1.2.2 微生物的选择培养和计数-【晨读晚练】2024-2025学年高二生物知识速记与提升（人教版2019选择性必修3）

1.2.2 微生物的选择培养和计数（第二课时） （必背要点+必知重难+知识检测） 一、发酵与传统发酵技术 一、选择培养基 1．水生栖热菌的筛选：水生栖热菌能在 70～ 80 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下 不能生 存 。 2．选择培养基概念：在微生物学中，将 允 许特定种类 的微生物生长，同时 抑 制或或 其他种类的微生物生长的培养基，称为选择培养基。 3．实验室筛选微生物的原理：人为提供有利于目的菌生 长的条件 ， 抑制或 阻止 其他种类的微生物生长，其方法是利用 选择 培养基 。 4．选择培养基的类型 类型 条件 分离得到的菌种 改变培养条件 70～80 ℃的高温 水生栖热菌 添加某种 化学物质 加入青霉素 酵母菌、霉菌等真菌 高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 特殊碳源、氮源 石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物 营养缺陷 不加碳源 自养型微生物 不加氮源 固氮菌 二、微生物的选择培养 1．方法：对土样进行充分稀释，然后用涂布器将 菌液 均匀地涂布到制备好的选择培养基上，这样就可以将聚集在一起的细菌分离开来。 2．菌液稀释 (1)将10 g土样加入盛有 90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，得到稀释10倍的菌液。 (2)取 1 mL上清液加入盛有 9_mL 无菌水 的试管中，得到稀释102倍的菌液，依次等比稀释。 3．稀释涂布平板法的操作步骤 培养环境：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 倒 置 ，放入30～37 ℃的 恒温 培养箱 中培养1～2 d。 三、微生物的数量测定 1．微生物的数量测定 (1)稀释涂布平板法 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个 活菌 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少 活菌 。 ②计数原则 a．一般选择菌落数为 30～ 300 的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。 b．在同一稀释度下，应至少对 3 个平板进行重复计数，然后求出 平均 值 。 ③统计结果 a．统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 b．统计的菌落数往往比活菌的实际数目 少 ，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是 一个 菌落。 (2)显微镜直接计数法 ①统计工具：利用特定的 细菌 计数板 或血细胞计数板。 ②统计方法：在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 ③统计结果 a．一般是 活菌 数 和 死 数 的总和。 b．统计的菌落数往往比活菌的实际数目 多 。 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 脲 酶 。利用 尿 素 作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 2．实验设计 (1)土壤取样：土壤中的微生物主要分布在距地表 3 ～8 cm的土壤层(酸碱度 接近中性 )，取样时用的铁铲和取样袋使用前都需要灭菌。 (2)样品的稀释：为保证获得菌落数为30 ～300 的平板进行计数，可将稀释倍数为1×103～1×107的稀释液分别 涂布到平板 上 培养。 (3)微生物的培养与观察：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在 30～37 ℃ 的温度下培养1～2 d。在菌落计数时，每隔24 h统计一次菌落数目，选取 菌落 数目稳定 时的记录作为结果，仔细观察所分离的菌落，最好以表格的形式将不同菌落的特征(如形状、大小和颜色等)记录下来。 一、微生物的选择培养(稀释涂布平板法) 1．方法概述 将土样进行充分稀释，然后再将菌液用 涂布 器 涂布到制备好的选择培养基上，这样就可以将聚集在一起的 细 菌分离 开来。 2．操作流程 3．平板划线法与稀释涂布平板法的比较 (1)涂布平板的所有操作均在 酒精灯 火焰旁 进行。 (2)不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免 引燃吧 。 (3)在用 移液 管 吸取菌液进行梯度稀释时，要使菌液与水充分混匀。 (4)要设置 空白对 照平板 ，且一定要涂布 至少3个 平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 重要操作 接种环在固体平板培养基表面 连续划线 一系列的梯度 稀释、涂布平板操作 成功关键 每次划线前后均需 灼烧接种 环 选用一定稀释范围的 样品 液 进行培养，以保证获得菌落数为 3 0～ 300 、适于计数的平板 菌体获得 从具有 显著 的菌落 特征的区域中挑取单个的菌落 从适宜稀释度的平板上挑取 单个 的菌落 分离结果 优点 可以根据菌落的特点获得 某种 微生物 的单细胞菌落 既可以获得单细胞菌落，又能 对微生物 计数 缺点 不能对 微 生物计数 样品浓度范围不确定，需要 涂布多个平板 二、微生物的数量测定 1 学科网（北京）股份有限公司 1．利用稀释涂布平板法计数——间接计数法、活菌计数法 2．显微镜直接计数法 3．释涂布平板法(活菌计数法)和显微镜直接计数法 项目 直接计数法 间接计数法 原理 利用特定血细胞计数板，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 主要用具 显微镜、血细胞计数板 培养基 计数依据 菌体本身 培养基上菌落数 优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌 缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂，有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌数＝400×104×每小格平均菌体数×稀释倍数① 每毫升原液含菌数＝培养基上平均菌落数÷涂布液体积×稀释倍数 三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．实验原理 (1)土壤中的一些细菌之所以 能分解 尿素 ，是因为它们能合成脲酶。 (2)配制以尿素为 唯一氮 源 的培养基，能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌。 2．实验设计原则 (1)平行重复原则：任一稀释度至少涂布3个平板，以增强实验结果的 信度与准确性 。 (2)对照原则 ①判断培养基是 否有 杂菌 污染 ，需要将未接种的相同培养基在相同条件下同时进行培养。 ②判断培养基是 否起到 了筛选的作用 ，需要同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行同样接种后培养，观察两种培养基上的菌落数目是否有显著差异。 3． 操作步骤 4．实验结果分析与评价 5．分离尿素分解菌操作中的注意事项 (1)在实验操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防 培 养基 被污染，影响实验效果。 (2)样品稀释液的最佳浓度为获得的每个平板上有30～300个菌落，这个稀释度 细菌 一般为104、105、106倍， 放线 菌 一般为103、104、105倍，真菌一般为102、103、104倍。 (3)每一稀释倍数的菌液至少要涂布3个平板，作为实验重复求其平均值，若其中有菌落数与其他实验组差距悬殊的，需要对该平板 重新 制作 。 6．鉴定原理 分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解为 N H3 ，使培养基的 碱 性 增强，pH升高。在选择培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。 　　　 7．选择培养基与鉴别培养基 项目 选择培养基 鉴别培养基 特殊成分 加入某种化学物质 加入某种指示剂或化学药品 目的 抑制或阻止其他微生物生长，促进目的微生物生长 与微生物的代谢物或培养基中的成分发生特定反应 用途 培养、分离出特定微生物 鉴别不同的微生物 　 微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物 可以利用其 他微生物 的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物 不 一定 都是所需的微生物，还需进一步验证。　　　　 4． （限时：15min） 一、单选题 一、系统分组_加入顺序 1．（2023·广东·高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（    ）    A．a点时取样、尿素氮源培养基 B．b点时取样、角蛋白氮源培养基 C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D．c点时取样、角蛋白氮源培养基 2．为了修复石油污染的土壤，某学习兴趣小组欲从盐碱土壤中筛选蒽(石油中污染土壤的重要成分)降解菌株。下列相关说法不正确的是（    ） A．应将土壤样品稀释液接种于以蒽为唯一碳源的固体培养基上 B．纯化菌种时，为了得到单菌落，只能用稀释涂布平板法 C．通过比较单菌落周围分解圈的大小来筛选高效菌株 D．筛选得到耐盐碱蒽高效降解菌，对修复石油污染的土壤具有积极意义 3．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（    ） A．镍是组成脲酶的重要元素 B．镍能提高尿素水解反应的活化能 C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 4．物质M是一种难以降解的含氮有机物，其在培养基中表现为不透明。