第1节 第1课时 植物细胞工程的基本技术-【金版新学案】2024-2025学年高中生物选择性必修3同步课堂高效讲义教师用书（人教版2019 多选）

第2节　微生物的培养技术及应用 第1课时　微生物的基本培养技术 [学习目标]　1.基于对牛肉膏蛋白胨培养基的实例分析，说明培养基的概念、种类及营养成分的种类和作用。　2.对比分析消毒和灭菌方法异同，认同灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。　3.运用微生物培养原理和无菌技术，通过平板划线接种并分离得到酵母菌单菌落，对实验结果进行分析与评价。 知识点一　培养基的配制 1．培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 2．培养基的种类 种类 划分标准 培养基特点 作用 固体培养基 物理 性质 加凝固剂，如琼脂 微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种 液体培养基 不加凝固剂 常用于工业生产 3.培养基的营养构成 (1)主要营养物质：水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐。 (2)某种常见的细菌培养基——牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5 g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10 g 碳源、氮源和维生素等 NaCl 5 g 无机盐 H2O 定容至1 000 mL 水 (3)其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表： 微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物 特殊需求 添加维生素 pH调至酸性 pH调至中性或弱碱性 无氧 学生用书第9页 [精通教材] 1．培养基的配制原则有哪些？ 提示：目的要明确；营养要协调；pH要适宜。 2．说出培养基中琼脂的作用。 提示：固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。 任务　分析培养基的种类和营养构成 1．下表是某培养基的配方，回答下列问题。 材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 用量 5 g 10 g 5 g 20 g 定容至1 000 mL (1)根据培养基的物理性质，该培养基属于哪类培养基，依据是什么？ 提示：固体培养基。该培养基的配方中含有凝固剂琼脂。 (2)为什么培养基需要氮源？该培养基中主要提供碳源和氮源的物质是什么？ 提示：培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。牛肉膏和蛋白胨主要提供碳源和氮源。 (3)说出该培养基培养的微生物同化作用类型，及判断依据。 提示：异养型微生物，该微生物的碳源和氮源是有机物，不能自己合成有机物。 (4)培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？ 提示：不一定，例如培养自养微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。 2．下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？ 编号 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL 提示：此培养基可用来培养自养型微生物。若除去①圆褐固氮菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供含碳有机物，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。 [核心归纳] 培养基营养成分的作用和主要来源 应用1.(2024·云南昆明高二期末)下表是培养某种微生物的培养基配方，下列说法正确的是(　　) 成分 NH4NO3 KH2PO4 CaCl2 FeSO4 维生素 蒸馏水 含量 0.5 g 3.0 g 0.5 g 0.5 g 少许 定容至1 000 mL A.该培养基中含有碳源、氮源、水和无机盐四类物质 B．该培养基可用来培养硝化细菌，不能用来培养酵母菌 学生用书第10页 C.该培养基在培养硝化细菌时，需要密封 D．要用该培养基培养酵母菌，需要加入葡萄糖作为氮源 答案：B 解析：该培养基中不含有碳源，而酵母菌是异养生物，硝化细菌是自养生物，其可以利用空气中CO2来合成有机物，因此该培养基可用来培养硝化细菌，不能用来培养酵母菌，A错误，B正确；硝化细菌需要利用空气中的CO2来合成有机物，因此该培养基在培养硝化细菌时，不能密封，C错误；要用该培养基培养酵母菌，需要加入葡萄糖作为碳源，D错误。 不是所有微生物的培养基中都需要加入碳源、氮源 1．自养微生物能利用无机碳源(如空气中的CO2)，故培养基中不用添加碳源。 2．固氮微生物可利用N2作为氮源，故培养基中不用加入氮源。 3．对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物(尿素除外)既可能是碳源，又可能是氮源。 应用2.(2024·陕西西安高二期末)下列有关微生物培养基的配制表述错误的是(　　) A．培养硝化细菌的培养基中添加的铵盐可作为能量来源 B．尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH C．培养光能自养型蓝细菌的培养基中不需提供有机碳源 D．马铃薯琼脂固体培养基中的琼脂能作为酵母菌的碳源 答案：D 解析：硝化细菌是化能自养型生物，可利用氧化NH3获得能量，将无机物转化为有机物，故培养硝化细菌的培养基中的铵盐可作为能量来源，A正确；尿素固体培养基中的K2HPO4能用于维持培养基的pH，保证微生物所需的酸碱环境，B正确；培养光能自养型蓝细菌的培养基中不需提供有机碳源，蓝细菌可利用二氧化碳和水合成有机物，C正确；琼脂的作用是凝固剂，不能作为碳源，D错误。 几种微生物的营养和能量来源 微生物 碳源 氮源 能源 蓝细菌 CO2 NH、NO等 光能 硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化 根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物 大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物 　　知识点二　无菌技术 1．消毒和灭菌 2．具体操作 (1)对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，许多实验操作都应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应注意避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 3．连线无菌技术的常用方法及适用对象 [精通教材] 1．消毒和灭菌的原理是什么？能否杀死所有的微生物？ 提示：消毒和灭菌都是使微生物的蛋白质或核酸变性，借此杀死微生物。灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅杀死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。 