第3章 基因工程 综合测评（Word练习）-【状元桥·优质课堂】2024-2025学年高中生物学选择性必修第三册（人教版2024）

第3章综合测评 一、选择题：本题共18小题，每小题2分，共36分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1．下列关于限制性内切核酸酶(限制酶)的叙述，正确的是(　　) A．限制酶主要来源于原核生物 B．限制酶的识别序列均由6个核苷酸组成 C．限制酶作用于两条核苷酸链之间的磷酸二酯键 D．限制酶可识别RNA分子的特定核苷酸序列 答案　A 解析　限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，A项正确；大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成，B项错误；限制酶作用于每一条脱氧核苷酸链中特定部位的磷酸二酯键，C项错误；限制酶可识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，D项错误。 2．下列关于DNA连接酶的叙述，正确的是(　　) A．DNA连接酶连接的是两个DNA片段碱基对之间的氢键 B．DNA连接酶连接的是两个被限制酶切开的DNA双链片段 C．DNA连接酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端 D．E.coli DNA连接酶能将双链DNA片段互补的平末端连接起来 答案　B 解析　DNA连接酶连接的是两个DNA片段之间的磷酸二酯键，A项错误；DNA连接酶能将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键，B项正确、C项错误；E.coli DNA连接酶只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来，D项错误。 3．PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。下列有关PCR技术的叙述，正确的是(　　) A．打开DNA双链需依赖于解旋酶 B．子链延伸的方向是3端向5端 C．所用的引物一定是单链DNA分子 D．PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行 答案　D 解析　双链的解开是进行DNA复制的前提，在细胞内，打开DNA双链需破坏碱基对间的氢键，依赖于解旋酶；在生物体外，DNA的解旋是通过控制温度实现的，在温度超过90 ℃时，双螺旋结构将解体，双链分开，A项错误；DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3端延伸DNA链，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3端开始延伸DNA链，因此，DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸，B项错误；引物可以是单链DNA分子，也可以是单链RNA分子，C项错误；PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，PCR反应的缓冲液的作用是为Taq DNA聚合酶提供一个最适酶催反应的条件，D项正确。 4．科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培育转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是(　　) A．可用PCR技术获得抗冻蛋白基因 B．将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体 C．利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞 D．在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄细胞 答案　D 解析　获取目的基因的方法包括从基因文库中获取、采用PCR技术体外扩增等，A项正确；在培育转基因番茄的过程中，需要将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体，再将基因表达载体导入受体细胞，B项正确；在自然条件下，农杆菌能侵染双子叶植物和裸子植物，故将目的基因导入番茄体细胞可以用农杆菌转化法，C项正确；应利用标记基因来筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄细胞，低温条件下筛选属于个体水平的鉴定，应该筛选番茄植株，D项错误。 