4.2 基因工程及其延伸技术应用广泛-【步步高】2023-2024学年高二生物学选择性必修3 生物技术与工程（浙科版）

第二节　基因工程及其延伸技术应用广泛 [学习目标]　1.举例说明基因工程和蛋白质工程改善了人类的生活品质。2.概述蛋白质工程的原理。 一、基因工程改善了人类的生活品质 1．应用基因工程技术诊断、治疗、研究疾病 (1)基因诊断(运用核酸分子杂交、PCR等技术) (2)基因治疗(向患者体内导入正常基因) (3)基因工程药物(利用转基因生物生产) (4)转基因动物可为研究疾病机理提供模型 2．应用基因工程技术进行法医鉴定 3．应用基因工程可培育具有优良性状的农牧业品种 4．基因工程可用于保护生态环境 判断正误 (1)核酸分子杂交、PCR技术可用来检测遗传病患者携带的致病基因(　　) (2)运用PCR技术可以检测某人是否感染某种病原体(　　) (3)利用哺乳动物的乳腺作生物反应器生产药物，需将药物蛋白基因导入动物的乳腺细胞 (　　) (4)DNA指纹可用于指证犯罪嫌疑人和亲子鉴定(　　) 答案　(1)√　(2)√　(3)×　(4)√ 任务一：运用核酸分子杂交、PCR技术进行基因诊断的原理 镰刀形贫血症是一种单基因遗传病，是由正常的血红蛋白基因(HbA)突变为镰刀形贫血症基因(Hbs)引起的。在非洲地区黑人中有4%的人是该病患者，会在成年之前死亡，有32%的人是携带者，不发病但血液中有部分红细胞是镰刀状。 (1)某表型正常的非洲裔夫妇，他们的孩子尚未出生，从羊水中收集少量胎儿的细胞，提取出DNA，用什么技术判断胎儿是否携带Hbs? 提示　用PCR技术或核酸分子杂交技术。 (2)如图甲是正常人和患者血红蛋白基因的部分片段，若用Mst Ⅱ限制酶切割图中正常的血红蛋白基因和镰刀形贫血症基因，则酶切后分别产生几种DNA片段？ 提示　正常的血红蛋白基因酶切后产生2种DNA片段，镰刀形贫血症基因酶切后产生1种DNA片段。 (3)若用MstⅡ限制酶切割胎儿的DNA后，用琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段，片段越大，在凝胶带上距离加样孔越近。得到图乙所示的三种结果。若出现哪种结果，则说明胎儿患病？若出现哪种结果，则说明胎儿是携带者？ 提示　出现C结果说明胎儿患病；出现B结果说明胎儿是携带者。 任务二：RT—PCR技术诊断是否感染某RNA病毒的原理 用于核酸检测的RT－PCR试剂盒的部分工作原理简图如图所示。回答下列问题： (1)RT－PCR是指以病毒的RNA为模板通过逆转录合成cDNA，并对cDNA进行PCR扩增的过程。进行RT－PCR过程中，需要加入的酶有哪些？ 提示　逆转录酶和Taq DNA聚合酶。 (2)利用RT－PCR试剂盒对某病毒进行检测时，除借助上述RT－PCR技术外，还需要有特异性的探针。制作该探针的依据是什么？ 提示　该病毒的(核糖)核苷酸序列。 1．基因诊断的过程 2．RT—PCR技术检测是否感染RNA病毒的过程 1．(2023·绍兴高二期中)地中海贫血症是一种遗传性溶血性贫血症。有一对表型正常的夫妇，他们以前生育过β地中海贫血症儿子，该患儿的β-珠蛋白结构异常，在一岁时死去。现在妻子又怀孕了，于是进行了产前诊断，诊断时用限制酶Pst Ⅰ酶切后电泳结果如图1所示，图2为β-珠蛋白基因及其侧翼序列的Pst Ⅰ酶切位点(不考虑X、Y染色体同源区段)。下列叙述错误的是(　　) A．该遗传病的遗传方式属于常染色体隐性遗传，且人群中男女的发病率相等 B．孕妇体内的胎儿虽含有致病基因，但生下来未必患该病 C．正常的β-珠蛋白基因长度为4.4 kb，突变后的致病基因长度为3.7 kb D．