某研究小组欲从土壤中分离出能降解M的微生物，取土样并进行一系列稀释后，取稀释液滴加到平板A上开始涂布，然后置于恒温箱中培养24h，发现平板上的部分菌落周围出现透明圈，部分菌落周围未出现透明圈。下列有关分析错误的是（    ） A．平板A应以物质M为唯一有机氮源，属于选择培养基 B．平板 A上的菌落数过多可能是取样前未将稀释液摇匀所致 C．平板A上出现了无透明圈的菌落是因为培养基被污染了 D．透明圈最大的菌落，其分解M的能力未必最强 5．某实验小组测定土壤中能分解尿素的活菌数，在实验组的每个平板上接种0.1mL稀释105倍的土样稀释液，培养后发现实验组4个平板上的菌落数分别为17、68、69、75，下列相关叙述正确的是（    ） A．用清水将土样制成1×103～107倍稀释的稀释液后灭菌处理 B．接种所用的培养基是湿热灭菌处理后的牛肉膏蛋白胨培养基 C．如果未接种的对照组平板上有菌落出现，应重新进行实验 D．该实验所用每克土样中能分解尿素的活菌数为5.7×107个 6．进行垃圾分类收集可以减少垃圾处理时间，降低处理成本。科研小组欲分离及培养若干种微生物用于对湿垃圾（包括剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物）的处理。下列有关叙述正确的是（　　） A．在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和操作者的双手进行灭菌 B．用液体培养基培养时，需通入无菌空气并进行搅拌，目的是使菌体充分接触营养物质和溶解氧，促进细菌繁殖 C．科研小组若从生活垃圾中分离分解尿素的微生物，可在培养基中加入酚红指示剂，如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现黑色 D．该实验培养基为选择培养基，无需进行未接种培养基的培养 7．物质S(含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染。研究人员按照图示流程从淤泥中分离出能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基， 甲的组分为无机盐、水和S， 乙的组分为无机盐、水、S和Y。下列叙述错误的是（    ）    A．甲、乙培养基均属于选择培养基，乙培养基中的Y物质是琼脂 B．在乙培养基上统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 C．步骤③对应的接种方法是稀释涂布平板法 D．实验中初步估测摇瓶 M中细菌细胞数为 2.5×10⁶个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL 稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过250个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释100倍 8．尿素是现代农业生产中一种重要的氮肥。农田土壤中，尿素分解菌的数量对农作物吸收、利用尿素中的氮有很大的影响。某科研小组从农田中分离出能够分解尿素的细菌并进行计数，实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（    ）    注：实验中选择稀释倍的菌液分别进行平板涂布 A．该实验使用的培养基是以尿素作为唯一氮源的鉴别培养基 B．步骤③中，进行系列稀释时每次需加9mL清水，依次等比稀释 C．步骤④中，接种的方法可以采用平板划线法或稀释涂布平板法 D．步骤⑤中，使用的稀释倍数不能全用于计数，计数结果往往比实际值少 9．嗜热菌可以在高温环境中生存，其产生的淀粉酶最适温度较高。筛选能产生耐高温淀粉酶的嗜热菌过程如图1所示，其中I号培养基用碘液处理的结果如图2 所示。下列叙述错误的是（    ）    A．甲、乙主要是梯度稀释，②是用稀释涂布平板法进行接种 B．图2中淀粉是唯一碳源，周围不显蓝色的菌落含有所需菌种 C．用接种环挑菌在Ⅱ号表面数次划线后培养可分离得到单菌落 D．丙中无琼脂，接种后放入适宜的较高温度培养箱中扩大培养 10．白色污染问题已引起全社会广泛关注，降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为（C2H4）n]。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基，聚乙烯分解菌在该培养基上会形成抑菌圈。回答下列问题： (1)在筛选聚乙烯分解菌过程中，制作培养基时，应将 作为X培养基中的唯一碳源，并使用 灭菌法对培养基进行灭菌。 (2)为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为 ，则可证明上述观点。 (3)为了获得可以高效降解聚乙烯的菌种，应该挑选X培养基中的 （填序号）中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。 (4)用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小，原因是 。 (5)在5个平板上各接种稀释倍数为10³的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为28、50、52、54、313，则每升原菌液样品中细菌数为 个。 