5．如图表示应用基因工程技术生产干扰素的三条途径，下列相关叙述错误的是(　　) A．途径甲中，过程Ⅰ应将干扰素基因和乳腺中特异表达的基因的启动子重组 B．途径乙中，过程Ⅱ一般采用农杆菌转化法 C．途径丙中，过程Ⅱ可用Ca2＋处理大肠杆菌 D．三条途径中，过程Ⅲ依据的生物学原理相同 答案　D 解析　途径甲中，要想使目的基因在乳腺中表达，过程Ⅰ应将干扰素基因和乳腺中特异表达的基因的启动子重组，A项正确；途径乙中，过程Ⅱ将目的基因导入植物细胞时，一般采用农杆菌转化法，B项正确；途径丙中，过程Ⅱ将目的基因导入大肠杆菌时，常用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，C项正确；三条途径中，过程Ⅲ依据的生物学原理不相同，D项错误。 6．下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是(　　) A．向菜花组织中加入蒸馏水并搅拌可释放核DNA B．鉴定DNA时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中进行沸水浴加热 C．过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行是为了防止DNA降解 D．离心研磨液是为了加速DNA的沉淀 答案　C 解析　菜花组织细胞是植物细胞，有细胞壁保护，直接加水细胞不能破裂，A项错误；鉴定DNA时，应将丝状物加入2 mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解后，向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝，B项错误；过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行是为了防止DNA降解，C项正确；离心研磨液是为了使细胞的其他物质离心沉淀到沉淀物中，去除滤液中的杂质，上清液中含有溶解的DNA，D项错误。 7．在基因表达载体的构建中，下列说法正确的是(　　) ①一个基因表达载体的组成，包括目的基因、起始密码子、终止密码子、标记基因　②起始密码子能驱动基因转录出mRNA，终止密码子使转录在所需要的地方停止　③基因表达载体构建过程中需要用到限制性内切核酸酶和DNA连接酶　④目的基因导入的受体细胞不同，在基因表达载体的构建上就会有差别 A．①② B．③④ C．①④ D．②③ 答案　B 解析　一个基因表达载体组成至少包括目的基因、标记基因、启动子、终止子，以及复制原点等，①错误；启动子能驱动基因转录出mRNA，终止子使转录在所需要的地方停止，②错误；基因表达载体的构建过程中需要用到限制性内切核酸酶和DNA连接酶，③正确；目的基因导入的受体细胞不同，在基因表达载体的构建上就会有差别，④正确。 8．图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述错误的是(　　) 　 A．在构建重组质粒时，可用Pst Ⅰ和Hind Ⅲ切割质粒和外源DNA B．在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因 C．若只用Pst Ⅰ处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反向连接 D．用上图甲、乙构建的基因表达载体导入受体细胞，可用含氨芐青霉素培养基筛选 答案　D 解析　切割目的基因时，用BamHⅠ切割会破坏目的基因，单独用PstⅠ切割目的基因和质粒身环化，会出现目的基因和质粒的自身环化，或目的基因和质粒的反向连接，而用PstⅠ和HindⅢ进行酶切，能确保目的基因和质粒的正向连接，并且质粒上只保留新霉素抗性基因作为标记基因，A项正确；在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因，至少保留其中的一个，B项正确；若只用PstⅠ处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反向连接，C项正确；用图中甲、乙构建的基因表达载体一定会用PstⅠ切割，切割后氨苄青霉素抗性基因被破坏了，不可以用含氨苄青霉素的培养基筛选，D项错误。 9．利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增，下列叙述错误的是(　　) A．Taq DNA聚合酶能耐高温 B．加入PCR反应体系中的引物一般有两种，在各循环中反复使用 C．