β-珠蛋白基因通过控制蛋白质的结构直接控制生物的性状 答案　C 解析　由题意和图示分析可知，该遗传病属于常染色体隐性遗传，在人群中男女的发病率相等，A正确；由电泳结果可知，待测胎儿同时含有致病基因和正常基因，故胎儿为杂合子，表型正常，生下来并不会患该病，B正确；由题图可知，限制酶Pst Ⅰ的两个酶切位点之间的长度分别是4.4 kb和3.7 kb，正常的β-珠蛋白基因和突变后的致病基因位于酶切位点的内部，因此两个基因的长度分别小于4.4 kb和3.7 kb，C错误；根据题干“该患儿的β-珠蛋白结构异常”可知，β-珠蛋白基因通过控制蛋白质的结构直接控制生物的性状，D正确。 2．实时荧光RT－PCR可用于某单链RNA病毒的核酸检测，其原理是：在PCR复性过程中探针和引物一起与模板链结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT－PCR进行核酸检测的相关过程如图所示。下列说法错误的是(　　) A．做RT－PCR之前，需要先根据该RNA病毒的cDNA核苷酸序列合成引物和探针 B．RNA不能作为PCR扩增的模板，故需要将样本中的RNA逆转录为DNA后再进行扩增 C．若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染病毒 D．病毒的检测还可以检测病毒的物质或病毒引发人体产生的抗体，其原理都是抗原－抗体杂交 答案　C 解析　PCR需要根据cDNA核苷酸序列合成引物，同时RT－PCR还需要探针与待测样本DNA混合，故需要根据cDNA的核苷酸序列合成探针，A正确；PCR扩增必须以DNA为模板，RNA不能作为PCR扩增的模板，所以需要将样本中的RNA逆转录为DNA后再进行扩增，B正确；若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者极有可能感染了病毒，C错误；RNA病毒的检测方法有：①RNA检测，即检测病毒的遗传物质RNA；②特异性抗原蛋白检测，即检测病毒表面的一种糖蛋白；③特异性抗体检测，即检测感染者体内通过免疫反应所产生的某种抗体，后两种方法的原理是抗原－抗体杂交，D正确。 二、蛋白质工程是基因工程的延伸和以测序为基础建立的基因数据库是人类共有的财富 1．蛋白质工程是基因工程的延伸 2．基因数据库 (1)测序技术的发展使得人类获得了海量的生物数据。为了能够有效地储存并解读这些数据，多个国家和机构建立了庞大的生物信息数据库。 (2)科学家可以通过比对核酸或蛋白质的序列重新审视生命进化的历程。 判断正误 (1)改变蛋白质中氨基酸序列可改变蛋白质的结构(　　) (2)蛋白质工程对蛋白质分子直接进行操作，定向改变蛋白质的空间结构(　　) (3)蛋白质工程获得特定功能的蛋白质过程，不遵循“中心法则”(　　) 答案　(1)√　(2)×　(3)× 任务三：蛋白质工程的基本原理 1．基因工程的局限性有哪些？ 提示　(1)基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，合成的蛋白质往往不能很好地行使功能。(2)天然蛋白质无法满足人类生产和生活的需要。 2．对天然的蛋白质进行改造，你认为应该直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？原因是什么？ 提示　通过对基因的操作来实现。原因如下：(1)基因决定蛋白质的合成，改造基因即为改造蛋白质。(2)改造基因可以遗传，改造蛋白质无法遗传。(3)改造基因比改造蛋白质更容易操作。 3．某多肽链的一段氨基酸序列是“……—丙氨酸—色氨酸—赖氨酸—甲硫氨酸—苯丙氨酸—……”。 (1)怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？ 提示　根据氨基酸序列逆推出mRNA序列，再根据mRNA序列推出DNA上的脱氧核苷酸序列。 (2)由(1)中所得脱氧核苷酸序列有多种，请说明理由。 提示　一种氨基酸可能有多个密码子，由此推测的mRNA中的核糖核苷酸序列以及由相应mRNA推测的DNA中的脱氧核苷酸序列都有多种。 (3)确定目的基因的碱基序列后，怎样合成或改造目的基因？ 