4 学科网（北京）股份有限公司 $$ 1.2.2 微生物的选择培养和计数（第二课时） （必背要点+必知重难+知识检测） 一、发酵与传统发酵技术 一、选择培养基 1．水生栖热菌的筛选：水生栖热菌能在 70～80 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下 不能生存 。 2．选择培养基概念：在微生物学中，将 允许特定种类 的微生物生长，同时 抑制或阻止 其他种类的微生物生长的培养基，称为选择培养基。 3．实验室筛选微生物的原理：人为提供有利于目的菌生长的条件 ， 抑制或阻止 其他种类的微生物生长，其方法是利用 选择培养基 。 4．选择培养基的类型 类型 条件 分离得到的菌种 改变培养条件 70～80 ℃的高温 水生栖热菌 添加某种 化学物质 加入青霉素 酵母菌、霉菌等真菌 高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 特殊碳源、氮源 石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物 营养缺陷 不加碳源 自养型微生物 不加氮源 固氮菌 二、微生物的选择培养 1．方法：对土样进行充分稀释，然后用涂布器将 菌液 均匀地涂布到制备好的选择培养基上，这样就可以将聚集在一起的细菌分离开来。 2．菌液稀释 (1)将10 g土样加入盛有 90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，得到稀释10倍的菌液。 (2)取 1 mL上清液加入盛有 9_mL无菌水 的试管中，得到稀释102倍的菌液，依次等比稀释。 3．稀释涂布平板法的操作步骤 培养环境：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 倒置 ，放入30～37 ℃的 恒温培养箱 中培养1～2 d。 三、微生物的数量测定 1．微生物的数量测定 (1)稀释涂布平板法 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个 活菌 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少 活菌 。 ②计数原则 a．一般选择菌落数为 30～300 的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。 b．在同一稀释度下，应至少对 3 个平板进行重复计数，然后求出 平均值 。 ③统计结果 a．统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 b．统计的菌落数往往比活菌的实际数目 少 ，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是 一个 菌落。 (2)显微镜直接计数法 ①统计工具：利用特定的 细菌计数板 或血细胞计数板。 ②统计方法：在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 ③统计结果 a．一般是 活菌数 和 死菌数 的总和。 b．统计的菌落数往往比活菌的实际数目 多 。 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 脲酶 。利用 尿素 作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 2．实验设计 (1)土壤取样：土壤中的微生物主要分布在距地表 3～8 cm的土壤层(酸碱度 接近中性 )，取样时用的铁铲和取样袋使用前都需要灭菌。 (2)样品的稀释：为保证获得菌落数为30～300 的平板进行计数，可将稀释倍数为1×103～1×107的稀释液分别 涂布到平板上 培养。 (3)微生物的培养与观察：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在 30～37 ℃ 的温度下培养1～2 d。在菌落计数时，每隔24 h统计一次菌落数目，选取 菌落数目稳定 时的记录作为结果，仔细观察所分离的菌落，最好以表格的形式将不同菌落的特征(如形状、大小和颜色等)记录下来。 一、微生物的选择培养(稀释涂布平板法) 1．方法概述 将土样进行充分稀释，然后再将菌液用 涂布器 涂布到制备好的选择培养基上，这样就可以将聚集在一起的 细菌分离 开来。 2．操作流程 3．平板划线法与稀释涂布平板法的比较 (1)涂布平板的所有操作均在 酒精灯火焰旁 进行。 (2)不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免 引燃酒精 。 (3)在用 移液管 吸取菌液进行梯度稀释时，要使菌液与水充分混匀。 (4)要设置 空白对照平板 ，且一定要涂布 至少3个 平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 重要操作 接种环在固体平板培养基表面 连续划线 一系列的梯度稀释、涂布平板操作 成功关键 每次划线前后均需 灼烧接种环 选用一定稀释范围的 样品液 进行培养，以保证获得菌落数为 30～300 、适于计数的平板 菌体获得 从具有 显著的菌落 特征的区域中挑取单个的菌落 从适宜稀释度的平板上挑取 单个的菌落 分离结果 优点 可以根据菌落的特点获得 某种微生物 的单细胞菌落 既可以获得单细胞菌落，又能对 微生物计数 缺点 不能对 微生物计数 样品浓度范围不确定，需要 涂布多个平板 二、微生物的数量测定 1．