PCR反应体系中有模板、引物、脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶和缓冲液 D．为避免外源DNA等的污染，微量离心管、枪头等在使用前都要经过灭菌处理 答案　B 解析　Taq DNA聚合酶能耐高温，可催化DNA子链的合成，A项正确；引物会参与到子链中，不会被反复使用，B项错误；PCR反应中，需要在一定的添加Mg2＋的缓冲液中才能进行，需提供模板DNA、分别与两条模板链结合的引物、4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶等，C项正确；为避免外源DNA等的污染，PCR实验中使用的相关器具如微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等应提前灭菌处理，D项正确。 10．枯草杆菌蛋白酶广泛应用于洗涤剂、食品等行业。某研究小组利用蛋白质工程将该蛋白酶中第188位丙氨酸替换为脯氨酸、第239位谷氨酰胺替换为精氨酸、第262位缬氨酸替换为亮氨酸，结果发现枯草杆菌蛋白酶的催化活性大幅度提高。下列叙述错误的是(　　) A．蛋白质工程最终要达到的目的是获取编码蛋白质的基因序列信息 B．对枯草杆菌蛋白酶进行分子设计必须从预期蛋白酶的功能出发 C．通过基因工程和蛋白质工程生产的枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列不同 D．改造后的枯草杆菌蛋白酶可能是空间结构发生改变导致其催化活性提高 答案　A 解析　蛋白质工程通过获取编码蛋白质的基因序列信息进而合成相关的基因并最终获得符合人们需求的蛋白质，这是蛋白质工程的最终目的，A项错误；对蛋白质进行分子设计应从预期的蛋白质功能出发，从而对蛋白质的结构进行设计，因此对枯草杆菌蛋白酶进行分子设计必须从预期蛋白酶的功能出发，B项正确；基因工程生产的蛋白质是自然界已有的蛋白质，而蛋白质工程能生产出自然界中不存在的新型蛋白质分子，两者的氨基酸序列不同，C项正确；改造后的蛋白酶中第188位丙氨酸替换为脯氨酸、第239位谷氨酰胺替换为精氨酸、第262位缬氨酸替换为亮氨酸，结果发现该酶的催化活性大幅度提高，其原因可能是改变了蛋白酶的空间结构，D项正确。 11．下列关于基因工程的应用及蛋白质工程的叙述，正确的是(　　) A．将某蛋白基因导入牛的乳腺细胞后形成乳腺生物反应器 B．由工程菌大肠杆菌获得人类干扰素的成分后可直接应用 C．基因治疗是一种利用基因工程产品治疗人类疾病的方法 D．蛋白质工程可以改造现有的蛋白质或制造出新的蛋白质 答案　D 解析　将某蛋白基因导入牛的受精卵后发育形成乳腺生物反应器，A项错误；由工程菌大肠杆菌获得人类干扰素的成分后不可直接应用，原因是大肠杆菌属于原核生物，其中不含内质网和高尔基体，不能对干扰素进行加工，B项错误；基因治疗是指把正常基因导入病人体内有缺陷的细胞中，使该基因的表达产物发挥功能从而达到治疗疾病的目的，C项错误；蛋白质工程可以改造现有的蛋白质或制造出新的蛋白质，D项正确。 12.科研人员利用农杆菌转化法将抗病基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，Ti质粒结构模式图如图所示。下列叙述正确的是(　　) A．农杆菌的拟核DNA与番木瓜基因发生重组 B．构建重组质粒需要限制酶和DNA聚合酶 C．含重组Ti质粒的农杆菌具有四环素抗性 D．转基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性 答案　D 解析　农杆菌的拟核DNA不会与番木瓜基因发生重组，和番木瓜基因发生重组的是其Ti质粒T－DNA上的基因，A项错误；构建重组质粒需要限制酶和DNA连接酶，B项错误；含重组Ti质粒的四环素抗性基因被破坏，不具有四环素抗性，C项错误；因为转入番木瓜的是重组Ti质粒的T－DNA，其中不含卡那霉素抗性基因，因此转基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性，D项正确。 13．为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C(图1)，拟将其与质粒(图2)重组，再借助农杆菌导入菊花中。下列操作不正确的是(　　) 　 A．用限制酶EcoR Ⅰ和DNA连接酶构建重组质粒 B．重组质粒的构建依赖于碱基互补配对 C．在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞 D．