1.2.1 发酵工程的灭菌方法、灭菌设备、无菌操作器具及微生物接种和传代的无菌技术-【步步高】2023-2024学年高二生物学选择性必修3 生物技术与工程（苏教版）

第二节　发酵工程的无菌技术 第1课时　发酵工程的灭菌方法、灭菌设备、无菌操作器具及微生物接种和传代的无菌技术 [学习目标]　1.掌握不同物品的灭菌方法。2.概述发酵工程的灭菌设备和无菌操作器具并掌握其正确使用方法。3.概述微生物接种的方法和传代的无菌技术。 一、发酵工程的灭菌方法 1．无菌技术：是发酵工程的重要技术之一，是指在操作过程中，保持物品与操作区域的无菌状态并不被微生物污染的技术，其核心是灭菌。 2．灭菌方法 灭菌方法 灭菌原理 应用 化学方法 化学试剂灭菌法 一些化学试剂如甲醛、氯、高锰酸钾，能破坏微生物的蛋白质或细胞结构，具有杀菌作用 由于灭菌剂可能会与培养基中的一些成分发生作用，因此一般不用于培养基的灭菌 物理方法 射线灭菌法 利用紫外线等产生的高能粒子或X射线和γ射线等进行灭菌 紫外线一般用于表面和空气的灭菌 干热灭菌法(包括干热空气灭菌法和火焰灼烧法等) 高温干热使微生物的结构被破坏、蛋白质、核酸变性 ①干热空气灭菌的条件一般是140～160 ℃，2～3 h，主要用于要求保持干燥的实验器具(如培养皿、接种针和移液管)的灭菌；②火焰灼烧法常用于接种等操作过程 湿热灭菌法(一般在温度为121 ℃、气压约100 kPa的条件下维持15～20 min) 蒸汽与较低温的物体表面接触凝结为水时可放出大量能量，吸收了蒸汽水分和热量的菌体蛋白质易变性 适用于耐高温、耐湿热的物品，如对培养基的灭菌，在相同温度下湿热灭菌比干热灭菌更有效 过滤除菌法 通过过滤阻留微生物从而达到除菌目的 制备无菌空气；在产品提取过程中处理料液，获得无菌产品 判断正误 (1)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底(　　) (2)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用湿热灭菌法进行灭菌(　　) (3)培养基最常用的灭菌方法是湿热灭菌法(　　) 答案　(1)√　(2)×　(3)√ 任务一：无菌技术的分析 1．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？ 提示　无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 2．请判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 (1)培养细菌用的培养基与培养皿。 (2)玻璃棒、试管、锥形瓶和移液管。 (3)实验操作者的双手。 提示　(1)培养基要湿热灭菌，培养皿要干热灭菌。 (2)玻璃器皿要干热灭菌。 (3)双手要酒精消毒。 　消毒与灭菌的比较 比较项目 消毒 灭菌 作用强度 较为温和 强烈的物理或化学方法 作用对象 操作空间、操作者双手等 接种环、移液管、培养基等 作用结果 不能杀死所有微生物(如细菌芽孢) 能杀死物体内外的所有微生物，包括芽孢和孢子 常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法等 干热灭菌法、湿热灭菌法等 1．下列关于无菌技术的叙述，错误的是(　　) A．甲醛、高锰酸钾等，能破坏微生物的蛋白质或细胞结构，具有杀菌作用 B．工业生产中制备无菌空气常用过滤除菌法 C．紫外线穿透力强能杀死一定空间中所有微生物 D．对培养基灭菌，常采用湿热灭菌法 答案　C 解析　紫外线穿透力弱，一般用于表面和空气的灭菌。 2．(2023·连云港高二调研)消毒和灭菌是微生物培养中常用的操作方法。下列说法正确的是(　　) A．发酵工程的生产过程只有在没有杂菌污染的情况下才能正常进行 B．在100 ℃条件下煮沸5～6分钟属于灭菌方法，该方法可杀死微生物细胞和一部分芽孢 C．无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌 D．消毒和灭菌的原理是完全不同的 答案　A 解析　在100 ℃条件下煮沸5～6分钟属于消毒，B错误；无菌技术中，若处理对象为液体，可以用湿热灭菌法灭菌，C错误。 二、发酵工程的灭菌设备及无菌操作器具 1．发酵工程的灭菌设备 (1)电热鼓风干燥箱 ①结构：具有双层金属壁、中间有隔热石棉板的箱体，顶端或背面有调气阀，下底夹层装有供通电加热的电炉丝。 ②应用：常用于空的玻璃器皿(如培养皿、离心管、移液管)、金属用具(如镊子、手术刀)和其他耐高温的物品(如菌种保藏采用的沙土管、石蜡油、碳酸钙)的灭菌。 ③优点：使灭菌器皿保持干燥。 ④缺点：带有胶皮或塑料的物品、液体及固体培养基一般不能采用电热鼓风干燥箱干热灭菌。 ⑤菌体蛋白质的变性温度与含水量的关系 a．细菌、酵母菌及霉菌的营养细胞，含水量较高，需在50～60 ℃条件下，加热10 min才可使其蛋白质变性而达到杀菌效果。 b．放线菌及霉菌孢子含水量较少，在80～90 ℃条件下，加热30 min方可杀菌。 c．细菌芽孢含水量低，蛋白质变性温度较高。 ⑥彻底灭菌的标准及灭菌条件 标准：以能否杀死细菌的芽孢作为彻底灭菌的标准。 灭菌条件：温度提高到约160 ℃，加热2～3 h。 ⑦注意事项 a．不得将易腐、易燃、易爆物品放入箱内干燥灭菌； b．干燥箱在工作时，必须将风机开关打开； c．箱内应经常保持清洁。 (2)高压蒸汽灭菌锅 ①应用：采用高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌。 ②灭菌原理：在一个密闭的锅内，水的沸点随蒸汽压力的增高而上升，加压的同时提高蒸汽的温度，使锅内的待灭菌物品在一定压力和温度等条件下，杀死其中所有微生物的营养体及其芽孢。 ③类型：有手动式高压蒸汽灭菌锅和全自动高压蒸汽灭菌锅两类。 ④注意事项：操作人员必须在现场规范操作，严格控制热源维持灭菌时的压力。锅内压力过高，不仅培养基的营养成分会被破坏，而且高压锅超过耐压范围后可能会发生爆炸，造成伤人事故等。 ⑤使用步骤 (3)空气除菌设备 ①空气除菌原因：通常在空气中含有灰尘颗粒和各种杂菌，在阴雨天气或环境污染比较严重的情况下，空气中会悬浮大量的微生物。这些微生物一旦进入营养丰富的培养基中，会很快繁殖，影响发酵过程。 ②空气除菌方法：常采用空气过滤除菌的方法，即让含菌空气通过无菌干燥的过滤介质，以阻截空气中所含微生物。 2．发酵工程的无菌操作器具 (1)接种器具 ①接种：在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。 ②常用的接种器具包括玻璃涂布器、接种针、接种环等。 ③应用：玻璃涂布器常用于平板稀释涂布接种，接种针用于穿刺接种，接种环用于斜面接种或在平板培养基上划线接种。 (2)转移器具 ①移液管的应用：一般用于转移部分液体培养物、系列稀释微生物或分装化学试剂。 ②刻度移液管：具有刻度的直形玻璃管，在需要控制试剂加入量时使用。 ③使用要点 a．以拇指及中指捏住管颈标线以上的地方，将移液管插入待取溶液液面下约1 cm。 b．移液管不应伸入太多，以免管尖外壁粘有过多溶液；也不应伸入太少，以免液面下降后而吸空。 ④操作步骤 ⑤微量取液器 a．应用：取液量很少时(如0.1 mL)使用。 b．类型：分为固定容量的和可调容量的两种。 (3)超净工作台 ①概念：超净工作台是一种经过空气净化而形成高洁净操作环境的设备。 ②净化原理：利用工作台内紫外线灯的杀菌作用，并通过空气过滤器过滤确保工作台内空气的无菌、无污染。 ③注意事项：超净工作台开机杀菌30 min后，需先关掉紫外线灯，约10 min后方可使用。 ④优点：操作方便。 判断正误 (1)菌体蛋白质的变性温度与含水量相关，一般来说含水量越低，变性温度越高(　　) (2)使用高压蒸汽灭菌锅时，为充分利用空间，装得越满越好(　　) (3)当高压蒸汽灭菌锅的压力表指针降至“0”点时，即可出锅(　　) (4)制备氨基酸、抗生素等的发酵过程，所需的微生物对空气无菌的要求较低(　　) (5)将移液管移入准备接受溶液的容器时，为避免污染，移液管不能接触器壁(　　) 答案　(1)√　(2)×　(3)×　(4)×　(5)× 任务二：无菌操作器具的使用分析 1．培养基灭菌为什么采用高压蒸汽灭菌而不采用干热灭菌？ 提示　干热灭菌箱内的高温会导致培养基的水分散失，而高压蒸汽灭菌锅内的湿度较大，不会导致培养基的水分散失。 2．如何制备一瓶无菌水？ 提示　对一瓶有菌水进行高压蒸汽灭菌处理。 3.某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是什么？ 提示　原因可能是未将锅内冷空气排尽。 4．某同学从高压蒸汽灭菌锅内拿出培养基后发现，培养基已经溅满了锥形瓶的瓶壁，最可能的原因是什么？ 提示　高压蒸汽灭菌锅的压力表指针还未降至“0”点，就提前打开了高压蒸汽灭菌锅。 　高压蒸汽灭菌锅的使用及注意事项 (1)首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，水量达到水位标记线即可。 (2)放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。锥形瓶与试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞。 (3)加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。拧紧固定螺栓，注意要对称地旋紧锅盖四周的固定螺栓，使固定螺栓松紧一致，不漏气。 (4)加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾，排出锅内的冷空气。等冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，按照灭菌所要求的时间，维持压力。 (5)到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到“0”点时，打开排气阀，旋开固定螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容器，造成污染。 3．(多选)下列关于无菌操作器具的使用，错误的是(　　) A．用玻璃涂布器进行涂布平板接种 B．用接种针进行穿刺接种 C．用移液管移取溶液时，当溶液液面上升到刻度标线时，立即堵住管口 D．超净工作台开机杀菌30 min后，关闭紫外线灯即可使用超净工作台 答案　CD 解析　可用玻璃涂布器进行涂布平板接种，A正确；用移液管移取溶液时，当溶液液面上升到刻度标线以上约1 cm处时，立即堵住管口，C错误；紫外线灯的开启可激发超净工作台内空气中的氧分子形成臭氧分子，臭氧分子有很强的杀菌作用，但也对操作人员的健康有害，因此，超净工作台开机杀菌30 min后，需先关掉紫外线灯，约10 min后方可使用超净工作台，D错误。 4．(多选)如图是灭菌锅及其局部剖面示意图，下列相关叙述正确的是(　　) A．甲、乙、丙分别是排气阀、安全阀和压力表 B．使用时应在锅内水煮沸并排除全部冷空气后再关闭乙 C．灭菌结束后应立即打开乙，放出锅内热蒸汽 D．将器皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎，避免灭菌后的再次污染 答案　BD 解析　甲、乙、丙分别是安全阀、排气阀和压力表，A错误；灭菌结束后，应切断热源，等灭菌锅内温度自然下降，当压力表指针降至“0”点时，再打开排气阀，以防止提前打开排气阀，锅内压力突然下降，导致灭菌容器内的液体冲出容器，造成污染，C错误。 三、微生物接种和传代的无菌技术 1．菌种的传代和保存：要考虑菌种的生理、生化特性，尽量让菌种在人工创造的条件下，降低细胞的代谢水平，使细胞基本处于休眠状态，即微生物的生长繁殖受到抑制但又不至于死亡。 2．菌种保存的重要条件：低温、干燥、真空。 3．穿刺接种和斜面接种 (1)厌氧微生物接触氧气会受到抑制、损伤甚至死亡，常采用穿刺接种。 (2)斜面接种是常用的菌种传代和低温下保存菌种的方法。 4．斜面接种和培养酵母菌 准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取菌体→接种→培养。 5．菌种保存 (1)步骤：挑选典型菌落→接种在斜面培养基上→培养使其充分生长→试管用牛皮纸包扎→置于4 ℃左右的冰箱中保藏(目的：减缓培养基的水分蒸发，延长保存时间)。 (2)通常每隔2～3个月重新接种一次，再继续保存。 判断正误 (1)低温、干燥、高氧是菌种保存的重要条件(　　) (2)厌氧微生物常采用穿刺接种的方法将其保护在培养基中(　　) (3)将含有新鲜菌种的试管放在－4 ℃的冰箱中保藏有利于延长保存时间(　　) 答案　(1)×　(2)√　(3)× 任务三：微生物接种方法分析 1．如图所示的接种方法分别是什么？ 提示　图1是穿刺接种；图2是斜面接种。 2．在斜面接种和培养酵母菌的过程中有哪些无菌操作的步骤？ 提示　(1)将接种环的环端和接种时可能进入试管的部分放在酒精灯火焰上，来回灼烧多次。(2)将试管口通过火焰2～3次。(3)在抽出接种环时，带菌部位不要触及管壁或通过火焰。 (4)将试管口与试管塞分别通过火焰2～3次，迅速塞紧试管。 　