提示　根据DNA的碱基序列或改造后的DNA碱基序列，利用四种脱氧核苷酸进行人工合成或定点改造。 　基因工程与蛋白质工程的比较 3．已知生物体内有一种转运蛋白Y，由300个氨基酸组成。如果将Y中157位的L-异亮氨酸变成亮氨酸，261位的酪氨酸变成丝氨酸，改变后的蛋白质Y1不但保留了原有Y蛋白的功能，且具备了催化活性。下列说法正确的是(　　) A．蛋白质工程和基因工程的根本区别是操作对象的差异 B．可以通过对Y蛋白基因进行修饰或人工合成获得Y1蛋白基因 C．蛋白质工程操作过程中，不需要酶和载体作为工具 D．细胞内合成Y1蛋白与Y蛋白的过程中，遗传信息的流向是相反的 答案　B 解析　蛋白质工程和基因工程的根本区别是蛋白质工程可产生自然界没有的蛋白质，A错误；蛋白质工程操作过程中，需要酶和载体作为工具，C错误；细胞内合成Y1蛋白与Y蛋白的过程中，遗传信息的流向是相同的，D错误。 4．人们发现，蛛丝蛋白比蚕丝蛋白更细，但强度却更大，于是试图通过破解蛛丝蛋白的结构从而推出其基因结构，以指导对蚕丝蛋白基因的修改，从而让蚕也吐出像蛛丝一样坚韧的丝。此过程的名称和依据的原理分别是(　　) A．基因突变：DNA→RNA→蛋白质 B．基因工程：RNA→RNA→蛋白质 C．基因工程：DNA→RNA→蛋白质 D．蛋白质工程：蛋白质→RNA→DNA→RNA→蛋白质 答案　D 解析　根据题干信息可知，通过改造基因来实现对蛋白质的改造，属于蛋白质工程；该工程依据的原理是蛋白质→RNA→DNA→RNA→蛋白质，D符合题意。 题组一　基因工程在医疗、制药方面的应用 1．基因治疗是指(　　) A．对全身所有的细胞进行基因改造，以达到根治疾病的目的 B．把正常功能的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中，使其表达而达到治疗疾病的目的 C．运用人工诱变的方法，使有缺陷的基因突变回正常基因 D．运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾病的目的 答案　B 2．(2023·宁波高二期中)RT－PCR是将RNA的逆转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)相结合的技术。该技术用于RNA病毒检测时，以下有关其检测反应体系的叙述，错误的是(　　) A．该体系应含有逆转录酶 B．该体系应含有ATP和四种核苷酸 C．该体系冷却时，引物结合到互补DNA链上 D．阳性样本在该体系中可形成大量相关DNA序列 答案　B 解析　该体系应含有四种脱氧核苷三磷酸，不含ATP，B错误。 3．下列关于乳腺生物反应器生产药物的叙述，错误的是(　　) A．构建乳腺生物反应器的过程需要乳腺蛋白基因的启动子 B．构建乳腺生物反应器的过程用到显微注射法 C．可从具有目的基因的转基因雄性动物乳汁中提取药物 D．乳腺生物反应器具有成本低、产量高、易提取等优点 答案　C 解析　乳腺生物反应器生产的药物在转基因雌性动物泌乳期产生的乳汁中提取，C错误。 4．(2023·嘉兴高二期末)如图是某单基因遗传病的系谱图(已确定该遗传病的致病基因不位于X、Y染色体的同源区段)，如表是对该家系中1～4号个体进行相关基因检测(先用某种限制酶切割样品DNA，再进行电泳)得到的电泳结果(电泳时，不同大小的DNA片段移动速率不同)。已知编号a对应的样品来自图中4号个体，下列有关叙述错误的是(　　) 项目 a b c d 条带1 条带2 条带3 A.由题图可知，该病属于常染色体隐性遗传病 B．由题图、题表可知，致病基因内部存在相关限制酶的酶切位点 C．8号个体与该病基因携带者结婚生一个正常男孩的概率为5/6 D．