1.2.1 微生物的基本培养技术（导学案）-【上好课】高二生物同步高效课堂（人教版2019选择性必修3）

第一章 发酵工程 1．2．1 微生物的基本培养技术 【学习目标】 1．概述培养基的成分和配制方法。 2．区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。 3．概述微生物纯培养的基本操作要求。 【学习重点】 1．微生物纯培养的基本操作要求。 2．酵母菌的纯培养。 【学习难点】 倒平板和平板划线的具体操作步骤。 【课前预习】 一、培养基的配制 1．培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 2．培养基的种类 培养基种类 划分标准 培养基特点 作用 固体培养基 物理性质 加凝固剂，如琼脂 微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种 半固体培养基 容器放倒不致流出，剧烈震动则破散 观察微生物的运动、分类鉴定 液体培养基 不加凝固剂 常用于工业生产 3．培养基的营养构成 (1)主要营养物质：水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐。 (2)某种常见的细菌培养基——牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5 g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10 g 碳源、氮源和维生素等 NaCl 5 g 无机盐 H2O 定容至1 000 mL 水 (3)培养基还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。 二、无菌技术 1．消毒 (1)概念：指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 (2)适用对象：操作的空间、操作者的衣着和手等。 (3)常用方法：煮沸消毒、巴氏消毒等。 2．灭菌 (1)概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 (2)适用对象：用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等。 (3)常用方法：湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。 三、微生物的纯培养 1．概念 (1)培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。 (2)纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体。 (3)纯培养：获得纯培养物的过程。 2．步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。 3．酵母菌的纯培养 (1)原理：微生物群体分散或稀释成单个细胞，单个细胞繁殖成单个菌落。 菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 (2)获得单菌落的方法：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 (3)步骤 ①制备培养基：配制培养基―→灭菌―→倒平板。 倒平板注意事项：a.温度：50 ℃左右；b.操作：在酒精灯火焰附近；c.冷凝后平板倒置。 ②接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。 ③培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28 ℃左右的恒温培养箱中培养24～48 h。 【课中探究】 活动一：概述培养基的种类和营养构成 1．结合提供的资料和教材中的“1 000 mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”，分析并回答下列问题： 资料1　配制培养酵母菌的培养基：称取去皮的马铃薯200 g，切成小块，加水1 000 mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20 g葡萄糖(也可用蔗糖代替)、15～20 g琼脂，用蒸馏水定容至1 000 mL。 资料2　100 g马铃薯中含有80 g水、2 g蛋白质、16 g碳水化合物，还有维生素、无机盐等。 (1)按物理性质划分上述两种培养微生物的培养基的种类。 (2)分析上述两种培养微生物的培养基的营养构成。 (3)为什么培养基需要氮源？ 2．如表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？ 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL 3．培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？ 【对应训练】 1．下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是(　　) A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.微生物的培养都需要提供碳源、氮源、水、无机盐，缺一不可 C.牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基，营养全面 D.液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养 2．关于微生物的营养，下列说法正确的是(　　) A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量 C．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也可能提供能量 活动二：消毒和灭菌的比较及无菌技术的其他作用 1．请完善表格中消毒和灭菌的主要方法及应用范围。 项目 主要方法 应用范围 消毒 巴氏消毒法 63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15s 牛奶、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品 紫外线消毒 30 W紫外灯照射30 min(损伤细菌的DNA) 接种室、接种箱或超净工作台 化学药物消毒 用体积分数为70%的酒精 擦拭实验者双手 氯气 水源 灭菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等 干热灭菌 干热灭菌箱中，160～170 ℃的热空气中维持1～2 h 耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 高压蒸汽灭菌(湿热灭菌) 100 kPa、121 ℃的条件下，维持15～30 min 培养基等 2．牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？ 3．为什么体积分数为70%的酒精杀菌效果最好？ 【对应训练】 1．在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解，错误的是(　　) A.消毒是指杀死物体表面或内部一部分微生物 B.灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 C.实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 D.吸管和培养皿可以采用干热灭菌法 2．下列有关无菌技术的说法，正确的是(　　) A．无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物 B．培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌 C．经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存 D．无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌 活动三：分析酵母菌的纯培养 1．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 2．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 3．下列接种过程，正确的顺序是b、a、e、f、c、g、d。 4．为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？请完善下方的表格。 