64 选择性必修3 第九单元 第48讲 微生物的培养技术及应用-【名师导航】2025年高考生物一轮总复习讲义（人教版）

课时分层作业(四十八) 1．D　[玻璃器皿如培养皿等需要保持干燥的实验用具可进行干热灭菌法进行灭菌，锥形瓶采用湿热灭菌法进行灭菌，A错误；培养基需要先调pH，再灭菌，B错误；培养动物细胞时需添加血清，为保持血清活性需要采用合适的灭菌方法，C错误；接种环和涂布器等接种工具可进行灼烧灭菌，D正确。] 2．B　[在实验前不能对菌悬液进行灭菌，A错误；甲和乙同学用的都是稀释涂布平板法，当两个或多个菌落长在一起时，只能观察到一个菌落，检测值可能比实际值偏小，B正确；制菌悬液时要用无菌水，C错误；两实验结果截然不同，可能是取样部位或取样时间不同，D错误。] 3．C　[热纤梭菌是一种嗜热厌氧细菌，牛粪堆的深层比表层氧气含量更低，温度更高，更适合热纤梭菌生存，因此从牛粪堆的深层取样比从表层取样更加合理，A正确；图示是筛选能高效降解纤维素的嗜热厌氧细菌，因此甲、丙都是以纤维素为唯一碳源的选择培养基，B正确；据平板乙的菌落分布均匀可知，是利用稀释涂布平板法接种的菌种，由于当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落，因此用该方法统计的菌体数量会比活菌的实际数量少，C错误；热纤梭菌可分泌一种多酶复合体将纤维素水解为可溶性糖，因此丙中纤维素的残留量可反映该菌降解纤维素的能力，D正确。] 4．D　[为排除杂菌的影响，应该用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，然后冷却到50 ℃左右倒平板，A正确；如题图，菌落分布均匀，是利用了稀释涂布平板法接种的结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养，B正确；长期使用抗生素A，在抗生素A的选择作用下，结核杆菌的抗药性基因频率可能会增加，C正确；据题图中平板上菌落的分布可知，与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B不能增强对结核杆菌的抑制作用，D错误。] 5．C　[干热灭菌法适合用于耐高温和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等，培养基用湿热灭菌法，如高压蒸汽灭菌，A错误；图示过程为以苹果皮为材料分离、纯化用于果醋制作的菌种，②中的纯培养物来自苹果皮上的野生型醋酸菌，B错误；据最后三个培养皿的菌落数为75、80、88可知，其平均数为81，可求出菌种浓度为81÷0.1×107＝8.1×109个/mL，故①扩大培养基中的菌种浓度约为8.1×109个/mL，C正确；分离计数的培养基需要用稀释涂布平板法且至少制备3个，平板划线法只能纯化不能计数，D错误。] 6．B　[富集培养基应以对羟基苯甲酸为唯一碳源，培养基要进行高压蒸汽灭菌，A错误；实验中取少量样品进行重复培养，其目的是使能降解对羟基苯甲酸的微生物比例增高，B正确；在图中1、2试管中都有微生物生长，说明通过富集培养分离获得的主要是分解对羟基苯甲酸的微生物，同时还有其他微生物，C错误；图示所采用的是稀释涂布平板法，使聚集在一起的细菌细胞分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便纯化菌种，得到纯培养物，D错误。] 7．D　[为实现无菌操作，制备富集培养基采用高压蒸汽灭菌法，冷却后再接入沉积物样品，A错误；平板划线法可分离菌种但不能用于计数，图示接种方法能够对微生物进行计数，属于稀释涂布平板法，B错误；分析图中曲线可知，在以纤维素为碳源的培养基中，细胞数量最多，可推知拟杆菌新菌株在以纤维素为碳源(纤维素的元素组成是C、H、O，不能作为氮源)时生长状况最好，C错误；深海冷泉中存在的某些微生物，只有利用冷泉中的特有物质才能生存，或者只能在深海冷泉的特定环境中才能存活，故在沉积物样品中分离获得的拟杆菌所分泌的酶可能具有耐低温、耐盐的特性，D正确。] 8．(1)a　e　B、E　(2)仅含蛋白质　直接观察有无透明圈　仅含淀粉　加入碘液染色，观察有无透明圈　仅含纤维素　加入刚果红溶液，观察有无透明圈 (3)能减少肠道中有害病原菌的数量，降低肠道疾病发生率，能够分泌多种酶，提高饲料利用率，具有良好的抗逆特性，便于在动物肠道中繁殖 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $$ 课时分层作业(四十八)　微生物的培养技术及应用 1．(2023·辽宁抚顺模考)在培养微生物时，确保无菌操作是非常重要的。下列说法正确的是(　　) A．锥形瓶和培养皿等实验用具可进行干热灭菌 B．培养基灭菌后调pH，确保微生物正常生长 C．培养动物细胞时需添加血清，为保持血清活性不需要灭菌 D．接种环和涂布器等可进行灼烧灭菌 2．(2023·湖北华中师大一附中模拟)某研究小组的两位同学为研究手机表面和马桶按钮上的微生物，分别取样并进行了微生物培养实验，其过程和结果如下图所示。下列相关说法正确的是(　　) A．为了防止杂菌污染，在实验前需要对培养皿、试管和菌悬液等进行灭菌 B．若甲同学还分别检测了两物体表面的微生物数量，则检测值可能比实际值偏小 C．图中的特殊处理是指将无菌棉插入蒸馏水中，多次换水并振荡 D．造成甲、乙实验结果不同的原因可能是培养基不同或接种方法不同 3．(2023·广东汕尾一模)热纤梭菌是一种能高效降解纤维素的嗜热厌氧细菌，可分泌一种多酶复合体将纤维素水解为可溶性糖，在农林废弃物的转化利用中具有应用价值。如图是筛选该菌的过程，下列相关叙述错误的是(　　) A．从牛粪堆的深层取样比从表层取样更加合理 B．甲、丙都是以纤维素为唯一碳源的选择培养基 C．用平板乙统计菌落数可准确反映该菌的真实数量 D．丙中纤维素的残留量可反映该菌降解纤维素的能力 4．(2023·山东聊城三模)研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A与B的培养基中(“＋”代表含抗生素，“＋”的多少代表抗生素浓度，“－”代表不含抗生素)，对两种抗生素药性分析。在37 ℃环境下培养24小时后，细菌生长情况如图。下列说法错误的是(　　) A．为排除杂菌的影响，倒平板前需对培养基采用高压蒸汽灭菌 B．该实验使用稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养 C．