制在18~30℃，经过10～12d，样液中是否含有酒精，可以用 来检验，其原理是在 条件下，该物质和酒精反应呈现 色。 ②酵母菌产生果酒的反应式 ③利用苹果酒制作苹果醋的反应简式是 。 (2)与获得单菌落的培养基相比，对土壤微生物进行扩大培养时，所配制的培养基中不能有 。 (3)市场上购买的真空包装酸菜，在没有漏气的状态下发生了“胀袋”现象，同学怀疑是杂菌污染导致的，同学B怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，你支持谁的观点并说明理由： 。 (4)科研人员从土壤中分离出来一种能降解农药S的微生物M，用于修复被农药S污染的土壤。为了进一步探究微生物M的降解能力与农药S浓度的关系，请简要写出实验设计思路： 。 27（12分）．白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞染色体数目分别为20、18。“白菜甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强、易于贮藏等优点。如图为“白菜甘蓝”的培育过程，请回答问题。 (1)植物体细胞杂交技术培育“白菜甘蓝”， （能/不能）用白菜、甘蓝体细胞直接融合。 (2)由原生质体A、B形成原生质体C的过程中，可使用 （写出2种即可）化学法诱导融合，该融合过程体现了细胞膜具有 性。 (3)由细胞D得到愈伤组织的过程叫作 ；由愈伤组织得到根、芽等器官的过程叫作 。 (4)由细胞D得到一个完整的杂种植株，采用的细胞工程技术是 ，该过程体现了细胞D具有 性。 (5)分别取白菜、甘蓝的花粉经细胞融合培育出二倍体“白菜甘蓝”，该植株的大多数体细胞中染色体数目为 。这种二倍体“白菜甘蓝”植株高度不育，可用化学试剂 （填试剂名称）诱导产生可育的四倍体“白菜甘蓝”，该变异类型属于 （从下列选项中选择填空）。 a.基因突变        b.基因重组 c.染色体结构变异  d.染色体数目变异 28（13分）．双特异性抗体（BsAb）是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原相结合，双特异性抗体在自然状态下并不存在，可以通过细胞融合技术人工制备实现。长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1是科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图示。回答下列问题。 (1)在体外进行动物细胞培养时为了维持培养液的pH，应该将细胞置于含有 的混合气体的CO2培养箱中培养，同时为了防止有害代谢物的积累，可采用 的方法，以便清除代谢物。 (2)用癌胚抗原作为抗原注射小鼠的目的是 ，一段时间后，将提取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合，该过程可采用的不同于植物原生质体融合的诱导因素是 。 (3)②、③、④存活的细胞中，只含有杂交瘤细胞的是 ，④过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，对其进行 和抗体检测，经多次筛选，其目的是筛选获得 。 (4)图1注射长春碱后，经筛选后可获取单克隆杂交一杂交瘤细胞，结合所学知识分析方框内相关的动物细胞工程技术有 。 (5)图1过程获得的双特异性抗体能结合的抗原有 ，该双特异性单克隆抗体能够准确抗肿瘤的作用机理 。 29（13分）．人的血消蛋白（HSA）具有重要的医用价值，研究人员欲用乳腺生物反应器来大量生产HSA。图1为HSA基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，其中Amp表示氨苄青霉素抗性基因，Neo’表示新霉素抗性基因，箭头表示切割形成末端完全不同的4种限制酶的切割位点。HSA只能从血浆中制备，以基因工程技术获取重组HSA(rHSA）的三条途径如图2所示。请回答下列问题：    (1)人工构建pBR322质粒除了含特定限制酶切割位点、标记基因、复制原点外，还必须有 （答出两点）等。 (2)据图1分析，在构建基因表达载体时，选择限制酶 切割质粒和目的基因，可提高目的基因和载体的正确连接率。双酶切法的优点之一是避免质粒与目的基因之间的 。 (3)为了排除普通受体细胞（未导入质粒）、空质粒受体细胞（导入pBR322质粒而非重组质粒）的干扰，目的基因导入后进行了进一步筛选：制备甲、乙两种培养基，甲培养基中有新霉素，乙培养基中有氨苄青霉素，含重组质粒的受体细胞在甲培养基上 （从“能”“不能”中选填）生存，在乙培养基上 ’.（从“能”“不能”中选填）生存。 (4)将农杆菌与水稻受体细胞混合后共同培养，旨在让Ti质粒的 进入水稻受体细胞。为检测目的基因的表达情况，可提取受体细胞的蛋白质，用 进行杂交实验。 (5)据下图分析，利用PCR技术获取HSA基因时，应选择甲、乙、丙、丁四种引物中的 ，需扩增 次后得到HSA目的基因。    (6)科学家培养出一种转基因羊，其膀胱上皮细胞可以合成人血清白蛋白并分泌到尿液中。其培育方法中将重组质粒通过 法导入山羊的 细胞。与乳腺生物反应器相比，膀胱生物反应器不受 限制，受体来源更广泛。 1 学科网（北京）股份有限公司 $$ 2024-2025学年高二生物下学期期中模拟卷 （考试时间：90分钟 试卷满分：100分） 注意事项： 1．本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答第Ⅰ卷时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。写在本试卷上无效。 3．回答第Ⅱ卷时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．测试范围：浙科版2019选必3。 5． 难度系数：0．7 6．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、选择题：本题共25个小题，每小题2分，共50分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1．下列有关果酒、果醋制作的叙述，正确的是（　　） A．果酒制作所需要的适宜温度较高 B．制作果酒时长期通氧可提高酒精产量 C．使用的主要菌种分别是酵母菌、醋酸菌 D．使用的菌种都具有核糖体、细胞核 【答案】C 【分析】果酒使用的菌种为酵母菌，属于兼性厌氧真菌，温度为18〜30 ℃。果醋制作菌种是醋酸菌，属于原核细胞，适宜温度为30～35℃，需要持续通入氧气。 【详解】A、酿酒的温度控制在18〜30 ℃，酿醋的温度控制在30～35℃，果醋制作所需要的适宜温度较高，A错误； B、制作果酒时酵母菌先进行有氧呼吸大量繁殖，而后进行无氧呼吸发酵产生酒精，因此长期通氧酵母菌只进行有氧呼吸不产生酒精，B错误； C、果酒、果醋制作使用的主要菌种分别是酵母菌、醋酸菌，C正确； D、酵母菌属于真核生物，有核糖体、细胞核；醋酸菌属于原核生物，有核糖体，无细胞核，D错误。 故选C。 2．下列有关平板划线操作的叙述，错误的是（    ） A．在第二次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 B．