灼烧时期 目的 取菌种前 杀死接种环上原有的微生物 每次划线前 杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞 接种结束后 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 5．若要按照如图d进行划线，那么在接种划线的操作过程中，共灼烧了几次接种环？ 6．为什么最后一次的划线与第一次的划线不能相连？ 【对应训练】 1．下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是(　　) A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水落入培养基 C．倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 2．在分离、纯化细菌的实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述错误的是(　　) A．每次划线前后都要对接种环灼烧灭菌 B．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 C．图甲中的a区域为划线的起始区域 D．蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行 【课后巩固】 知识点1　培养基的配制 1．关于微生物的营养，下列说法正确的是(　　) A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B.除水以外的无机物仅提供无机盐 C.凡是碳源都能提供能量 D.无机氮源也可能提供能量 2．下列关于微生物实验室培养的叙述，正确的是(　　) A.制备培养基时，应先灭菌后定容再倒平板 B.培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或弱碱性 C.培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素 D.培养破伤风芽孢杆菌时需要提供有氧的条件 知识点2　无菌技术 3．防止杂菌入侵，获得纯净的培养物是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是(　　) A.实验室里可用化学药物或紫外线对物体表面或空气进行消毒 B.实验室里不可吃东西，离开时一定要洗手以防被微生物感染 C.接种环、接种针等用具应在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 D.使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 4．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，可能引起食物中毒，利用该菌进行实验，结束后的做法不正确的是(　　) A.对接种环进行灼烧处理 B.带菌培养基经高压蒸汽锅灭菌后倒掉 C.带菌培养基经加热后才能倒掉 D.接种后双手必须用肥皂洗净，再用体积分数为75%的酒精棉球擦拭 5．下列有关无菌技术的说法，正确的是(　　) A.无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物 B.培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌 C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存 D.在无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌 知识点3　微生物的纯培养 6．如图是实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　) A.①步骤使用的培养基已经灭菌 B.①②③步骤操作时均需要在酒精灯火焰旁进行 C.④在恒温培养箱中培养时需要将平板倒置 D.④操作过程中，需灼烧接种环5次 7．如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是(　　) A.正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁 B.甲在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染 C.丁操作必须要等待平板冷却凝固后才能进行 D.培养基应冷却到50 ℃倒平板是因为该温度下不易受杂菌污染 8．下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是 (　　) A.获得纯培养物的关键是防止杂菌污染 B.倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落造成污染 C.倒平板时将培养皿的盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D.检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温箱中培养 【反思总结】 。 7 / 8 学科网（北京）股份有限公司 $$ 第一章 发酵工程 1．2．1 微生物的基本培养技术 【学习目标】 1．概述培养基的成分和配制方法。 2．区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。 3．概述微生物纯培养的基本操作要求。 【学习重点】 1．微生物纯培养的基本操作要求。 2．酵母菌的纯培养。 【学习难点】 倒平板和平板划线的具体操作步骤。 【课前预习】 一、培养基的配制 1．培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 2．培养基的种类 培养基种类 划分标准 培养基特点 作用 固体培养基 物理性质 加凝固剂，如琼脂 微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种 半固体培养基 容器放倒不致流出，剧烈震动则破散 观察微生物的运动、分类鉴定 液体培养基 不加凝固剂 常用于工业生产 3．培养基的营养构成 (1)主要营养物质：水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐。 (2)某种常见的细菌培养基——牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5 g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10 g 碳源、氮源和维生素等 NaCl 5 g 无机盐 H2O 定容至1 000 mL 水 (3)培养基还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。 二、无菌技术 1．消毒 (1)概念：指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 (2)适用对象：操作的空间、操作者的衣着和手等。 (3)常用方法：煮沸消毒、巴氏消毒等。 2．灭菌 (1)概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 (2)适用对象：用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等。 (3)常用方法：湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。 三、微生物的纯培养 1．概念 (1)培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。 (2)纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体。 (3)纯培养：获得纯培养物的过程。 2．步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。 3．酵母菌的纯培养 (1)原理：微生物群体分散或稀释成单个细胞，单个细胞繁殖成单个菌落。 菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 (2)获得单菌落的方法：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 (3)步骤 ①制备培养基：配制培养基―→灭菌―→倒平板。 倒平板注意事项：a.温度：50 ℃左右；b.操作：在酒精灯火焰附近；c.冷凝后平板倒置。 ②接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。 ③培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28 ℃左右的恒温培养箱中培养24～48 h。 