实验题高频考点归纳练-2025年高考生物二轮复习备考

实验题 1．帕金森病(简称PD)是一种影响中枢神经系统的慢性神经退行性疾病，主要影响运动神经系统。它的症状通常随年龄增长缓慢出现，早期症状为静止性震颤、肌肉僵直、运动迟缓和步态异常等。引起PD的原因主要是多巴胺能神经元内外神经递质浓度异常导致其损伤或死亡。下图是由多巴胺能神经元构成的突触，回答下列问题： (1)上图中神经递质是一种 (填“兴奋性”或“抑制性”)神经递质，发挥作用后产生愉悦感的部位是 。据图分析正常人体避免多巴胺能神经元突触前膜两侧神经递质浓度异常的机制是 。 (2)科研人员为研究药物A是否对帕金森有治疗效果，用M物质制备了PD模型大鼠并分组处理，设计了如下实验： 实验一 实验二 实验三 M物质 - + + 药物A - - + 检测指标 ★★★★★★ ★★ ★★★★ 注意：“+”表示给予该处理，“-”表示未给予该处理注，“★”数量代表检测指标的数量 ①上述实验的检测指标是 。 ②实验结论是： 。 (3)进一步研究发现A药物通过作用于星形胶质细胞发挥作用，可能通过以下两条途径。途径一：通过产生神经营养因子C与多巴胺能神经元上的C受体结合发挥保护作用，途径二：通过P蛋白与多巴胺能神经元之间形成连接发挥保护作用。现提供PD模型大鼠、C受体的抗体、P蛋白的抑制剂、生理盐水等实验材料，设计实验探究A药物发挥作用的通路机制。 ①实验思路：将生理状态相同的PD模型大鼠随机均分为三组，甲、乙组分别用 处理，丙组用5mL药物A和等量生理盐水处理，在相同且适宜的条件下，培养一段时间后，检测相应指标。 ②实验结果与结论：若 ，则药物A通过途径一和途径二起作用。 2．药物性肝损伤（DILI）是指由药物或其代谢产物引起的肝脏损害，是药物不良反应中的重要类型，对乙酰氨基酚（退烧药）是导致DILI常见药物之一。致病机制如图所示，“+”表示促进。回答下列问题： (1)肝脏对于维持人体正常运转起着至关重要的作用，当人处于饥饿状态时，人体细胞产生 （至少写两种激素）作用于肝，促进 ，以维持血糖平衡。 (2)图示过程中机体发生的免疫反应有 ，B细胞活化的条件是 。途径3可导致受损伤的肝细胞损伤程度进一步加重，据图分析其机理是 。 (3)丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）主要分布在肝细胞内，临床上常以这两种酶在血液中含量作为肝脏功能的检测指标。有文献指出，人参皂苷能显著减轻药物、酒精等引起的肝损伤，改善肝功能指标。设计实验探究人参皂苷是否具有此作用，写出实验思路 。实验材料：生理状态相同的健康小鼠若干只、CCl4溶液（肝毒性药物）、人参皂苷溶液、生理盐水、注射器等其他仪器设备。 3．帕金森病是常见的中枢神经系统疾病。酪氨酸羟化酶在帕金森病中起着关键作用，其表达水平的下降与帕金森病的病理过程密切相关。当前研究发现由干细胞分泌的外泌体对该病有一定的治疗作用，回答下列问题。    (1)如图所示，外泌体是一类包含有复杂成分的小膜泡，干细胞分泌外泌体的方式为 ，这种方式体现了细胞膜具有 的结构特点。外泌体与其他细胞膜上的 结合后，将信息传递给靶细胞，发挥调节作用。 (2)为验证干细胞分泌的外泌体对帕金森病有一定的治疗作用，根据以下材料和用具，完善实验思路，设计实验记录表。 