2025届高考生物二轮复习专题：基因工程

1.限制酶主要来源于 ， （能/不能）切割自身DNA，原因是： 。 2.限制酶切割产生的黏性末端最好用 连接；产生的平末端最好用 连接. 3.使用限制酶获取目的基因，需要 个切口，断开 个磷酸二酯键，产生 个游离的磷酸基团，需要 水分子的数量为 个。 3.基因表达载体组件中的 是 识别和结合的部位，是转录的起点。 4.农杆菌转化法是利用土壤农杆菌侵染植物细胞，然后将 整合到受体植物细胞的染色体DNA上。 5.PCR技术 （“需要”或“不需要”）额外加入ATP， 原因是 。 6.利用转基因技术获得的转基因新品种，通过传统的杂交技术 （“能”或“不能”）使该性状稳定遗传给子代，原因是 。 原核生物 不能 课前读背（基因工程易错基础知识点）： 原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰 E.coliDNA连接酶 T 4DNA连接酶 2 4 4 消耗 4 启动子 RNA聚合酶 T-DNA 不需要 PCR技术中加入的dNTP既可以提供能量，又可以提供原料 不能 受体细胞中可能 只含有一个该 基因，在减数分裂时重组质粒的移动是随机的，所以子代未必能获得该基因 考情分析：2024年高考基因工程考点分布统计 考题示例 考察热点 2024•甲卷12；2024•新课标11 2024•河北22；2024•湖南2 2024•江苏23；2024•江西17 限制性核酸内切酶 2024•北京20；2024•肃.21 2024•广东21；2024•贵21 2024•海南20；2024•湖21 2024•山东25；2024•天津16 基因表达载体的构建 2024•甲卷12；2024•新课标11 2024•福建17;2024•贵州21 2024•海南20；2024•河北22 目的基因的获取和筛选 2024•安徽20 目的基因的检测与鉴定 2024•湖北22；2024•江苏23； 2024•江西19;2024•重庆19 电泳技术名称、电泳图谱的解读 基因工程微专题 学习目标： 1.通过T1、T6的练习，强化限制酶的选择和PCR相关计算的方法应用 2.通过T2、T3；T4、T5；T7、T8的练习，掌握重组质粒的筛选、引物选择和修饰、DNA片段电泳与遗传的解题方法。 题型一：限制酶的选择 题型二：重组质粒的筛选 题型三：PCR扩增过程中的引物选择和修饰 题型四：PCR扩增过程中的相关计算 题型五：DNA片段电泳与遗传 基因工程常考题型总结 题型一：限制酶的选择-T1 基因工程常考题型总结 【方法总结】 选择限制酶的四原则： 1、不能破坏目的基因 2、不能破坏质粒中的重要原件。如：启动子、终止子、复制原点、标记基因（至少保留一个） 3、目的基因和质粒要产生相同的黏性末端 4、一般选择双酶切以防止目的基因、质粒的自身环化及目的基因和质粒的反向连接 3 基因工程常考题型总结 题型二：重组质粒的筛选-T2、T3 题型二：重组质粒的筛选 基因工程常考题型总结 【合作讨论一】通过小组合作，尝试总结出重组质粒的筛选步骤和前提条件 类型一：标记基因双重筛选法 ①质粒上一般有两种抗性基因（抗a和抗b） ②其中一个因目的基因插入而无法表达（即不能抗b） ③先用含a的培养基筛选，未导入质粒无法存活，存活的是重组质粒和空质粒 ④再用含b的培养基筛选（借助影印法），在含a的培养基中获取含重组质粒的受体细胞 类型二：蓝白斑筛选法 ①质粒上有抗性基因a以及LacZ基因（LacZ基因表达产物能水解X-gal从而使菌落呈现蓝色） ②LacZ基因因目的基因插入而无法表达（即不能使菌落呈现蓝色） ③用含a和X-gal的培养基筛选，未导入质粒无法存活，存活的是重组质粒和空质粒 ④进一步观察菌落颜色，导入空质粒的菌落呈蓝色，导入重组质粒的菌落呈白色 基因工程常考题型总结 5、（3）已知AMYI 基因上游的部分碱基序列如图2所示，在PCR扩增前，需要在AMYI 基因两端构建BamH1和BclⅠ的切割位点。则设计的AMY7 基因上游对应引物的序列为 。 5'GGATCCACGTCAT 题型三：PCR扩增过程中的引物选择和修饰 -T4、T5 题型三：PCR扩增过程中的引物选择和修饰 基因工程常考题型总结 【【合作讨论二】 1、引物应结合在需扩增目的基因的 端？ 2、若需要对引物进行修饰，如加上限制酶的识别序列，应添加在引物的 端？原因是？ 若需对引物进行修饰，应添加在引物的5′端 因为引物3'端为关键碱基，是PCR延伸的起始端，不能进行任何修饰，若添加到引物的3'端，限制酶识别序列不能与目的基因碱基互补配对，则破坏了PCR的准确性，无法正确延伸子链 引物的作用使DNA聚合酶从引物的3＇端开始连接脱氧核苷酸，故引物应结合在需扩增目的基因的3＇端 3＇ 5＇ -T4、T5 基因工程常考题型总结 题型四：PCR扩增过程中的相关计算 6 -T6 基因工程常考题型总结 题型四：PCR扩增过程中的相关计算 6 -T6 循环次数 1 2 3 n 子代DNA分子总数 2 4 8 2n 长-中链（含模板链）的DNA分子数 2 2 2 2 中-短链的DNA分子数 0 2 4 2（n-1） 短-短链（目的基因）的DNA分子数 0 0 1 2n-2n 共消耗引物的总数 2 6 14 2n+1-2 基因工程常考题型总结 【规律总结】PCR中的数量关系 题型四：PCR扩增过程中的相关计算 基因工程常考题型总结 7 题型五：DNA片段电泳与遗传-T7 题型五：DNA片段电泳与遗传-T7 基因工程常考题型总结 核酸样品经过限制酶酶切或PCR扩增等处理后，在凝胶中进行电泳。电场使得带电核酸分子向电极移动，分子会停留在凝胶中的特定位置。在凝胶中 DNA 分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA 分子本身的大小和构象有关。电泳时，DNA质量越大，受到的阻力越大，迁移速率越慢；DNA 质量越小，受到的阻力越小，迁移速率越快。 【合作讨论三】 1、电泳时，DNA片段的迁移速率受哪些因素的影响？ 2、电泳结果出现的不同条带代表什么？ 电泳结果出现的不同条带只能代表不同的DNA片段即DNA片段的种类，不能代表 DNA片段的数量。 （1）若未使用限制酶，电泳结果出现一种条带代表一种 DNA 片段 （2）若使用限制酶，先观察 DNA 是线状还是环状。电泳结果出现的条带代表限制酶切开后产生的一种或多种 DNA片段 课堂小结 题型一：限制酶的选择 题型二：重组质粒的筛选 题型三：PCR扩增过程中的引物选择和修饰 题型四：PCR扩增过程中的相关计算 题型五：DNA片段电泳与遗传 课后作业：导学案链接高考T1、T3+课本P98-T1 基因工程常考题型总结 8 题型五：DNA片段电泳与遗传-T8 $$