第2节 第2课时 微生物的选择培养和计数-【金版新学案】2024-2025学年高中生物选择性必修3同步课堂高效讲义教师用书（人教版2019 多选）

第2课时　微生物的选择培养和计数 [学习目标]　1.说明选择培养基的概念和如何设计培养基来分离分解尿素的细菌。　2.归纳与概括测定微生物数量的常用方法。　3.基于微生物的选择培养和数量测定原理，设计实验分离土壤中的尿素分解菌，并对实验结果进行分析与评价。 知识点一　选择培养基及微生物的选择培养 1．选择培养基 (1)自然界中目的菌的筛选 ①实例：聚合酶链式反应(PCR)中用到的耐高温的DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出的水生栖热菌中提取出来的。 ②依据：水生栖热菌能在70～80_℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 (2)实验室中目的菌的筛选 ①原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 ②选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2．微生物的选择培养(稀释涂布平板法) (1)依次等比稀释操作 ①编号为1×102～1×107的试管中分别盛有9 mL无菌水。 ②将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 ③取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 (2)涂布平板操作 (3)培养分离：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37 ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 [精通教材] 1．平板划线法为什么不能对微生物进行计数？ 提示：平板划线法最开始的划线很可能微生物会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分微生物。 2．稀释涂布平板法为什么能用菌落数代表活菌数目？ 提示：当菌液稀释倍数足够高时，培养基表面生长的一个单菌落来源于一个活菌。 学生用书第18页 任务　分析选择培养基的组成和功能 下面为培养某种微生物的培养基配方，请分析： 成分 NaNO3 K2HPO4 KCl MgSO4·7H2O 含量 3 g 1 g 0.5 g 0.5 g 成分 FeSO4 (CH2O) H2O 青霉素 含量 0.01 g 30 g 1 L 0.1万单位 (1)从物理性质看，该培养基属于液体培养基。 (2)培养基中的唯一碳源是(CH2O)，唯一氮源是NaNO3。 (3)若利用该培养基实现对纤维素分解菌的筛选，应如何处理？ 提示：除去(CH2O)和青霉素，再添加纤维素。 [核心归纳] 选择培养基四种常见制备方法或实例 1．加入某些特定的物质(前提是培养基具备全部营养成分) 2．改变培养基的营养成分 3．利用培养基中的“特定化学成分”进行分离 4．通过某些“特殊环境”进行分离 应用1.如图是纯化微生物时两种接种方法接种后培养的效果图，下列叙述正确的是(　　) A．图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同 B．图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数 C．图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器 D．图乙每次划线应从同一起点开始以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落 答案：B 解析：根据图甲中三个平板的菌落密度可知，三个平板中所用培养液的稀释倍数不同，A错误；图甲、乙均可获得单菌落，均可用于分离微生物，图乙是平板划线法接种后的结果，不适合对微生物进行计数，B正确；稀释涂布平板法接种使用涂布器，平板划线法接种使用接种环，C错误；图乙每次划线应从上一次划线的末端开始，以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落，D错误。 平板划线法和稀释涂布平板法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 主要步骤 接种环在固体培养基表面连续划线 依次等比稀释操作和涂布平板操作 接种工具 接种环 涂布器 单菌落的获得 从最后划线的区域挑取 稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落 用途 分离纯化菌种，获得单菌落 ①分离纯化菌种，获得单菌落； ②用于计数 菌落分布 共同点 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征 学生用书第19页 应用2.物质W是一种含氮有机物，W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌，结果如图。下列说法错误的是(　　) A．透明圈的形成是因为W被分解 B．所用的选择培养基应该是以W为唯一氮源 C．甲菌落中的细菌可能是利用空气中的氮气作为氮源 D．乙菌落中的细菌都能降解W，不需要进一步纯化 答案：D 解析：W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明，因此透明圈的形成是因为W被分解，A正确；要筛选出能降解W的细菌，所用的选择培养基应该是以W为唯一氮源，B正确；该培养基以W为唯一氮源，而甲菌落周围未出现透明圈，因此甲菌落中的细菌可能是利用空气中的氮气作为氮源，C正确；乙菌落中的细菌不一定都能降解W，因此仍需要进一步纯化，D错误。 