内容正文:
“其茅葺,其叶青青,犹绿衣郎,挺节独立,可敬可慕。迨(dài)夫花开,凝晴滚露,万态千妍,薰(xūn)风自来,四坐芬郁,岂非入兰室乎!岂非有国香乎!”这是我国历史上第一部兰谱——《金漳(zhānɡ)兰谱》(宋·赵时庚)中对兰花的一段描述。从古至今,我国人民都把兰花看作高洁、典雅的象征,很多人喜欢养兰花。
但是,兰花种子通常发育不全,在自然条件下萌发率极低;传统分株繁殖的方法又存在繁殖周期长、繁殖率低等问题,如果靠自然繁殖,兰花的价格可想而知了
如何能让名贵的兰花大量、快速地繁殖,从而走入寻常百姓家呢?
第二章 细胞工程
细胞工程是指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等学科的原理和方法,通过细胞、细胞器或组织水平上的操作,有目的地获得特定的细胞或组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。
第1 节 植物细胞工程
第二章 细胞工程
Part 1 植物细胞工程的基本技术
一、理论基础
叶子
花瓣
花粉
细胞
植物体
一定条件下:
细胞的全能性
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细胞的全能性:
体现细胞全能性的原因:
细胞经过分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能
组成生物体的细胞中含有发育成为完整个体所需的全部遗传信息
生长点
叶原基
芽原基
枝芽结构示意图
叶原基的细胞只能发育为叶
芽原基的细胞只能发育为芽
在特定的时间和空间条件下,细胞中的
基因会选择性表达
为什么植物体内细胞并不都表现全能性?
一、理论基础
二、植物组织培养技术
1958年,科学家斯图尔德取胡萝卜韧皮部细胞培育出了完整的胡萝卜植株,为全能性提供了强有力的支持
植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成完整植株的技术
这些离体培养的植物器官、组织或细胞称为外植体
(一)概述
二、植物组织培养技术
(二)基本流程
阅读教材35页左栏文字,在图2-1中标出“脱分化”“再分化”
接种外植体
诱导愈伤组织
诱导生芽
诱导生根
移栽成活
脱分化
已经分化的细胞失去其特有的结构和功能,转变为未分化的细胞,进而形成愈伤组织的过程
脱分化形成的不定形的薄壁组织团块
诱导愈伤组织
外植体(叶片)
愈伤组织
脱分化
排列疏松而无规则,是一种高度液泡化的,呈无定形的薄壁细胞
二、植物组织培养技术
二、植物组织培养技术
诱导愈伤组织
二、植物组织培养技术
(二)基本流程
阅读教材35页左栏文字,在图2-1中标出“脱分化”“再分化”
接种外植体
诱导愈伤组织
诱导生芽
诱导生根
移栽成活
脱分化
再分化
再分化
已经分化的细胞失去其特有的结构和功能,转变为未分化的细胞,进而形成愈伤组织的过程
脱分化形成的不定形的薄壁组织团块
愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程
二、植物组织培养技术
(二)基本流程
接种外植体
诱导愈伤组织
诱导生芽
诱导生根
移栽成活
脱分化
再分化
再分化
植物组织培养需要什么条件呢?
① 离体的植物器官、组织、细胞
② 人工配制的培养基
③ 适宜的培养条件
二、植物组织培养技术
思考1:外植体生长的培养基中可能含有哪些成分?
含植物生长所需的水分、各种无机营养(含大量元素、微量元素)、有机营养(如蔗糖、维生素)等
(三)条件
二、植物组织培养技术
第一代合成的细胞分裂素
生长素类调节剂
外植体
愈伤组织
脱分化
芽
再分化
生长素/细胞分裂素
比例适中
根
比例高
比例低
结合资料,分析植物激素/植物生长调节剂用量的比例对植物细胞发育方向的影响
(三)条件
二、植物组织培养技术
(三)条件
思考2:杂菌有可能在该培养基中生长吗?微生物污染会对实验造成什么影响?如何避免这种影响?
无菌操作是植物组织培养能否成功的关键
①外植体
②培养基
③超净工作台
④解剖刀
⑤实验者的双手
化学药物消毒法
高压蒸汽灭菌法
紫外线消毒法
干热灭菌法、灼烧灭菌法
化学药物消毒法
在愈伤组织的诱导阶段一般不需要光照,如果在光照条件下,容易分化产生维管等组织,不利于产生大量的愈伤组织
当愈伤组织分化出芽和叶时,要有适当光照,有利于叶片内叶绿素的合成及叶片的光合作用
光照在各阶段都一定需要吗?
适宜的培养条件,如温度、光照等
外植体
愈伤组织
脱分化
芽
再分化
根
二、植物组织培养技术
(三)条件
思考3:除以上条件外,组织培养过程还需要哪些条件?
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二、植物组织培养技术
(四)步骤
消毒
切段
接种
脱分化
再分化
移栽
二、植物组织培养技术
(四)步骤
消毒
切段
接种
脱分化
再分化
移栽
立即用无菌水清洗2~3次
流水冲洗
体积分数为70%的酒精消毒30s
立即用无菌水清洗2~3次
质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液处理30min
幼嫩的菊花茎段
二、植物组织培养技术
(四)步骤
消毒
切段
接种
脱分化
再分化
移栽
用解剖刀将外植体切成0.5~1cm长的小段
将消过毒的外植体置于无菌的培养皿中
用无菌滤纸吸去表面的水分
二、植物组织培养技术
(四)步骤
消毒
切段
接种
脱分化
再分化
移栽
在酒精灯火焰旁,将外植体的1/3~1/2插入诱导愈伤组织的培养基中
用封口膜或瓶盖封盖瓶口,并在培养瓶上作好标记
接种时注意外植体的方向,不要倒插!
(形态学上端朝上)
二、植物组织培养技术
(四)步骤
消毒
切段
接种
脱分化
再分化
移栽
将接种了外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18~22℃的培养箱中培养。在培养过程中,定期观察和记录愈伤组织的生长情况
二、植物组织培养技术
(四)步骤
消毒
切段
接种
脱分化
再分化
移栽
培养15~20d后,将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上培养。长出芽后,再将其转接到诱导生根的培养基上,进一步诱导形成试管苗
二、植物组织培养技术
(四)步骤
消毒
切段
接种
脱分化
再分化
移栽
打开封口膜或瓶盖,让试管苗在培养箱内生长几日
用流水清洗掉根部的培养基
将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中
待其长壮后再移栽入土
让试管苗逐渐适应外界环境
保水透气
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