2025届高三生物二轮复习课件聚焦引物专题

聚焦“引物” 2019人教版选择性必修三二轮复习专题课件 1.全称: ; 2.原理: ; 3.条件: ①缓冲液:含有 ,目的是 ; ②模板:DNA双链; ③原料:4种 ,既作为 又作为 ; ④酶: 的 酶; ⑤引物: 种,使DNA聚合酶能从引物的 端开始连接脱氧核苷酸。 聚合酶链式反应 半保留复制 Mg2+ 激活DNA聚合酶 脱氧核苷酸(dNTP) 原料 能量 耐高温 DNA聚合 2 3’ PCR基础知识回顾 1、概念: 是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸,体内DNA复制,引物一小段 ,PCR反应中,因为可以是 分子片段。 聚焦“引物” RNA RNA或单链DNA (1)(多选)荧光定量PCR可定量检测样本中DNA含量,其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时,加入与某条模板链互补的荧光探针,当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针并生成荧光分子,即DNA每扩增一次,就有一个荧光分子光生成(如图),荧光监测系统随时接收荧光信号变化。 下列叙述正确的有( ) A.图示引物与胞内DNA复制所用引物的化学本质不同 B.耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5' 3' C.一段待扩增的DNA经过4次循环后,等长目标片段所占比例为1/3 D.反应管内荧光信号到达设定阈值所经历的循环数,与样本DNA浓度呈正相关 对点训练 AB 2、作用: 作用:引物能使耐高温的DNA聚合酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。 3、结合部位: 引物结合在模板链的_。 3’端 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 3’ 5’ 引物1 3’ 5’ 引物2 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 5’ 3’ 子链延伸方向: 聚焦“引物” 对点训练 1.(24-25高三上 江苏泰州 开学考试)黑水虻是重要的资源昆虫,体内H基因编码的抗菌肽HI-3具有抗菌、抗癌和免疫调节作用。科研人员利用酵母菌生产抗菌肽HI-3,并避免基因污染。请回答下列问题: (1)利用PCR技术扩增H基因,需根据H基因设计两种引物,引物的作用有_。 A.为Taq酶提供结合位点 B.决定扩增产物大小 C.决定反应的特异性 D.决定变性时间 ABC 2.如图为 X 蛋白的部分基因序列,所示序列为引物结合的部分,据图分析: 扩增 X 蛋白基因所需的引物序列是_;_。 对点训练 5′ ATGCCGTAAGTCCTAC 3 5′ TGATCTACGGCTTACA 3′ PCR扩增时至少需要_种引物,原因是_ 2 DNA的两条链是反向平行的,用2种引物才能保证DNA的两条链同时被扩增 5、PCR扩增的前提是: 根据一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物 6、设计引物时必须依据: 目的基因的核苷酸序列 7、设计引物的要求: ①同种引物之间不能发生碱基互补配对,原因是:_ ②2种引物之间不能发生碱基互补配对,原因是:_。 防止引物自身折叠 防止引物之间配对,导致引物 不能与模板链结合 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 4、种类: 聚焦“引物” (1)(2020 山东,25 节选)通过 PCR 技术可在总 cDNA 中专一性的扩增出 Wx 基因的 cDNA,原因是_ 。 (2)(经典高考题节选)设计引物时需要避免引物之间发生_ ,而造成引物自连。同理也要避免引物之间的互补。复性温度的设定与引物长度、碱基组成有关,长度相同且_的引物需要设定更高的复性温度。 (3)科学设计引物是 PCR 能否成功的关键,若引物的碱基过多或引物的 G、C 含量过高,会造成 PCR 的 效率偏低,收获的目的基因较少,原因是_。 若对 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,结果发现有两个或多个条带,从引物角度分析,原因可能是_。 