材料和用具：正常小鼠若干只，生理盐水配制的MPTP溶液（腹腔注射，用于制备急性帕金森小鼠模型），缓冲液配制的外泌体溶液（静脉注射），生理盐水，缓冲液等。 （要求与说明：实验中涉及的剂量不作具体要求。旋转试验可用于评估小鼠神经系统的功能，其结果可用转圈数进行表示。） ①完善实验思路： 将45只正常小鼠随机分为A、B、C三组，每组15只，其中B、C两组 ，制备成急性帕金森病小鼠模型； A组、B组 ，C组 。 将小鼠置于相同且适宜的条件下饲养，并在T1、T2、T3天， 。 进行数据的统计与分析。 ②设计一张表格，用于记录实验数据。 。 ③实验结果表明，使用外泌体治疗后，在一定时间范围内帕金森病小鼠转圈数明显减少，说明外泌体对帕金森病有一定的治疗作用。请结合信息预测A、B、C三组小鼠体内酪氨酸羟化酶的表达量大小： 。结合上述研究，除注射外泌体外，请再提出1种可能的治疗帕金森病的思路： 。 4．在日光温室的冬、春季栽培中，供应严重不足。为探究不同浓度对温室番茄光合作用的影响，设置了的4组实验，浓度分别为400、600、800、1000μmol/mol。自11月3日番茄幼苗定植后，分别在不同生育期（苗期、开花期和成熟期）对叶片的相关指标进行测定，结果如图所示。 回答下列问题： (1)气孔导度表示气孔张开的程度，会影响呼吸作用、 （写出两点）等生理过程。气孔导度增加有利于进入叶肉细胞合成为三碳酸。在适宜条件下，三碳酸还原形成12个三碳糖，将再生形成 个五碳糖，此再生过程的意义是 。 (2)该实验中可变因素是 。据图可知，番茄叶片在不同生育期中 均随二氧化碳浓度的升高而增大。已知水分利用率用Pn/Tr表示，由图推测， （填“苗期”、“开花期”或“成熟期”）的 组对水分的利用率最高。 (3)采摘后的番茄仍会持续进行高强度呼吸作用，需及时在 （写出两点）条件下储存。 5．榕树生长期间枝叶繁茂，能够形成一个天然的遮阳伞，因此在重庆大街小巷种植普遍。科研人员就榕树及其树上昆虫进行了系列研究，蓟马是榕属植物的一种害虫，目前发现榕小蜂是榕树唯一的传粉昆虫，并以花序为其幼体专一的栖息地和食物来源。 (1)蓟马集群分布于叶片长成的瘤状物里，吸食幼芽的汁液生存，蓟马同化量去向有 ，根据蓟马的分布特点，现用样方法统计其种群密度，应如何改进相关操作可以尽量减小实验误差？ (2)榕小蜂和榕树的种间关系是 。关于榕树和榕小蜂的叙述，正确的是 。 A．榕树可以向榕小蜂传递化学信息，促进种群繁衍 B．榕树与榕小蜂协同进化，使两者的基因频率发生定向改变 C．高低错落的榕树构成了群落的垂直结构 D．依据能量传递规律，榕小蜂可获得榕树同化量的10%～20% (3)为研究蓟马对盆栽榕树挥发物的行为反应，研究人员使用下图甲所示Y形嗅觉仪开展实验。 ①选取生理状态相似且健康的三种盆栽榕树，用保鲜膜将盆栽密封，分别放置于玻璃集气罐中，以收集三种榕树的挥发物。 ②将上述装置置于黑暗环境下，且正上方均放置40W日光灯，以避免光照不一致对实验结果的影响。 ③分别在Y形嗅觉仪AB两侧的样品瓶中放入收集到的待测气体，并将饥饿处理12h的蓟马释放入Y形管基部管入口，统计爬向不同管的蓟马数量。每组处理观察60只蓟马，每只蓟马在实验中只使用1次，每测试10只更换Y型管并调换味源方位一次，目的是 。 ④图乙为实验结果，由此可知，蓟马对三种盆栽榕树挥发物的趋向性由大到小依次为 。 6．生长素及其极性运输在植物分枝或分蘖发生过程中有着极其重要的调节作用。