长期使用抗生素A可能会增加结核杆菌的抗药性基因频率 D．与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B可显著增强对结核杆菌的抑制作用 5．(2023·江苏盐城中学模拟预测)下图为以苹果皮为材料分离纯化用于果醋制作的菌种，已知所用培养基为“米曲汁乙醇碳酸钙培养基”——米曲汁1 000 mL、CaCO310 g、95%乙醇30 mL(灭菌后加入)，在该培养基上，醋酸菌菌落周围会形成透明圈。下列有关说法正确的是(　　) A．图中器具、培养基都可用干热灭菌法灭菌 B．②中的纯培养物来自苹果皮上的野生型酵母菌 C．①扩大培养基中的菌种浓度约为8.1×109个/mL D．分离、计数的培养基需要用平板划线法且至少制备3个 6．(2023·山东济南二模)科研人员采用富集培养的方法从土壤中分离出能降解对羟基苯甲酸的微生物，实验过程如图所示。下列说法正确的是(　　) A．富集培养基以对羟基苯甲酸为唯一碳源，不能进行高压蒸汽灭菌 B．取少量样品重复培养的目的是使能降解对羟基苯甲酸的微生物比例增高 C．在图中1、2试管中都有微生物生长，说明该富集培养得到了欲分离的微生物 D．富集培养后通过平板划线法得到纯培养物 7．(2023·广东广州联考模拟预测)我国科学家采集了某海域1 146米深海冷泉附近沉积物样品，利用富集培养基获得含拟杆菌的混合培养物，经纯培养后进一步研究了其生物学特性，结果如图所示。下列叙述正确的是(　　) A．制备富集培养基采用高压蒸汽灭菌法，灭菌后，应立刻接入沉积物样品 B．对拟杆菌的纯培养物采用平板划线法可获得上图的实验结果 C．据图分析，拟杆菌新菌株在以纤维素为氮源时生长状况最好 D．在沉积物样品中分离获得的拟杆菌所分泌的酶可能具有耐低温、耐盐的特性 8．(2023·北京昌平二模)暹罗芽孢杆菌有望作为饲料发酵剂和添加剂应用于畜禽生产，以实现绿色健康养殖。 (1)大肠杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌(厌氧菌)，能引起家禽和家畜的肠道疾病，常使用氨苄青霉素治疗。为检测暹罗芽孢杆菌代谢物的抑菌能力，实验过程如图1所示。 Ⅰ.请完善实验过程：①________；②________(填选项) a．37 ℃、200转/min、恒温培养箱 b．37 ℃、200转/min、厌氧培养箱 c．37 ℃、恒温培养箱 d．37 ℃、厌氧培养箱 e．上层清液 f．下层沉淀 Ⅱ.该抑菌实验还需要设计__________________________(填选项)作为对照。实验结果说明暹罗芽孢杆菌对三种病原菌有较好的抑菌活性，且不弱于氨苄青霉素。 A．等量无菌水 B．等量LB液体培养基 C．等量FTG液体培养基 D．等量含有氨苄青霉素的无菌水 E．等量含有氨苄青霉素的LB液体培养基 F．等量含有氨苄青霉素的FTG液体培养基 (2)研究者基于(1)的部分操作和检测方法，设计了如下表所示实验，发现暹罗芽孢杆菌具有较好的产酶能力。请完善下表中的实验设计。 检测酶的种类 培养基成分 检测指标 蛋白酶 ________＋2%琼脂 ________ 淀粉酶 ________＋2%琼脂 ________ 纤维素酶 ________＋2%琼脂 ________ (3)已知肠道中的胆盐能够抑制肠道细菌的生长。检测暹罗芽孢杆菌酸性耐受和胆盐耐受能力，实验结果如图2。 综合上述研究，阐明暹罗芽孢杆菌可以添加在畜禽生产的饲料中的理由是_____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 5 / 5 学科网（北京）股份有限公司 $$ 第48讲　微生物的培养技术及应用 　1．阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。　2．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。　3．举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。　4．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。　5．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 考点1　微生物的基本培养技术 一、培养基的配制 1．概念：人们按照微生物对__________的不同需求，配制出供其__________的营养基质。 2．营养组成 (1)一般都含有____、______、______和无机盐等。 (2)需要满足微生物生长对______、特殊营养物质以及______的需求。 微生物 对培养基的需求 乳酸杆菌 添加________ 霉菌 一般将培养基调至____性 细菌 一般将培养基调至____________性 厌氧微生物 提供______的条件 3．种类 (1)按物理性质分 (2)按用途分 1．(选择性必修3 P10“旁栏思考”)培养基中加入氮源的原因是______________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 二、无菌技术 1．概念：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 2．关键：______________。 3．目的：________________________。 4．消毒与灭菌的比较 比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的____________或生物等方法 杀死物体表面或内部一部分微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高温的液体 化学药物 消毒法 操作空间、操作者的衣物和手等 紫外线 消毒法 接种室、接种箱或超净工作台 灭菌 强烈的理化方法 杀死物 体内外 所有的 微生物， 包括芽 孢和孢 子　　 湿热灭 菌法 培养基、容器等 干热灭菌法 玻璃器皿、金属用具等 灼烧灭菌法 接种工具等 5．其他操作 (1)做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具与____________接触。 (2)为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并在____________附近进行。 2．(选择性必修3 P10“相关信息”)利用某些微生物可以净化污水、污泥，原因是___________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 6．酵母菌的纯培养 3．(选择性必修3 P12“探究·实践”)倒平板操作中，平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是_____________________________________________________ _____________________________________________________________________。 1．在培养细菌时，要将培养基调至中性或弱酸性。 (　　) 2．蛋白胨中含有糖、维生素和有机氮等营养物质。 (　　) 3．玻璃器皿、金属用具等可以采用干热灭菌法。 (　　) 4．微生物的纯培养步骤为配制培养基→接种→灭菌→分离和培养等。 (　　) 5．待灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 (　　) 6．酵母菌的纯培养的马铃薯葡萄糖培养基上的葡萄糖也可用蔗糖代替。 (　　) 扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢物棒曲霉素(Pat)是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处，取样分离的5个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。 研究人员测定了病斑直径为1、2、3 cm的苹果中①～⑤号部位的Pat含量，请推测最可能的结果。 _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 无菌技术 1．(2022·湖北选择性考试)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　　) A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 2．(2023·山东枣庄二模)微生物培养成功的关键是防止杂菌污染。下列操作过程遵循无菌操作规范的是(　　) A．用果酒制作果醋时，打开瓶盖，盖上一层纱布以利于醋酸菌繁殖 B．将培养基放入干热灭菌箱，然后加热至压力为100 kPa、温度为121 ℃ C．用灼烧冷却后的接种环取酵母菌纯培养物，连续划五个区后，再灼烧一次接种环 D．啤酒制作时，在糖浆中加入啤酒花蒸煮，以产生风味组分，终止酶的进一步作用 微生物的实验室培养 3．(2023·山东等级考)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　) A．不含氮源的平板不能用于微生物培养 B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 4．(2023·广东惠州一模)下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是(　　) A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌处理 B．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置 C．步骤②的目的是使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落 D．步骤③划线结束后在培养皿盖上做好标注 　平板划线操作中几次灼烧接种环的目的 项目 第一次划线前灼烧 每次划线前灼烧 划线结束后灼烧 目的 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种均来自上一次划线的末端 杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者 考点2　微生物的选择培养和计数 一、选择培养基 二、微生物的选择培养 1．土壤取样 铲取土样，将样品装入纸袋中。 2．等比稀释 将10 g土样加入盛有______ mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 3．涂布平板 4．培养观察 (1)待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入____________ ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。 (2)在涂布有合适浓度菌液的平板上可以观察到分离的________。 1．(选择性必修3 P18“探究·实践”)统计菌落种类和数目时要每隔24 h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定。若培养时间不足或培养时间太长，分别会导致的结果是______________________________________________________、 _____________________________________________________________________。 三、微生物的数量测定 1．稀释涂布平板法 (1)计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为______________的平板进行计数。 (3)计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为______________、适于计数的平板。在____________下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出________。 (4)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计结果一般用________表示。 2．