【课中探究】 活动一：概述培养基的种类和营养构成 1．结合提供的资料和教材中的“1 000 mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”，分析并回答下列问题： 资料1　配制培养酵母菌的培养基：称取去皮的马铃薯200 g，切成小块，加水1 000 mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20 g葡萄糖(也可用蔗糖代替)、15～20 g琼脂，用蒸馏水定容至1 000 mL。 资料2　100 g马铃薯中含有80 g水、2 g蛋白质、16 g碳水化合物，还有维生素、无机盐等。 (1)按物理性质划分上述两种培养微生物的培养基的种类。 【答案要点】由于琼脂是凝固剂，所以培养酵母菌的培养基是固体培养基，而牛肉膏蛋白胨培养基未加凝固剂，是液体培养基。 (2)分析上述两种培养微生物的培养基的营养构成。 【答案要点】都含有水、碳源、氮源、无机盐和维生素等，其中培养酵母菌的培养基中主要由糖类提供碳源，蛋白质提供氮源，牛肉膏蛋白胨培养基中主要由牛肉膏和蛋白胨提供碳源，蛋白胨提供氮源。 (3)为什么培养基需要氮源？ 【答案要点】培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 2．如表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？ 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL 【答案要点】此培养基可用来培养自养型微生物。圆褐固氮菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供有机碳源，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。 3．培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？ 【答案要点】不一定。例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。 【对应训练】 1．下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是(　　) A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.微生物的培养都需要提供碳源、氮源、水、无机盐，缺一不可 C.牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基，营养全面 D.液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养 【答案】D 【解析】同一种物质可以既作碳源又作氮源，如牛肉膏，A错误；不同的微生物所需的条件不同，如培养自生固氮菌时不需要加入氮源，B错误；牛肉膏蛋白胨培养基属于天然培养基，营养全面，C错误；液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养，D正确。 2．关于微生物的营养，下列说法正确的是(　　) A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量 C．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也可能提供能量 【答案】D 【解析】对一些微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物可以既是碳源，又是氮源，A错误；CO2是光能自养型细菌的碳源，但不能提供能量，B错误；除水以外的无机物种类繁多、功能多样，如CO2可作自养型微生物的碳源，C错误；硝化细菌所利用的氮源是无机氮源——氨气，同时氨气的氧化过程也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能量，D正确。 活动二：消毒和灭菌的比较及无菌技术的其他作用 1．请完善表格中消毒和灭菌的主要方法及应用范围。 项目 主要方法 应用范围 消毒 巴氏消毒法 63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15s 牛奶、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品 紫外线消毒 30 W紫外灯照射30 min(损伤细菌的DNA) 接种室、接种箱或超净工作台 化学药物消毒 用体积分数为70%的酒精 擦拭实验者双手 氯气 水源 灭菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等 干热灭菌 干热灭菌箱中，160～170 ℃的热空气中维持1～2 h 耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 高压蒸汽灭菌(湿热灭菌) 100 kPa、121 ℃的条件下，维持15～30 min 培养基等 2．牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？ 【答案要点】在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。 3．为什么体积分数为70%的酒精杀菌效果最好？ 【答案要点】若酒精浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；若酒精浓度过低，杀菌能力减弱。 【对应训练】 1．在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解，错误的是(　　) A.消毒是指杀死物体表面或内部一部分微生物 B.灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 C.实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 D.吸管和培养皿可以采用干热灭菌法 【答案】C 【解析】消毒只能杀死物体表面或内部的一部分微生物，不能杀死孢子和芽孢，A正确；灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，在经过灭菌后的物体中，不再存在任何活着的生命，包括芽孢和孢子，B正确；实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，C错误；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌等，吸管和培养皿可以采用干热灭菌法，D正确。 2．下列有关无菌技术的说法，正确的是(　　) A．无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物 B．培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌 C．经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存 D．无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌 【答案】C 【解析】无菌技术的关键是防止杂菌污染，A错误；无菌技术中，若处理对象为液体，可以用湿热灭菌法灭菌，D错误。 活动三：分析酵母菌的纯培养 1．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 【答案要点】最好不要用这个平板培养微生物； 防止空气中的微生物在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 2．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 【答案要点】平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快挥发。 3．下列接种过程，正确的顺序是b、a、e、f、c、g、d。 4．为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？请完善下方的表格。 灼烧时期 目的 取菌种前 杀死接种环上原有的微生物 每次划线前 杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞 接种结束后 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 5．若要按照如图d进行划线，那么在接种划线的操作过程中，共灼烧了几次接种环？ 【答案要点】图d中共划了5个区域，在每次划线前后均需要对接种环灼烧灭菌，因此共需要灼烧接种环6次。 6．