某实验小组利用水稻进行相关实验，用不同磷浓度[低磷（LP，10μmol/L）和正常供磷 及外源萘乙酸（NAA）、生长素极性运输抑制剂 NPA（也可抑制NAA的极性运输）处理一段时间后，观察水稻的分蘖数，结果如图所示。请回答下列问题： (1)生长素可合成于植物顶端完全展开的叶片中，其极性运输能够抑制侧芽的生长，极性运输是一种 （填跨膜运输方式），抑制侧芽生长的原因是 。 (2)图a结果说明 。 (3)通过比较 组，可推测在低磷胁迫下，除了生长素之外，可能存在其他因素抑制水稻分蘖的发生。 (4)结合图a和图 b 说明，与正常供磷处理相比，低磷胁迫 （填“促进”或“抑制”）了水稻体内生长素的极性运输。 7．茄子植株中花青素的合成由 D/d、R/r和Y/y三对等位基因共同控制，含花青素的茄子呈现紫红色。研究人员将非紫红果甲和非紫红果乙进行杂交，F1中果实全为紫红果，F2中紫红果与非紫红果的分离比为27：37。回答下列问题： (1)根据杂交实验结果分析，F1中紫红果的基因型为 ，F2中非紫红果的基因型有 种。在F1自交过程中，减数分裂形成配子时，D/d、R/r和Y/y这三对基因的分离和组合是否会互相干扰?判断依据是 。 (2)为分析基因对茄子果色遗传调控的分子基础，研究人员发现基因D突变成d后，其编码蛋白质的氨基酸数目减少，据基因表达原理分析，导致基因d控制合成的蛋白质中氨基酸数目减少的可能原因是 。 (3)研究人员发现，D基因对花青素的合成调控具有组织特异性，即其能调控果皮中花青素的合成，对花中花青素的合成没有影响。在上述实验中，亲本花色均为白色，F2中紫花与白花的分离比为9：7，据此写出亲本可能的基因型组合（包括三对等位基因）有 。 8．研究人员利用基因工程的方法将油料作物紫苏的DGAT1基因导入四尾栅藻（操作过程如下图所示），获得转基因的产油微藻。利用地热废水培养该藻，在生产生物柴油的同时，还能治理地热废水。请回答下列问题： (1)PCR 技术的原理是 ，PCR 反应缓冲液中一般要添加Mg2+原因是 。 (2)将DGAT1基因与pBH21构建基因表达载体时，需在DGAT1基因的两端添加限制酶 的识别序列。 (3)启动子往往具有物种特异性，在载体pBH21质粒中插入紫苏DGAT1基因，其上游启动子应选择 （填“紫苏 DGAT1基因”“大肠杆菌”或“四尾栅藻”）的启动子。对获得的转基因四尾栅藻进行不同的分子水平检测，可采用的技术有 （答出2种）。 (4)为检测转基因四尾栅藻对地热废水的治理能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表。 表培养转基因四尾栅藻的地热废水培养基各项指标测定结果 各项指标 总氮/（mg·L⁻¹） 总磷/（mg·L⁻¹） 氟化物/（mg·L⁻¹） 初始 23.2 4.32 4.56 培养转基因四尾栅藻 11天后 1.9 0.45 0.84 该实验不能说明转DGAT1基因显著提高了四尾栅藻的去污能力。请进一步完善实验设计： 。 参考答案 1．