备课素材：EdU检测法 和BrdU检测法的原理和优缺点-2024-2025学年高二上学期生物人教版（2019）选择性必修1

EdU检测法‌和BrdU检测法的原理和优缺点

 

先看一道试题：

变胖过程中，胰岛B细胞会增加。增加的B细胞可能源于自身分裂(途径I),也可能来自胰岛中干细胞的增殖、分化(途径Ⅱ)。科学家采用胸腺嘧啶类似物标记的方法，研究了L基因缺失导致肥胖的模型小鼠IK中新增B细胞的来源。

(1)EdU和BrdU都是胸腺嘧啶类似物，能很快进入细胞并掺入正在复制的DNA中，掺入DNA的EdU和BrdU均能与_______互补配对，并可以被分别检测。未掺入的EdU和BrdU短时间内即被降解。

(2)将处于细胞周期不同阶段的细胞混合培养于多孔培养板中，各孔同时加入EdU,随后每隔一定时间向一组培养孔加入BrdU,再培养十几分钟后收集该组孔内全部细胞，检测双标记细胞占EdU标记细胞的百分比(如图)。图中反映DNA复制所需时长的是从____点到______ 点。

(3)为研究变胖过程中B细胞的增殖，需使用一批同时变胖的小鼠。为此，本实验使用诱导型基因敲除小鼠，即饲喂诱导物后小鼠的

L基因才会被敲除，形成小鼠IK。科学家利用以下实验材料制备小鼠IK:①纯合小鼠Lx:小鼠L基因两侧已插入特异DNA序列(x),但L的功能正常；②Ce酶基因：源自噬菌体，其编码的酶进入细胞核后作用于x,导致两个x间的DNA片段丢失；③Er基因：编码的Er蛋白位于细胞质，与Er蛋白相连的物质的定位由Er蛋白决定；④口服药T:小分子化合物，可诱导Er蛋白进入细胞核。请完善制备小鼠IK的技术路线：______ →连接到表达载体→转入小鼠Lx→筛选目标小鼠→______ →获得小鼠IK。

 (4)各种细胞DNA复制所需时间基本相同，但途径I的细胞周期时长(t₁)是途径Ⅱ细胞周期时长(t₂)的三倍以上。据此，科学家先用EdU饲喂小鼠IK,t时间后换用BrdU饲喂，再过t₂时间后检测B细胞被标记的情况。研究表明，变胖过程中增加的B细胞大多数来源于自身分裂，与之相应的检测结果应是___。

 答案 ：(1)腺嘌呤 (2) ①.Q ②.R (3) ①.将Ce酶基因和Er基因连接 ②.饲喂口服药T (4)大多数B细胞没有被BrdU标记

解析：该实验的实验目的是:探究工基因缺失导致肥胖的模型小鼠水中新增B细胞的来源。采用的方法是同位素标记法。

(1)EdU 和 BrdU 都是胸腺嘧啶类似物，可代替胸腺嘧啶参与DNA的合成以其为原料能很快进入细胞并掺入正在复制的DNA中，掺入DNA的EdU和BrdU 均能与A(腺嘌呤)互补配对，并可以被分别检测，而未入的EdU和BrdU 则在短时间内被降解。

(2)分析题干信息可知，图中反映 DNA 复制所需时长应是从EdU