31.发酵工程第三课时

第31讲 发酵工程 细胞的一辈子 课程要求 考点1 发酵与传统发酵技术的概念及泡菜的制作 考点2 果酒和果醋的制作　 考点3 发酵工程及其应用 1．举例说明日常生活中的某些食品是运用传统发酵技术生产的。　 2．阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品。　 3．举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值。 考点4 微生物的基本培养技术 考点5 微生物的选择培养和计数 4．阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。　 5．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。　 6．举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。　 7．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。　 8．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 04 微生物的基本培养技术 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ①概念： 培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 ②作用： 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 ③营养组成： 一般都含有水、碳源、氮源和无机盐 3.培养基的营养构成 含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 1.有没有一些物质能同时提供碳源和氮源？ 2.并非所有培养基中都一定有碳源和氮源; 如自养型微生物的培养基中可不含碳源，其可利用大气中的CO2；自生固氮微生物的培养基中可不含氮源，其可利用大气中N2。 5 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素（生长因子）等 蛋白胨 10g 氮源、碳源和维生素（生长因子）等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000ml 水 蛋白胨：不同来源的蛋白质经过部分酶解或酸水解后，得到的可溶性产物混合物 牛肉膏：精牛肉的热水浸提液经过滤和浓缩制成的营养料 放线菌：高氏1号合成培养基 酵母菌：麦芽汁培养基 霉菌: 查氏合成培养基 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ③营养组成： 有时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质、O2的需求。 例如： 特殊营养物质：主要指生长因子(是一类调节微生物正常生长代谢所必需，但不能用简单的碳、氮源自行合成的有机物。） ④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。 ①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 ； ②培养霉菌时，需要将培养基调至 ； ③培养细菌时，需要将培养基调至 ； 维生素 酸性 中性或弱碱性 无氧 ① 含有C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的 。 ② 自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于 。 ③ 自养型微生物所需的碳源来自 ，异养型微生物所需的碳源来自 ， 因此可以根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。 ④ 有些无机氮源不但能给自养型微生物提供 ，也能作为 物质，如NH3氧化释放的化学能。 碳源、氮源、能源 碳源 无机碳源 有机碳源 氮源 能源 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ③营养组成： [误区警示]： 微生物的碳源、氮源和能源物质的两个认识“误区” (1)误认为所有碳源和氮源都可提供能量： (2)误认为所有微生物的能源都是有机碳源： 自养微生物的碳源一般是CO2，光能自养微生物的能源是光能，例如蓝细菌等；化能自养微生物的能源是还原态无机化合物氧化过程中释放的能量，例如硝化细菌的能源来自于是NH3。 有机碳源和有机氮源是异养微生物的能源物质。 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ③营养组成： 分类标准 培养基种类 培养基特点 作用 物理 性质 固体培养基 加凝固剂，如琼脂（多1.5%-2.5%） 微生物的分离与鉴定、活菌计数、保藏菌种 半固体培养基 容器放倒不致流出，剧烈震动则破散 （多0.2%-0.7%） 观察微生物的运动、分类鉴定 液体培养基 不加凝固剂 常用于工业生产(大规模培养) 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ④种类： 分类标准 培养基种类 培养基特点 作用 功能 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 选择、分离 鉴别培养基 加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂 鉴定 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ④种类： 类型 条件 分离得到的菌种 改变培养条件 置于无氧条件下 添加某种化学物质 加入青霉素 高浓度食盐 特殊碳、氮源 石油是唯一碳源 营养缺陷 不加有机碳源 不加氮源 厌氧型和兼性厌氧型微生物（乳酸菌、酵母菌等） 其他菌在高盐环境中易失水而不能生存（金黄色葡萄球菌） 能分解石油的微生物 酵母菌、霉菌等真菌；相应抗性的细菌 自养型微生物 固氮微生物 大肠杆菌的代谢产物（有机酸）能与伊红美蓝结合，从而形成深紫色、并带有金属光泽的菌落。P30 伊红美蓝培养基 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ④种类——鉴别培养基 在以尿素为唯一氮源的培养基中，只有能分解尿素的细菌才能利用尿素这种氮源来生长繁殖，并长出菌落。尿素分解菌产生的脲酶能将尿素分解成CO2和NH3，NH3溶于水会电离出NH4+和OH-，使培养基的pH升高。 在该培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果菌落周围变红，说明该细菌能够分解尿素。 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ④种类——鉴别培养基 刚果红 + 纤维素 → 红色复合物 纤维素分解菌周围出现透明圈 纤维素分解菌 → 纤维素酶 → 纤维二糖 + 葡萄糖（不能与刚果红形成红色复合物） 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ④种类——鉴别培养基 分类标准 培养基种类 培养基特点 作用 成分 来源 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 用已知的化学物质配制 分类鉴定 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 合成培养基: 4.微生物的基本培养技术 1.培养基的配制 ④种类 4．(2021·山东等级考)含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是(　　) A．乙菌的运动能力比甲菌强 B．为不影响菌的运动需选用液体培养基 C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 B 据图可知，甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；实验所用培养基应为半固体培养基，B错误；该实验可以根据黑色沉淀的多少初步比较细菌产生硫化氢的能力，但不能测定产生硫化氢的量，C正确；微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。 4.微生物的基本培养技术 2.