学生用书第11页 2.下图为接种环灼烧灭菌的示意图，思考下列问题。 (1)酒精灯火焰A、B代表充分燃烧层的是A。 (2)灭菌先后的正确顺序是③→①→②(用序号和箭头表示)。 任务　分析无菌技术的类型和应用 获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括消毒和灭菌。思考下列问题。 (1)消毒和灭菌的结果有什么不同？ 提示：消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物；灭菌可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？ 提示：在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。 (3)常用酒精擦拭双手是日常防护致病菌感染的措施之一，这是消毒还是灭菌？体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？ 提示：酒精擦拭属于消毒，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。 [核心归纳] 消毒和灭菌的主要方法及应用范围 项目 主要方法 应用范围 消 毒 巴氏消毒法 63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s 牛奶、啤酒等不耐高温的液体 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品 紫外线消毒 紫外线照射30 min 接种室、接种箱或超净工作台 化学药物消毒 用体积分数为70%～75%的酒精、氯气、苯酚或煤酚皂溶液等处理 皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、水消毒 灭 菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等 干热灭菌 160～170 ℃的热空气中维持1～2 h 耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等 高压蒸汽灭菌(湿热灭菌) 100 kPa、121 ℃维持15～30 min 培养基及多种器材、物品 应用1.(2024·山东东营高二开学考试)微生物的实验室培养要进行严格的灭菌和消毒。下列关于灭菌和消毒的叙述，正确的是(　　) A．灭菌和消毒均可以杀死环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子 B．无菌操作时，对操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 C．灼烧灭菌的对象是金属器具，不可以是玻璃器具 D．消毒和灭菌的原理是基本相同的，程度有所不同 答案：D 解析：灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子；消毒只能杀死物体表面或内部一部分微生物，不能杀死芽孢和孢子，A错误。对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒，B错误。灼烧灭菌的对象可以是金属器具和玻璃器具，C错误。消毒和灭菌的原理基本相同，都是使微生物的核酸或蛋白质变性，灭菌更彻底，D正确。 学生用书第12页 芽孢和孢子 1．芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。 2．孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。孢子的特点是能直接长成新个体。 　　 应用2.(2024·甘肃天水高三期末)实验室常用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，下列叙述正确的是(　　) A.放入待灭菌物品后，关闭排气阀，即可打开电源加热 B．一般在压力为100 kPa、温度121 ℃的条件下灭菌10 min C．高压蒸汽灭菌法可以杀灭物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 D．若压力达到设定要求时，锅内没有达到相应温度，说明灭菌锅的温度计测量有误 答案：C 解析：放入待灭菌物品后，加热灭菌锅，打开排气阀，排除锅内冷空气，A错误；为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121 ℃的条件下，维持15～30 min，B错误；高压蒸汽灭菌法是常用的湿热灭菌法之一，可以杀灭物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，C正确；若压力达到设定要求，而锅内没有达到相应温度，最可能的原因是未将锅内冷空气排尽，D错误。 高压蒸汽湿热灭菌的2个注意点 1．高压蒸汽灭菌开始之前要将锅内的冷空气排尽。因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 2．灭菌完毕后，要待压力降到0时才能打开排气阀，否则会导致锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 　　 知识点三　微生物的纯培养 1．纯培养的相关概念 (1)培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。 (2)纯培养物与纯培养：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 2．步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。 3．酵母菌的纯培养 (1)实验原理 ①分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 ②采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 (2)方法步骤 4．倒平板的具体操作 学生用书第13页 5.平板划线法的具体操作 [精通教材] 1．培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。可用什么办法来估计培养基的温度？ 提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2．在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 任务　分析平板划线操作过程 1．结合倒平板的操作程序思考下列问题。 (1)如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (2)图二所示，平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 提示：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快挥发。 (3)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 提示：不能用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 2．