2025届高三生物一轮复习导学案微生物的培养技术及应用

第10部分第2节《微生物的培养技术及应用》-2025届高考一轮复习-基础摸查+基础夯实+优化提升 基础摸查 【真题导入】 1.为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是(　　) A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整 B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落 C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的 D．菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色 2．人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是(　　) A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌 B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样 C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布 D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断 3．解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是(　　) A．甲菌属于解脂菌 B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 4．产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题： (1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是________(填编号)。 编号 ① ② ③ ④ 物品 培养基 接种环 培养皿 涂布器 灭菌方法 高压蒸汽 火焰灼烧 干热 臭氧 (2)称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同 的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌________个。 (3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行____________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。 (4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株________进行后续相关研究，理由是___________。 【考点陈列】 考点一　微生物的培养技术及应用 1．培养基的配制 (1)培养基的概念、用途和类型 ①概念：人们按照微生物对________________的不同需求，配制出的供其________________的营养基质。 ②用途：用以______________微生物或积累其________。 ③种类：按物理性质分 (2)培养基的配方 ①主要营养物质：水、______、氮源、______。 ②其他条件：pH、________________和氧气。如下表： 微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物 特殊需求 添加____________ pH调至__________ pH调至________ 2．微生物的纯培养 (1)概念辨析 (2)酵母菌纯培养的操作步骤 (3)平板划线法操作步骤 3.无菌技术 (1)目的：获得________的微生物培养物。 (2)关键：防止________污染。 (3)消毒与灭菌的比较 项目 消毒 灭菌 作用强度 较为________的理化因素 ________的理化因素 作用程度 杀死物体表面或内部________微生物 杀死物体内外的________微生物 芽孢和孢子 一般不能杀灭 能杀灭 适用对象 实验操作的空间、操作者衣着和双手 微生物培养器皿、接种用具和培养基等 常用方法 __________消毒法、_________消毒法等 ____灭菌法、___灭菌法、____灭菌法等 (4)注意事项 ①实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与___________接触。 ②为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在__________________附近进行。 拓展： 下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题： (1)用图中字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：___________。 (2)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ ___________________________________________________________(3)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ ___________________________________________________________(4)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？ ___________________________________________________________ 考点二　微生物的选择培养和计数 1．区分选择培养基与鉴别培养基 种类 特点 用途 举例 选择培养基 允许_____________________，同时___________________________ 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品，进而产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌 注意：常见选择培养基举例： (1)缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。 (2)含青霉素的培养基可淘汰细菌，筛选出真菌。 (3)无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。 2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作 (1)实验原理 (2)实验流程 (3)实验结果分析与评价 3．微生物的选择培养和数量测定 (1)稀释涂布平板法步骤 ①系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。 操作步骤： ②涂布平板操作步骤 (2)微生物的数量测定方法 ①显微镜直接计数法 ②间接计数法——活菌计数法(即稀释涂布平板法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 根据图示问答以下问题： a．为了保证结果准确，一般选择菌落数在________的平板进行计数。 b．为什么用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低？ ___________________________________________________________c．某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)，那么稀释倍数为106的试管中细菌的浓度是________个/mL，稀释倍数为10的锥形瓶中细菌的浓度为_______个/mL，所以每克样品中的细菌数是_______个。 