从第二次划线开始，每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种 C．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免污染环境和感染操作者 【答案】A 【分析】平板划线法是指通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面，最后得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 【详解】A、在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端，A错误； B、从第二次划线开始，每次划线结束，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，以达到逐步分离微生物的目的，B正确； C、接种前先要用火焰灼烧接种环，目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，C正确； D、划线结束后，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者，D正确。 故选A。 3．紫花苜蓿易使家畜患鼓胀病，我国科学家利用另一种植物百脉根培育抗鼓胀病的苜蓿新品种F，主要流程如图所示。下列叙述错误的是（　　）    A．该育种方法可以打破生殖隔离，实现种间基因交流 B．融合的原生质体再生细胞壁的过程与高尔基体有关 C．诱导甘蓝根尖细胞与白菜叶肉细胞原生质体融合,观察到叶绿体即可筛选出异种融合细胞 D．从D到F需更换培养基，通常使愈伤组织先生芽后生根 【答案】C 【分析】据图分析，图中①是去除细胞壁，②是原生质体的融合过程，③是筛选出杂种细胞的过程，④是脱分化过程，⑤是再分化过程，据此分析作答。 【详解】A、图示为植物体细胞杂交技术培育新品种，可以打破生殖隔离，实现种间基因交流，A正确； B、高尔基体与植物细胞壁的形成有关，因此融合的原生质体再生细胞壁的过程与高尔基体有关，B正确； C、诱导甘蓝根尖细胞与白菜叶肉细胞原生质体融合，结果可能为甘蓝+甘蓝、甘蓝+白菜、白菜+白菜，观察到叶绿体可能是异种融合细胞，也可能是白菜+白菜的融合细胞，C错误； D、杂种细胞脱分化形成愈伤组织，再分化出芽和根等，依次使用诱导愈伤组织的培养基、诱导生芽的培养基、诱导生根的培养基，不同阶段的培养基中细胞分裂素和生长素的比例不同，D正确。 故选C。 4．植物组织培养技术常用于商业化生产：其过程一般为：无菌培养物的建立→培养物增殖→生根培养→试管苗移栽及鉴定。下列相关叙述错误的是（    ） A．为获得无菌培养物，外植体要消毒处理后才可接种培养 B．愈伤组织是由一团薄壁细胞组成，无特定形态 C．提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值，有利于诱导生根 D．用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异 【答案】D 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、植物组织培养过程中应注意无菌操作，为获得无菌培养物，外植体要经过表面消毒处理后，才能进行培养，A正确； B、愈伤组织是无定型状态，具有高度液泡化的薄壁细胞，是由外植体经脱分化而来，B正确； C、生长素和细胞分裂素的比值高时，有利于根的分化、抑制芽的形成，因此提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值，有利于诱导生根，C正确； D、用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗会出现变异，如在愈伤组织的培养过程中可能发生基因突变等变异，D错误。 故选D。 5．下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述错误的是（　　） A．过程②的去核可以保证重组细胞的核遗传物质全部来自甲牛 B．丁牛的性别由甲牛和乙牛提供的遗传物质共同决定 C．用电融合法可使供体细胞与去核卵母细胞融合形成重组细胞 D．利用该技术可以克隆一批遗传背景相同的动物，用于致病基因的研究 【答案】B 【分析】题图分析：图示过程为体细胞克隆过程，取甲牛体细胞，对处于减数第二次分裂中期的乙牛的卵母细胞去核，然后进行细胞核移植；融合后的细胞激活后培养到早期胚胎，再进行胚胎移植，最终得到克隆牛。 【详解】A、过程②的去核可以保证重组细胞的核遗传物质全部来自甲牛，质遗传物质几乎来自乙牛， A正确； B、丁牛的性别由甲牛提供的遗传物质决定，B错误； C、将供体细胞注入去核卵母细胞后通过电融合法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞，形成重构胚，C正确； D、利用该技术可以克隆一批遗传背景相同的动物，可以对比分析致病基因，D正确。 故选B。 6．通过细胞培养构建的人造皮肤在治疗大面积烧伤时具有较好的应用前景，下列叙述正确的是（    ） A．由于对细胞所需的营养物质未全部研究清楚，培养时通常加入血清 B．选择非患者细胞进行培养获得人造皮肤，可以降低免疫排斥的发生 C．细胞培养获得人造皮肤的过程中，可加入纤维素酶处理贴壁的细胞 D．细胞培养时需置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱 【答案】A 【分析】动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素，定期更换培养液，以清除代谢废物；（2）营养物质：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和pH；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）5%的CO2（维持培养液的pH）。 【详解】A、在进行动物细胞培养时，培养液中通常需加入血清、血浆等一些天然成分，主要目的是为细胞提供促生长因子，以补充细胞生长和增殖过程中所需的营养物质，A正确； B、选择患者自身的细胞进行培养获得人造皮肤，可以避免免疫排斥的发生，选择非患者细胞进行培养获得人造皮肤，一般会发生免疫排斥反应，B错误； C、细胞培养获得人造皮肤的过程中，可加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理贴壁的细胞，C错误； D、细胞培养时需置于95%空气（细胞代谢必需的）5%的CO2（维持培养液的pH）的混合气体的CO2培养箱进行培养，D错误。 故选A。 7．下列有关基因工程的工具的叙述，正确的是（　　） A．基因工程的载体都是质粒 B．限制酶和其他酶一样具有专一性，只能识别特定的核苷酸序列 C．噬菌体可以作为动物基因工程的载体 D．天然质粒均可以直接用作载体将目的基因送入受体细胞 【答案】B 【分析】基因工程的工具包含限制酶、DNA连接酶和载体。载体是运载着外源DNA进入宿主细胞的“车子”，即运载工具。 