第3章 第1节 重组DNA技术的基本工具（课件PPT）-【状元桥·优质课堂】2024-2025学年高中生物学选择性必修第三册（人教版2024）

基因工程 第3章 第1节　重组DNA技术的基本工具 返回目录 生物学　选择性必修3 　 教材梳理·新知全解 关键能力·合作探究 随堂检测·即时巩固 课时作业(十二) 目 录 Contents 教材梳理·新知全解 知识点1　重组DNA技术的基本工具 转基因 DNA分子 返回目录 生物学　选择性必修3 　 限制酶 原核生物 特定核苷酸 磷酸二酯键 平 中心轴线两侧 返回目录 生物学　选择性必修3 　 中心轴线处 返回目录 生物学　选择性必修3 　 磷酸二酯键 返回目录 生物学　选择性必修3 　 自我复制 环状双 链DNA 限制酶 返回目录 生物学　选择性必修3 　 自我复制 人工改造 标记基因 筛选 噬菌体 动植物病毒 返回目录 生物学　选择性必修3 　 × × 返回目录 生物学　选择性必修3 　 √ √ × 返回目录 生物学　选择性必修3 　 知识点2　DNA的粗提取与鉴定 物理和化学性质 返回目录 生物学　选择性必修3 　 酒精 酒精 溶解度 2 mol/L 二苯胺 蓝 返回目录 生物学　选择性必修3 　 纱布 4 1500 r/min 返回目录 生物学　选择性必修3 　 酒精 白 10000 r/min 返回目录 生物学　选择性必修3 　 2 mol/L的NaCl 二苯胺 沸水 返回目录 生物学　选择性必修3 　 √ × 返回目录 生物学　选择性必修3 　 × × 返回目录 生物学　选择性必修3 　 关键能力·合作探究 返回目录 生物学　选择性必修3 　 拟核DNA 质粒 ① 标记基因 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 探究点1　重组DNA技术的基本工具 返回目录 生物学　选择性必修3 　 不能 3 4 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 探究点2　DNA的粗提取与鉴定 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 洋葱、菜花 使DNA溶解 使DNA析出 DNA在2 mol/L的NaCl 溶液中的溶解度较高，而在0.14 mol/LNaCl溶液中的溶解度很低，向滤液D中加入蒸馏水可降低NaCl溶液的浓度，使DNA溶解度下降而沉淀析出，以便除去溶解在低盐溶液中的杂质 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂会被染成蓝色 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 体积分数为95%的冷酒精 粗提取的DNA B 二苯胺 2mol/L的NaCl 不变蓝 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 随堂检测·即时巩固 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 课时作业(十二)　重组DNA技术的基本工具 返回目录 生物学　选择性必修3 　 制 作 者：状元桥 适用对象：高中学生 制作软件：Powerpoint2010、 Photoshop cs3 运行环境：WindowsXP以上操作系统 [课标要求] 1.概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的(生命观念)。2.阐明重组DNA技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具(生命观念、科学思维)。3.DNA的提取和鉴定(科学探究)。 1.基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，通过__________等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在______________水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。 2．限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，又称__________。 (1)来源：主要是从____________中分离纯化出来的。 (2)作用：识别双链DNA分子的______________序列，并且使每一条链中特定部位的______________断开。 (3)切割产物：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——黏性末端和______末端。 ①黏性末端：由限制酶在它识别序列的________________将DNA分子的两条链分别切开形成。 ②平末端：由限制酶在它识别序列的______________将DNA分子的两条链分别切开形成。 ③两种切割末端图示： 3．DNA连接酶——“分子缝合针” (1)DNA连接酶的作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的______________。 (2)DNA连接酶的种类和特点 4．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” (1)常用载体——质粒 ①概念：质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有__________能力的______ _________分子。 ②特点 a．质粒DNA分子上有一个至多个__________切割位点，供外源DNA片段插入其中。 b．携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，能在细胞中进行__________，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。 ③在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过____________的，这些质粒上常有特殊的____________，便于重组DNA分子的________。 (2)其他载体 基因工程中使用的载体除质粒外，还有_______、___________等。 【辨正误】 (1)重组DNA技术所需要的工具酶有限制酶、DNA连接酶和载体。(　 　) 基因工程中常用的工具酶有限制性内切核酸酶、DNA连接酶，载体不属于工具酶。 (2)所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列。(　 　) 限制性内切核酸酶具有特异性，一种限制性内切核酸酶只能识别一种特定的核苷酸序列。 (3)当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，产生的是黏性末端。(　 　) (4)限制酶和DNA连接酶的作用部位一致，但作用相反。(　 　) (5)所有的DNA连接酶都能连接黏性末端和平末端。(　 　) 在基因工程操作中，DNA连接酶主要有两类：E.coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶，前者只能连接黏性末端；后者可连接黏性末端和平末端，但是连接平末端的效率相对较低。 1.原理 (1)提取思路 DNA、RNA、蛋白质和脂质等在__________________方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。 (2)提取原理 ①DNA不溶于________，但某些蛋白质溶于________。利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。 ②DNA在不同浓度的NaCl溶液中__________不同，它能溶于___________的NaCl溶液。 (3)鉴定原理 在一定温度下，DNA遇__________试剂会呈现______色。 2．实验过程 (1)称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。 (2)在漏斗中垫上________，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在______℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。也可以直接将研磨液倒入塑料离心管中，在____________的转速下离心5 min，再取上清液放入烧杯中。 (3)在上清液中加入体积相等的、预冷的体积分数为95%的_______溶液，静置2～3 min，溶液中出现的____色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离心管中，在___________的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。 3．DNA的鉴定 取两支20 mL的试管，各加入_________________溶液5 mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中各加入4 mL的__________试剂。混合均匀后，将试管置于________中加热5 min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。 【辨正误】 (1)DNA粗提取的原理利用了DNA与蛋白质等物质的物理与化学性质方面的差异。(　 　) (2)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝。(　 　) 在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，应该将DNA丝状物放入一定浓度的氯化钠溶液中溶解，再滴加二苯胺试剂，沸水浴加热后冷却变蓝。 (3)用玻璃棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少。(　 　) 用玻璃棒缓慢搅拌滤液，有利于提取DNA并防止搅拌时DNA断裂，并不影响DNA的提取量。 (4)DNA在NaCl溶液中溶解度远超蛋白质。(　 　) DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，在2 mol/L NaCl溶液中溶解度最高。 1．(教材P72图示拓展)根据大肠杆菌及质粒结构模式图完成下列问题： (1)图中A、B分别代表的物质是______________、________。 (2)①②两点具有限制酶切割位点的是_________。 (3)图中氨苄青霉素抗性基因可作为____________。 2．(教材P74“拓展应用”)为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？ 提示　细菌中的限制酶之所以不剪切自身DNA，是因为细菌在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 1．BamHⅠ和BclⅠ是两种限制酶，其识别序列及切割位点如下表所示。 限制酶 BamHⅠ BclⅠ 识别序列及切割位点 (1)限制酶________(填“能”或“不能”)切割原核细胞自身的DNA。 (2)若某链状DNA分子中含有两个限制酶BamHⅠ的识别序列，该DNA分子将被切成______个片段，共断裂______个磷酸二酯键。 (3)请画出BclⅠ切割后产生的末端。 (4)BamHⅠ和BclⅠ切割后产生的黏性末端能否被DNA连接酶连接？说明你的理由。 提示　(3)—T　　　　GATCA— 　 —ACTAG　　　　T— (4)能；二者切割后产生的黏性末端相同，可被DNA连接酶连接。 2．通常利用质粒作为载体，将基因送入细胞。如图是质粒结构模式图，回答下列问题： (1)质粒上的××抗性基因在基因工程中的作用是_________。 (2)将外源基因直接导入受体细胞可行吗？为什么？_______ (3)为使外源基因插入质粒中，质粒需具备什么条件？ 提示　(1)作为标记基因，便于重组DNA分子筛选 (2)不可行；直接把外源基因导入受体细胞，外源基因在受体细胞内不能进行复制，转录和稳定保存。 (3)质粒应有一个至多个限制性内切核酸酶的切割位点，供外源基因插入其中。 1．基因工程的理论基础 2．限制酶与DNA连接酶的比较 种类 限制酶 DNA连接酶 不同点 作用 使“特定部分”的磷酸二酯键断裂；具有特异性 在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键；无识别的特异性，只要两个黏性末端(或平末端)能互补配对，DNA连接酶就将其“缝合”起来，重新形成DNA分子 应用 用于提取外源基因和切割载体 将两个DNA片段拼接成新的DNA分子 关系 3.标记基因的筛选原理 载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。如图所示： 【例1】 下表列举了几种限制酶的识别序列及其切割位点(箭头表示相关酶的切割位点)。下图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是(　　) 限制酶 AluⅠ BamHⅠ SmaⅠ Sau3AⅠ 识别序列及 切割位点 A．BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键 B．Sau3AⅠ和BamHⅠ切割的序列产生的黏性末端能够相连，连接后的片段还能被Sau3AⅠ切割 C．DNA连接酶能连接②⑤，不能连接②④ D．