显微镜直接计数法 (1)计数原理：利用特定的____________或______________，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 (2)优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。 2．(选择性必修3 P18“相关信息”)血细胞计数板常用于________的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数；细菌计数板常用于________的细菌等的计数。 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)选择培养基四种常见制备方法或实例 ①加入某些特定的物质(前提是培养基具备全部营养成分) ②改变培养基的营养成分 ③利用培养基“特定化学成分”分离 ④通过某些“特殊环境”分离 (2)两种纯化细菌的方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞 主要步骤 平板划线操作 系列稀释操作和涂布平板操作 接种工具 接种环 涂布器 平板示 意图 能否用 于计数 不能计数 可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板 共同点 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征 1．选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。 (　　) 2．脲酶催化尿素分解产生NH3。 (　　) 3．对细菌进行计数时，可以用平板划线法。 (　　) 4．筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源。 (　　) 5．刚果红与纤维素形成红色复合物，可以通过是否产生透明圈来分离纤维素分解菌。 (　　) 6．用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 (　　) 某小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容： 在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，该实验的自变量为______________。若要排除缓冲液可能具有的降解作用，在C处滴加____________，三处滴加量相同，一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，则说明___________________ _____；若A处的透明圈直径大于B处，说明________________________；若A处透明圈直径小于B处，说明____________________________；若A与B处透明圈直径大小相等，说明_______________________________________________ _____________________________________________________________________。 微生物的选择培养 1．(2023·广东选择性考试)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(　　) A．a点时取样、尿素氮源培养基 B．b点时取样、角蛋白氮源培养基 C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D．c点时取样、角蛋白氮源培养基 微生物的分离和计数 2．(2024·广东校考模拟预测)酿酒酵母菌种的性能是决定果酒品质的重要因素。如图表示从土壤中筛选酿酒酵母的过程。下列叙述正确的是(　　) A．图示接种方法为稀释涂布平板法，据结果推测1 g土壤中酵母菌数最多为1.6×106 B．分离、纯化酵母菌时，还可采用平板划线法且该方法也需要进行③步骤操作 C．获得酿酒酵母纯培养物的关键是防止杂菌污染，故应对土壤、培养基及用具进行灭菌 D．进行步骤⑤时，应用液体培养基培养④中的酵母菌，并检测酵母菌的数量和酒精含量 1．核心概念 (1)(选择性必修3 P9)培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)(选择性必修3 P10)消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 (3)(选择性必修3 P10)灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 (4)(选择性必修3 P12)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 (5)(选择性必修3 P16)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 2．结论语句 (1)(选择性必修3 P16)土壤中的某些细菌能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。 (2)(选择性必修3 P18)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。 (3)(选择性必修3 P18)在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 1．(2023·浙江1月选考)某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是(　　) A．培养基pH需偏碱性 B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C．需在无氧条件下培养 D．分离得到的微生物均为乳酸菌 2．(2022·海南等级考)为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展相关实验。下列有关叙述错误的是(　　) A．采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本 B．培养细菌时，可选用牛肉膏蛋白胨固体培养基 C．