鉴别培养基 1．作用：用于鉴别不同类型微生物的培养基。 2．原理：在基础培养基中，加入某种特殊的化学物质，这种物质会与某种微生物的代谢物发生反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，就可以将该种微生物与其他微生物区分开来。鉴别培养基主要用于微生物的快速分类鉴定。 3．举例 名称 主要用途 主要化学物质 特征性变化 伊红－亚甲蓝琼脂培养基 鉴别大肠杆菌 伊红、亚甲蓝 出现带金属光泽的深紫色菌落 刚果红培养基 鉴别纤维素分解菌 刚果红(是一种染料，它可与纤维素形成红色复合物，并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生颜色反应)、纤维素 纤维素被分解后出现透明圈 淀粉鉴别培养基 鉴别淀粉酶菌株　　 可溶性淀粉 淀粉被水解后出现淀粉水解圈 　　知识点二　微生物的数量测定 1．活菌计数法 (1)常用方法：稀释涂布平板法。 (2)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (3)计数原则：一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 (4)计算公式 每克样品中的菌株数＝×稀释倍数 (5)统计结果 ①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 ②表示方法：一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 2．显微镜直接计数法 (1)一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。 学生用书第20页 (2)操作：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。 [精通教材] 1．通过稀释涂布平板法统计的细菌的数目与它的实际数目相同吗？为什么？ 提示：不相同，统计的细菌数往往比活菌实际数目少。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 2．显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，因此一般用来统计总菌数。但是，通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。 任务　分析微生物数量测定的方法 1．甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 (1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？ 提示：不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。 (2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？ 提示：不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。 2．某同学在三种稀释度下吸取0.1 mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到了以下的数据： 平板 稀释度 　　 平板1 平板2 平板3 104 320 360 356 105 212 234 287 106 21 23 18 (1)试计算1 g样品的活菌数。 提示：105的稀释度下取0.1 mL涂布的三个平板上的菌落数在30～300范围内，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108个。 (2)据图，计算4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数。 提示：由图可知，4号试管的稀释倍数为105，105的稀释度下取0.1 mL涂布的三个平板上的菌落，计算其平均值为(110＋108＋112)/3＝110。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为(110÷0.1)×105＝1.10×108个。 [核心归纳] 对比分析微生物计数的两种方法 计算方法 间接计数法 (稀释涂布平板法) 直接计数法 (显微镜计数法) 每克样品中的菌落数＝×M C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数； V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)； M：稀释倍数 每毫升原液所含细菌数：每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数 学生用书第21页 缺点 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 统计的结果一般是死菌数与活菌数的总和 结果 比实际值偏小 比实际值偏大 应用1.稀释涂布平板法是常用的微生物培养方法，下列叙述正确的是(　　) A．灭菌锅中取出的培养基应趁烫时倒平板，如此可对培养皿灭菌 B．稀释涂布平板法不可用于微生物的分离，可用于微生物的计数 C．用此法估测的数值往往偏小，应以菌落数最多的平板计数为准 D．稀释涂布平板法分离得到的单菌落需进一步纯化，可用平板划线法 答案：D 解析：灭菌锅中取出的培养基应冷却至50 ℃左右时倒平板，A错误。稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数，B错误。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，C错误。稀释涂布平板法分离得到的单菌落仍需进一步划线纯化，以获得纯种，D正确。 应用2.(2024·安徽合肥高三期末)某生物活动小组为探究当地农田土壤中尿素分解菌的数量，按随机取样、依次等比稀释、涂布平板、培养、计数等步骤进行实验，如图所示。实验结果：6号试管涂布的三个平板的菌落数分别为550、501、688，7号试管涂布的三个平板的菌落数分别为58、73、97，8号试管涂布的三个平板的菌落数分别为8、15、28。下列叙述正确的是(　　) A．琼脂培养基属于液体培养基 B．接种时要对操作者双手进行灭菌 C．对微生物进行计数时可采用稀释涂布平板法 D．10 g土壤样品中约含有7.6×1010个尿素分解菌 答案：C 解析：琼脂可作为凝固剂，含琼脂的培养基属于固体培养基，A错误；接种时要对操作者双手进行消毒，B错误；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，所以在对微生物进行计数时可采用稀释涂布平板法，C正确；由于平板计数的适宜值在30～300之间，所以应选择7号试管涂布的平板进行计数，其平均菌落数为(58＋73＋97)/3＝76，据图可知，10 g土壤样品经依次等比稀释至7号试管，稀释度为108倍，而不是107倍，因为在锥形瓶中已经稀释10倍，所以利用公式计算每克土壤样品中的菌落数：(76÷0.1)×108＝7.6×1010，10 g土壤样品中含有分解尿素细菌的数目是7.6×1010×10＝7.6×1011个，D错误。 用稀释涂布平板法计数微生物的方法 1．稀释涂布平板操作要求：按照平行重复原则，同一稀释度下的菌液应涂布3个或3个以上的平板。 2．计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。 3．选择可用于计数的平板：选择菌落数在30～300的平板(相同稀释度的平板均符合该特点)进行计数，然后取平均值。 知识点三　探究·实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．实验设计 (1)土壤取样 ①土壤要求：酸碱度接近中性且潮湿。 ②取样部位：距地表约3～8_cm的土壤层。 (2)样品的稀释 测定土壤中细菌的数量，一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。当第一次做这个实验时可以将稀释的范围放宽一点。 (3)微生物的培养与观察 ①培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37 ℃的温度下培养1～2 d。 ②观察：每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。记录菌落的特征：包括菌落的形状、大小和颜色等。 2．操作提示 (1)无菌操作 ①取土样的用具在使用前都需要灭菌。 ②实验操作均应在火焰旁进行。 学生用书第22页 (2)做好标记：本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。 (3)制定计划：对于耗时较长的生物实验，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。 [精通教材] 1．土壤中分解尿素的细菌的分离原理是什么？ 提示：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 2．该实验中所用接种方法是什么？选择上述方法的理由是什么？ 提示：稀释涂布平板法。稀释涂布平板法能用于微生物计数，平板划线法不能用于微生物计数。 任务　分析土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 阅读教材P18～P19“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”，回答下列问题。 (1)测定土壤中细菌的数量，一般选择用多大稀释倍数的稀释液进行涂布平板？测定土壤中细菌的总量和能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？为什么？ 提示：测定土壤中细菌的数量，一般选择用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。不相同。因为土壤中能分解尿素的细菌的数量比细菌的总量要少。 (2)第一次实验可以选择用多大稀释倍数的稀释液进行涂布平板？第一次实验时为什么要将稀释范围放宽一些？ 提示：第一次实验时可以将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上进行培养。为了确保能从中选出菌落数在30～300之间的平板进行计数。 (3)为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？ 提示：尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落。 (4)利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物都是能分解尿素的微生物吗？为什么？ 提示：不一定；因为有些微生物可以利用能分解尿素的细菌的代谢物进行生长繁殖。 (5)细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解菌。依据以上原理，如何对分离得到的微生物是否是分解尿素的细菌作进一步鉴定？ 