E.coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶都能连接①③，且连接效率低 答案　B 解析　限制酶BamHⅠ与AluⅠ切割的均是磷酸二酯键，A项错误；BamHⅠ切割Sau3AⅠ切割故二者切割后产生的黏性末端是相同的，因此二者切割后产生的黏性末端能够相连，连接后的片段能被Sau3AⅠ切割，但是不能被BamHⅠ切割，B项正确；②⑤的黏性末端相同，②④的黏性末端也相同，因此DNA连接酶能连接②⑤，也能连接②④，C项错误；E.coli DNA连接酶是从大肠杆菌中获得的，只能连接黏性末端，T4 DNA连接酶既可以连接黏性末端，也可以连接平末端，而图中①③属于平末端，只能用T4 DNA连接酶连接，D项错误。 【例2】 据图判断，下列有关酶功能的叙述不正确的是(　　) A．切断a处的酶为限制酶 B．连接a处的酶为DNA连接酶 C．切断b处的酶为解旋酶 D．连接b处的酶为DNA聚合酶 答案　D 解析　a表示的是磷酸二酯键，切断a处的酶为限制性内切核酸酶，连接a处的酶为DNA连接酶，A、B项正确；b表示的是氢键，切断b处的酶为解旋酶，C项正确；DNA分子内氢键是自动形成的，不需要酶进行连接，D项错误。 1．即使用不同的限制酶进行切割，但只要切割后产生的黏性末端相同，就可用DNA连接酶连接起来。 2．辨析限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等相关酶 项目 作用底物 作用结果 限制酶 DNA分子 断开磷酸二酯键，形成黏性末端或平末端 DNA连接酶 DNA分子片段 通过形成磷酸二酯键，进而形成新的DNA分子 项目 作用底物 作用结果 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 通过形成磷酸二酯键，进而形成新的DNA分子 DNA水解酶 DNA分子 断开磷酸二酯键，形成脱氧核苷酸 解旋酶 DNA分子 断开碱基对间的氢键，形成单链DNA分子 RNA聚合酶 核糖核苷酸 通过形成磷酸二酯键，进而形成单链RNA分子 点悟：几种酶的作用部位图解： (1)作用于a(磷酸二酯键)的酶：限制酶(断开)、DNA连接酶(形成)和DNA聚合酶(形成)。 (2)作用于b(氢键)的酶：解旋酶(断开)。 DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。例如，DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。下图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。 (1)图中实验材料A可以是______________等。图中所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是________________，之后再过滤得到滤液D并向滤液D中加入蒸馏水的目的是_____________，其原理是______________________ ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。 (2)DNA鉴定的原理是_________________________________ ________________。 (3)如图甲、乙为“DNA的粗提取与鉴定”实验中涉及的两个操作装置图。 比较 加入物质 结果 实验组 ______组 均加入： a．4 mL__________试剂 b．_______________溶液5 mL 丝状物 (DNA) 溶液____________ ①图甲烧杯中所加溶液是____________________________，缠绕在玻璃棒上的丝状物为__________________。 ②针对图乙的A、B试管，填写下表中空白处内容。 1．DNA粗提取的原理 2．DNA的粗提取与鉴定操作步骤原理及目的归纳 步骤 原理或目的 充分研磨 使细胞破碎，DNA溶解于研磨液中 过滤(或离心) 除去细胞膜等不溶性杂质，得到与蛋白质等杂质结合在一起的溶解于滤液(或上清液) 的DNA 搅拌(或离心) 析出DNA 加入预冷的酒精溶液，蛋白质溶于酒精，DNA不溶于酒精，将DNA和蛋白质等杂质分离 溶解 用2 mol/L的NaCl溶液溶解DNA 鉴定DNA 二苯胺试剂现配现用，水浴加热，溶液变蓝则证明有DNA存在 【例3】 (2023·广东)“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。下列叙述错误的是(　　) A．裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质 B．分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等 C．沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度 D．鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色 答案　D 解析　DNA粗提取与鉴定实验的基本过程是：裂解、分离、沉淀、鉴定。裂解的目的是使细胞破裂，释放出DNA等物质，A项正确；DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质等，去除混合物中的多糖、蛋白质等，B项正确；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质，可反复多次以提高DNA的纯度，C项正确；进行DNA鉴定时可以使用二苯胺试剂，但要进行沸水浴加热后才能观察到颜色变化， D项错误。 【例4】 (2024·山东)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是(　　) A．整个提取过程中可以不使用离心机 B．研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中 C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变 D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰 答案　A 解析　在DNA的粗提取与鉴定实验中，可将获得的研磨液用纱布过滤后，在4℃的冰箱中放置几分钟，再取上清液，也可以直接将研磨液用离心机进行离心后取上清液，A项正确；研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，DNA在上清液中，应取上清液倒入烧杯中，B项错误；鉴定过程中用沸水浴加热，DNA双螺旋结构会发生改变，C项错误；加入二苯胺试剂后沸水浴处理的时间要在5分钟以上，且要等到冷却后再观察结果，这样才可以观察到较为明显的显色反应，仅设置一个对照组可以排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰，D项错误。 (1)粗提取的DNA中可能含有少量的蛋白质等。 (2)析出DNA时必须用“冷酒精”的原因。 ①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解。 ②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出。 ③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。 (3)实验中出现的丝状物的主要成分是DNA，实际上每一根“丝”都是由许多DNA分子聚集在一起形成的；应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，避免破坏DNA。 (4)为减少DNA的损失，过滤过程一般使用纱布过滤。 (5)“DNA的粗提取与鉴定”实验中3种试剂的作用 ①2 mol/L的NaCl溶液——溶解DNA。 ②酒精(体积分数为95%)——除去杂质，提纯DNA。 ③二苯胺试剂——DNA鉴定剂(沸水浴、呈蓝色)。 核心知识小结 [网络构建] 核心知识小结 [答题必备] 1．实现DNA分子重组至少需要三种工具：即切割DNA分子的“限制性内切核酸酶”、缝合DNA片段的“DNA连接酶”及将体外重组好的DNA分子导入受体细胞的“载体”。 2．大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端。 核心知识小结 3．DNA连接酶主要有两类：只连接黏性末端的E.coli DNA连接酶及连接两类末端的T4 DNA连接酶。 4．基因工程中使用的载体除质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等，质粒上要有限制酶切割位点供外源DNA切入其中，还要有特殊的标记基因便于重组DNA分子的筛选。 1．基因工程中常用的DNA连接酶有E.coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶，以下说法正确的是(　　) A．两种酶都可以连接平末端 B．两种酶都可以连接磷酸二酯键和氢键 C．E.coli DNA 连接酶连接的是磷酸二酯键，T4 DNA连接酶连接的是氢键 D．T4 DNA连接酶既能连接黏性末端，也能连接平末端 答案　D 解析　两种酶都可以连接黏性末端，只有T4 DNA连接酶可以连接平末端，A项错误、D项正确；两种DNA连接酶都只能连接磷酸二酯键，而不能连接DNA双链间的氢键，B、C项错误。 2．作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件之一及理由是(　　) A．能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B．具有多个限制酶切割位点，以便于目的基因的表达 C．具有某些标记基因，以便目的基因能够与其结合 D．对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择 答案　A 解析　作为载体需能在宿主细胞内稳定保存并大量复制，A项正确；应有一个或多个限制酶切割位点，使外源DNA片段插入其中，B项错误；应具有标记基因，以便于重组DNA的鉴定和选择，C项错误；应对宿主细胞无伤害，以便目的基因能够与其结合，D项错误。 3．(2024·安徽)下列关于“DNA 粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是(　　) A．实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低 B．利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNA C．DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，该原理可用于纯化DNA粗提物 D．将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可检测溶液中是否含有蛋白质杂质 答案　D 解析　将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可鉴定溶液中是否含有DNA，D项错误。 4．以洋葱为材料进行DNA的粗提取与鉴定实验，相关叙述错误的是(　　) A．可将洋葱换成哺乳动物的血液进行该实验 B．向含DNA的滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液，有利于去除杂质 C．向含DNA的滤液中加入预冷的体积分数为95%的酒精溶液，有利于获得较纯净的DNA D．用二苯胺试剂鉴定DNA时进行沸水浴加热，有利于显色反应的发生 答案　A 解析　哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体等，不宜作为该实验的材料，A项错误；在2 mol/L的NaCl溶液中，DNA的溶解度较大，进而可去除不溶的杂质，B项正确；DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，向含DNA的滤液中加入预冷的体积分数为95%的酒精溶液，有利于获得较纯净的DNA，C项正确；DNA与二苯胺试剂在沸水浴下反应呈蓝色，D项正确。 5．通过重组DNA技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质。如图表示这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“分子手术刀”能识别的序列和切点是。请回答下列问题： (1)从羊染色体中“切下”羊蛋白质基因的酶是___________，人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是____________。 (2)请写出质粒被切割形成黏性末端的过程图。 (3)人体蛋白质基因能“插入”羊的染色体内，原因是________，“插入”时用的工具是_______，其种类有_________。 解析　(1)限制酶可以识别并切割特定的核苷酸序列，可从羊染色体中“切下”羊蛋白质基因。人的蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要DNA连接酶。(3)羊的染色体的主要成分是DNA和蛋白质，其DNA上的基因与人体蛋白质基因的结构是相同的，因此人体蛋白质基因能“插入”羊的染色体内。“插入”时用的工具是载体，载体的种类有质粒、动植物病毒和噬菌体等。 答案　(1)限制酶　DNA连接酶 (3)基因的结构是相同的　载体　质粒、动植物病毒和噬菌体等 $$