C基因导入受体细胞后，不一定能够成功表达，需要进行进一步检测与鉴定 答案　C 解析　分析图示可知，用限制酶EcoR Ⅰ酶切目的基因(花色基因C)和质粒，可使目的基因和质粒产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶将切口连接起来从而构建重组质粒，A项正确；构建重组质粒时，目的基因的黏性末端和质粒的黏性末端之间的碱基通过碱基互补配对形成氢键，B项正确；从图中可以看出，该质粒中的标记基因只有潮霉素抗性基因，被转化的菊花细胞只对潮霉素有抗性，因此在培养基中添加卡那霉素，不能筛选被转化的菊花细胞，C项错误；C基因导入受体细胞后，不一定能够成功表达，需要进行进一步检测与鉴定，D项正确。 14．从蓝光到紫外线都能使绿色荧光蛋白(GFP)激发，发出绿色荧光。研究人员将某病毒的外壳蛋白(L1)基因与GFP基因连接，获得了L1-GFP融合基因，并将其插入质粒P0，构建了重组质粒P1。如图为P1部分结构和限制酶酶切位点的示意图，相关叙述错误的是(　　) A．将L1-GFP融合基因插入质粒P0时，使用了E1和E4两种限制性内切核酸酶 B．可借助基因工程、核移植技术及胚胎移植技术等获得转基因的克隆牛 C．可采用抗原—抗体杂交技术检测该融合基因是否存在于转基因牛的不同组织细胞中 D．若在某转基因牛皮肤细胞中观察到绿色荧光，则说明L1基因在该细胞中完成表达 答案　C 解析　将L1-GFP融合基因插入质粒P0时，使用了E1和E4两种限制性内切核酸酶，A项正确；可借助基因工程、核移植技术及胚胎移植技术等获得转基因的克隆牛，B项正确；可通过PCR等技术检测该融合基因是否存在于转基因牛的不同组织细胞中，抗原—抗体杂交技术用于检测目的基因是否成功表达出蛋白质，C项错误；若在某转基因牛皮肤细胞中观察到绿色荧光，则说明L1基因在该细胞中完成表达，D项正确。 15．下列有关DNA的粗提取的叙述，错误的是(　　) A．洋葱研磨液在1 500 r/min的转速下离心5 min后，取上清液进行实验 B．在上清液中加入体积分数为95%的冷酒精，溶液中出现的丝状物是粗提取的DNA C．在DNA的粗提取过程中玻璃棒搅拌方向不需要一致 D．在DNA的粗提取过程中，用冷酒精处理的上清液，可在10 000 r/min的转速下离心5 min，收集管底的沉淀物 答案　C 解析　在DNA粗提取过程中，如果玻璃棒从不同方向搅拌，DNA可能会断裂，也可能会影响DNA的提取量，因此用玻璃棒搅拌时要沿一个方向，C项错误。 16．利用转基因山羊乳腺生物反应器生产丁酰胆碱酯酶，可治疗有机磷中毒。下列叙述错误的是(　　) A．应该用山羊乳腺中特异表达的基因的启动子构建基因表达载体 B．通过体细胞克隆可将丁酰胆碱酯酶基因传递给子代 C．通过显微注射法将基因表达载体导入山羊乳腺细胞 D．山羊乳腺细胞可将肽链加工成具有一定空间结构的丁酰胆碱酯酶 答案　C 解析　要得到转基因山羊乳腺生物反应器，在构建基因表达载体时需要乳腺中特异表达的基因的启动子，使目的基因只在乳腺细胞中表达，A项正确；通过体细胞克隆可将丁酰胆碱酯酶基因传递给子代，B项正确；通过显微注射法将基因表达载体导入山羊的受精卵，C项错误；山羊乳腺细胞含有内质网和高尔基体，可将肽链加工成具有一定空间结构的丁酰胆碱酯酶，D项正确。 17．在植物基因工程中，为将目的基因导入受体细胞常采用农杆菌转化法，农杆菌中常含有一个Ti质粒。某科研小组欲将某抗虫基因导入某植物，下列分析错误的是(　　) A．Ti质粒不含有对宿主细胞生存具有决定性作用的基因，是基因工程中重要的载体 B．用Ca2＋处理细菌是重组Ti质粒导入农杆菌中的重要方法 C．重组Ti质粒的农杆菌成功侵染植物细胞，可通过植物组织培养技术将该细胞培养成具有抗虫性状的植物 D．若能够在植物细胞中检测到抗虫基因，则说明重组质粒成功地导入受体细胞，并已表达 答案　D 解析　Ti质粒是基因工程中重要的载体，不含有对宿主细胞生存具有决定性作用的基因，A项正确；用Ca2＋处理细菌，使细菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，是重组Ti质粒导入农杆菌中的重要方法，B项正确；转基因成功的植物细胞可通过植物组织培养技术获得转基因植物，C项正确；在植物细胞中检测到抗虫基因，说明目的基因已成功导入，但不能证明其已经表达，D项错误。 18．人组织纤溶酶原激活物(htPA)主要由血管内皮细胞合成并分泌，它是一种重要的药用蛋白，现通过生物工程技术可在转htPA基因母羊的乳汁中获得。像这样通过乳汁来生产所需药品的转基因动物被称为乳腺生物反应器。下列关于乳腺生物反应器的制备和应用，说法正确的是(　　) A．获取htPA基因可以从人口腔上皮细胞中提取RNA作模板进行PCR扩增 B．构建基因表达载体时需用到限制酶和DNA连接酶来切开和连接氢键 C．将基因表达载体导入受精卵前，应该对受精卵的性别进行筛选 D．