拓展： 甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 (1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？ ___________________________________________________________(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？ ___________________________________________________________(3)在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3个平板？ ___________________________________________________________(4)为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？ ___________________________________________________________ 【考点专攻】 考点一　微生物的培养技术及应用 1．下列操作不能达到灭菌目的的是(　　) A．使用高压锅处理器皿 B．在火焰上灼烧接种环 C．用干热灭菌箱处理金属用具 D．防疫期间用石炭酸喷洒教室 2．在实验室培养微生物，需要人为地为微生物提供适宜的营养和环境条件。下列关于培养基配制的说法正确的是(　　) A．培养基中需要碳源、氮源、水和无机盐齐全 B．培养基中必须添加琼脂 C．培养基制备中均需调节pH至酸性 D．无论哪种培养基均需要灭菌 3．下图为微生物的实验室培养的有关操作，下列相关叙述错误的是(　　) A．步骤①中，需将接种工具灼烧至变红，以杀灭杂菌 B．步骤②中，将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远 C．图中接种方法的目的是使菌种逐渐稀释，经培养后获得单个菌落 D．接种后应将培养皿倒置培养，培养后可以根据结果进行微生物计数 归纳： (1)无菌技术的三个主要注意点 ①实验前应对操作空间、操作人员进行消毒，对所用器具和培养基进行灭菌。 ②实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作。 ③避免已杀菌处理的材料再次污染。 (2)倒平板时的注意事项 ①琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固。倒平板时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不及时操作，琼脂会凝固。 ②可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 考点二　微生物的选择培养和计数 4．下列有关培养基的叙述正确的是(　　) A．筛选、培养硝化细菌的培养基中不能加入氮源 B．固体培养基中的琼脂能为微生物生长提供碳源 C．在进行微生物的富集培养时常选用液体培养基 D．培养基中加入刚果红可用于尿素分解菌的鉴定 5．稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是(　　) A．固体培养基灭菌后，应冷却至50 ℃左右时倒平板 B．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长 C．稀释涂布平板分离到的单菌落需进一步划线纯化 D．稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数 归纳： 两种纯化方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 分离结果 关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 ①一系列的梯度稀释；②涂布平板操作 接种用具 接种环 涂布器 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征 缺点 不能计数 操作复杂，需要涂布多个平板 共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征 基础夯实 1．判断关于培养基的叙述 (1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质(　　) (2)培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或弱碱性(　　) (3)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(　　) 2．判断关于无菌技术的叙述 (1)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(　　) (2)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(　　) (3)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和灭菌(　　) 3．判断关于微生物的培养与计数的叙述 (1)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数(　　) (2)统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计(　　) (3)利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数(　　) 4．填空默写 (1)(选择性必修3 P10)培养基的化学成分包括_____________等。 (2)选择性必修3 P10)获得纯净的微生物培养物的关键是________________，无菌技术除了用来________________外，还能________________________________。 (3)(选择性必修3 P12)菌落是指_________________。 采用________法和________法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 (4)(选择性必修3 P16)选择培养基是指__________________。 (5)(选择性必修3 P12)平板冷凝后，要将平板倒置的原因是________。 (6)(选择性必修3 P13)平板划线操作的第一步灼烧接种环是为了____________；每次划线前灼烧接种环是为了_____________，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环，能______________________。 (7)(选择性必修3 P13)在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是___________________________________。 (8)(选择性必修3 P13)在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是_____________________。 (9)(选择性必修3 P18)当______________，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。 (10)(选择性必修3 P19)检测培养物中是否有杂菌污染的方法是______________。判断选择培养基是否起到筛选作用的方法是_________________________________________________。 优化提升 一、选择题 1．