【详解】A、目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒，A错误； B、限制酶和其他酶一样具有专一性，只能识别特定的核苷酸序列，并在特定位点进行切割，B正确； C、噬菌体专门侵染大肠杆菌，不可作为动物基因工程的载体，C错误； D、天然质粒往往不能直接作为载体，要根据不同的目的和需求进行人工改造，D错误。 故选B。 8．下列有关将目的基因导入受体细胞的叙述，正确的是（　　） A．将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法 B．原核生物有繁殖快、遗传物质少等特点，可用于生产各种有生物活性的蛋白质 C．基因枪法是将目的基因导入动物细胞中最为有效的方法 D．可将含有目的基因的植物病毒作为载体导入Ca2＋处理后的大肠杆菌细胞 【答案】A 【分析】将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，其依据主要是：当植物受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。 【详解】A、由于农杆菌中Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞并整合到受体细胞的染色体DNA上，故将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，A正确； B、原核生物的细胞中没有内质网和高尔基体，不能对蛋白质进行加工，故生产的蛋白质可能没有生物活性，B错误； C、将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射技术，C错误； D、植物病毒只侵染植物细胞，不侵染大肠杆菌，D错误。 故选A。 9．据统计，从20世纪90年代至今，全世界包括基因制药在内的生物技术药物的销售额以年均30%的速度增长，生物制药已成为21世纪的朝阳产业，下列有关说法不正确的是（    ） A．我们可以利用转基因技术使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂” B．对于基因制药，我们应该科学地认识和评估，保障公众的知情权 C．利用转基因技术还可以进行基因治疗，现在技术已经完全成熟 D．由于转基因生物的安全问题，国家应建立相应的评估及预警机制 【答案】C 【分析】转基因动物生产药物中基因来源是药用蛋白基因和乳腺组织特异性表达的启动子，成果是乳腺生物反应器。转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏原、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。 【详解】A、利用转基因工程技术可以使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”，如有人将α-抗胰蛋白酶基因转到羊体内生产α-抗胰蛋白酶，A正确； B、由于人们对基因药物持不同观点，所以应科学地认识和评估，保障公众的知情权，B正确； C、转基因技术可以进行基因治疗，但现在技术还不成熟，C错误； D、转基因生物的安全性包括食物安全、生物安全和环境安全问题，国家应该设立多环节、严谨的安全性评价机制及预警机制，D正确。 故选C。 10．转基因产品的安全性一直是人们关注的焦点。下列哪项是对待转基因技术的理性态度（　　） A．转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用，同时也存在一定风险 B．转基因技术是按照人们的意愿对生物进行的设计，不存在负面影响 C．大量引入国外转基因作物与本地近缘作物品种杂交 D．转基因技术如果被恐怖分子利用将可能导致人类灭绝，应停止转基因研究 【答案】A 【分析】转基因生物的安全性问题包括：（1）食物安全：滞后效应、出现过敏原、食物的营养成分改变等；（2）生物安全：基因扩散导致对生物多样性的威胁；（3）环境安全：对生态系统稳定性及环境的影响。 【详解】A、转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用，同时也存在一定风险，A正确； B、转基因技术存在一定的负面影响，B错误； C、大量引入国外转基因作物与本地近缘作物品种杂交，容易造成基因污染，是不理性的表现，C错误； D、转基因技术有其优点和缺点，应趋利避害，而不是停止转基因研究，D错误。 故选A。 11．下图为技术人员利用石榴进行传统发酵制作石榴酒和石榴醋的简要流程图。下列有关叙述正确的是（　　） A．去皮除隔膜后将石榴籽清洗干净，然后破碎榨汁 B．调整石榴汁的成分后，需将石榴汁装满发酵罐再接种酵母菌 C．石榴酒发酵过程中持续通入无菌空气可促进酵母菌产生酒精 D．制作石榴醋和石榴酒的过程中，发酵液的pH均会有所下降 【答案】D 【分析】1、果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是异养兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是18～25℃、前期需氧，后期不需氧。 2、果醋制作菌种是醋酸菌，属于原核细胞，适宜温度为30～35℃，需要持续通入氧气。 【详解】A、应先将石榴清洗干净再去皮除隔膜，在果汁中添加果胶酶，可分解果胶，提高出汁率，A错误； B、果酒发酵时，需要预留一定的空间，不能将发酵罐装满，否则发酵液容易溢出，B错误； C、酵母菌无氧呼吸产生酒精，发酵过程中应确保无氧环境，C错误； D、石榴酒发酵过程中，酵母菌产生酒精的同时还会产生二氧化碳，二氧化碳溶于发酵液中，使发酵液的pH下降，果醋发酵过程中，醋酸菌不断生成醋酸，使发酵液的pH下降，D正确。 故选D。 12．米醋是一种营养价值较高的调味品，《醒园录》中有“赤米不用舂，洗净蒸饭，拌曲发香，用水或用酒泼皆可发，……俟月余可用。如有发霉，用铁火针烧极红淬之。”的记载。下列有关米醋酿制的说法正确的是（    ） A．“不舂”保留稻壳的目的是为后续发酵提供菌种 B．米饭“拌曲”后要密封，有利于产生酒精和醋酸 C．“用水或用酒泼皆可发”，说明利用糖和乙醇都可以酿醋 D．为防止霉菌感染，米醋制作时温度应控制在30℃以下 【答案】C 【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。 【详解】A、“不舂”保留稻壳，稻壳的保留并非为了提供菌种，而是为了保护米粒在蒸煮过程中不被破坏，A错误； B、“拌曲”后密封，密封的目的是创造厌氧环境，促进酒精发酵，但醋酸发酵需要氧气，B错误； C、“用水或用酒泼皆可发”，说明米醋的酿制可以利用糖（通过水泼）或乙醇（通过酒泼）作为原料，C正确； D、米醋制作时温度是30-35℃，D错误。 故选C。 13．科学家将马铃薯和西红柿进行植物体细胞杂交，成功获得了杂种植株。下列分析正确的是（　　） A．可将植物细胞置于含纤维素酶和果胶酶的略高渗溶液中以获得原生质体 B．可用电融合法、高Ca2+-低pH融合法诱导原生质体融合 C．杂种细胞再分化的过程中需平衡激素的种类方可获得杂种植株 D．原生质体由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质构成 【答案】A 【分析】1、原生质层由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质构成。 