提示：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若菌落周围出现红色环带，则可说明该菌种能够分解尿素。 [核心归纳] “土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验结果分析 应用1.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是(　　) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上 学生用书第23页 C.将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 h D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数 答案：D 解析：检测细菌总数，用蒸馏水配制培养基，常用高压蒸汽灭菌法灭菌后，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组放置在适宜条件下培养，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板为代表进行计数，D错误。 能够在选择培养基上生长的不一定都是目的菌株 原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此，能够在选择培养基上生长的不一定都是目的菌株。 　　 应用2.(2024·广东深圳高三期末)某实验小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，操作流程如图所示，下列叙述正确的是(多选)(　　) A．某些细菌合成的脲酶可催化尿素分解为NH3和CO2 B．实验所用的培养基应该以尿素为唯一的氮源和碳源 C.由图中数据可知1 g实验土样中的菌株数约为1.7×109个 D．涂布3个平板可以避免出现菌落数比活菌的实际数目少的现象 答案：AC 解析：尿素分解菌之所以能分解尿素，是因为其合成的脲酶可催化尿素分解为NH3和CO2，A正确；实验所用的培养基应该以尿素为唯一氮源，但需要加入其他必需的碳源，B错误；1 g实验土样中的菌株数约为(168＋175＋167)÷3÷0.1×106＝1.7×109个，C正确；涂布3个平板可以减小实验误差，但并不能避免出现菌落数比活菌的实际数目少的现象，D错误。 思维导图 要语必背 1.测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。 2.稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比实际活菌数目低。 3.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的选择培养基分离该细菌。 4.为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数；在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 1．(2024·河北保定高三开学考试)人们在研究、利用微生物时，需用无菌技术获取纯净微生物，并对其进行计数或保存。下列相关叙述正确的是(　　) A．可用血细胞计数板或细菌计数板在显微镜下对酵母细胞进行计数 B．倒平板冷却后的培养皿和接种后的平板都要倒置在恒温培养箱中 C．制作大肠杆菌培养基时，一般需将培养基pH调至酸性 D．接种、分离后使用过的器皿须先洗涤再彻底灭菌 答案：B 解析：血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板适用于细菌的数量测定等，酵母细胞属于真菌类，故用血细胞计数板，A错误；倒平板冷却后的培养皿和接种微生物的平板都要倒置在恒温培养箱中，既能防止培养皿皿盖上的水珠落在培养基表面造成污染，又能防止培养基中的水分过快蒸发，B正确；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，C错误；接种、分离后，使用过的器皿须先经彻底灭菌后再洗涤，以免造成环境污染，D错误。 学生用书第24页 2.(2024·湖南永州高二开学考试)工业生产上，有时需要对菌种进行筛选纯化，平板划线法和稀释涂布平板法是常用的获取纯培养物的方法。下列叙述错误的是(　　) A．传统发酵以天然菌种为主，菌种差异、杂菌不明等往往造成发酵食物品质不一 B．筛选酵母菌菌种时，可在培养基中加入一定量的青霉素来抑制真菌的生长 C．稀释涂布平板法计算获得的菌落数往往少于实际活菌数，采用细菌计数板统计时则相反 D．平板划线法纯化菌种时，对接种环灼烧了5次，说明操作员在培养基上进行了4次划线 答案：B 解析：传统发酵以天然菌种为主，菌种差异、杂菌不明等原因往往造成传统发酵食物品质不一，因为传统发酵过程中使用的菌种主要是天然菌种，这些菌种的差异以及发酵过程中可能存在的杂菌，导致发酵产品的品质存在一定的不稳定性，A正确。青霉素是一种抗生素，可以抑制细菌的生长，因此在筛选酵母菌菌种时，加入青霉素可以防止细菌的干扰，B错误。稀释涂布平板法计算获得的菌落数往往少于实际活菌数，原因是当两个或多个细胞连在一起时，观察到的只是一个菌落；而细菌计数板统计法获得的菌落数可能会大于实际活菌数，原因是细菌计数板统计出的菌体数目是活菌和死菌的数目之和，C正确。灼烧接种环的目的是杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，确保下一次划线时接种环上的菌种来自本次划线，并且，最开始划线前也需要对接种环进行灼烧，灼烧5次，实际划线次数只有4次，D正确。 3．(2024·江苏南京高二期末)下列有关微生物培养与应用技术的叙述，正确的是(　　) A．