达标测试卷(13) 生物技术与工程(二)-【高考总复习】2025年高考生物达标测试卷

达标测试卷(十三)　生物技术与工程(二) (本试卷满分100分) 一、选择题(本题共15小题，每小题2分，共30分，每小题只有一个选项符合题目要求) 1.(2024·杭州模拟)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的描述正确的是(　　) A.倒平板后无需将培养基进行高压蒸汽灭菌 B.将倒好培养基的培养皿轻放在桌上，不能晃动 C.等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置 D.等培养基冷却至40 ℃ 左右时，方可进行倒平板 2.(2023·辽宁模拟)为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中进行细胞悬浮培养。多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。下列相关叙述错误的是(　　) A.植物的次生代谢物通常含量很低，从植物组织中提取会大量消耗植物资源 B.诱导外植体脱分化获得愈伤组织的过程通常要使用生长素和细胞分裂素 C.经生长素诱导会使细胞中染色体数目加倍，进而获得高产的多倍体细胞 D.若在避光条件下培养植物细胞，需要在培养基中添加葡萄糖或蔗糖等能源物质 3.(2023·青岛模拟)细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫等的重要手段，如图A、B表示两种动物细胞。下列相关说法错误的是(　　) A.图示过程与植物原生质体融合的基本原理相同 B.需要将仙台病毒用紫外线等灭活使其失去感染能力 C.图中C细胞进行的细胞分裂方式为有丝分裂 D.将A、B细胞等量混合诱导得到的融合细胞即为杂交细胞 4.纤维素酶广泛应用于医药、食品发酵、造纸、废水处理等领域。研究人员利用蛋白质工程将细菌纤维素酶的第137、179、194位相应氨基酸替换为赖氨酸后，纤维素酶热稳定性得到了提高。下列有关该技术的说法，错误的是(　　) A.经改造后的纤维素酶热稳定性提高，这一性状可遗传 B.对纤维素酶的改造是通过直接改造mRNA实现的 C.改造纤维素酶也需要构建基因表达载体 D.改造后的纤维素酶和原纤维素酶不是同一种酶 5.(2023·烟台调研)利用卷心菜发酵制作泡菜过程中乳酸菌、酵母菌的细胞数量和pH的变化如图所示。下列叙述不正确的是(　　) A.酵母菌和乳酸菌均有由核膜包被的细胞核 B.发酵初期乳酸菌建立了明显的菌种优势 C.前6天pH下降主要由乳酸菌代谢引起 D.发酵中期酵母菌通过无氧呼吸进行增殖 6.(2024·菏泽一模)聚羟基脂肪酸酯(PHA)是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA菌种的流程图如下。下列叙述正确的是(　　) A.步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上 B.步骤③所用的培养基中营养物质浓度越高，对嗜盐细菌的生长越有利 C.步骤④所用到的培养基应加入琼脂，以便挑取单菌落获得纯化菌株 D.挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量 7.(2023·海口一模)人类利用微生物发酵制作果酒、果醋的历史源远流长。无论是果酒还是果醋，都具有一定的保健养生功效。如图为制作果酒、果醋的发酵装置，下列叙述正确的是(　　) A.进行果酒发酵时，打开开关2并不断转动搅拌器，可提高酒精产量 B.进行果醋发酵前，不需要检查整个装置的气密性，但应该关闭开关1 C.管口3处取样，可用酸性重铬酸钾溶液检测果酒发酵过程是否产生CO2 D.若要检测果醋发酵是否成功，可以检测发酵前后pH、菌种数量的变化 8.(2023·成都摸底)用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，往往要设置对照组。下列叙述错误的是(　　) A.对照组培养基的各种成分和用量应该单独配置 B.将对照组的平板倒置后放在恒温箱中进行培养 C.设置对照组可以排除实验组中无关变量的影响 D.设置空白对照组可以验证培养基灭菌是否合格 9.(2023·广东六校高三联考)科学家利用逆转录病毒将Oct4等4个关键基因导入已分化的体细胞中并表达，可使这个细胞成为类似干细胞的诱导多能干细胞(iPS细胞)。下图为该技术在人体细胞中的实验示意图。下列说法正确的是(　　) A.将肌肉细胞诱导成iPS细胞的过程发生了基因重组，且两种细胞的基因有所差别 B.将上述转录因子导入肌肉细胞中所需的工具酶有限制酶、DNA连接酶和运载体 C.实验中逆转录病毒作为转录因子的载体，必须通过显微注射法导入肌肉细胞中 D.可以利用镰状细胞贫血患者自身体细胞培养的iPS细胞治疗自身该疾病 10.在体细胞克隆猴培育过程中，为调节相关基因的表达，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂(TSA)处理，使胚胎的发育率和妊娠率提高，具体培育流程如图所示。下列说法错误的是(　　) A.去核的实质是去除卵母细胞中的纺锤体—染色体复合物 B.胚胎移植前应对代孕母猴进行同期发情处理 C.将组蛋白去甲基化和去(脱)乙酰化，有利于重构胚的分裂和发育 D.形成重构胚后可加入化学药物将其激活，待发育至桑葚胚或囊胚再进行胚胎移植 11.(2023·唐山二模)苏云金杆菌是杀灭玉米螟的重要生物，灭蚊球孢菌具有杀灭蚊子的效能，某人将这两种菌的原生质体融合获得既能杀蚊又能杀螟的新菌株，过程见下图。