斜面接种和培养酵母菌的操作步骤及其目的或分析说明 顺序 接种操作步骤 目的或分析说明 ① 将接种环的环端和接种时可能进入试管的部分放在酒精灯火焰上，来回灼烧多次 将接种环灭菌，避免污染菌种 ② 迅速将试管口通过火焰2～3次 灼烧灭菌，防止试管口上的微生物污染培养基 ③ 将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位 使接种环冷却，避免杀死菌种 ④ 抽出接种环时，带菌部位不要触及管壁或通过火焰 防止菌种沾于管壁；防止菌种被杀死 ⑤ 在培养基斜面上由底部向上轻轻划“Z”型折线，但不要将培养基的表面划破 初步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准 ⑥ 将试管口与试管塞分别通过火焰2～3次，迅速塞紧试管 防止杂菌污染 ⑦ 将接种过菌种的试管，放在恒温箱(28 ℃)中培养24 h 培养酵母菌，观察接种和培养的结果 5．下列关于斜面接种和培养酵母菌的叙述，错误的是(　　) A．接种环灭菌时，只需将其环端进行灭菌 B．接种时，应在培养基斜面上由底部向上轻轻划“Z”型折线 C．挑取菌体时应先将接种环的环部接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位使其冷却 D．将菌种置于4 ℃左右的冰箱中保藏既有利于减缓培养基的水分蒸发，又有利于延长保存时间 答案　A 6．(多选)穿刺接种是指用接种针挑取少量的菌种，自培养基的中心垂直地刺入半固体培养基中，然后沿原穿刺线将针拔出的微生物接种方法。下列有关叙述错误的是(　　) A．该接种方法可用于厌氧菌种的接种 B．培养基的配制、分装及微生物的接种过程都需要进行无菌操作 C．在火焰上灼烧接种针后要立即接种，防止空气中杂菌污染接种针 D．接种过程中为杀灭试管口上沾染的微生物要对试管口进行灭菌 答案　BC 解析　培养基的配制、分装不需要无菌操作，需要保持环境卫生，待培养基配制、分装完成会进行高压蒸汽灭菌操作，微生物的接种过程需要进行无菌操作，B错误；在火焰上灼烧接种针后要待接种针冷却后才能进行接种，这样能够防止接种针温度过高杀死菌种，C错误。 题组一　发酵工程的灭菌方法 1．下列常用的无菌操作中，错误的是(　　) A．化学试剂灭菌法可以用于培养基的灭菌 B．灭菌所使用的物理、化学方法比较强烈 C．消毒所使用的物理、化学方法比较温和 D．湿热灭菌法和干热灭菌法有不同的适用条件 答案　A 解析　由于灭菌剂可能会与培养基中的一些成分发生作用，因此化学试剂灭菌法一般不用于培养基的灭菌，A错误；灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，B正确；消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物，C正确；常用的灭菌方法有干热灭菌法和湿热灭菌法等，依据灭菌对象的不同各有其适用范围，D正确。 2．下列有关无菌技术的叙述，正确的是(　　) A．无菌技术的唯一目的是防止实验室的培养物被外来微生物污染 B．消毒和灭菌的原理是完全不同的 C．人体皮肤最好采用紫外线进行消毒 D．培养皿的灭菌可用干热灭菌法 答案　D 解析　无菌技术可防止实验室的培养物被外来微生物污染，还可避免操作者自身被病原微生物感染，A错误；消毒和灭菌均是通过理化手段，使微生物的蛋白质、核酸等变性，从而失去生命活性，B错误；紫外线可诱发皮肤细胞癌变，人体皮肤不可采用紫外线进行消毒，C错误。 题组二　发酵工程的灭菌设备和无菌操作器具 3．下列关于灭菌设备的使用，错误的是(　　) A．不得将易腐、易燃、易爆物品放入电热鼓风干燥箱内干燥灭菌 B．使用高压蒸汽灭菌锅时，操作人员应严格控制热源维持灭菌时的压力 C．高压蒸汽灭菌锅内的物品太多，摆放太挤，会降低灭菌效果 D．在使用高压蒸汽灭菌锅时，一旦加热就不能打开排气阀 答案　D 解析　加热后，随着锅内压力逐渐增加，须打开排气阀，排出锅内残留的冷空气。 4．(2022·淮安高二期末)下列有关使用高压蒸汽灭菌锅的操作，错误的是(　　) A．加水时，水量达到标记线即可 B．加盖时，将排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内 C．加热时，待冷空气完全排尽后关上排气阀 D．切断电源后，打开排气阀使压力表降到零后开盖 答案　D 解析　切断电源后，应该等压力表指针降至“0”点，待温度下降后，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，D错误。 5．下列有关常见无菌操作的叙述，错误的是(　　) A．用酒精擦拭双手 B．用氯气对水源消毒 C．用电热鼓风干燥箱对金属用具(如镊子、手术刀)灭菌 D．