培养微生物所用的培养基中都必须含有水、无机盐、碳源和氮源等基本营养成分 B．若要检测饮水机的直饮水中大肠杆菌是否超标，待检测水样需要经过灭菌后再检测 C．采用稀释涂布平板法接种后，不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单菌落 D．分离土壤中分解尿素菌纯培养后，利用含酚红的尿素培养基可作进一步鉴定 答案：D 解析：自养型微生物不需要培养基提供碳源，A错误。若要检测饮水机的直饮水中大肠杆菌是否超标，待检测水样需要直接进行检测，待检测水样不能进行灭菌处理，B错误。采用稀释涂布平板法接种后，稀释到合适的浓度的菌液才可在培养基表面形成单菌落，C错误。分解尿素的细菌能合成脲酶，催化尿素分解产生的NH3可以作为细菌生长的氮源。如果培养基中加入了酚红指示剂，尿素分解的产物NH3会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，因此，可用酚红指示剂对分解尿素的微生物进行鉴定，D正确。 4．(2024·重庆沙坪坝高二期末)研究人员从青藏高原班戈桥地区的土壤中分离到一株能利用原油为碳源生长的细菌(BGQ-6)，该菌对石油的总降解率为74.14%，且对直链烷烃、支链烷烃、环烷烃和芳香烃等60种烃类有较高的降解率。下列说法错误的是(　　) A．利用添加石油的普通培养基能从被石油污染的土壤中筛选BGQ-6 B．可采用稀释涂布平板法对BGQ-6进行计数 C．一般选择菌落数为30～300的平板进行BGQ-6菌落计数 D．由单一的BGQ-6繁殖所获得的群体称为BGQ-6纯培养物 答案：A 解析：利用以石油为唯一碳源的选择培养基能从被石油污染的土壤中筛选BGQ-6，A错误；对微生物进行计数时，应该选择的接种方法是稀释涂布平板法，B正确；为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，C正确；由单一的BGQ-6繁殖所获得的群体称为BGQ-6纯培养物，D正确。 5．(2024·江苏南京高二期末)某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述正确的是(多选)(　　) A．配制好培养基X后先分装到培养皿，再进行湿热灭菌，防止倒平板时产生杂菌污染 B．固体培养基X对菜品中的细菌没有选择性 C．接种过程需在酒精灯火焰旁进行，接种后固体培养基X需立即倒置培养 D．根据培养基表面形成的菌落的形态和颜色等，可以初步判断菌落的类型 答案：BD 解析：培养基配制过程为称量→溶解→调pH值→熔化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→倒平板，因此配制好培养基X后先进行湿热灭菌，然后进行倒平板分装到培养皿中，A错误；本实验是研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，没有具体指哪一种细菌，且固体培养基X没有做任何处理，所以对菜品中的细菌没有选择性，B正确；接种过程需在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染，接种后固体培养基X需凝固后，再进行倒置培养，立即倒置容易使培养皿内的培养基倒到其他地方，影响实验结果，C错误；在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，注意不能准确判断，D正确。 6．(创新情境)分解尿素的微生物广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的微生物进行分离与计数。请回答下列问题： (1)分解尿素的微生物能产生________酶；配制培养基时应以__________作为唯一氮源。 (2)该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是______________________；然后将1 mL样液稀释10 000倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别涂布0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为39、42和45。据此可得出每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为________________个。 (3)微生物的培养与观察 ①培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养________和培养________。 ②观察：每隔24 h统计一次________数目，最后选取菌落数目________时的记录作为结果。 答案：(1)脲　尿素　(2)检测平板灭菌是否合格　4.2×106　(3)①温度　时间　②菌落　稳定 解析：(1)分解尿素的微生物能产生脲酶；配制培养基时应以尿素作为唯一氮源。(2)在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，其目的是检测平板灭菌是否合格。每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数＝某一稀释度下培养基上生长的平均菌落数÷涂布平板时所用的稀释液的体积×稀释倍数＝(39＋42＋45)÷3÷0.1×10 000＝4.2×106 个。(3)不同种类的微生物，在培养时往往需要不同的培养温度和培养时间，在培养过程中，可以每隔24 h统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。 学科网（北京）股份有限公司 $$