2、植物细胞壁主要成分为纤维素和果胶，可将植物细胞置于含纤维素酶和果胶酶的等渗溶液（略高渗溶液）中以获得原生质体。 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，获得原生质体时需要用纤维素酶和果胶酶处理，原生质体在低渗溶液中会吸水膨胀甚至破裂，因此需要在略高渗溶液进行，A正确； B、原生质体融合可用高Ca2+－高pH融合法，B错误； C、生长素和细胞分裂素的比例会影响分化的方向，因此杂种细胞再分化的过程中需平衡激素的比例方可获得杂种植株，C错误； D、原生质层由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质构成，D错误。 故选A。 14．图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述错误的是（    ） A．步骤①常用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 B．步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C．原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D．台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养 【答案】B 【分析】植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 【详解】A、植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，步骤①添加纤维素酶或果胶酶去除细胞，其原理是酶的专一性，A正确； B、步骤②吸取原生质体放入等渗液中清洗，否则会导致原生质体吸水涨破，B错误； C、结合图示可知原生质体处于甘露醇和蔗糖溶液之间，因而可推测原生质体的密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间，C正确； D、台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养，染成蓝色的原生质体活性差或死亡，D正确。 故选B。 15．为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞染色体丢失的问题，研究者在单克隆抗体的制备过程中增加了一个步骤，如下图所示。除了抗原刺激之外，用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B淋巴细胞，并使之成为“染色体核型稳定”的细胞株。这样的细胞株能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。下列相关分析不合理的是（    ）    A．杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降 B．B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的淋巴结和脾脏等 C．骨髓瘤细胞应该无法在HAT选择培养基中存活 D．杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力 【答案】D 【分析】图示为单克隆抗体制备过程，除了抗原刺激之外，还用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B淋巴细胞，并使之成为“染色体核型稳定”的细胞株。该细胞株能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。 【详解】A、杂交瘤细胞染色体丢失可能引起细胞发生变异，进而导致抗体产生能力下降，A正确； B、脾、淋巴结和扁桃体是免疫细胞集中分布的场所，因此在制备单克隆抗体的过程中，B淋巴细胞可以来源于抗原刺激后的动物的淋巴结和脾脏等，B正确； C、由图示分析可知：在HAT选择培养基中，骨髓瘤细胞无法存活，C正确； D、本实验中EBV的作用是使B细胞染色体核型更稳定，而不是刺激B淋巴细胞分化成浆细胞产生抗体，所以该杂交瘤细胞不具有产生抗EBV抗体的能力，D错误。 故选D。 16．狂犬病病毒（RABV）具有较高的致死率，注射疫苗是预防狂犬病的最有效措施，目前主要采用生物反应器培养Vero细胞（非洲绿猴肾上皮细胞），扩增RABV，再纯化病毒等步骤制备狂犬病疫苗。下图表示培养过程测定的相应数值（培养一定时间后接种RABV，病毒滴度指单位体积培养液中病毒数量）。下列叙述不正确的是（    ）    A．应在无菌、无毒的环境中培养Vero细胞 B．换瓶培养时，需用胰蛋白酶处理Vero细胞 C．接种病毒的时间可能为培养Vero细胞的第4天 D．第六天细胞密度开始下降只与培养液有关 【答案】D 【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 【详解】A、培养动物细胞应在无菌、无毒的环境中，即Vero细胞的培养需要无菌、无毒环境，因为培养液中营养丰富，容易感染杂菌，A正确； B、换瓶培养时应用胰蛋白酶处理，使其分散成单个细胞制成单细胞悬液，B正确； C、细胞密度从第4天开始增加速率减慢，第6天时开始下降，说明从第6天开始病毒导致细胞裂解死亡，故接种病毒的时间可能为培养Vero细胞第4天，C正确； D、第六天细胞密度开始下降不只与培养液有关，还与病毒的侵染有关，D错误。 故选D。 17．逆转录PCR(RT-PCR）是以mRNA为模板逆转录形成DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增的技术。如图为利用RT-PCR扩增人乳铁蛋白基因的部分过程，相关叙述错误的是（    ） A．由于基因的选择性表达，人乳铁蛋白基因mRNA应从人乳腺细胞中提取获得 B．过程①②所需的酶分别是逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶，原料均为脱氧核苷酸 C．过程③获得的人乳铁蛋白基因不具有起始密码子、终止密码子的对应序列 D．RT-PCR中，引物P1、P2的长度会影响复性温度以及扩增产物的数量和纯度 【答案】C 【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。 【详解】A、由于基因的选择性表达，人乳铁蛋白基因只在人乳腺细胞中表达，则人乳铁蛋白基因mRNA应从人乳腺细胞中提取获得，A正确； B、过程①为逆转录过程，需要逆转录酶的参与，过程②为DNA的复制（利用PCR技术合成），需要耐高温的DNA聚合酶，这两个过程都是合成DNA链，需要的原料均为脱氧核苷酸，B正确； C、mRNA上含有起始密码子和终止密码子，则由mRNA逆转录获得的人乳铁蛋白基因具有起始密码子、终止密码子的对应序列，C错误； D、PCR扩增中，引物的长度会影响复性温度以及扩增产物的数量和纯度，引物长度越长，复性的温度越高，扩增的产物特异性越强，D正确。 故选C。 18．某质粒中氨苄青霉素抗性基因（AmpR），四环素抗性基因（TetR）和多种限制酶的识别位点如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．