利用稀释涂布平板法计数——间接计数法、活菌计数法 2．显微镜直接计数法 3．释涂布平板法(活菌计数法)和显微镜直接计数法 项目 直接计数法 间接计数法 原理 利用特定血细胞计数板，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 主要用具 显微镜、血细胞计数板 培养基 计数依据 菌体本身 培养基上菌落数 优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌 缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂，有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌数＝400×104×每小格平均菌体数×稀释倍数① 每毫升原液含菌数＝培养基上平均菌落数÷涂布液体积×稀释倍数 三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．实验原理 (1)土壤中的一些细菌之所以 能分解尿素 ，是因为它们能合成脲酶。 (2)配制以尿素为 唯一氮源 的培养基，能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌。 2．实验设计原则 (1)平行重复原则：任一稀释度至少涂布3个平板，以增强实验结果的 可信度与准确性 。 (2)对照原则 ①判断培养基是 否有杂菌污染 ，需要将未接种的相同培养基在相同条件下同时进行培养。 ②判断培养基是 否起到了筛选的作用 ，需要同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行同样接种后培养，观察两种培养基上的菌落数目是否有显著差异。 3． 操作步骤 4．实验结果分析与评价 5．分离尿素分解菌操作中的注意事项 (1)在实验操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防 培养基 被污染，影响实验效果。 (2)样品稀释液的最佳浓度为获得的每个平板上有30～300个菌落，这个稀释度 细菌 一般为104、105、106倍， 放线菌 一般为103、104、105倍，真菌一般为102、103、104倍。 (3)每一稀释倍数的菌液至少要涂布3个平板，作为实验重复求其平均值，若其中有菌落数与其他实验组差距悬殊的，需要对该平板 重新制作 。 6．鉴定原理 分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解为 NH3 ，使培养基的 碱性 增强，pH升高。在选择培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。 　　　 7．选择培养基与鉴别培养基 项目 选择培养基 鉴别培养基 特殊成分 加入某种化学物质 加入某种指示剂或化学药品 目的 抑制或阻止其他微生物生长，促进目的微生物生长 与微生物的代谢物或培养基中的成分发生特定反应 用途 培养、分离出特定微生物 鉴别不同的微生物 　 微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物 可以利用其他微生物 的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物 不一定 都是所需的微生物，还需进一步验证。　　　　 4． （限时：15min） 一、单选题 一、系统分组_加入顺序 1．（2023·广东·高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（    ）    A．a点时取样、尿素氮源培养基 B．b点时取样、角蛋白氮源培养基 C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D．c点时取样、角蛋白氮源培养基 【答案】D 【分析】筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，要用角蛋白氮源培养基。 【详解】研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，所以D正确，ABC错误。 故选D。 2．（22-23高二下·甘肃临夏·阶段练习）为了修复石油污染的土壤，某学习兴趣小组欲从盐碱土壤中筛选蒽(石油中污染土壤的重要成分)降解菌株。下列相关说法不正确的是（    ） A．应将土壤样品稀释液接种于以蒽为唯一碳源的固体培养基上 B．纯化菌种时，为了得到单菌落，只能用稀释涂布平板法 C．通过比较单菌落周围分解圈的大小来筛选高效菌株 D．筛选得到耐盐碱蒽高效降解菌，对修复石油污染的土壤具有积极意义 【答案】B 【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物种和氧气的要求；在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。2、微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。