1.2 微生物的培养技术及应用（第2课时）-2024-2025学年高二生物同步课堂精优课件（人教版2019选择性必修3）

自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢? 问题导入 视频:黄石国家公园，给微生物分离提供什么思路？ 第1章 发酵工程 第2节 微生物的培养技术及应用 本节聚焦 1、怎样运用生物与环境相适应的观点来理解选择培养的原理？ 2、如何通过调整培养基的配方来有目的地培养某种微生物？ 3、测定微生物数量的常用方法有哪些？ 第2课时 微生物的选择培养和计数 自主探究（思） 阅读课本16-17页，回答以下问题 1、为什么要寻找耐高温的DNA聚合酶，如何找到？筛选的原因、思路、启示？ 2、什么是选择培养基？ 3、如何1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？如何得到分解尿素的细菌的纯培养物？ 4、稀释涂布平板法的操作过程是什么？ 一、选择培养基 寻找耐高温的DNA聚合酶 筛选原因： 水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 1、科学实例： 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，并从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。 发现史： PCR（聚合酶链式反应）是一项在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 科学需求： 耐高温的酶 耐高温生物体 高温环境（热泉、火山口） 筛选思路： 寻找 寻找 美国黄石公园 为什么要寻找耐高温的DNA聚合酶，如何找到？筛选的原因、思路、启示？ 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 选择培养基 实验室微生物筛选原理:人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。 纤维素分解菌 启示： 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 一、选择培养基 寻找耐高温的DNA聚合酶 1、科学实例： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 一、选择培养基 2、选择培养基： 概念： 类型 条件 分离得到的菌种 原理 水生栖热菌 酵母菌、霉菌等真菌 金黄色葡萄球菌 能分解纤维素的微生物 自养型微生物 固氮菌 类型:(举例) 改变培养条件 70～80℃的高温 添加某种化学物质 加入青霉素 高浓度食盐 特殊碳、氮源 纤维素唯一碳源 营养缺陷 不加碳源 不加氮源 无氧环境 厌氧、兼性厌氧型微生物 抑制细菌，对真菌无作用 固氮微生物能利用空气中氮气 自养型微生物能利用无机碳源 有更多的生存机会而大量繁殖 高温中其他微生物酶失活 需氧型微生物无法生存 在高盐环境中生长，其他抑制 合作探究（议） 任务一：思考讨论选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以为细菌生长的氮源。 1、如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,只有能合成脲酶细菌才能生长。 2、该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 除以尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。 尿素的立体结构 CO(NH2)2 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 3.怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 二、微生物的选择培养 1、稀释涂布平板法 分离：选择培养基获得分解尿素的细菌，并获得纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。 ①梯度稀释菌液 ②涂布平板 稀释涂布平板法 要对土样进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上。 1、概念： 稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。 2、主要过程： 3、原理： 如何1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？如何得到分解尿素的细菌的纯培养物？ 取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 注：多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ④浸 ⑥涂 ⑤灼 ②稀 注：各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照。 二、微生物的选择培养 1、稀释涂布平板法 4、操作过程： 铲取土样，将样品装入纸袋中。 将10g土样加入盛有90mL无菌水锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 9mL 无菌水 90mL无菌水 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 1×10 注：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。 ①铲 ③滴 视频：土壤微生物的分离 合作探究（议） 任务二：讨论微生物选择培养相关问题 1、平板划线法接种培养结果如右图。此方法能否对细菌计数？ 不能；平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。 2、稀释涂布平板法接种培养结果如右图。此方法能否对细菌计数？ 稀释涂布平板法会进行等比稀释，在合适的稀释倍数下，均匀涂布得到的菌落互不接触，可以确定菌落的密度，再通过计算可以得知原液中的活细菌数。 4、通过稀释涂布平板法统计的细菌的数目与它的实际数目相同吗？ 统计的细菌数往往比活菌实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 3、分离土壤中细菌，10g土样加入盛有90mL无菌水中后已稀释 倍，计算时不要忽略；过程中所有操作都应在 进行。 10 酒精灯火焰旁 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 接种工具 单菌落的获得 用途 接种效果图 特点 相同点 通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。 将菌液进行一系列梯度稀释，并分别涂布到固体培养基表面，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。 接种环 涂布器 从最后划线的区域挑取 稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落 分离纯化菌种，获得单菌落 ①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数 单菌落更易分开，可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板 方法简单，但不适宜计数 两种纯培养方法比较 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征 1、下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，正确的是( ) A.实验中采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液 B.分离土壤中能分解尿素的细菌时，应选择以尿素为唯一氮源的培养基 C.利用显微镜进行直接计数时，可使用普通的载玻片完成计数 D.接种土壤微生物稀释液时，平板划线法通过连续划线的操作使微生物均匀分布 B 2、如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素的细菌的过程示意图。下列有关叙述错误的是( ) A.在配制步骤②③的培养基时，应先调pH 后湿热灭菌 B.步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集 的细菌分散，以获得单菌落 C.步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向 牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素 D.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较不同种细菌分解尿素的能力 C 课后练习（检） 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基一 KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4 ·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基二 1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基，判断依据是_________________；该类培养基的主要用途为_____________________。 2.从目的用途上来讲， 属于选择培养基，目的是为了获得 。 3.两种培养基共有的培养基成分有： 。培养基一的主要碳源为 ，主要氮源为 ； 培养基二的碳源为 ，氮源为 。 