下图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是(　　) A．①步骤使用的培养基是已经灭菌的培养基 B．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 C．③到④的过程中，接种环共灼烧了5次 D．④步骤操作时，不能将第1区和第5区的划线相连 2．下列有关传统发酵技术和微生物培养技术中的操作，错误的是(　　) A．制作果酒时，挑选新鲜葡萄，去除枝梗后用清水反复冲洗再榨汁 B．平板划线时，每次划线前后都需将接种环放在酒精灯火焰上灼烧 C．制作泡菜时，加入蔬菜后注入煮沸冷却的盐水，使盐水没过全部菜料 D．为判断选择培养基是否起到了选择作用，设置接种普通培养基作对照 3．下列有关微生物培养的叙述，错误的是(　　) A．涂布接种时，需将涂布器蘸酒精后用酒精灯外焰灼烧，冷却后再使用 B．纯化培养酵母菌时，培养皿应倒置放入28 ℃左右的培养箱内中培养24～48 h C．计数时，可用稀释涂布平板法对需计数的微生物进行计数 D．观察菌落时，应将培养皿皿盖拿掉以利于看清菌落的形态特征 4．稀释涂布平板是常用的微生物培养方法，下列相关叙述正确的是(　　) A．灭菌锅中取出的培养基应趁烫时倒平板，如此可对培养皿灭菌 B．稀释涂布平板法不可用于微生物的分离，可用于微生物的计数 C．用此法估测的数值往往偏小，应以菌落数最多的平板计数为准 D．稀释涂布平板法分离到的单菌落需进一步纯化，可用平板划线法 5．为了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度，某研究小组进行了相关药敏实验，图1为部分实验器材。将含有相同浓度的抗生素Ⅰ～Ⅳ四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的平板上，实验结果如图2。下列相关叙述正确的是(　　) A．为获得长满测试菌的平板，需要使用图1中器材①②③ B．图2中 Ⅱ 形成的抑菌圈较小，可能是病原微生物对药物较敏感 C．图2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素Ⅳ作用下产生了突变株 D．不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果 6．培养微生物需要提供适宜的培养基。下列关于培养微生物的培养基的叙述，错误的是(　　) A．培养基为目标微生物提供适宜的生长环境 B．培养基的成分需根据微生物的代谢特点而定 C．培养基需满足各种微生物生长繁殖的需求 D．培养基通常需包含水、无机盐、碳源、氮源等营养物质 7．聚羟基脂肪酸酯(PHA)是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA菌种的流程图如下。下列说法正确的是(　　) A．步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上 B．扩大培养时，需要将接种后的培养基放入恒温箱中倒置培养，以防杂菌污染 C．步骤④所用到的培养基应加入琼脂，以便挑取单菌落获得纯化菌株 D．挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量 8．某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，具体操作流程如图所示。下列相关叙述不正确的是(　　) A．在酒精灯火焰附近称取土壤并将其倒入锥形瓶中 B．等比稀释时可用移液管或微量移液器进行操作 C．振荡的目的是为了增加尿素分解菌的浓度 D．由图示菌落计数结果可知，10克土样中的菌株数约为1.6×107个 9．某同学将1 mL土壤样液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58。下列叙述错误的是(　　) A．可得出土壤样液中活菌数大约为5.7×107个/L B．此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低 C．一般选择菌落数在30～300的平板进行计数 D．显微镜直接计数法统计的都是稀释液中活菌数 10．产脂肪酶细菌可用于含油废水的处理。科研人员采用射线照射从土壤中分离的菌株，反复筛选后获得产脂肪酶能力较高的菌株，具体流程如图。下列相关叙述正确的是(　　) A．步骤①取土壤样品灭菌后溶于无菌水中制成菌悬液 B．步骤②的固体平板是以脂肪作为唯一碳源的培养基 C．步骤②射线照射可引起细菌基因突变或染色体变异 D．步骤③透明圈越大的菌落，其脂肪酶活性一定越高 11．野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，a、b、c表示操作步骤，d、e为菌落。下列叙述不正确的是(　　) A．图中①②④为基本培养基，③为完全培养基 B．a操作的目的是提高突变率，增加突变株的数量 C．b的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面 D．经c过程原位影印及培养后，可从④中挑取d菌落进行纯化培养 12．下图为分离以尿素为氮源的微生物的实验结果，下列叙述正确的是(　　) A．图中采用平板划线法接种 B．图中①和②表示尿素培养基长出的菌落 C．图中③④培养基中菌落生长代谢时，会释放CO2 D．实验结果表明，自然界中能合成脲酶的微生物比例较高 13.下图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（　　） A.①步骤使用的培养基是已经调节过pH并灭菌的培养基 B.①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 C.③到④的过程中，接种环共灼烧了5次 D.④步骤操作时，不能将第1区和第5区的划线相连 14.马铃薯琼脂培养基常用于真菌的筛选，其配制过程如下：将马铃薯去皮切块，加水煮沸至其软烂，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量琼脂，用水定容后灭菌。下列相关叙述错误的是（　　） A.应在培养基中加入链霉素，以抑制细菌的生长 B.除碳源外，马铃薯浸出液还提供氮源和无机盐 C.氮源进入细胞后，可参与合成核苷酸等物质 D.加入碘液后，周围为蓝色的菌落一般能产生淀粉酶 15.平板涂布是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是（　　） A.固体培养基灭菌后，应冷却至50 ℃左右时倒平板 B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长 C.平板涂布分离到的单菌落需进一步划线纯化 D.平板涂布法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数 16.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。请据图分析，下列说法错误的是（　　） A.③号试管的稀释倍数为103 B.④号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能恰为⑤号试管的10倍 C.⑤号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109 D.将涂布器在酒精灯火焰上灼烧冷却后，再进行涂布 17.下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是 （　　） A.在配制步骤②③的培养基时，应先调pH再进行高压蒸汽灭菌 B.步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落 C.步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素 D.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力 18.