基因工程的载体也可选用噬菌体和动植物病毒 B．质粒和目的基因用ScaI和HindⅢ切割，用四环素进行筛选 C．质粒和目的基因用SalⅠ和SphⅠ切割，用氨苄青霉素进行筛选 D．质粒和目的基因用ScaⅠ和PUuⅠ切割，用四环素进行筛选 【答案】B 【分析】质粒中的氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因是标记基因，标记基因的作用是便于重组DNA分子的筛选。 【详解】A、基因工程的载体有质粒、动植物病毒和噬菌体，A正确； B、质粒和目的基因用ScaI和HindⅢ切割，会破坏所有的标记基因，用四环素无法进行筛选，B错误； C、质粒和目的基因用SalⅠ和SphⅠ切割，会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，可以用氨苄青霉素进行筛选，C正确； D、质粒和目的基因用ScaⅠ和PUuⅠ切割，不会破坏四环素抗性基因，但会破坏氨苄青霉素抗性基因，可以用四环素进行筛选，D正确。 故选B。 19．下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（    ）    A．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂 B．⑨计数得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较多 C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求 D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌 【答案】B 【分析】1、选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长； 2、鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同种类的微生物。 【详解】A、④和⑤所用培养基从物理性质分析，④是液体培养基，⑤是固体培养基，加有琼脂，A正确； B、⑨计数方法为稀释涂布平板法，只能统计活菌数，而细菌计数板计数法无论活菌还是死菌都统计在内，因此稀释涂布平板法统计得到的细菌数与用细菌计数板计数法得到的细菌数相比较少，B错误； C、该实验是为了分享得到纤维素分解菌，培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用纤维素的微生物才能生长繁殖，从而筛选出纤维素分解菌，此外还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求，C正确； D、当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌，D正确。 故选B。 20．花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。通过蛋白质电泳技术分析了亲本亟待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2所示。下列有关叙述正确的是（    ）    A．图1培育杂种植株所用的技术体现了细胞膜具有一定流动性原理和基因突变原理 B．②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是成功的标志 C．只考虑细胞两两融合，图1培育出的植株体细胞中最多含有72条染色体，减数分裂时最多可形成18个四分体 D．可将病菌悬浮液均匀喷施于图2中的3和5植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株 【答案】C 【分析】1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束；杂种植株的特征：具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质；植物体细胞杂交克服了远缘杂交不亲和的障碍。 2、根据图谱分析，4号和5号个体含有紫罗兰和花椰菜两种类型的蛋白质，说明是杂种细胞，而1、2、3号个体只有紫罗兰中的蛋白质，说明不是杂种细胞。 【详解】A、植物体细胞杂交技术将杂种细胞培养成完整植株，体现了植物细胞全能性；两个物种细胞的融合体现了细胞膜流动性原理和染色体变异原理，A错误； B、植物细胞不能用灭活病毒诱导细胞融合，杂交细胞再生出新的细胞壁是植物细胞融合成功的标志之一，发育成完整植株是植物体细胞杂交技术成功的标志，B错误； C、只考虑细胞两两融合，若两个花椰菜细胞融合则最多有36条染色体，在有丝分裂后期最多有72条染色体，C正确； D、根据图谱分析4号和5号个体含有紫罗兰和花椰菜两种类型的蛋白质，是杂种植株，可将病菌悬浮液均匀喷施于4、5号杂种植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株，D错误。 故选C。 21．基因组印记（通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达）阻碍了哺乳动物的“孤雌生殖”。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个第二极体注入修饰后的次级卵母细胞（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（    ） A．基因组印记会阻碍次级卵母细胞与精子或第二极体的结合 B．需对代孕母鼠进行同期发情处理后，再进行胚胎移植，受体对移植来的胚胎几乎不发生免疫排斥 C．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，所以其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同 D．移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化 【答案】B 【分析】题图分析，从卵泡中取出卵母细胞，再将经过甲基化处理的卵母细胞进行早期胚胎培养、胚胎移植等获得孤雌小鼠。表观遗传是指DNA序列不发生变化，但基因的表达却发生了可遗传的改变，即基因型未发生变化而表现型却发生了改变，如DNA的甲基化，甲基化的基因不能与RNA聚合酶结合，故无法进行转录产生mRNA，也就无法进行翻译，最终无法合成相应蛋白，从而抑制了基因的表达。 【详解】A、题干难以判断基因组印记是否会阻碍次级卵母细胞与精子或第二极体的结合，A错误； B、胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎或通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为个体的技术；胚胎移植的实质是早期胚胎在同种生理环境条件下空间位置的转移，为了保证胚胎移植的成功率需对代孕母鼠进行同期发情处理后，再进行胚胎移植，大量的研究已经证明，受体对移植来的胚胎几乎不发生免疫排斥反应，B正确； C、“孤雌小鼠”是由修饰后的次级卵母细胞和一个第二极体结合后发育形成的，同时由于配子在形成过程中会经历减数分裂的基因重组，或发生基因突变，将导致“孤雌小鼠”的基因型不一定与提供卵母细胞的雌鼠相同，C错误； D、移植后的囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化，D错误。 