通过酒精擦拭对玻璃器皿(如试管、培养皿)进行灭菌 答案　D 解析　玻璃器皿(如试管、培养皿)等常应用干热灭菌，酒精擦拭属于消毒，D错误。 题组三　微生物接种和传代的无菌技术 6．下列斜面接种划线示意图，正确的是(　　) 答案　A 解析　正确的接种划线方法是迅速将带菌的接种环伸入待接种的试管中，在培养基斜面上由底部向上轻划“Z”型折线，将菌种接种到培养基上，A正确。 7．下列关于微生物接种和传代的叙述，错误的是(　　) A．抽出接种环时，其带菌部位不要触及管壁或通过火焰，以免被杂菌污染或被杀死 B．用斜面培养基保存菌种通常每隔2～3个月重新接种一次 C．休眠状态即微生物的生长繁殖受抑制但又不至于死亡 D．穿刺接种用到的接种器具是接种环 答案　D 解析　接种针用于穿刺接种，接种环用于斜面接种或划线接种。 8．在斜面培养基上接种时，其正确的操作顺序是(　　) ①用一只手的拇指和其他四指夹住菌种试管和待接种的斜面试管，管口并齐，使斜面向上保持水平状态 ②在火焰附近用握有接种环的手的小拇指、无名指、中指和掌心拔去两支试管上的试管塞，并迅速将试管口通过火焰2～3次 ③将接种环伸入菌种管内，让环先接触培养基上未长菌的部位，使环冷却，然后轻轻挑取少许菌体，立即将接种环抽出 ④手拿接种环，在酒精灯火焰上来回灼烧多次 ⑤在火焰旁迅速将沾有菌体的接种环伸到斜面培养基的底部然后向上轻轻划“Z”型折线 ⑥抽出接种环，将试管口与试管塞分别通过火焰2～3次，迅速塞紧试管 A．①②③④⑤⑥ B．①④②③⑤⑥ C．①②③④⑥⑤ D．②①③④⑤⑥ 答案　B 9．(2023·无锡高二检测)接种是微生物培养和微生物选择的必要步骤之一。下列关于接种的叙述，不正确的是(　　) A．接种通常在酒精灯火焰附近进行 B．接种之前要对接种环进行灼烧灭菌 C．接种指无菌条件下将微生物接入培养基的操作 D．接种时接种环要将培养基的表面划破 答案　D 解析　接种时接种环不能划破培养基的表面，故D错误。 10．无菌技术是发酵工程的重要技术之一。实验室通常使用电热鼓风干燥箱作为干热灭菌设备，下列关于其用法和原理的叙述，错误的是(　　) A．对于空的玻璃器皿和其他耐高温的物品可以采用此法来保持干燥 B．不同菌体由于含水量不同，灭菌温度、时间都不同 C．使用干燥箱时必须将风机开关打开，否则会导致电机或传感器烧坏 D．由于放线菌及霉菌孢子含水量较低，在80～90 ℃条件下，加热10 min即可杀菌 答案　D 解析　由于放线菌及霉菌孢子含水量较低，在80～90 ℃条件下，加热30 min方可杀菌。 11．(多选)发酵工程中的培养基含丰富的营养物质，对于液体培养物一般选用移液管转移液体，下列对于移液管的使用，错误的是(　　) A．使用移液管时，拇指和食指捏住管颈标线以上的地方 B．移液管插入待取溶液液面时不应伸入太多也不应伸入太少 C．吸取液体时，当液面上升到刻度标线以上约1 cm处时迅速用另一只手的拇指堵住管口 D．将移液管移入准备接受溶液的容器中时，将移液管倾斜，使其尖端接触器壁 答案　ACD 解析　使用移液管时，拇指和中指捏住管颈标线以上的地方，A错误；移液管插入待取溶液液面时不应伸入太多，以免管尖外壁粘有过多溶液，也不应伸入太少，以免液面下降后而吸空，B正确；吸取液体时，当液面上升到刻度标线以上约1 cm处时，迅速用另一只手的食指堵住管口，C错误；将移液管移入准备接受溶液的容器中时，使其出口尖端接触器壁，将容器倾斜，而使移液管直立，D错误。 12．(多选)含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢，导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法正确的是(　　) A．乙菌的运动能力比甲菌强 B．为不影响菌的运动需选用液体培养基 C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌污染 答案　ACD 13．(多选)防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述正确的是(　　) A．实验室里可以用紫外线或化学药物进行灭菌 B．接种环等金属用具，可在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 C．在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染 D．玻璃器皿和金属用具等可以采用干热灭菌 答案　ACD 解析　接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰部位灼烧灭菌，B错误。 