固体 添加了凝固剂琼脂 分离、鉴定、计数、保存 培养基二 能分解尿素的微生物 碳源、氮源、无机盐、水 牛肉膏 蛋白胨 葡萄糖 尿素 课后练习（检） 3、结合表格回答问题 阅读课本18-19页，回答以下问题 1、稀释涂布平板法的计数原理和原则？ 2、显微镜直接计数法的原理，优点？ 3、探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ①实验原理 ②土壤取样的土壤要求、取样地点、注意事项？ ③样品稀释的要求？ ④微生物培养的条件与结果？ 自主探究（思） 三.微生物的数量测定 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ①一般选择菌落数30-300的平板进行计数； ②同一稀释度至少对3个平板计数并求平均值； ③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低； ④统计的结果一般用菌落数而不是活菌数来表示； ⑤恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 计数原则: 1.间接计数法 — 稀释涂布平板法 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 稀释涂布平板法： 原理： 稀释涂布平板法的计数原理和原则？ ①分离微生物；②常用来统计样品中活菌的数目。 三.微生物的数量测定 1.间接计数法 — 稀释涂布平板法 每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M M --稀释倍数 C --稀释后平板上生长的平均菌落数 V --涂布平板时所取的稀释液体积(mL) 计算公式: 例1、甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，每克土壤中可以分离尿素的细菌数目是 个。 9 ×107 例2、请计算右图4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为 个。 1.1×108 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板在显微镜下观察、计数，然后再计算 一定体积的样品中微生物的数量，统计结果一般是活菌数和死菌数的总和。 原理： 优点： 缺点： 常用、快速、直观 ①不能区分死菌和活菌→偏大 ②不适于对运动细菌的计数。 ③个体小的细菌在显微镜下难以观察。 台盼蓝染液染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。 2.直接计数法——显微镜直接计数法 血细胞计数板常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等； 细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 三.微生物的数量测定 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×104×稀释倍数 计算： 显微镜直接计数法的原理，优点？ 内容 显微镜直接计数法 稀释涂布平板法（间接计数法） 主要用具 计数依据 优点 缺点 计算公式 结果 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板 涂布器 细菌个数 培养基上菌落数 计数方便、操作简单 计数的是活菌 不能区分死菌与活菌 操作较复杂且有一定误差 每毫升原液含菌株数＝每小格平均菌株数×400×104×稀释倍数 每毫升原液含菌株数＝平均菌落数/所用涂布液体积×稀释倍数 小结：微生物的计数方法比较 比实际值偏大 比实际值偏小 1.提出问题： （1）土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？ （2）每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？ 利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以分离。 2.做出假设： 3.实验原理： 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 土壤取样 制备培养基 样品稀释 与取样涂布 微生物的 培养与观察 菌落计数 ①土壤要求： ②取样部位： ③注意事项： 4.实验步骤： 探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 制备以 为唯一氮源的选择培养基。 制备牛肉膏蛋白胨培养基。 2、KH2PO4和Na2HPO4的作用是什么？ 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL 作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用。 1、为什么制备牛肉膏蛋白胨培养基？ 提供无机盐； 调节pH。 酸碱度接近中性且潮湿。（细菌适宜生长） 铲去表层土，取距地表约3～8cm的土壤层。（细菌绝大部分分布于此） 取土样时用的铁铲和取样袋使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。 尿素 土壤取样 制备培养基 样品稀释 与取样涂布 微生物的 培养与观察 菌落计数 4.实验步骤： 探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300、适于计数的平板。 细菌：一般用104、105、106稀释液 放线：一般用103、104、105稀释液 真菌：一般用102、103、104稀释液 在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，将稀释范围放宽一点，如将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。 ①如何判断选择培养基是否具有选择作用？每个浓度设置了 个平板，1、2、3平板是选择培养基（ 实验），4为 培养基，4上的菌落数目 选择培养基上的数目则有选择作用。 ②如何验证培养基中是否含有杂菌？ 整个实验还要设置 个空白对照平板：未接种的________________________培养基。 4 重复 牛肉膏蛋白胨 2 选择培养基和牛肉膏蛋白胨 大于 土壤取样 制备培养基 样品稀释 与取样涂布 微生物的 培养与观察 菌落计数 4.实验步骤： 探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。 一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。 每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致菌落数目遗漏。 培养条件： 观察： 结果： 注意事项： 本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。 视频：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ①结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。 如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。 如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。 ②你是否获得了某一稀释度下菌落数 为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？ 如果得到了两个或多个菌落数为30~300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。 5.结果分析与评价 ③你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？ 如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。 ④得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？ 不一定。因为有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物进行生长繁殖。所以还需要进一步的鉴定。 本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌, 对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料,进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。 方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。 培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 ——鉴别培养基 CO(NH2)2+H2O 脲酶 2NH3+CO2 呈碱性，遇酚红指示剂呈 红 色。 可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。 液体培养基： 可以直接看液体的变色情况； 固体培养基： 探究实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 6.进一步探究 原理： 脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红 在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应,从而达到鉴定的作用。 伊红和美蓝培养基鉴别大肠杆菌 刚果红培养基鉴别纤维素分解菌 鉴别培养基： 滤膜法：将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红-美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。 