故选B。 22．蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应 的 DNA 片段结构示意图，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（　　）    A．为了使 PCR 技术获取的取蛛丝蛋白基因与质粒成功连接，应在设计的引物 3′端加限 制酶识别序列 B．若从该 DNA 片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏 2 个磷酸二酯键 C．若一个蛛丝蛋白基因扩增了4 次，则共消耗引物 32 个 D．在 PCR 仪中至少需经过 6 次循环才可获得 32 个符合要求的目的基因 【答案】D 【分析】PCR 反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链结合的2种引物，4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶；同时通过控制温度使 DNA复制在体外反复进行。扩增的过程是：目的基因DNA 受热变性后解为单链，引物与单链相应互补序列结合；然后以单链 DNA为模板，在 DNA聚合酶作用下进行延伸，即将4种脱氧核苷酸加到引物的3'端，如此重复循环多次。 【详解】A、为了使子链在DNA聚合酶的作用下由5′端向3′端延伸，应保证引物3′端与模板链碱基互补配对，所以限制酶识别序列只能加在引物的5′端，A错误； B、若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，DNA每条链上会破坏2个磷酸二酯键，共会破坏4个磷酸二酯键，B错误； C、利用PCR扩增一个基因要加入2个引物，若一个蛛丝蛋白基因扩增了4次，则加入的引物数为24×2-2=30个，C错误； D、如图所示，    设X基因为目的基因。经过第一轮复制以亲代DNA的两条链做模板，可以得到①和②两种DNA；经过第二轮复制可以得到①和③、②和④；经过第三轮复制可以得到①和③、③和⑤、②和④、④和⑤；第四轮复制得到16个DNA分子，即①和③、2个③和2个⑤、②和④、2个④和2个⑤、第三轮的2个⑤得到4个⑤（统计为①、②、3个③、3个④、8个⑤）；第五轮复制得到32个DNA分子，即①和③、②和④、3个③和3个⑤、3个④和3个⑤、第四轮的8个⑤得16个⑤（统计为①、②、4个③、4个④、22个⑤；⑤为目的基因即还未获得32个目的基因），第六轮复制得64个DNA分子，即①和③、②和④、4个③和4个⑤、4个④和4个⑤、第五轮的22个⑤得44个⑤（统计为①、②、5个③、5个④、52个⑤；⑤为目的基因，即此时获得32以上符合条件的目的基因），综上所述，需要至少6次循环可获得32个符合要求的目的基因，D正确。 故选D。 23．从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→富集培养（使菌体数量增多）→纯种分离→性能测定，如图a、b是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述正确的是（    ） A．可使用液体培养基进行富集培养 B．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌 C．获得图a所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌3次 D．利用图b计算出样品中菌体浓度为5．85×108个/ml，则接种稀释液的稀释倍数为107倍 【答案】A 【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、与使用固体培养基相比，使用液体培养基培养菌种时，菌体可以分布在整个培养基中，可充分利用其中的营养物质，提高培养液中氧气含量，菌体数量增加的更快，A正确； B、需从采集的样品分离得到目的菌种，不能对样品进行灭菌，B错误； C、图a所示结果的接种次数为3次，接种环需灭菌4次，C错误； D、利用稀释涂布平板法计算菌体浓度的方法为菌落数÷接种液体积×稀释倍数，而用于计数的平板的菌落数应在30-300之间，因此58.5个÷0.1ml×稀释倍数=5.85×108个/ml，计算得出稀释倍数为106倍，D错误。 故选A。 24．体外受精技术是提高动物繁殖能力的有效措施，该技术还可为胚胎移植提供可用的胚胎。下列关于体外受精和胚胎移植的叙述，错误的是（    ） A．在精子的刺激下，卵子完成减数分裂II，排出第二极体后形成雌原核 B．精子入卵后细胞膜会迅速发生生理反应，阻止其他精子进入卵细胞 C．对奶牛胚胎进行分割时，应选择发育良好、形态正常的原肠胚进行均等分割 D．“设计试管婴儿”利用了体外受精技术、胚胎移植技术和遗传学诊断技术 【答案】C 【分析】体外受精包括精子的采集和获能、卵母细胞的采集和培养、体外受精，该技术产生的动物称为试管动物。 【详解】AB、体内受精时，当精子触及卵细胞膜的瞬间，透明带会迅速产生生理反应阻止后来的精子进入；精子入卵后卵子完成减 数分裂Ⅱ、排出第二极体、形成雌原核，AB正确； C、对奶牛胚胎进行分割时，应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚进行均等分割，不能选择原肠胚，因为原肠胚高度分化，C错误； D、设计试管婴儿是指体外受精形成的胚胎在植入母体孕育前，根据人们的需要，将胚胎的一个细胞取出，进行某些基因检测， 设计试管婴儿利用了体外受精技术、胚胎移植技术和植入前胚胎遗传学诊断技术，D正确。 故选C。 25．研究发现，大豆GmNF-YA19基因在干旱胁迫中有响应。科研人员利用PCR扩增GmNF-YA19基因，构建GmNF-YA19基因表达载体并转化烟草，实验过程如图1、2所示下列说法错误的是（    ）    A．PCR扩增GmNF-YA19基因的前提是根据已知核苷酸序列合成两种引物 B．为获得能正确表达目的基因的重组质粒，应选用限制酶KpnI、EcoRI进行切割 C．终止子为一段DNA序列，其作用是使转录在所需要的地方停下来 D．重组质粒转化烟草后，可使用含氨苄青霉素的培养基来筛选目的细胞 【答案】B 【分析】基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 【详解】A、PCR扩增GmNF-YA19基因的前提是根据已知核苷酸序列合成两种引物，因为子链的延伸方式在引物的3'端，A正确； B、根据图中信息，在质粒的启动子和终止子中间含有的限制酶为PvuⅡ、Kpn I和EcoR I三种限制酶切割位点，由于Kpn I在质粒中不止一个识别位点，因此最好选用PvuⅡ和EcoR I进行切割，且在目的基因的两端也存在着两种酶的识别位点，即选用PvuⅡ和EcoR I两种限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体，这样可以保证目的基因和质粒正向连接、避免发生自身环，B错误； C、终止子是位于基因末端的一段特殊的DNA序列，其作用是使转录过程在所需要的地方停下来，C正确； D、重组质粒转化烟草后，重组质粒中含有抗氨苄青霉素的基因，该基因可作为标记基因，因而使用含氨苄青霉素的培养基来筛选成功导入重组质粒的目的细胞，D正确。 