14．(多选)如图是实验室里用的一种高压蒸汽灭菌锅。下列有关其结构和使用过程的说法，错误的是(　　) A．使用高压蒸汽灭菌锅一般须经加水、装锅、加热、排空冷空气、保温保压、出锅等步骤 B．①是安全阀，其下方有软管通入内筒内，用于排除内筒内的冷空气 C．在压力103 kPa，温度121 ℃条件下维持15～20 min后，可以立即打开排气阀放气 D．盖上锅盖后，应按顺时针方向依次扭紧螺栓，以确保锅盖密封 答案　BCD 解析　③(排气阀)的下方有软管通入内筒内，用于排除内筒内的冷空气，B错误；在压力103 kPa，温度121 ℃条件下维持15～20 min后，关闭电源，当压力表的指针降至“0”点，待温度下降后，打开排气阀，C错误；盖上锅盖后，以对称的方式旋紧锅盖四周的固定螺栓，使螺栓松紧一致，以确保锅盖密封，D错误。 15．某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题： (1)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方如下： 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 蒸馏水 3.0 g 10.0 g 5.0 g 20.0 g 定容至1 000 mL 其中提供氮源的是________________；提供碳源的主要物质是__________。 (2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的_________，在烧杯中加入琼脂后要不停地__________________，防止__________________________。 (3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到“0”点时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应________。 (4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向外层锅内倒入______。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。 (5)从一支试管向另一支试管接种时应注意，接种环要在酒精灯________(填“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环________后再挑取菌体，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入______℃冰箱中保藏。 答案　(1)牛肉膏、蛋白胨　牛肉膏　(2)比例　搅拌　琼脂糊底引起烧杯破裂　(3)废弃　 (4)适量水　(5)外　冷却　4 16．在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。请回答下列问题： (1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________(填“可以”或“不可以”)放入密闭容器如电热鼓风干燥箱中进行干热灭菌。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________________________________________________________________。 (3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能______________________。工业生产上一般利用________________法大量地制备无菌空气。 (4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。 (5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是________________________________________。 答案　(1)可以　(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少　(3)破坏DNA的结构　过滤除菌　(4)氯气　(5)未将锅内冷空气排尽 学科网（北京）股份有限公司 $$