3、由题干信息分析可知，本实验的实验目的是从盐碱土壤中筛选蒽降解菌株，故培养基中的碳源应选择蒽为唯一碳源。 【详解】A、要筛选蒽降解菌株，则应将土壤样品稀释液接种于以蒽为唯一碳源的固体培养基上，A正确； B、纯化菌种时，为了得到单个菌落，可以采用平板划线法和稀释涂布平板法，B错误； C、单菌落周围分解圈越大的，说明菌株降解能力越强，因此可以通过比较单菌落周围分解圈的大小来筛选高效菌株，C正确； D、筛选得到耐碱蒽高效降解菌，有利于修复石油污染的土壤，对于环境保护具有积极意义，D正确。 故选B。 3．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（    ） A．镍是组成脲酶的重要元素 B．镍能提高尿素水解反应的活化能 C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖 D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌 【答案】B 【分析】1、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2、只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 【详解】A、根据题意，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组成脲酶的重要元素，A正确； B、脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降低尿素水解反应的活化能有关，B错误； C、产脲酶细菌可利用NH4Cl里的氮源进行代谢活动，因此产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖，C正确； D、产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源，不能产脲酶的细菌则无法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D正确。 故选B。 4．（24-25高三上·河北邢台·开学考试）物质M是一种难以降解的含氮有机物，其在培养基中表现为不透明。某研究小组欲从土壤中分离出能降解M的微生物，取土样并进行一系列稀释后，取稀释液滴加到平板A上开始涂布，然后置于恒温箱中培养24h，发现平板上的部分菌落周围出现透明圈，部分菌落周围未出现透明圈。下列有关分析错误的是（    ） A．平板A应以物质M为唯一有机氮源，属于选择培养基 B．平板 A上的菌落数过多可能是取样前未将稀释液摇匀所致 C．平板A上出现了无透明圈的菌落是因为培养基被污染了 D．透明圈最大的菌落，其分解M的能力未必最强 【答案】C 【分析】人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。按照功能的不同，可将培养基分为选择培养基和鉴别培养基，其中在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长、同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 【详解】A、题干信息：欲从土壤中分离出能降解M的微生物，可见平板A应以物质M为唯一有机氮源，属于选择培养基，A正确； B、题干信息可知，实验采用稀释涂布平板法进行接种，平板 A上的菌落数过多可能是取样前未将稀释液摇匀所致，B正确； C、平板A上出现了无透明圈的菌落不是因为培养基被污染了，而是细菌分解M的能力弱，C错误； D、透明圈与菌落的直径大小能反映该细菌对物质M的分解能力，透明圈最大的菌落，其分解M的能力未必最强，D正确。 故选C。 5．（23-24高二下·北京朝阳·期末）某实验小组测定土壤中能分解尿素的活菌数，在实验组的每个平板上接种0.1mL稀释105倍的土样稀释液，培养后发现实验组4个平板上的菌落数分别为17、68、69、75，下列相关叙述正确的是（    ） A．用清水将土样制成1×103～107倍稀释的稀释液后灭菌处理 B．接种所用的培养基是湿热灭菌处理后的牛肉膏蛋白胨培养基 C．如果未接种的对照组平板上有菌落出现，应重新进行实验 D．该实验所用每克土样中能分解尿素的活菌数为5.7×107个 【答案】C 【分析】稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30 ~ 300的平板进行计数。除稀释涂布平板法外，还可以利用显微镜进行直接计数，该方法要利用特定的细菌计数板或血细胞计数板。 【详解】A、用无菌水（不是清水）将土样制成1×103～107倍稀释的稀释液，然后将稀释液涂布到制备好的培养基上，A错误； B、牛肉膏蛋白胨培养基为完全培养基，而实验目的是测定土壤中能分解尿素的活菌数，应使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，B错误； C、如果未接种的对照组平板上有菌落出现，可能是培养菌灭菌不彻底等原因导致的，应重新进行实验，C正确； D、为了保证结果准确，一般选择菌落数为30 ~ 300的平板进行计数，该实验所用每克土样中能分解尿素的活菌数≈（68+69+75）/3÷0.1×105≈7.1×107，D错误。 