3号个体基因检测的电泳结果是编号c的条带类型 答案　C 解析　设该遗传病由基因A、a控制，则4号个体的基因型为aa，而其进行酶切电泳得到的结果有两种条带，可推测致病基因a内部存在相关限制酶的酶切位点，可以将a基因酶切为两种大小的片段，B正确；8号个体(AA∶Aa＝1∶2)与该病基因携带者(Aa)结婚生一个正常男孩的概率为(1－2/3×1/4)×1/2＝5/12，C错误；表中是1～4号个体基因检测的电泳结果，b和d结果相同，可知b和d分别对应基因型都是Aa的1号和2号个体，又知a对应的样品来自图中4号个体，所以3号个体基因检测的电泳结果是编号c的条带类型，D正确。 题组二　基因工程在法医鉴定、农牧业育种和环境保护方面的应用 5．DNA指纹技术可以帮助人们确认亲子关系，这是因为(　　) A．每个人的DNA大都相同 B．每个人的DNA指纹图谱都是特有的 C．不同个体的相同组织中的DNA指纹图谱相同 D．DNA指纹技术是检测DNA分子的碱基种类 答案　B 解析　每个人都有自己独特的DNA，都是不同的；不同个体的相同组织中的DNA指纹图谱是不相同的；所有个体的DNA分子都是由A、T、G、C四种碱基组成的，对于不同的个体来讲是没有差异的。 6．(2023·绍兴高二检测)下列有关基因工程在农牧业领域应用的叙述，错误的是(　　) A．将来源于某些病毒、真菌等的抗病基因导入植物，可培育出转基因抗病植物 B．将降解或抵抗某种除草剂的基因导入作物，可培育出转基因抗除草剂作物 C．将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物，可提高植物的营养价值 D．将基因工程生产的肠乳糖酶作为药物添加在牛奶中，可解决人的乳糖不耐受问题 答案　D 解析　肠乳糖酶属于蛋白质，口服会被胃蛋白酶消化分解而失效，D错误。 题组三　蛋白质工程 7．水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。研究人员发现，用赖氨酸替换水蛭素第47位的天冬酰胺，可以提高它的抗凝血活性。在这项替换研究中，目前可行的直接操作对象是(　　) A．基因 B．氨基酸 C．多肽链 D．蛋白质 答案　A 解析　通过题干信息可知，该项替换研究可通过蛋白质工程来完成，蛋白质工程直接改造的是相应的基因。 8．(2023·杭州高二月考)科学家为提高玉米中赖氨酸的含量，计划将天冬氨酸激酶的第352位的苏氨酸替换为异亮氨酸，将二氢吡啶二羧酸合成酶中第104位的氨基酸天冬氨酸替换为异亮氨酸。下列叙述正确的是(　　) A．直接改造上述两种蛋白质的空间结构 B．对指导上述两种酶蛋白合成的mRNA进行改造 C．利用诱变育种技术促使上述两种酶蛋白的基因突变 D．利用基因工程技术，对控制上述两种酶蛋白的基因进行改造 答案　D 解析　蛋白质的功能与其高级结构密切相关，而蛋白质的高级结构又非常复杂，所以直接对蛋白质改造非常困难，且即使改造成功也不能遗传，A错误；直接改造相应的mRNA，不一定能够表达产生所需要的蛋白质，且即使成功也不一定能遗传，B错误；由于基因突变具有多方向性和稀有性，所以使用诱变育种的方法不易获得符合要求的基因，C错误；基因工程可定向改造生物的遗传性状，所以可利用基因工程技术，对控制上述两种酶蛋白的基因进行改造，D正确。 9．正常情况下，XAGE基因只在胎盘组织和脑组织中表达，为了探究XAGE基因在肝癌细胞中的表达情况，实验小组分别提取肝癌组织和正常组织细胞的RNA，以RNA为模板指导合成单链cDNA，再将获得的cDNA进行电泳，电泳结果如图所示。下列相关叙述正确的是(　　) 表达XAGE 基因样本 正常肝 组织样本 肝癌样本1 肝癌样本2 肝癌样本3 A.以RNA为模板合成cDNA时需要加入RNA聚合酶 B．以RNA为模板合成的cDNA中的嘌呤数目和嘧啶数目相等 C．XAGE基因的表达情况可作为肝细胞癌变的检测依据 D．该实验也可以直接提取肝组织细胞中的DNA后再进行电泳 答案　C 解析　RNA聚合酶的作用是促进RNA的合成，以RNA为模板合成cDNA时，应加入逆转录酶，A错误；单链cDNA并无碱基互补配对，因此不一定存在嘌呤数目和嘧啶数目相等的现象，B错误；由题意可知，正常肝细胞中无XAGE基因的表达，而肝癌组织有XAGE基因的表达，因此该基因可以作为肝细胞癌变的检测依据，C正确。 