对点训练 引物是根据Wx基因的一段已知序列设计合成的 碱基互补配对 G、C含量高 引物与模板链结合过于紧密,变性时引物不易与模板链脱离(影响变性) 引物过短导致引物的特异性下降 聚焦“引物” 8、引物的修饰: (1)(2022 山东,25 节选)某种类型的白血病由蛋白P引发,蛋白 UBC 可使 P 被蛋白酶识别并降解,药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物 A 治疗该病的机理,需构建重组载体以获得融合蛋白 FLAG-P 和 FLAG-P 。P 是缺失特定氨基酸序列的P,FLAG 是一种短肽,连接在P或P 的 氨基端,使融合蛋白能与含有 FLAG 抗体的介质结合,但不影响 P 或 P 的功能。 ①为构建重组载体,需先设计引物,通过 PCR 特异性扩增 P 基因。用于扩增 P 基因的引物需满足的条件是_。 为使 PCR 产物能被限制酶切割,需在引物上添加相应的限制酶识别序列,该限制酶识别序列应添加在引 物的_(填“3′端”或“5′端”)。 能与P基因模板链3′端的一段碱基序列互补配对的短单链核酸 5′端 ②PCR 扩增得到的 P 基因经酶切连接插入载体后,与编码 FLAG 的序列形成一个融合基因,如图所示,其中“ATGTGCA”为 P 基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后,融合基因转录出的 mRNA 序列正确,翻译出的融合蛋白中 FLAG 的氨基酸序列正确,但 P 基因对应的氨基酸序列与 P 不同。据图分析,出现该问题的原因是 _。 修改扩增 P 基因时使用的带有 EcoR 识别序列的引物来解决该问题,具体修改方案是_。 聚焦“引物” 8、引物的修饰: P基因编码链的第一个碱基与EcoR 识别序列的最后两个碱基编码一个氨基酸,导致mRNA的密码子被错位读取 在引物中的EcoR 识别序列3′端添加1个碱基 (2)引物用 PCR 技术将 DNA 分子中的 A1片段进行扩增,设计了引物 、 ,其连接部位如图所示,X 为 某限制酶识别序列。扩增后得到的绝大部分 DNA 片段是图中的( ) 聚焦“引物” 8、引物的修饰: C 聚焦“引物” 9、引物的选择: (2023 山东,25 节选)科研人员构建了可表达 J-V5 融合蛋白的 重组质粒并进行了检测,该质粒的部分结构如图甲所示,其中 V 5 编码序列表达标签短肽V5。 (1)构建重组质粒后,为了确定 J 基因连接到质粒中且插入方向正 确,需进行 PCR 检测,若仅用一对引物,应选择图甲中的引物_ _ 。已知 J基因转录的模板链位于 b 链,由此可 知引物 F1 与图甲中J基因的_(填“a 链”或“b 链”)相应 部分的序列相同。 (2)重组质粒在受体细胞内正确表达后,用抗 J 蛋白抗体和抗 V5 抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表达水平,结果如图乙所示。其中,出现条带 1 证明细胞内表达了_ ,条带 2 所检出的蛋白_(填“是”或“不是”)由重组质粒上的 J 基因表达的。 不是 F1和R2(或F2和R1) a链 J-V5融合蛋白 对点训练 DNA双链解聚为单链 50 左右 使两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 ②③ 引物②为5'-AGTTTCCC-3' 引物③为5'-AAGGGCGG-3' 236-2 1.一个DNA,一对引物(A与B),复制n次: (1)子代DNA分子等长的DNA分子数为:_个 (2)子代DNA分子中不等长链DNA分子数为:_个 (3)子代DNA分子中含模板链DNA分子数为:_个 (4)含引物的DNA分子数 。 子代DNA分子中含引物A(或B)的DNA分子数为: _ 个 (5)复制过程中共需引物_个 (6)第n次复制需要引物_个 (2)已知引物 1 及引物 2 之间的序列为目的序列,若引物与 DNA 的结合位点如图所示,在第_轮循环产物中开始出现两条单链等长的目的片段。 2n-2n 2n 2 2n-1 2n+1-2 2n 2 2n 聚焦“引物” 10、引物的数量计算: 1.(2024 河北邢台模拟)PCR引物的3′端为结合模板DNA的关键碱基,5′端无严格限制,可用于添加限制酶切点等序列。下列叙述正确的是( ) A.PCR第5个循环,消耗了16对引物 B.脱氧核苷酸作为扩增的原料会依次连接到5′端 C.PCR反应体系中需要加入脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、Ca2+等 D.用图中引物扩增至少四个循环后才能获得两端均添加限制酶切点的目的产物 对点训练 A 3′ Mg2+ 两个循环 感谢观看 $$