转基因动物是否产生htPA，可以用RCR等技术检测 答案　C 解析　乳腺生物反应器是将药用蛋白基因与乳腺中特异性表达基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射的方法导入受精卵中，培养成胚胎后移植到代孕母体中获得转基因动物，此转基因动物进入泌乳期后，可从其分泌的乳汁中获取所需要的药品。获取htPA基因可在血管内皮细胞中提取RNA通过逆转录得到或从人口腔上皮细胞中提取DNA作模板进行PCR扩增，A项错误；构建基因表达载体时，需用到限制酶和DNA连接酶，作用部位都为磷酸二酯键，B项错误；乳腺生物反应器是从雌性的乳汁中获取药物，基因表达载体应导入雌性的受精卵中，C项正确；htPA是一种蛋白质，可用抗原—抗体杂交的方法检测转基因动物是否产生htPA，D项错误。 二、非选择题：本题共4小题，共64分。 19．(13分) 病毒是重要的植物病原体，至今发现的致病性植物病毒约有450种，它们通过多种传播途径感染农作物，造成农作物减产，严重时会造成绝产。20世纪80年代科学家首次成功地将烟草花叶病毒的外壳蛋白基因转化到烟草植物中，获得了稳定遗传的抗病毒烟草植株，为植物基因工程技术的发展奠定了基础。 回答相关问题： (1)为了获得烟草花叶病毒的外壳蛋白基因(即目的基因)，先要分离得到烟草花叶病毒的外壳蛋白，分析该蛋白质的氨基酸序列，再推测出________________________，就可以利用化学方法人工合成该目的基因了。 (2)在利用上述目的基因和质粒构建重组质粒的过程中，要用相同的________切割目的基因和质粒，原因是___________________________________。 将构建好的基因表达载体用________法导入烟草植物的愈伤组织细胞中，并进行筛选。愈伤组织细胞是比较理想的受体细胞，这是因为___________________________________________________________________________________________________________________________________。 (3)烟草花叶病毒的外壳蛋白基因在烟草植株中表达成功的标志是________________________，可以用________________进行检测。 (4)若用含有重组质粒的某种细菌直接感染烟草植株叶片的伤口，则该植株的种子______(填“含有”或“不含有”)烟草花叶病毒的外壳蛋白基因。 答案　(1)该蛋白基因的核苷酸(或脱氧核苷酸或碱基)序列　(2)限制酶(或限制性内切核酸酶)　相同的限制酶切割才能产生相同的黏性末端，有利于连接时碱基互补配对　农杆菌转化　愈伤组织结构疏松，细胞分裂分化能力强，易形成新个体　(3)产生了烟草花叶病毒的外壳蛋白　抗原—抗体杂交 (4)不含有 20．(14分) 凝乳酶是奶制品加工中经常用到的一种酶，其传统制备方法的产量远不能满足生产需要。科学家研究利用基因工程技术生产凝乳酶，其部分环节如下图所示。 回答下列问题： (1)从刚出生5天的小牛皱胃组织中提取总RNA，经________过程获得总cDNA。通过PCR 技术可在总cDNA中专一性扩增出凝乳酶基因，原因是__________________________________________。 (2)过程①所使用的工具酶有__________。凝乳酶基因和质粒上均有Nde Ⅰ 和Xho Ⅰ 两种酶的识别序列，分别是 ，用以上两种酶分别切割目的基因和质粒，得到的黏性末端分别为_______________。 (3)大肠杆菌作为凝乳酶基因受体细胞的主要优点有__________________ ________________________________________________________________________________________________(答出2点即可)。 (4)筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，经多代培养后，仍能从大肠杆菌中提取出凝乳酶基因。据此判断，你认为凝乳酶基因是否已在大肠杆菌中成功转化？请说明你的观点及理由：________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________。 答案　(1)逆转录　引物是根据凝乳酶基因的一段已知序列设计合成的　(2)限制酶、DNA连接酶 (3)繁殖快，易培养，遗传物质较少等　(4)不一定。转化是指目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，仅从大肠杆菌中提取到凝乳酶基因不能说明该基因是否已在大肠杆菌中成功转化 21．(18分) 下图为培育某种转基因抗虫植物的过程示意图。 