10．(2022·天津耀华中学高二期中)如图表示抗凝血酶乳腺生物反应器的制备过程，下列说法正确的是(　　) ―→ A．该转基因牛中的抗凝血酶基因只存在于乳腺细胞中 B．②表示性别为雄性的胚胎 C．常用农杆菌转化法将基因导入受体细胞 D．①表示受精卵 答案　D 解析　图示为抗凝血酶乳腺生物反应器的制备过程。该转基因牛中的抗凝血酶基因存在于所有体细胞中，只在乳腺细胞中表达，A错误；由于只有母牛能产奶，因此②表示性别为雌性的胚胎，B错误；常用显微注射法将基因导入动物受体细胞，C错误；培育转基因动物时应该以受精卵为受体细胞，因此①表示受精卵，D正确。 11．研究表明，每个人的DNA都不完全相同，DNA指纹技术就是利用这一原理，通过比较DNA来识别身份。警方收集犯罪现场及疑犯的DNA，经DNA扩增得到数量较多的相同DNA，再用限制性内切核酸酶将DNA切成若干片段进行凝胶电泳，结果如图所示。下列有关叙述错误的是(　　) A．通过比较，基本可以排除疑犯1的嫌疑 B．将DNA切成片段利用了限制性内切核酸酶的高效性 C．DNA扩增得到数量较多的相同DNA，利用的原理是DNA的半保留复制 D．不同人的DNA不同主要是因为DNA中的脱氧核苷酸排列顺序不同 答案　B 解析　由图可知，疑犯2的DNA与犯罪现场的DNA相似性较大，基本可以排除疑犯1的嫌疑，A正确；将DNA切成片段利用了限制性内切核酸酶的专一性，B错误；脱氧核苷酸的排列顺序储存着生物的遗传信息，不同人的DNA不同主要是因为DNA中的脱氧核苷酸排列顺序不同，D正确。 12．八氢番茄红素合酶(其基因用psy表示)和胡萝卜素脱饱和酶(其基因用crtI表示)参与β-胡萝卜素合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。科学家将psy和crtI基因转入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡萝卜素，由此生产出的大米称为“黄金大米”。下列有关叙述错误的是(　　) A．psy和crtI基因是该项研究中的目的基因 B．以pmi基因为标记基因便于筛选出导入目的基因的受体细胞 C．检出水稻中含八氢番茄红素合酶和胡萝卜素脱饱和酶，即表明转基因水稻培育成功 D．可设法将重组载体导入水稻叶肉细胞 答案　C 解析　由题干信息可知，pmi编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，因此构建基因表达载体时可用pmi基因作为标记基因，B正确；若检测出水稻胚乳细胞中含有β-胡萝卜素，才说明转基因水稻培育成功，仅含有八氢番茄红素合酶和胡萝卜素脱饱和酶，不能说明其能正常发挥作用，C错误；在培育“黄金大米”的转基因操作中可将水稻叶肉细胞作为受体细胞，然后再将导入成功的细胞通过组织培养获得转基因植株，因此，可设法将重组载体导入水稻叶肉细胞，D正确。 13．(2022·绍兴高二期中)阅读如下资料，判断下列相关叙述不合理的是(　　) 资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”。 资料乙：T4溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。 A．甲属于基因工程，乙属于蛋白质工程 B．甲中将目的基因导入小鼠细胞中常用显微注射法 C．乙中通过对基因改造实现了对蛋白质的改造 D．从资料乙可看出，T4溶菌酶是一种直接利用氨基酸制造出来的新蛋白质 答案　D 解析　甲中“超级小鼠”的培育，与导入的牛生长激素基因有关，属于基因工程，乙中通过对编码T4溶菌酶的基因进行改造，导致组成T4溶菌酶的肽链中的氨基酸序列发生了改变，实现了对蛋白质的改造，这属于蛋白质工程，A、C不符合题意，D符合题意。 14．一对表型正常的夫妇，生了一个镰刀形贫血症(常染色体隐性遗传病)患儿。