故选C。 6．（21-22高二下·四川成都·阶段练习）进行垃圾分类收集可以减少垃圾处理时间，降低处理成本。科研小组欲分离及培养若干种微生物用于对湿垃圾（包括剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物）的处理。下列有关叙述正确的是（　　） A．在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和操作者的双手进行灭菌 B．用液体培养基培养时，需通入无菌空气并进行搅拌，目的是使菌体充分接触营养物质和溶解氧，促进细菌繁殖 C．科研小组若从生活垃圾中分离分解尿素的微生物，可在培养基中加入酚红指示剂，如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现黑色 D．该实验培养基为选择培养基，无需进行未接种培养基的培养 【答案】B 【分析】1、无菌技术的主要内容：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；③实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。2、尿素分解菌能够产生脲酶，在脲酶的作用下能够将尿素分解为氨，使pH升高与酚红指示剂反应呈红色。 【详解】A、在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌处理，对操作者的双手进行消毒处理，A错误； B、培养过程需要向培养基通入无菌空气并进行搅拌，目的是使菌体充分接触营养物质和溶解氧，促进细菌生长繁殖，B正确； C、科研小组若从生活垃圾中分离分解尿素的微生物，可在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素，C错误； D、进行细菌培养的同时需进行未接种培养基的培养，起对照作用，D错误。 故选B。 7．（23-24高二下·天津·期末）物质S(含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染。研究人员按照图示流程从淤泥中分离出能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基， 甲的组分为无机盐、水和S， 乙的组分为无机盐、水、S和Y。下列叙述错误的是（    ）    A．甲、乙培养基均属于选择培养基，乙培养基中的Y物质是琼脂 B．在乙培养基上统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 C．步骤③对应的接种方法是稀释涂布平板法 D．实验中初步估测摇瓶 M中细菌细胞数为 2.5×10⁶个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL 稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过250个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释100倍 【答案】D 【分析】分析题图：①为淤泥取样进行稀释，②为接种到液体培养基上，③稀释涂布平板法接种到以S为唯一碳源和氮源的选择培养基上，其中Y为琼脂，④为挑取单菌落接种，⑤在以S为唯一碳源和氮源的选择培养基上进一步筛选出高效降解S的菌株。 【详解】A、乙培养基为接种的培养基，属于固体培养基，结合题干“乙的组分为无机盐、水、S和Y”，其中S（一种含有C、H、N的有机物）为碳源和氮源，则Y物质是琼脂（凝固剂）。甲、乙培养基均以S（一种含有C、H、N的有机物）为唯一碳源和氮源，属于选择培养基，A正确； B、图乙属于稀释涂布平板法接种，由于当两个或多个菌体连在一起生长时培养基上形成的是一个菌落，因此这样统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，B正确； C、③稀释涂布平板法接种到以S为唯一碳源和氮源的选择培养基上，C正确； D、利用稀释涂布平板法对细菌进行计数，要保证每个平板上长出的菌落数不超过250，假设稀释倍数为a在每个平板上涂布100uL(0.1ml)稀释后的菌液，则有250×a÷0.1=2.5×106，则稀释倍数a=1000，D错误。 故选D。 8．（24-25高三下·安徽·开学考试）尿素是现代农业生产中一种重要的氮肥。农田土壤中，尿素分解菌的数量对农作物吸收、利用尿素中的氮有很大的影响。某科研小组从农田中分离出能够分解尿素的细菌并进行计数，实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（    ）    注：实验中选择稀释倍的菌液分别进行平板涂布 A．该实验使用的培养基是以尿素作为唯一氮源的鉴别培养基 B．步骤③中，进行系列稀释时每次需加9mL清水，依次等比稀释 C．步骤④中，接种的方法可以采用平板划线法或稀释涂布平板法 D．步骤⑤中，使用的稀释倍数不能全用于计数，计数结果往往比实际值少 【答案】D 【分析】微生物筛选的关键是选择培养基的使用，通过选择培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他微生物在选择培养基上是不能生存或生存受到抑制。 