(1) 兴奋性 大脑皮层 利用多巴胺运载体将多巴胺转运回神经元内，降低突触间隙中多巴胺浓度，利用单胺运载体将细胞质中的多巴胺转运到突触小泡中降低细胞质中多巴胺浓度 (2) (正常)多巴胺能神经元的数量 药物A对帕金森病有治疗效果 (3) 5mL的A药物和适量C受体抗体，5mL的A药物和适量P蛋白抑制剂 甲、乙两组的多巴胺能神经元的数量均少于丙组 （1）据图分析可知，多巴胺作为神经递质，与突触后膜上的特异性受体结合，使突触后膜的通透性发生改变，Na⁺通道开放，Na⁺内流，从而产生动作电位，上图中神经递质是一种兴奋性神经递质，发挥作用后产生愉悦感的部位是大脑皮层。据图可知，利用多巴胺运载体将多巴胺转运回神经元内，降低突触间隙中多巴胺浓度，利用单胺运载体将细胞质中的多巴胺转运到突触小泡中降低细胞质中多巴胺浓度，从而使正常人体避免多巴胺能神经元突触前膜两侧神经递质浓度异常。 （2）①据题分析，引起PD的原因主要是多巴胺能神经元内外神经递质浓度异常导致其损伤或死亡。上述实验的检测指标是(正常)多巴胺能神经元的数量。 ②分析表可知，实验一为正常大鼠，属于对照组，正常多巴胺能神经元数量较多，而实验二用M物质制备了PD模型大鼠，没有使用药物A，正常多巴胺能神经元数量较少，实验三用M物质制备了PD模型大鼠，使用药物A，正常多巴胺能神经元数量比实验二多，比实验一少，因此，该实验结论是药物A对帕金森病有治疗效果。 （3）本实验的目的是探究A药物发挥作用的途径机制，即A药物是通过途径一，还是途径二起作用，则实验的自变量为途径存在的不同类型，因变量为多巴胺能神经元的数量。 ①实验思路：将生理状态相同的PD模型大鼠随机均分为三组，甲、乙组分别用5mL的A药物和适量C受体抗体，5mL的A药物和适量P蛋白抑制剂处理，作为实验组，丙组用5mL药物A和等量生理盐水处理，作为对照组，在相同且适宜的条件下，培养一段时间后，检测多巴胺能神经元的数量。 ②若药物A通过途径一和途径二起作用，实验组（甲和乙）中A药物起不到作用，故实验结果为甲、乙两组的多巴胺能神经元的数量均少于丙组。 2．(1) 胰高血糖素、肾上腺素、甲状腺激素、糖皮质激素（任写2种即可） 肝糖原分解成葡萄糖、非糖物质转变成糖 (2) 细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫（或：特异性免疫和非特异性免疫） 药物-蛋白复合物、代谢物作为抗原直接和B细胞接触，辅助性T细胞表面的特定分子发生变化并与B细胞结合，同时辅助性T细胞分泌细胞因子 损伤肝细胞释放的损伤分子又促进损伤肝细胞释放更多的损伤分子，损伤分子激活中性粒细胞攻击肝脏 (3)将生理状态相同的健康小鼠均分成甲、乙两组，用等量的CCl4溶液处理两组的小鼠，一段时间后采血检测ALT和AST含量；用适量的人参皂苷溶液处理甲组小鼠，等量的生理盐水处理乙组小鼠，一段时间后再次采血检测ALT和AST含量，比较两次的ALT和AST含量。 （1）当人处于饥饿状态时，人体细胞产生的激素包括胰高血糖素、肾上腺素、甲状腺激素、糖皮质激素​，作用于肝脏，促进肝糖原分解成葡萄糖、非糖物质转变成糖，以维持血糖平衡。 （2）图示过程中机体发生的免疫反应有 体液免疫​（B细胞活化、抗体分泌）、​细胞免疫​（T细胞活化、细胞毒性T细胞杀伤靶细胞）和和非特异性免疫（巨噬细胞吞噬DILI）。B细胞活化的条件是药物-蛋白复合物、代谢物作为抗原直接和B细胞接触，辅助性T细胞表面的特定分子发生变化并与B细胞结合，同时辅助性T细胞分泌细胞因子。途径3可导致受损伤的肝细胞损伤程度进一步加重，原因是损伤肝细胞释放的损伤分子又促进损伤肝细胞释放更多的损伤分子，损伤分子激活中性粒细胞攻击肝脏。 （3）丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）在血液中含量作为肝脏功能的检测指标。人参皂苷能显著减轻药物、酒精等引起的肝损伤，改善肝功能指标。设计实验探究人参皂苷是否具有此作用，自变量为是否使用人参皂苷，因变量为丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）的含量。故设计思路为将生理状态相同的健康小鼠均分成甲、乙两组，用等量的CCl4溶液处理两组的小鼠，一段时间后采血检测ALT和AST含量；用适量的人参皂苷溶液处理甲组小鼠，等量的生理盐水处理乙组小鼠，一段时间后再次采血检测ALT和AST含量，比较两次的ALT和AST含量。 3．(1) 胞吐 一定的流动性 受体 (2) 腹腔注射MPTP溶液 腹腔注射生理盐水 静脉注射外泌体溶液 对每组小鼠进行旋转实验，记录转圈数 A组 > C组 > B组 通过基因治疗提高酪氨酸羟化酶基因的表达量 （1）外泌体是一类包含有复杂成分的小膜泡，外泌体通过胞吐释放，体现细胞膜具有一定的流动性；外泌体通过膜表面配体与靶细胞受体结合传递信息，发挥调节作用。 （2）①根据题意信息可知，为了验证干细胞分泌的外泌体对帕金森病有一定的治疗作用，可以将45只正常小鼠随机分为A、B、C三组，每组15只，其中B、C两组腹腔注射MPTP溶液，制备成急性帕金森病小鼠模型。 ②A组腹腔注射生理盐水（正常对照），B组腹腔注射生理盐水（模型对照），C组腹腔注射缓冲液配制的外泌体溶液（治疗组）。将小鼠置于相同且适宜条件下饲养，并在T1、T2、T3天进行旋转试验，记录各组小鼠的转圈数。由此设计表格可以记录实验数据， 。 ③因为帕金森模型（B组）酶表达下降，外泌体治疗（C组）部分恢复，正常组（A组）最高。所以预测酪氨酸羟化酶表达量为A组 > C组 > B组 。通过基因治疗提高酪氨酸羟化酶基因的表达量可治疗帕金森病。 4．(1) 蒸腾作用、光合作用 6 保证卡尔文循环不断进行 (2) 不同二氧化碳浓度和不同生育期 净光合速率 成熟期 A3浓度下 (3)(零上)低温、低氧、适宜湿度 （1）气孔是植物与外界进行气体交换的通道，气孔导度表示气孔张开的程度，气孔张开有利于二氧化碳进入叶肉细胞进行光合作用，也有利于氧气进入叶肉细胞进行有氧呼吸，同时水分会通过气孔以蒸腾作用的形式散失到外界。所以气孔导度会影响光合作用、蒸腾作用等生理过程，在适宜条件下，在光合作用的卡尔文循环中，三碳酸还原形成三碳糖，每形成2个三碳糖需要消耗1个五碳糖，同时再生出1个五碳糖。所以三碳酸还原形成12个三碳糖时，将再生形成6个五碳糖。此再生过程的意义是保证卡尔文循环不断进行。 （2）为探究不同浓度对温室番茄光合作用的影响，分别在不同生育期（苗期、开花期和成熟期）对叶片的相关指标进行测定，所以该实验中可变因素是不同二氧化碳浓度和不同生育期，观察图中曲线，净光合速率均随着CO2浓度的升高而增大，从图中可以看出，在成熟期，A3组（CO2 ​浓度为1000μmol/mol）的净光合速率相对较高，而蒸腾速率相对较低，所以水分利用率最高。 （3）采摘后的番茄仍会持续进行高强度呼吸作用，需及时在(零上)低温、低氧、适宜湿度条件下储存。 5．