项目 选择培养基 鉴别培养基 原理 用途 举例 图示 尿素分解菌 大肠杆菌 加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应 培养、分离出目标微生物 鉴别目标微生物 培养酵母菌和霉菌时，可在培养基 中加入青霉素，抑制细菌的生长； 利用以尿素为唯一氮源的培养基来 培养可分解尿素的细菌 可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈深紫色，并有金属光泽) 加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质 选择培养基和鉴别培养基的区别 2、用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，其中正确的是( ) A.涂布了1个平板，统计的菌落数是230 B.涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C.涂布了3个平板，统计的菌落数分别是13、234和254，取平均值167 D.涂布了3个平板，统计的菌落数分别为210、240和250，取平均值233 1、如图是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图，下列相关叙述正确的是（ ） A.图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同 B.图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数 C.图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器 D.图乙每次划线应从同一起点开始，以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落 B D 课后练习（检） 4、关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述,正确的是 (　　) A.培养基应以尿素为唯一氮源,该细菌与硝化细菌所利用的碳源是相同的 B.对微生物进行分离、纯化用平板划线法,而稀释涂布平板法只能用于计数 C.对10 mL土样稀释106倍后,取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验,测得的菌落数分别为18、234、276,则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个 D.应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰,提高可信度 D 3、某兴趣小组在校园土壤中取样,进行“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验。小明从稀释倍数为106的培养基中筛选出约120个菌落,而其他同学只筛选出约40个菌落。下列有关叙述错误的是 (　　) A.小明出现这种结果的可能原因是和其他同学取样的土壤不同  B.要证明培养基是否受到污染,可将小明配制的培养基不加土样进行培养 C.当稀释倍数太小时,可能由于菌落重叠而导致计数结果偏小 D.在牛肉膏蛋白胨培养基中加入酚红指示剂可初步鉴定尿素分解菌 D 课后练习（检） 1. 研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌，判断下列相关表述是否正确。 （1）这种培养基是一种选择培养基。（ ） （2）利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤。（ ） （3）相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌。（ ） 2. 用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是（ ） A. 菌落中的细菌数目是固定的 B. 平板上的一个菌落就是一个细菌 C. 通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同 D. 平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 √ √ √ D 练习与应用(P20) 一、概念检测 3、反刍动物，如牛和羊具有特殊的器官一瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。 反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。 （1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。 （2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？ 4. 地球上的植物每年产生的纤维素超过70 亿吨，其中40%～ 60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈（如下图所示）。请回答下列问题。 (3)有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。 可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。 可行，这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境,腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。 练习与应用(P20) 二、拓展应用 用“纤维素为唯一碳源”的选择培养基进行培养，并在培养基加入刚果红进行鉴别。 1.选择培养基是指在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 2.稀释涂布平板法不仅是分离和纯化微生物的重要方法，也是测定微生物数量的重要方法。该方法通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 3.平板划线法可用于分离纯化菌种，获得单菌落，但不能进行微生物计数。 4.一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的形状、大小和颜色等方面。 5.土壤中分解尿素的细菌的分离与鉴定 (1)尿素分解菌的筛选：以尿素为唯一氮源的选择培养基可以筛选能分解尿素的细菌。 (2)尿素分解菌的鉴别：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若菌落周围出现红色环带，则可说明该菌种能够分解尿素。 要语必背 1.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌的原因：_________________ ____________________________________________________________________________________________________________。 2.为了筛选能分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择 (填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是______________________ ______________________________________________________________________。 3.尿素分解菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是______________________ ______________________________________。 由于生物与环境的 相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对较高，从这种土样中获得目的微生物的概率高于普通环境 尿素 能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用 尿素分解菌是异养型 微生物，不能利用CO2来合成有机物 长句表达 4.细菌计数时往往会产生实验误差，稀释涂布平板法计数的值比实际值_____，原因是_______________________________________________________；显微镜直接计数法计数的结果比实际值_____，原因是_________________________________________ __________________________。 5.检测培养物中是否有杂菌污染的方法：___________________________________ __________________。判断选择培养基是否起到筛选作用的方法：_______________ _________________________________________________________________________________。 偏小 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 偏大 显微镜下无法区分细胞的死活，统计结果一般 是活菌数和死菌数的总和 同时培养灭菌后的未接种的培养基，观 察是否有菌落产生 培养基作为对照，观察选择培养基上的菌落数目是否远少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目 其他两组都含有NH4NO3， 配制牛肉膏蛋白胨 Lavf58.51.100 Lavf58.51.100 Lavf59.27.100 $$