无菌技术 在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法 ①关键： ②目的： 防止杂菌污染 获得纯净的微生物培养物 ③包括： 消毒和灭菌 比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较温和的物化生等方法 杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢、孢子） 日常用品 牛奶不耐高温的液体 操作者的衣物、手、水源 接种室、接种箱或超净工作台 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药物消毒法（酒精等） 紫外线消毒法 18 接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min。在照射前，适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。 紫外线照射消毒法 酒精擦拭属于消毒，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。95%的酒精浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。 问题：注射药液前，常用酒精擦拭注射部位，这是消毒还是灭菌？体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？ 比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围 灭菌 强烈的理化方法 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子　　 培养基、容器等 耐高温，需保持干燥的物品如玻璃器皿、金属用具等 接种环、接种针等接种工具、试管口或瓶口 4.微生物的基本培养技术 2.无菌技术 湿热灭菌法 干热灭菌法 灼烧灭菌法（充分燃烧层） 消毒和灭菌的原理都是使微生物的蛋白质或核酸变性，借此杀死微生物。但两者的实质不同。消毒的结果实际上是部分灭菌。 正确选择无菌技术 对象 方法 日常生活常用物品 实验操作者的双手 接种室、接种箱或超净工作台 牛奶 煮沸消毒 酒精消毒 适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，配合紫外线照射消毒 巴氏消毒法 正确选择无菌技术 对象 方法 水源 接种环、接种针等金属用具，试管口、瓶口 培养基 玻璃器皿(培养皿、吸管等)、金属用具 氯气消毒 灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌 干热灭菌 其他操作 (1)做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具与_____________接触。 (2)为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并在____________附近进行。 周围的物品 酒精灯火焰 2．(选择性必修3 P10“相关信息”)利用某些微生物可以净化污水、污泥，原因是？ 提示：有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解 思考1、培养基灭菌为什么采用高压蒸汽灭菌而不采用干热灭菌？ 分析：干热灭菌箱内的高温会导致培养基的_________丧失，而高压蒸汽锅内的_________较大，不会导致培养基的_________散失 。 思考2、如何制备一瓶无菌水？ 分析：对一瓶有菌水进行___________________处理。 思考3、某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是？ 分析：_____________________。 水分 湿度 水分 高压蒸汽灭菌 未将锅内冷空气排尽 思考4、某同学从高压蒸汽灭菌锅内拿出培养基后发现，培养基已经溅满了锥形瓶的瓶壁，最可能的原因是？ 分析：___________________________________________，就提前打开了高压蒸汽锅。 思考5：用紫外线可以给接种室消毒，其原理是紫外线能___________________。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等_________，可以加强消毒效果。 高压蒸汽锅的压力表读数还未降至零 损伤细菌的DNA 消毒液 4.微生物的基本培养技术 3.概念辨析 培养物 接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 纯培养物 由单一细菌繁殖所获得的微生物群体 菌落 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体 纯培养 获得纯培养物的过程 平板划线法和稀释涂布平板法 纯化（分离单菌落）的方法： 27 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 目的要求： 1.学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。 2.学会进行无菌操作。 3.尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。 材料用具： 酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。 麦芽汁培养基和马铃薯琼脂培养基 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 称取 → 煮沸 → 过滤 → 加琼脂 → 定容 马铃薯 (200g) 去皮 马铃薯块 切块 加水 (1000mL) 煮沸 软烂 马铃薯 纱布过滤 滤液 加葡萄糖/蔗糖 (20g) 加琼脂 加水定容 (1000mL) 酵母菌培养基 01 02 03 04 配制培养基（调pH、分装） 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 培养基——湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 培养皿——干热灭菌 在灭菌时①能避免水蒸气凝结时浸湿棉塞；在取出锥形瓶时也起到②隔绝空气中杂菌污染的作用。 2.在灭菌前，用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？ 1.如果需要调节培养基的pH，应在什么时候进行？ 调pH应该在灭菌前进行操作。（称量，溶解，调ph，灭菌） 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 ③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20 mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下： ①拔出锥形瓶的棉塞。 ②将瓶口迅速通过火焰。 ④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。 翻转 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 琼脂是一种多糖，在44℃以下凝固。倒平板时，若低于50℃不及时操作，琼脂会凝固。倒平板时高于50 ℃则会烫手。 1.培养基灭菌后为什么要冷却到50℃左右时开始倒平板？ 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过快挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 接种：指在无菌条件下将微生物或含菌材料转移到合适其生长繁殖的培养基中的过程。 接种工具： 接种针——用于穿刺接种； 接种环——用于斜面接种或平板划线接种； 玻璃涂布器——用于涂布平板接种； 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 穿刺接种：将带有欲培养微生物的接种针深插至半固体培养基（琼脂含量0.2%〜1.0%）中接种，接种时，自固体深层培养基表面的中心点垂直穿刺，直到培养基底部，然后轻轻退出，保持接种线整齐。主要用于厌氧或兼性厌氧微生物的培养。 可根据穿刺部分菌落的生长和扩散状况来判断该微生物的运动性能和对氧气的需求状况。 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。 连续划线法 分区划线法 ——平板划线法 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 ①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。 ②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞。 ③将试管口通过火焰 ④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液。 ⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 ——平板划线法 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 避免温度过高杀死菌种 ⑥左手在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 1 2 3 4 5 灼烧接种环 蘸取菌液 第1区接种 灼烧接种环 第2区接种 灼烧接种环 第3区接种 第4区接种 注意： ①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次。 ②划线首尾不能相接 ③每次划线前接种环进行灭菌 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 灼烧接种环 第5区接种 灼烧接种环 灼烧接种环 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 1.为什么在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？ 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞。 杀死接种环上原有微生物，避免污染培养物 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 2.除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，目的是什么？ 使酵母菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 3.划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断的长满了菌落，第二划线区所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误有？ ①接种环灼烧后未冷却； ②划线未从第一区域末端开始； 培养：完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置（皿底标注菌种及接种日期等），放入 28℃ 左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养 24 ~ 48h。 01 02 03 04 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 05 避免杂菌污染 2.为什么倒平板和接种整个过程要在酒精灯火焰旁进行？ 1.未接种的培养基直接培养起什么作用？ 做空白对照，判断培养基是否被污染。 4.酵母菌的纯培养 4.微生物的基本培养技术 酵母菌的纯培养 1.纯培养物： 2.菌落： 3.步骤： 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 的微生物(单一个体)在适宜的 表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有 的 。 ①配制培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、水） ②灭菌 ③倒平板（在酒精灯火焰附近操作） 培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅） 培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅） ④接种和分离酵母菌 ⑤培养酵母菌 固体培养基 子细胞群体 分散 一定形态结构 固体培养基、平板划线法 倒置、恒温培养箱 1．在培养细菌时，要将培养基调至中性或弱酸性。 (　　) 提示：在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性。 2．蛋白胨中含有糖、维生素和有机氮等营养物质。 (　　) 3．玻璃器皿、金属用具等可以采用干热灭菌法。 (　　) 4．微生物的纯培养步骤为配制培养基→接种→灭菌→分离和培养等。 (　　) 提示：微生物的纯培养步骤为配制培养基→灭菌→接种→分离和培养等。 6．酵母菌的纯培养的马铃薯葡萄糖培养基上的葡萄糖也可用蔗糖代替。 (　　) × √ √ × √ 2021·山东 解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是( ) A. 甲菌属于解脂菌 B. 实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C. 可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D. 该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 B 乙菌也会形成菌落 2．(2022·海南等级考)为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展相关实验。下列有关叙述错误的是(　　) A．采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本 B．培养细菌时，可选用牛肉膏蛋白胨固体培养基 C．土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落 D．鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法 C 采集植物园中土壤样本的原则之一是要随机采样，A正确；牛肉膏蛋白胨固体培养基中含有细菌生长所需的碳源、氮源、水、无机盐等，可用于细菌的培养，B 正确；土壤溶液稀释倍数足够高时，才能将聚集的细菌分散开，有助于在培养基表面形成单菌落，C错误；不同种类细菌的理化特性一般不同，鉴定细菌种类时，除根据菌落特征进行形态学鉴定外，还可以借助生物化学的方法进行鉴定，D正确。 真题感悟 明确考向 考向1　无菌技术 1．(2022·湖北选择性考试)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　　) A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 D DNA提取实验中，可以通过特定试剂和调整pH有效抑制微生物的生长 动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行，A错误；动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养基中不能加入抗生素，B错误；一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，C错误；可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌，以防止杂菌污染，D正确。 2．(2023·山东枣庄二模)微生物培养成功的关键是防止杂菌污染。下列操作过程遵循无菌操作规范的是(　　) A．用果酒制作果醋时，打开瓶盖，盖上一层纱布以利于醋酸菌繁殖 B．将培养基放入干热灭菌箱，然后加热至压力为100 kPa、温度为121 ℃ C．用灼烧冷却后的接种环取酵母菌纯培养物，连续划五个区后，再灼烧一次接种环 D．啤酒制作时，在糖浆中加入啤酒花蒸煮，以产生风味组分，终止酶的进一步作用 D 醋酸菌属于好氧细菌，用果酒制作果醋时，打开瓶盖，盖上一层纱布以利于醋酸菌繁殖，但这不属于无菌操作，A不符合题意；培养基的灭菌方法是湿热灭菌，不是干热灭菌，B不符合题意；用灼烧冷却后的接种环取酵母菌纯培养物，每个区划线前都需要灼烧接种环，划完最后一区后，需要再次灼烧接种环，C不符合题意；啤酒制作时，在糖浆中加入啤酒花蒸煮，蒸煮的目的是产生风味组分，终止酶的进一步作用，并对糖浆灭菌，D符合题意。 考向2　微生物的实验室培养 3．(2023·山东等级考)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　) A．不含氮源的平板不能用于微生物培养 B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 D 不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。 $$