在他们欲生育第二胎时，发现妻子的双侧输卵管完全堵塞，不能完成体内受精。医生为该夫妇实施了体外受精和产前基因诊断，过程如图所示。 请回答下列问题： (1)过程①是指在体外进行的__________处理，从而使精子与卵子结合形成受精卵；过程②称为______________。 (2)在对胎儿进行产前基因诊断时，要先从羊水中的胎儿细胞提取物质③__________进行PCR扩增。然后用Mst Ⅱ对扩增产物进行切割，产生多个片段的酶切产物。据此判断，Mst Ⅱ是一种__________酶。 (3)不同长度的酶切产物在电泳时移动的速率不同，形成不同的电泳条带。该家庭成员的镰刀形贫血症基因分析的电泳带谱如④，据此判断胎儿为 ________(填“正常”“患者”或“携带者”)。 答案　(1)精子获能　胚胎移植　(2)DNA　限制性内切核酸(限制)　(3)正常 解析　(1)精子与卵细胞结合前，要进行获能处理，早期胚胎移植到子宫的过程叫胚胎移植。(2)基因位于DNA上，所以要进行基因诊断就必须提取细胞的DNA，能切割DNA的酶叫限制性内切核酸酶(限制酶)。(3)父母是携带者，有两条电泳条带，其中一条与患儿相同，是含致病基因的条带，另一条是不含致病基因的条带，胎儿只有一条电泳条带，且不与患儿相同，是不含致病基因的条带，所以胎儿正常。 15．基因工程抗体又称重组抗体，是指利用重组DNA及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配，经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。如图为某研究所制备小鼠抗甲肝病毒抗体的流程图。回答下列问题： (1)实验室构建重组质粒时，为保证目的基因与载体的正确连接，过程①最好选择的限制酶是________________。 (2)在重组质粒中，目的基因上游的启动子能够____________________，从而驱动目的基因的转录。除启动子之外，重组质粒还应该包含_________________________________等。 (3)为了筛选出导入目的基因的骨髓瘤细胞，可以在过程③的培养液中添加_______________，过程③所获得的细胞具有____________________的特点。 (4)临床试验发现，过程⑤提取的小鼠抗甲肝病毒抗体具有外源性，容易被人体的免疫系统清除，从而导致其治疗效果大大降低。如图抗体中的A区是与抗原特异性结合的区域，B区是引起人体免疫反应的区域。若要避免小鼠抗甲肝病毒抗体被人体免疫系统清除，请提出合理的改造思路：_____________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________。 答案　(1)EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ　(2)与RNA聚合酶结合　复制起点、终止子、目的基因、标记基因　(3)(适量的)青霉素　既能大量增殖，又能产生抗甲肝病毒抗体　(4)采用蛋白质工程技术将小鼠抗甲肝病毒抗体上B区进行改造，或替换成人体相应抗体的B区，进而降低人体对该抗体的免疫排斥 解析　(1)图中限制酶EcoR V会破坏目的基因，故不能用于切割目的基因，目的基因和载体共同含有的限制酶还有EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ，为了保证目的基因与载体的正确连接，应该选择限制酶EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ切割目的基因和载体(质粒)。(3)重组质粒中含有青霉素抗性基因，故可以在过程③的培养液中添加青霉素，来筛选导入目的基因的骨髓瘤细胞。过程③所获得的细胞是含有目的基因的骨髓瘤细胞，既能大量增殖，又能产生抗甲肝病毒抗体。 学科网（北京）股份有限公司 $$