请回答下列问题： (1)实施基因工程的核心操作是__________，目的是____________________。 (2)图中将含抗虫基因的质粒导入农杆菌前，常用________处理农杆菌。 (3)重组Ti质粒上的青霉素抗性基因是作为________。含有重组质粒的农杆菌与愈伤组织在培养基2上共同培养的目的是____________________________。由植物未成熟的胚获得愈伤组织的过程称为________。 (4)培养基2与培养基3中所添加物质的主要区别是除了特定的、起筛选作用的物质外，还有__________________________的不同。 解析　(1)基因工程的核心操作是基因表达载体的构建。目的是使目的基因在受体细胞内稳定表达并能遗传给子代。(2)含抗虫基因的质粒导入农杆菌之前，常用Ca2＋处理农杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。(3)重组Ti质粒上的青霉素抗性基因是作为标记基因；含有重组质粒的农杆菌与愈伤组织在培养基2上共同培养的目的是筛选得到含有重组质粒的愈伤组织；由植物未成熟的胚获得愈伤组织的过程称为脱分化。(4)培养基2与培养基3分别用于筛选愈伤组织与培养愈伤组织，所以添加的物质中，还有生长素与细胞分裂素的浓度及比例不同。 答案　(1)基因表达载体的构建　使目的基因在受体细胞内稳定表达并能遗传给子代　(2)Ca2＋　(3)标记基因　筛选得到含有重组质粒的愈伤组织　脱分化　(4)生长素和细胞分裂素的浓度及比例 22．(19分) 苏云金杆菌可通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白(Bt抗虫蛋白)，破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将该细菌的“杀虫基因”转移到棉花里，培育出了抗虫棉，让棉花也能产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。 回答下列问题： (1)可利用PCR技术获取并扩增Bt基因，前提是要有一段Bt基因的核苷酸序列，这是因为____________________________________。 (2)PCR与体内DNA复制相比，其特殊之处有________________________ _________________________________________________________________________________________________________(写出两点)。 (3)Bt基因两端的酶切位点如图1所示，图2中质粒上的AmpR为氨苄青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，箭头表示酶切位点。 实际操作中，一般采用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ两种酶进行切割，与只采用限制酶EcoRⅠ切割相比，用两种酶切的优势之一是避免_____________________，二是避免造成反向连接。反向连接会导致目的的基因表达出不同的蛋白质，原因是___________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________。 (4)将基因表达载体导入农杆菌后，要用选择培养基进行筛选。已知未导入表达载体时，农杆菌对氨苄青霉素和四环素均不具有抗性，在不含抗生素的培养基(标记为A)中有经过转化的农杆菌单菌落(由一个菌体繁殖而成)，挑取一部分菌接种到含有四环素的培养基(标记为A1)中培养，再挑取一部分菌接种到含有氨苄青霉素的培养基(标记为A2)中培养，若出现_____________________________ ______________________________________的结果，说明转化成功。 (5)转基因棉花是否培育成功还要对棉花进行__________水平的检验。 答案　(1)利用PCR技术扩增目的基因需要两种引物，合成引物的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列　(2)PCR 过程中要变换温度、利用的DNA聚合酶为耐高温的DNA聚合酶、DNA解旋在90℃以上的高温下进行等(写出两点即可)　(3)目的基因和质粒自身环化　目的基因与启动子相接的一端为转录的起始端，如果反向连接，则转录得到的mRNA序列与正向连接相比是不同的 (4)在A1中能形成菌落，在A2中不形成菌落　(5)分子水平和个体生物学 学科网（北京）股份有限公司 $$