(1) 呼吸消耗、自身生长发育繁殖（被分解者利用、流向下一营养级、未被利用） 适当增加样方面积或样方数量 (2) 互利共生 B (3) 消除两臂的几何误差对蓟马行为可能造成的影响 垂叶榕>人参榕>印度榕 （1）蓟马同化的能量去向有呼吸消耗、自身生长发育繁殖（被分解者利用、流向下一营养级、未被利用的能量）。蓟马是榕属植物上的一种害虫，活动能力弱，活动范围小，对蓟马研究时，通常可用样方法调查其种群密度，为减小实验误差，可以适当扩大样方面积或增加样方数量。 （2）榕树依靠传粉榕小蜂为之传粉,榕小蜂在榕树花序中产卵,以榕树花序作为其幼体栖息场所和食物来源,两者是互利共生关系。 A、榕树通过分泌化学物质吸引小体积的榕小蜂进入隐头花序内部完成传粉,即榕树向榕小蜂传递化学信息，利于促进个体的繁殖,A错误； B、榕树与榕小蜂之间互利共生，两者协同进化，而进化的实质是种群基因频率定向改变，可见协同进化时两者的基因频率都发生了定向改变，B正确； C、垂直结构指同一地段不同高度分布着不同的种群，高低错落的榕树是同一个种群，不属于垂直结构，C错误； D、能量流动发生在相邻两个营养级之间，且榕树与榕小蜂之间是互利共生关系，不是捕食关系，D错误。 故选B。 （3）为研究蓟马对盆栽榕树挥发物的行为反应，选取树龄、株高等条件相同且生长状态良好的三种盆栽榕树，用保鲜膜将育苗盆和泥炭土密封，分别放置于玻璃集气罐中，以收集三种榕树的挥发物。实验中将Y型管置于黑暗环境下，且正上方放置40W日光灯，以避免光照等无关变量不一致对实验结果的影响。分别在两臂的样品瓶中放入待测气体，并将饥饿处理12h的蓟马释放入Y形管基部管入口，统计爬向不同管的蓟马数量。每组处理观察60只蓟马，每只蓟马在实验中只使用1次。每测试10只更换Y型管并调换味源方位一次，目的是消除两臂的几何误差对蓟马行为可能造成的影响。图2为实验结果，由图可知，三种榕树与空气比较时，蓟马数量关系是垂叶榕>人参榕>印度榕，印度榕vs垂叶榕时，垂叶榕一侧蓟马数量更多，人参榕vs印度榕时，人参榕一侧蓟马数量更多，垂叶榕vs人参榕时，垂叶榕一侧蓟马数量更多，故对三种盆栽榕树挥发物的趋向性由大到小依次为垂叶榕>人参榕>印度榕。 6．(1) 主动运输 顶芽产生的生长素运输至侧芽处，使得侧芽处生长素浓度较高，且侧芽对生长素敏感，从而抑制侧芽生长 (2)在正常供磷条件下，阻止生长素(或NAA)的极性运输能解除生长素(或NAA)对水稻分蘖发生的抑制作用 (3)LP与LP+NPA (4)促进 （1）极性运输是逆浓度运输，且耗能，其运输方式属于主动运输，抑制侧芽生长的原因是顶芽产生的生长素运输至侧芽处，使得侧芽处生长素浓度较高，且侧芽对生长素敏感，从而抑制侧芽生长； （2）图a结果表明，在正常供磷条件下，施加NAA显著抑制了水稻分蘖的发生，而施加NPA处理后水稻分蘖数则显著增加，由此说明在正常供磷条件下，阻止生长素(或NAA)的极性运输能解除生长素(或NAA)对水稻分蘖发生的抑制作用； （3）图b中LP与LP+NPA对比结果显示，在低磷条件下，施加NPA处理不能增加水稻的分蘖数，其分蘖数比低磷处理低，表明在低磷胁迫下，除了生长素之外，可能存在其他因素抑制水稻分蘖的发生； （4）结合图a和图b说明，与正常供磷处理相比，低磷胁迫组水稻的分蘖数少于正常组，说明低磷胁迫促进了水稻体内生长素的极性运输。 7．