土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落 D．鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法 3．(2021·北京等级考)人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是(　　) A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌 B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样 C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布 D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断 4．(2021·山东等级考)含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是(　　) A．乙菌的运动能力比甲菌强 B．为不影响菌的运动需选用液体培养基 C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量 D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染 5．(2022·全国甲卷)某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。 实验所用的培养基成分如下。 培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。 培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。 操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。 回答下列问题。 (1)实验所用培养基中作为碳源的成分是________。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成_______________________ (答出两种即可)等生物大分子。 (2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是________。 (3)为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示。 菌株 透明圈大小 平板Ⅰ 平板Ⅱ A ＋＋＋ ＋＋ B ＋＋ － (“＋”表示有透明圈，“＋”越多表示透明圈越大，“－”表示无透明圈)，推测该同学的实验思路是__________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________。 (4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是________，理由是_________________________________________ _____________________________________________________________________。 【研读教材】 自主诊断 考点1　一、1．营养物质　生长繁殖　2．(1)水　碳源　氮源　(2)pH　O2　维生素　酸　中性或弱碱　无氧 二、2．防止杂菌污染　3．获得纯净的微生物培养物　4．物理、化学　5．(1)周围的物品　(2)酒精灯火焰　6．高压蒸汽灭菌　干热灭菌　平板划线法　倒置　未接种　28 考点2　一、抑制或阻止　NH3　尿素 二、2．90　3．0．1　酒精　冷却　4．(1)30～37　(2)单菌落 三、1．(1)菌落数　(2)30～300　(3)30～300　同一稀释度　平均值　(4)菌落数　2．(1)细菌计数板　血细胞计数板 四、脲酶　尿素　中性　菌落数目稳定时 1 / 15 学科网（北京）股份有限公司 第48讲　微生物的培养技术及应用 考点1 研读教材·夯实必备知识 教材隐性知识 1．提示：培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的 2．提示：有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解 3．提示：防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上(污染培养基和破坏菌落)，防止培养基水分过快蒸发 澄清概念 1．×　提示：在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性。 2．√　3．√　 4．×　提示：微生物的纯培养步骤为配制培养基→灭菌→接种→分离和培养等。 5．√　6．√ 思考探究·达成学科素养 提示：病斑越大，相同部位的Pat含量越高；相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低 考向演练·提升关键能力 1．D　2．D　3．D　4．C　 考点2 研读教材·夯实必备知识 教材隐性知识 1．提示：遗漏菌落的种类和数目　菌落粘连影响计数、培养基表面干燥脱水、微生物衰败，菌落特征不易观察 2．提示：相对较大　相对较小 澄清概念 1．×　提示：选择培养基可以筛选分离出某种微生物。 2．√　 3．×　提示：对细菌计数可以采用稀释涂布平板法或显微镜直接计数法。 4．√　5．√　6．√ 思考探究·达成学科素养 提示：酶的种类　缓冲液　缓冲液不能降解W　酶E降解W的能力大于天然酶　酶E降解W的能力小于天然酶　酶E降解W的能力与天然酶相当 考向演练·提升关键能力 1．D　2．D　 真题感悟·明确考向 1．C　2．C　3．C　4．B　 5．(1)石油　DNA、RNA、蛋白质　(2)N0·2n (3)在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜的条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力　(4)A菌株　A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长 $$