下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题： (1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤。 提示：d→b→f→a→e→c→h→g。 (2)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要 学生用书第14页 灼烧接种环？在划线操作结束时，为什么仍然需要灼烧接种环？ 提示：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落，划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 (3)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 提示：以免接种环温度太高，杀死菌种。 (4)若要按照如图h进行划线，那么在接种划线的操作过程中，共灼烧了几次接种环？ 提示：图h中共划了5个区域，在每次划线前后均需要对接种环灼烧灭菌，因此共需要灼烧接种环6次。 (5)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ 提示：培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 [核心归纳] 1．配制培养基的注意事项 (1)如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成之后，灭菌之前进行操作。 (2)培养基灭菌后需要冷却至50 ℃左右时才能倒平板。温度过高会烫手，且培养基凝固后皿盖上凝结的冷凝水过多，易落入培养基造成污染；温度过低，培养基会凝固。 (3)倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (4)将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。 (5)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 2．平板划线操作的注意事项 (1)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 (2)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过火焰；划线操作全程都要在酒精灯火焰旁进行。 (3)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线时最后一区不要与第一区相连。 (4)划线时用力大小要适当，避免用力过大将培养基划破。 (5)操作第一步即取菌种之前以及每次划线之前都需要将接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环。 3．实验结果的分析 (1)若未接种的培养基表面有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。 (2)在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈乳白色。 (3)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液中混入了其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。 应用1.下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列叙述正确的是(　　) A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌处理 B．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置 学生用书第15页 C.步骤②应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落 D．步骤③划线结束后在培养皿盖上做好标注 答案：C 解析：图中①是倒平板，②是进行平板划线，③是培养。对实验操作的空间、操作者的衣着和手需要进行消毒处理，A错误；倒完平板后立即盖上培养皿盖，待培养基冷却凝固后将平板倒过来放置，B错误；步骤②应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，C正确；图中操作结束后需在培养皿底标注菌种及接种日期等信息，而不是在培养皿盖上做标注，D错误。 应用2.(2024·广西桂林高二开学考试)微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。下列关于酵母菌的纯培养的叙述错误的是(　　) A．采用平板划线法和稀释涂布平板法均可分离酵母菌 B．可用湿热灭菌法对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌 C．通过接种环连续蘸取菌液在固体培养基表面划线的操作，可将菌种逐步稀释 D．完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将接种后的平板进行培养 答案：C 解析：对于微生物进行分离的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，A正确；可用湿热灭菌法(通常是高压蒸汽灭菌法)对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌，B正确；通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，该过程中只蘸取一次菌液，C错误；完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板(和一个未接种的平板)倒置培养，D正确。 应用3.在分离纯化大肠杆菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图所示。下列叙述错误的是(　　) A．甲中a区域为划线的起始位置 B．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 C．接种过程中至少需要对接种环灼烧5次 D．连续划线的目的是获得单个细菌，以便形成单菌落 答案：A 解析：乙图呈现的培养结果是：从d区域到a区域菌落逐渐减少，而形成单菌落的区域是划线的末端，所以a区域应为划线的终点位置，A错误；在培养微生物时必须进行无菌操作，培养基可通过高压蒸汽灭菌来保证无菌，B正确；划线前后都要对接种环灼烧，共划线4次，所以需要灼烧5次，C正确；平板划线法是分离单菌落的常用方法，划线将细菌分散，到划线的末端可以获得单菌落，D正确。 培养基中微生物数目过多或连成一片的原因 1．菌液浓度过高。 2．培养过程中被杂菌污染。 3．利用接种环划线时，每次划线前未灼烧灭菌。 思维导图 要语必背 1.培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。 2.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 3.由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 4.