有关培养基配制原则的表述正确的是（　　） A.任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水以及无机盐 B.碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素 C.有的培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求 D.营养物质的浓度越高越好 19.为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（　　） A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整 B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落 C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的 D.菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色 二、非选择题 20.牛奶是适合微生物生长的良好培养基。牛奶在饮用前都要用巴氏消毒法消毒，以杀死有害微生物。某小组为检测自制酸奶是否被杂菌污染，进行了如图所示操作。请回答下列问题。 图1 （1）牛奶用巴氏消毒法消毒的好处是___________________。 （2）图1所用培养基在灭菌过程中，需用到高压蒸汽灭菌锅。下面是关于高压蒸汽灭菌锅使用过程中的操作，正确的先后顺序是①②　　　　④⑧⑨。（有的步骤可重复操作） ①装入待灭菌物品　②加盖　③加热灭菌锅　 ④打开排气阀　⑤关闭排气阀　⑥切断电源　 ⑦压力表的压力降到零　⑧打开盖子　⑨取出灭菌物品 （3）取最终的牛奶稀释液0.1 mL在培养基上进行涂布，应选择的工具是图2中的　　　　。 图2 （4）图1所示方法为稀释涂布平板法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了5个培养皿，菌落数分别为12、65、63、64、196，则可以推测每毫升酸奶中所含细菌数为　　　　个，运用这种方法统计的结果往往较实际值　　　　（填“大”或“小”），如果培养基上出现　　　　的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。 （5）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，要进一步分离纯化乳酸菌，应采用图3中　　　　（填字母）所示的划线分离操作，其正确操作过程中，划线工具至少要灼烧　　　　次。 图3 21.鲸死亡后会沉入海底，俗称“鲸落”。“鲸落”后期会形成一个以厌氧菌和硫细菌等为主体的生态系统。厌氧菌以“鲸落”肌肉中的脂肪为食，同时产生一些硫化氢等硫化物，硫细菌将硫化物氧化成硫酸盐，并以该过程中释放的能量合成有机物。请回答相关问题： （1）培养微生物的培养基中一般都会含有水、无机盐、氮源和碳源，培养“鲸落”群落中厌氧菌的碳源必须是　　　　。要培养硫细菌，培养基中的成分需要特殊配制，主要体现在　　　　　　，这种培养基可以用来专一性培养硫细菌，所以称为　　　　培养基。 （2）在分离“鲸落”中的微生物时要制备固体培养基，在倒平板操作后，将平板倒置，这样做的目的是_______________。 （3）为了研究“鲸落”中含有微生物的情况，需将“鲸落”提取物加水稀释，然后将稀释水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，这种方法称为　　　　　　　　。下面所示的四种菌落分布情况中，不可能由该方法得到的是　　　　。 （4）若想得到“鲸落”中某目标菌种，可用平板划线法进行纯化。若下图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为　　　　。图甲中的③更易获得单菌落，判断依据是_________________________。 22.大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。下面是其培养基配方： 成分 蛋白胨 乳糖 磷酸二氢钾 琼脂 含量 10 g 10 g 2 g 20～30 g 成分 蒸馏水 2%的伊红水溶液 0.5%的美蓝水溶液 含量 1 000 mL 20 mL 13 mL 回答下列问题： （1）该培养基中，蛋白胨为大肠杆菌提供的主要营养有　　　　和维生素等。 （2）在接种大肠杆菌前，需先将灭菌后的空白培养基放在恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落生成，其目的是　　　　　　。 （3）为了检测严重污染的水体中大肠杆菌的数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为　　　　　　　　的菌落进行计数。该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是_________________________。 （4）将1 mL水样稀释1 000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_________________。 （5）除利用特定培养基选择鉴定某种细菌外，还可以依据　　　　　　　　对细菌进行初步的鉴定和分类。 23．菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。下图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题： (1)该营养琼脂培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、_________法灭菌等。然后将培养基放入47 ℃水浴锅保温，选择此温度的理由是_____________。 (2)实验过程中须将样品剪碎并使用均质器10 000 r·min－1处理1 min，其目的是____________。从水浴锅取出营养琼脂培养基倒平板适量，稍冷却后移液0.2 mL样品于培养皿进行涂布，涂布时可______________，使涂布更均匀。 (3)本实验用菌落计数的原理是基于_______________，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏________。具体培养结果如下表。选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释浓度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数×稀释倍数报告。当有两个浓度菌落值在30～300之间，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数，且菌落数大于100取两位有效数字，两位之后的数值四舍五入；若比值大于2，则报告稀释度较低(稀释次数越多，稀释度越高)的培养皿菌落数。请填写例次3中“？”处的菌落总数为________。 例次 不同稀释度平均菌落数 两稀释度菌落数之比 菌落总数/ [CFU/mL(g)] 10－1 10－2 10－3 1 1 365 164 20 — 16 400 2 2 760 295 46 1.6 38 000 3 2 890 271 60 2.2 ？ (4)利用鲜奶进行工业生产酸奶时，不能使用________污染的鲜奶为原料，否则会使乳酸菌生长受到限制；利用________法可以除去鲜奶中的白细胞、杂菌和其他肉眼可见的异物，取其上清液用于发酵制酸奶。 (5)密封良好的泡菜坛内有时会长一层白膜，这些白膜是____________(填“乳酸菌”或“酵母菌”)繁殖产生的。在泡菜腌制过程中坛、蔬菜等均未进行严格灭菌，而在发酵过程中一般不会出现其他杂菌大量繁殖，其原因是____________(填序号)。 ①发酵的原料中缺乏杂菌生长需要的各种营养物质 ②发酵过程的温度不适合杂菌的生长 ③乳酸菌产生较多乳酸，许多好氧菌被杀死 ④在自然界中乳酸菌占优势 24．化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。 碳源 细胞干重(g/L) S产量(g/L) 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.01 0.00 制糖废液 2.30 0.18 回答下列问题： (1)通常在实验室培养微生物时，需要对所用的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有________________________________(答出2点即可)。 (2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是______________；用菌株C生产S的最适碳源是______________。菌株C的生长除需要碳源外，还需要______________________(答出2点即可)等营养物质。 (3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是________________________。 (4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：_______________。 (5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，其意义是____________。 参考答案： 基础摸查 【真题导入】 1．B 2．C　 3．B 4．(1)④　 (2)等比稀释　4.6×105(或460 000)　 (3)诱变　脂肪　较大　 (4)B　该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好 【考点陈列】 考点一　 归纳 1．(1)①营养物质　生长繁殖　②培养、分离、鉴定、保存　代谢物　③液体　凝固剂　固体　(2)①碳源　无机盐　②特殊营养物质　维生素　酸性　中性或弱碱性　无氧 2．(1)固体培养基　一定形态结构　(2)15～20 g琼脂　湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法　干热灭菌　酒精灯火焰　灼烧灭菌　平板划线法　恒温培养箱　28 3．(1)纯净　(2)杂菌　(3)温和　强烈　一部分　所有　煮沸　巴氏　湿热　干热　灼烧　(4)①周围的物品　②酒精灯火焰 拓展 (1)d→b→f→a→e→c→h→g (2)需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。 (3)划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 (4)培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。 考点二　 归纳 1．特定种类的微生物生长　抑制或阻止其他种类微生物生长 2．(1)脲酶　尿素　(2)3～8　30～300　稀释涂布平板　30～37　菌落数目稳定　(3)对照的培养皿中无菌落生长　对照的培养皿中有菌落生长　30～300 3．(1)②培养基　酒精　冷却　菌液　(2)②a.30～300 b．因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 c．2.34×103　2.34×108　2.34×109 拓展 (1)不可靠。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。 (2)不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。 (3)作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。 (4)尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落特征。 【考点专攻】 考点一 1．D 2．D　 3．D　 考点二 4．C 5．B　 基础夯实 1．(1)√　(2)×　(3)×　 2．(1)√　(2)×　(3)×　 3．(1)×　(2)×　(3)× 4．(1)水、无机盐、碳源、氮源　 (2)防止杂菌污染　防止实验室的培养物被其他外来微生物污染　有效避免操作者自身被微生物感染　 (3)分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体　平板划线　稀释涂布平板　 (4)在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基　 (5)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以减少培养基中的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染　 (6)避免接种环上可能存在的微生物污染培养物　杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端　及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者　 (7)以免接种环温度太高，杀死菌种　 (8)划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落　 (9)两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落　 (10)同时培养灭菌后的未接种的培养基，观察是否有菌落产生　配制牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，观察选择培养基上的菌落数是否远少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目 优化提升 1．C 2．A 3．D 4．D 5．D　 6．C　 7．D　 8．C 9．D　 10．B　 11．A　 12．C　 13.C 14.D 15.B 16.A 17.C 18.C 19.B 20.（1）不破坏牛奶的营养成分　 （2）③④⑤⑥⑦　 （3）B　 （4）6.4×107　小　（形状、大小、颜色）不同　 （5）B　5 21.（1）含碳有机物（或脂肪）　碳源必须是含碳无机物（或碳酸盐），同时加入硫化物　选择　 （2）防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染；防止培养基中水分过快挥发　 （3）稀释涂布平板法　D　 （4）丙　每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，最后一次划线结束时更容易获得单菌落 22.（1）氮源　 （2）检测培养基制备是否合格（或灭菌是否彻底）　 （3）黑色　当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌　 （4）3.8×108　 （5）菌落的形状、大小等菌落特征 23．(1)高压蒸汽灭菌(湿热灭菌)　保证培养基处于溶化状态(在凝固之前接种且不致将培养物烫死)　 (2)尽量使样品中的微生物细胞分散　转动培养皿　 (3)一个菌落代表一个活菌　小　27 100　 (4)抗生素　离心　 (5)酵母菌　③ 24．(1)干热灭菌、湿热灭菌(或高压蒸汽灭菌)　 (2)葡萄糖　制糖废液　氮源、无机盐　 (3)缺少淀粉酶　 (4)设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度　 (5)减少污染、节省原料、降低生产成本 学科网（北京）股份有限公司 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