故选B。 第Ⅱ卷 二、非选择题：本题共4小题，共50分。 26（12分）．根据相关知识，回答下列问题： (1)以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程如图1所示，请分析回答： ①图1中甲过程利用的微生物是 ，其细胞结构中 （填“含有”或“不含”）线粒体。甲过程发酵温度控制在18~30℃，经过10～12d，样液中是否含有酒精，可以用 来检验，其原理是在 条件下，该物质和酒精反应呈现 色。 ②酵母菌产生果酒的反应式 ③利用苹果酒制作苹果醋的反应简式是 。 (2)与获得单菌落的培养基相比，对土壤微生物进行扩大培养时，所配制的培养基中不能有 。 (3)市场上购买的真空包装酸菜，在没有漏气的状态下发生了“胀袋”现象，同学怀疑是杂菌污染导致的，同学B怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，你支持谁的观点并说明理由： 。 (4)科研人员从土壤中分离出来一种能降解农药S的微生物M，用于修复被农药S污染的土壤。为了进一步探究微生物M的降解能力与农药S浓度的关系，请简要写出实验设计思路： 。 【答案】(1) 酵母菌 含有 重铬酸钾 酸性 灰绿 C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量 C2H5OH＋O2 CH3COOH＋H2O＋能量 (2)琼脂/凝固剂 (3)支持A的观点，乳酸菌代谢过程中不产生气体 (4)在不同浓度的农药S溶液中，接种相同量的微生物M，一定时间后测定农药S的剩余量，并计算出降解率 【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。 2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】（1）①图1甲过程是制作苹果酒，即酒精发酵，因此使用的微生物是酵母菌；酵母菌属于真核生物，含有线粒体；检测酒精可以使用酸性重铬酸钾溶液进行检测；其原理是在酸性条件下；该物质和酒精反应会呈现出从橙色变为灰绿色的变化； ②酵母菌产生果酒的反应式为：C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量； ③利用苹果酒制作苹果醋的反应简式为：C2H5OH＋O2 CH3COOH＋H2O＋能量。 （2）与获得单菌落的培养基相比，对土壤微生物进行扩大培养时，采用的是液体培养基，故所配制的培养基中不能有琼脂（凝固剂）。 （3）市场上购买的真空包装酸菜，在没有漏气的状态下发生了“胀袋”现象，说明有气体产生，乳酸菌代谢过程中不产生气体，因此支持A同学的观点。 （4）为了进一步探究微生物M的降解能力与农药S浓度的关系，可在不同浓度的农药S溶液中，接种相同量的微生物M，一定时间后测定农药S的剩余量，并计算出降解率，以此来判断微生物M的降解能力。 27（12分）．白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞染色体数目分别为20、18。“白菜甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强、易于贮藏等优点。如图为“白菜甘蓝”的培育过程，请回答问题。 (1)植物体细胞杂交技术培育“白菜甘蓝”， （能/不能）用白菜、甘蓝体细胞直接融合。 (2)由原生质体A、B形成原生质体C的过程中，可使用 （写出2种即可）化学法诱导融合，该融合过程体现了细胞膜具有 性。 (3)由细胞D得到愈伤组织的过程叫作 ；由愈伤组织得到根、芽等器官的过程叫作 。 (4)由细胞D得到一个完整的杂种植株，采用的细胞工程技术是 ，该过程体现了细胞D具有 性。 (5)分别取白菜、甘蓝的花粉经细胞融合培育出二倍体“白菜甘蓝”，该植株的大多数体细胞中染色体数目为 。这种二倍体“白菜甘蓝”植株高度不育，可用化学试剂 （填试剂名称）诱导产生可育的四倍体“白菜甘蓝”，该变异类型属于 （从下列选项中选择填空）。 a.基因突变        b.基因重组 c.染色体结构变异  d.染色体数目变异 【答案】(1)不能 (2) 聚乙二醇诱导法、高Ca2+-高pH诱导法 一定的流动（性） (3) 脱分化 再分化 (4) 植物组织培养（或组培） 全能（性） (5) 19 秋水仙素 d 【分析】植物体细胞杂交过程： 先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得原生质体，借助物理或化学方法诱导原生质体融合，得到的杂种细胞再经过诱导形成愈伤组织，并进一步发育成完整植株。 【详解】（1）植物细胞存在细胞壁，不能直接融合。 （2）化学法使用特定的化学试剂诱导原生质体融合，常用的试剂包括：  ‌聚乙二醇（PEG）‌：PEG能与水分子形成氢键，导致细胞脱水，改变质膜结构，从而引起细胞融合。其优点是成本低，但可能对细胞有毒害。‌ ‌硝酸钠法‌：通过改变离子浓度促进原生质体融合。‌ ‌高pH-高Ca2+法‌：利用高pH和高钙离子浓度诱导融合；由于细胞膜具有一定的流动性，因此原生质体能融合。 （3）由细胞D得到愈伤组织的过程叫作脱分化，由愈伤组织得到根、芽等器官的过程叫再分化。 （4） 由细胞D得到一个完整的杂种植株，采用的技术是植物组织培养技术，由细胞获得个体，体现细胞具有全能性。 （5）来自白菜的花粉含有10条染色体，来自甘蓝的花粉含有9条染色体，经花粉培育的二倍体“白菜甘蓝”植株体细胞含有19条染色体；秋水仙素抑制纺锤体的形成，可使细胞内的染色体数目加倍，从而可育；该变异类型属于染色体数目变异，故选d。 28（13分）．双特异性抗体（BsAb）是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原相结合，双特异性抗体在自然状态下并不存在，可以通过细胞融合技术人工制备实现。长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1是科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图示。回答下列问题。 (1)在体外进行动物细胞培养时为了维持培养液的pH，应该将细胞置于含有 的混合气体的CO2培养箱中培养，同时为了防止有害代谢物的积累，可采用 的方法，以便清除代谢物。 (2)用癌胚抗原作为抗原注射小鼠的目的是 ，一段时间后，将提取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合，该过程可采用的不同于植物原生质体融合的诱导因素是 。 (3)②、③、④存活的细胞中，只含有杂交瘤细胞的是 ，④过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，对其进行 和抗体检测，经多次筛选，其目的是筛选获得 。 (4)图1注射长春碱后，经筛选后可获取单克隆杂交一杂交瘤细胞，结合所学知识分析方框内相关的动物细胞工程技术有 。 (5)图1过程获得的双特异性抗体能结合的抗原有 ，该双特异性单克隆抗体能够准确抗肿瘤的作用机理 。 