为什么最后一次的划线与第一次的划线不能相连？ 【答案要点】最后一次的划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次的划线相连则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。 【对应训练】 1．下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是(　　) A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水落入培养基 C．倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 【答案】C 【解析】倒平板时用食指和拇指夹住培养皿的皿盖并开启一条缝隙，使其恰好能让锥形瓶瓶口伸入，随后倒入培养基，C错误。 2．在分离、纯化细菌的实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述错误的是(　　) A．每次划线前后都要对接种环灼烧灭菌 B．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 C．图甲中的a区域为划线的起始区域 D．蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行 【答案】C 【解析】题图中a对应的区域出现了单个菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，C错误。 【课后巩固】 知识点1　培养基的配制 1．关于微生物的营养，下列说法正确的是(　　) A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B.除水以外的无机物仅提供无机盐 C.凡是碳源都能提供能量 D.无机氮源也可能提供能量 【答案】D 【解析】对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源，如牛肉膏，A错误；CO2和N2是无机物，也是某些微生物的碳源和氮源，B错误；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量，C错误；硝化细菌可利用体外NH3氧化获得能量，D正确。 2．下列关于微生物实验室培养的叙述，正确的是(　　) A.制备培养基时，应先灭菌后定容再倒平板 B.培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或弱碱性 C.培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素 D.培养破伤风芽孢杆菌时需要提供有氧的条件 【答案】C 【解析】制备培养基时，应先定容后灭菌再倒平板，A错误；培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，B错误；维生素是乳酸杆菌生长繁殖所必需的，但其自身不能合成，因此培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，C正确；破伤风芽孢杆菌属于厌氧菌，培养破伤风芽孢杆菌时需要提供无氧的条件，D错误。 知识点2　无菌技术 3．防止杂菌入侵，获得纯净的培养物是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是(　　) A.实验室里可用化学药物或紫外线对物体表面或空气进行消毒 B.实验室里不可吃东西，离开时一定要洗手以防被微生物感染 C.接种环、接种针等用具应在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 D.使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 【答案】C 【解析】实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒，A正确；实验室中，不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防被微生物感染，B正确；接种环、接种针等金属用具，应在酒精灯火焰的充分燃烧层(外焰)灼烧灭菌，C错误；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，D正确。 4．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，可能引起食物中毒，利用该菌进行实验，结束后的做法不正确的是(　　) A.对接种环进行灼烧处理 B.带菌培养基经高压蒸汽锅灭菌后倒掉 C.带菌培养基经加热后才能倒掉 D.接种后双手必须用肥皂洗净，再用体积分数为75%的酒精棉球擦拭 【答案】C 【解析】接种环属于金属用具，所以要用灼烧灭菌的方法进行灭菌处理，A正确；为了避免对环境造成污染，带菌培养基必须经过高压蒸汽灭菌后才能被倒掉，加热后不一定能将细菌杀死，B正确、C错误；实验结束后，对实验者的双手必须进行消毒，一般用洗涤剂洗涤或者酒精擦拭，D正确。 5．下列有关无菌技术的说法，正确的是(　　) A.无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物 B.培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌 C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存 D.在无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌 【答案】C 【解析】无菌技术的关键是防止杂菌的污染，A错误；培养微生物的培养基一般用高压蒸汽灭菌，微生物的接种工具，如接种针、接种环或其他金属用具一般通过酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧来灭菌，B错误；经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存，C正确；在无菌技术中，若处理对象为液体，可以用高压蒸汽灭菌法灭菌，D错误。 知识点3　微生物的纯培养 6．如图是实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　) A.①步骤使用的培养基已经灭菌 B.①②③步骤操作时均需要在酒精灯火焰旁进行 C.④在恒温培养箱中培养时需要将平板倒置 D.④操作过程中，需灼烧接种环5次 【答案】D 【解析】①为倒平板，该步骤使用的培养基已经灭菌，A正确；①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，B正确；④在恒温培养箱中培养时需要将平板倒置，防止冷凝水滴入培养基，造成污染，C正确；每次划线前后都要灼烧接种环，因此④操作过程中，需灼烧接种环6次，D错误。 7．如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是(　　) A.正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁 B.甲在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染 C.丁操作必须要等待平板冷却凝固后才能进行 D.培养基应冷却到50 ℃倒平板是因为该温度下不易受杂菌污染 【答案】D 【解析】倒平板正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁，A正确；将培养基倒入培养皿(甲)，在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染，B正确；丁操作为将培养基倒置，必须要等待平板冷却凝固后才能进行，C正确；培养基冷却到50 ℃时既不烫手，也不发生凝固，适宜进行倒平板，而不是防止杂菌污染，D错误。 8．下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是 (　　) A.获得纯培养物的关键是防止杂菌污染 B.倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落造成污染 C.倒平板时将培养皿的盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D.检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温箱中培养 【答案】C 【解析】倒平板时用食指和拇指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，使其恰好能让锥形瓶瓶口伸入，随后倒入培养基，C错误。 【反思总结】 。 9 / 9 学科网（北京）股份有限公司 $$