(1) DdRrYy 19 否，F2中紫红果与非紫红果的分离比为27:37，是(3:1)3的变式，说明三对等位基因遵循自由组合定律 (2)D基因内部的碱基对可能发生了缺失、增添或替换，使转录出的mRNA中的终止密码子提前出现，导致合成的蛋白质中氨基酸数目减少 (3)DDRRyy和 ddrrYY；ddRRyy和DDrrYY （1）茄子植株中花青素的合成由D/d、R/r和Y/y三对基因共同控制，含花青素的茄子呈现紫红色。研究人员将非紫红果甲和非紫红果乙进行杂交，F1中果实全为紫红果，F2中紫红果与非紫红果的分离比为27:37，是(3:1)3的变式，说明三对等位基因遵循自由组合定律。因此F1的基因型为DdRrYy，F2中共3×3×3=27种基因型，其中紫红果的基因型为D_R_Y_，共2×2×2=8种，非紫红果的基因型有27-8=19种； （2）基因D突变成d后，其编码蛋白质的氨基酸数目减少，据基因表达原理分析，基因内部的碱基对可能发生了缺失、替换或增添，使转录出的mRNA中的终止密码子提前出现，导致合成的氨基酸数目减少； （3）F1的基因型为DdRrYy，D基因对花青素的合成调控具有组织特异性，即其能调控果皮花青素的合成，对花中花青素的合成没有影响，亲本花色都为白色，F2中紫花与白花的分离比为9:7，说明F1紫花的基因型为RrYy，因此亲本白花基因型为RRyy和rrYY，又因亲本均为非紫红果，因此亲本基因型组合有DDRRyy和ddrrYY；ddRRyy和DDrrYY。 8．(1) DNA半保留复制 DNA聚合酶需要Mg2+激活 (2)BamHⅠ和XbaⅠ (3) 四尾栅藻 PCR、PCR和电泳、抗原一抗体杂交 (4)应添加对照组:用相同废水培养基培养等量非转基因四尾栅藻(其余条件相同)，11天后检测对照组总氮、总磷和氟化物的含量并与实验组进行比较 （1）PCR技术即聚合酶链式反应，是一种用于体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术，其原理是DNA的半保留复制；DNA聚合酶需要Mg2+激活，故PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2+； （2）基因表达载体的构建需要将目的基因插入启动子和终止子之间，且不能破坏卡那霉素抗性基因。观察质粒pBH21的酶切位点，只有BamHⅠ和XbaⅠ能满足在不破坏关键元件的情况下插入目的基因，所以将DGAT1基因与pBH21构建基因表达载体时，需在DGAT1基因的两端添加限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的识别序列； （3）启动子是一端特殊的DNA序列，是RNA聚合酶识别和结合的位点，可驱动基因的 转录，故要达到让紫苏DGAT1基因在四尾栅藻细胞中表达的目的，应该添加四尾栅藻启动子；对获得的转基因四尾栅藻进行分子水平的检测，通过PCR等技术检测四尾栅藻的染色体DNA上是否插入了DGATI基因（或DGATI基因是否转录出了mRNA）；用抗DGATl的抗体与从转基因四尾栅藻中提取的蛋白质进行抗原—抗体杂交以检测DGAT1基因是否翻译出蛋白质； （4）要想证明转DGAT1基因显著提高了四尾栅藻的去污能力，应增加非转基因四尾栅藻对废水的去污能力，将转基因四尾栅藻与非转基因组结果进行比较，即应添加对照组，废水培养非转基因四尾栅藻11天后，检测总氮、总磷和氟化物的含量。 学科网（北京）股份有限公司 $$