【答案】(1) 95%空气和5%CO2 定期更换培养液 (2) 对小鼠进行免疫，使其产生相应的B淋巴细胞 灭活病毒 (3) ③④ 克隆化培养 既能无限增殖，又能产生相应抗体的杂交瘤细胞 (4)动物细胞融合、动物细胞培养 (5) 癌胚抗原和长春碱抗原 双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，精准杀死癌细胞 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养,即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】（1）动物细胞培养需要一定的气体环境，即在含有95%空气和5 % CO2的混合气体的CO2培养箱中进行。在动物细胞培养的过程中，为防止有害代谢物的积累，需要定期更换培养液。 （2）抗原可激发机体的特异性免疫过程，注射癌胚抗原是为了刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞；在诱导细胞融合时不同于诱导植物原生质体融合的诱导因素是灭活的病毒。 （3）HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的，未融合的（B细胞或骨髓瘤细胞）和同种融合的细胞（B细胞+B细胞，骨髓瘤细胞+骨髓瘤细胞）不能在该培养基上生长，能生长的为杂交瘤细胞（B细胞+骨髓瘤细胞，经选择性培养获得的③细胞是杂交瘤细胞，由③细胞到获得细胞还需经过④过程克隆化培养和专一抗体检测剂，筛选出既能无限增殖，又能产生抗癌胚抗原抗体的杂交瘤细胞。 （4）图中过程运用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术。 （5）图中对小鼠进行了癌胚抗原和长春碱的免疫，所以小鼠可以和癌胚抗原和长春碱抗原结合。双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，精准杀死癌细胞，对人体的副作用更小。 29（13分）．人的血消蛋白（HSA）具有重要的医用价值，研究人员欲用乳腺生物反应器来大量生产HSA。图1为HSA基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，其中Amp表示氨苄青霉素抗性基因，Neo’表示新霉素抗性基因，箭头表示切割形成末端完全不同的4种限制酶的切割位点。HSA只能从血浆中制备，以基因工程技术获取重组HSA(rHSA）的三条途径如图2所示。请回答下列问题：    (1)人工构建pBR322质粒除了含特定限制酶切割位点、标记基因、复制原点外，还必须有 （答出两点）等。 (2)据图1分析，在构建基因表达载体时，选择限制酶 切割质粒和目的基因，可提高目的基因和载体的正确连接率。双酶切法的优点之一是避免质粒与目的基因之间的 。 (3)为了排除普通受体细胞（未导入质粒）、空质粒受体细胞（导入pBR322质粒而非重组质粒）的干扰，目的基因导入后进行了进一步筛选：制备甲、乙两种培养基，甲培养基中有新霉素，乙培养基中有氨苄青霉素，含重组质粒的受体细胞在甲培养基上 （从“能”“不能”中选填）生存，在乙培养基上 ’.（从“能”“不能”中选填）生存。 (4)将农杆菌与水稻受体细胞混合后共同培养，旨在让Ti质粒的 进入水稻受体细胞。为检测目的基因的表达情况，可提取受体细胞的蛋白质，用 进行杂交实验。 (5)据下图分析，利用PCR技术获取HSA基因时，应选择甲、乙、丙、丁四种引物中的 ，需扩增 次后得到HSA目的基因。    (6)科学家培养出一种转基因羊，其膀胱上皮细胞可以合成人血清白蛋白并分泌到尿液中。其培育方法中将重组质粒通过 法导入山羊的 细胞。与乳腺生物反应器相比，膀胱生物反应器不受 限制，受体来源更广泛。 【答案】(1)启动子、终止子 (2) EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ 反向连接 (3) 能 不能 (4) T-DNA 抗人血清蛋白（HSA）的抗体 (5) 乙、丙 3 (6) 显微注射 受精卵 性别和年龄 【分析】基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 （4）目的基因的检测与鉴定。 【详解】（1）基因工程的关键步骤是构建基因表达载体，基因表达载体主要由启动子、目的基因、标记基因和终止子组成，因此人工构建pBR322质粒除了含特定限制酶切割位点、标记基因、复制原点外，还必须有启动子、终止子等。 （2）据图1可知，BamH Ⅰ会切割目的基因，Tth Ⅲ 1会切割质粒中的复制原点，而EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ这两种酶能切割质粒和目的基因，不破坏抗性基因和复制原点等，且能得到不同的黏性末端，避免质粒和目的基因自连及反向连接，因此在构建基因表达载体时，选择EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ作为切割质粒和目的基因的限制酶可提高目的基因和载体的正确连接效率。 （3）分析题图1可知，Pst I破坏了氨苄青霉素抗性基因（Ampr），构建的重组质粒无氨苄青霉素抗性，但具有新霉素抗性基因，而甲培养基中含有新霉素，因此，含重组质粒的受体细胞能在甲培养基上能生存，乙培养基中含有氨苄青霉素，能杀死含有目的基因的受体细胞，不能在乙培养基中生存。 （4）农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上，所以将农杆菌与水稻受体细胞混合后共同培养，旨在让Ti质粒的T-DNA进入水稻受体细胞，目的基因片段作为探针检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体DNA上。为检测目的基因的表达情况，可提取受体细胞的蛋白质，利用原理是抗原-抗体特异性结合，所以用抗人血清蛋白（HSA）的抗体进行杂交实验来检测血清蛋白（HSA）。 （5）PCR时，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的，因此据图分析，利用PCR技术获取HSA基因时，应选择乙、丙作为引物。扩增3次后得到HSA目的基因（第一次循环扩增出来的新片段很长，第二次循环以新的长片段为模板进行，但新片段的一端是引物开头的，所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度，但只是一条链，所以还不能分离出目的基因。第三次循环，当以第二次循环得到的新片段为模板时，因为这个片段的长度就是需要扩增的长度，当第三次循环完成时，这个片段是需要的长度，且是双链DNA，这就得到了需要的目的基因了）。 （6）将重组质粒通过显微注射法导入动物的受体细胞时，常选用受精卵作为受体细胞，主要原因是动物受精卵具有发育的全能性，由于生物界共用一套遗传密码子，所以人血清白蛋白基因能在山羊膀胱上皮细胞中表达出相应的蛋白质。“乳腺细胞生物反应器”只能从哺乳期雌性奶牛的乳汁中获取产物，与“乳腺细胞生物反应器”相比，“膀胱生物反应器”的优点是雌性和雄性奶牛的尿液中都可提取到产物，且不受性别、年龄等限制，因而受体来源更广泛。 1 学科网（北京）股份有限公司 $$