【详解】A、该实验使用的培养基是以尿素作为唯一氮源的选择培养基，A错误； B、步骤③中，进行系列稀释时每次需加9mL无菌水，依次等比稀释，B错误； C、因该实验最终还需要对微生物进行计数，所以步骤④中的接种方法只能采用稀释涂布平板法，C错误； D、在微生物计数时，为了保证计数的准确性，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，实验中选择稀释104~107倍的菌液分别进行平板涂布，每个稀释倍数下，平板上的单菌落数不可能都在30～300的范围内。由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以计数结果往往比实际值少，D正确。 故选D。 9．（24-25高三上·重庆·开学考试）嗜热菌可以在高温环境中生存，其产生的淀粉酶最适温度较高。筛选能产生耐高温淀粉酶的嗜热菌过程如图1所示，其中I号培养基用碘液处理的结果如图2 所示。下列叙述错误的是（    ）    A．甲、乙主要是梯度稀释，②是用稀释涂布平板法进行接种 B．图2中淀粉是唯一碳源，周围不显蓝色的菌落含有所需菌种 C．用接种环挑菌在Ⅱ号表面数次划线后培养可分离得到单菌落 D．丙中无琼脂，接种后放入适宜的较高温度培养箱中扩大培养 【答案】C 【分析】在微生物培养和筛选的过程中，常常会用到梯度稀释和不同的接种方法。稀释涂布平板法可以用于将菌液进行梯度稀释并涂布在培养基上。以淀粉为唯一碳源时，能产生淀粉酶分解淀粉的菌落周围不会出现蓝色。 【详解】A、图中可以看出甲、乙过程主要是梯度稀释，②是在I号培养基稀释涂布平板法进行的接种，A正确； B、图2中淀粉是唯一碳源，能产生淀粉酶分解淀粉的菌落周围不会出现蓝色，所以周围不显蓝色的菌落含有所需菌种，B正确； C、在Ⅱ号培养基用接种环挑菌划线时，第一次划线后，灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连，C错误； D、丙是液体培养基，无琼脂，嗜热菌可以在高温环境中生存，因此接种后放入适宜的较高温度培养箱中扩大培养，D正确。 故选C。 10．（23-24高二下·湖南邵阳·期中）白色污染问题已引起全社会广泛关注，降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为（C2H4）n]。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基，聚乙烯分解菌在该培养基上会形成抑菌圈。回答下列问题： (1)在筛选聚乙烯分解菌过程中，制作培养基时，应将 作为X培养基中的唯一碳源，并使用 灭菌法对培养基进行灭菌。 (2)为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为 ，则可证明上述观点。 (3)为了获得可以高效降解聚乙烯的菌种，应该挑选X培养基中的 （填序号）中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。 (4)用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小，原因是 。 (5)在5个平板上各接种稀释倍数为10³的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为28、50、52、54、313，则每升原菌液样品中细菌数为 个。 【答案】 (1)聚乙烯 高压蒸汽 (2)X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数 (3)⑤ (4)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (5)5.2×108 【分析】微生物常见的接种的方法： ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落； ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）筛选聚乙烯分解菌，依据题干信息，地膜的主要成分是聚乙烯，所以应选择含废旧地膜丰富的土壤制作样品，制作培养基时，应将聚乙烯作为X培养基中的唯一碳源，并使用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌； （2）为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。如果X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数，说明该培养基具有选择作用。 （3）透明圈直径/菌落直径越大，说明该菌的降解能力越强，所以应选择⑤中单菌落接种到Y培养基上进行培养。 （4）由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以当用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小。 （5）平板上的菌落数应介于30-300之间，故28、313数值无效，所以每升原菌液样品中的细菌数为（50+52+54）/3÷0.1×103×103=5.2×108。 4 / 4 学科网（北京）股份有限公司 $$