菌落是单个或少数同种微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 5.微生物纯化方法主要采用平板划线法和稀释涂布平板法。 1．下列有关微生物培养基种类及配制原则的叙述，正确的是(　　) A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、水、无机盐及特殊的营养物质 B．液体培养基可用于观察菌落，固体培养基可用于工业生产 C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、O2、渗透压等的影响 D．淀粉可作为所有微生物的碳源 答案：C 解析：培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，培养固氮微生物的培养基中不需加入氮源，A错误；一般固体培养基可用于观察菌落，液体培养基可用于工业生产，B错误；某些微生物不能利用淀粉，而只能利用葡萄糖、果糖、蔗糖和麦芽糖等糖类，D错误。 2．防止外来杂菌的入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是(　　) 学生用书第16页 A.实验室里可以用紫外线或化学药剂进行消毒 B．接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 C．在实验室中，切记不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，防止被微生物感染 D．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 答案：B 解析：实验室里可以用紫外线或化学药剂进行消毒，A正确；灼烧灭菌应该在酒精灯火焰的外焰部位灼烧，B错误；为防止被微生物感染，切记不可在实验室中吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，C正确；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，D正确。 3．下图为实验室中酵母菌纯培养的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　) A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖 C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理 D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养 答案：B 解析：由图可知，①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，④是培养。①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，以防止污染环境和感染操作者，A正确；倒完平板后应立即盖上培养皿的皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B错误；第一次划线前灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基，除第一次划线外，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过增加划线次数，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，最后一次划线后也需要对接种环进行灭菌处理，C正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D正确。 4．下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是(　　) A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B．倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水落入培养基 C．倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿 D．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 答案：C 解析：倒平板时用食指和拇指夹住培养皿的皿盖并开启一条缝隙，使其恰好能让锥形瓶瓶口伸入，随后倒入培养基，C错误。 5．(2024·河北邢台二模)鲸死亡后会沉入海底，俗称“鲸落”。“鲸落”后期会形成一个以厌氧菌和硫细菌等为主体的生态系统。厌氧菌以“鲸落”肌肉中的脂肪为食，同时产生一些硫化氢等硫化物。硫细菌将硫化物氧化成硫酸盐，并以该过程中释放的能量合成有机物。下列说法正确的是(多选)(　　) A．培养“鲸落”中的厌氧菌时，需要用葡萄糖作为碳源 B．厌氧菌属于消费者，是“鲸落”中不可缺少的部分 C．平板划线时，最好按照图乙的方法对菌种进行纯化 D．可利用稀释涂布平板法对菌种进行纯化培养并计数 答案：CD 解析：题意显示，厌氧菌以“鲸落”肌肉中的脂肪为食，因此，培养“鲸落”中的厌氧菌时，需要用脂肪作为碳源，A错误；厌氧菌属于分解者，是“鲸落”中不可缺少的部分，B错误；平板划线时，最好按照图乙的方法对菌种进行纯化，因为该方法通过连续划线操作划线的路径更长，因而更容易获得单菌落，C正确；可利用稀释涂布平板法对菌种进行纯化培养并计数，因为稀释涂布平板法不仅可得到单菌落，而且可用于活菌计数，D正确。 6．(创新情境)牛奶是微生物生长的良好培养基。牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。为检测自制酸奶是否被杂菌污染，先将酸奶进行一定程度的稀释，回答下列问题： (1)牛奶用巴氏消毒的好处是____________________________________。 (2)取最终的牛奶稀释液在培养基上划线，应选择的工具是下图中的________(填选项)。 (3)理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落，如果培养基上出现_______的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。 (4)已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，纯化乳酸菌时划线操作正确的是______(填选项)。 答案：(1)牛奶的营养成分不被破坏(或营养成分没有损失)　(2)A　(3)(形状、大小、颜色、光泽度)不同　(4)B 解析：(1)巴氏消毒的方法是指63～65 ℃消毒30 min或72～76 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏。(2)划线时所用的接种工具是接种环，即图中的A。(3)如果培养基上出现(形状、大小、颜色、光泽度)不同的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。(4)A图很难得到由单个菌株增殖而来的菌落；B图划线从上次划线末端开始，容易得到由单个菌株增殖而来的菌落；C图划线没有从上次划线的末端开始，接种环上没有菌种，不能得到由单个菌株增殖而来的菌落；D图划线不是从上次划线末端开始，不容易得到由单个菌株增殖而来的菌落。 学科网（北京）股份有限公司 $$