微生物原生质体的获得等过程和植物的类似。下列叙述正确的是(　　) A.①试管中加入PEG的目的是诱导A、B原生质体融合及细胞壁再生 B.图中过程与植物体细胞杂交过程相比，诱导融合的方法、所依据的原理均完全相同 C.离心洗涤后向培养液中加入的酶可能是溶菌酶，目的是溶解细菌的细胞壁以获得原生质体 D.图中的甲实验和乙实验是指灭蚊实验和杀灭玉米螟实验，获得的融合株染色体数目加倍 12.(2023·辽宁高三一轮联考)TALEN是一种靶向基因操作技术，该技术利用了TAL靶向识别单元对靶向基因的识别作用和Fokl蛋白对靶向基因的切割作用，实现了对特定靶向基因的敲除。TAL靶向识别单元为间隔32个氨基酸的双连氨基酸(即两个相连的氨基酸)序列。不同的双连氨基酸分别与靶向基因中的A、T、C、G有恒定的对应关系，根据靶向基因的碱基序列可以设计出双连氨基酸序列。下列说法错误的是(　　) A.该技术应该先推测出信使RNA序列，再推测出目的基因的核苷酸序列 B.在构建的基因表达载体中，启动子应位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位 C.TALEN是一种靶向基因操作技术，其中Fokl蛋白实质上是一种限制酶 D.双连氨基酸能够与含氮碱基A、T、C、G之间发生碱基互补配对 13.(2023·北京十五中高三月考)戊型肝炎病毒是一种RNA病毒，ORF2基因编码的结构蛋白(pORF2)位于病毒表面，构成病毒的衣壳。我国科研人员利用基因工程技术，在大肠杆菌中表达pORF2，制备戊型肝炎疫苗，过程如图。下列关于该疫苗的叙述，正确的是(　　) A.过程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是A、U、G、C B.重组基因表达载体上的启动子需来源于戊型肝炎病毒 C.过程⑤需要用聚乙二醇处理大肠杆菌使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 D.过程⑥大量制备pORF2蛋白前应做相应的检测与鉴定 14.科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义。下列相关叙述错误的是(　　) A.选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞全能性最高 B.采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达 C.人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用 D.将转基因小鼠体细胞进行核移植(克隆)，可以获得具有相同外源基因的后代 15.如图是“生物导弹”的作用原理，阿霉素是一种抗肿瘤药物，可抑制DNA和RNA的合成，对正常细胞也有一定毒性。下列相关说法错误的是(　　) A.单克隆抗体是由杂交瘤细胞合成和分泌的，具有特异性强，灵敏度高等特点 B.活化阿霉素能抑制细胞中的DNA转录和翻译过程 C.单克隆抗体的定位导向作用将药物带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，进而治疗癌症 D.单克隆抗体作用的特异性可减轻阿霉素对正常细胞的伤害 二、选择题(本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全选对得3分，选对但不全得1分，选错得0分。) 16.某些土壤细菌能合成脲酶，可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。使用特定的选择培养基能分离土壤中分解尿素的细菌。下列相关叙述错误的是(　　) A.在施用过尿素的土壤中取样，更易得到尿素分解菌 B.该选择培养基要以尿素为唯一碳源 C.通常要对土样进行充分稀释，再涂布到平板上培养 D.培养过程中平板上出现多种菌落，则可判定平板已被外来杂菌污染 17.(2024·大连模拟)唐诗云“葡萄美酒夜光杯，欲饮琵琶马上催”，可见果酒的制作在我国源远流长。下列关于家庭制作果酒、果醋的叙述，正确的是(　　) A.果酒制作过程中为防止杂菌污染，不能拧松发酵瓶盖 B.若最终获得的果酒偏酸，可能原因是醋酸菌有氧发酵产生了乙酸 C.果酒制成后只需要将装置移至温度略高的环境中就能酿成果醋 D.果酒不易变质的原因是在酸性、缺氧及含酒精的发酵液中，微生物的繁殖受到抑制 18.(2024·南通模拟)狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉且其细胞中的黄酮类化合物可入药。为满足狼爪瓦松市场化需求，某科研小组利用植物细胞工程等技术手段，进行狼爪瓦松的扩大培养，具体过程如图所示(其中数字序号代表相应的处理过程)。下列相关分析错误的是(　　) A.过程③先在生长素/细胞分裂素的值高的培养基中培养，再转移至其值低的培养基中 B.制备培养基的正确顺序是：称量→溶解→定容→调 pH 值→分装→灭菌 C.过程④常用射线或化学物质处理即可获得大量所需的突变体植株丙 D.过程⑥利用愈伤组织分裂能力强、全能性高的特点可大量获得黄酮类化合物 19.(2023·沈阳二模)下列有关生物实验的叙述，错误的是(　　) A.培养基经干热灭菌后，待冷却至50 ℃左右时才可倒平板；PCR过程中复性所需温度与前者相同，若温度太高，引物与模板DNA单链不能牢固结合 B.将供体细胞注入去核的卵母细胞后，通过电融合法使两细胞融合；在高渗或等渗溶液中也可采用此法促进原生质体的融合 C.外植体脱分化形成愈伤组织，需要一定的激素诱导和营养条件；成纤维细胞转化为iPS细胞则不同，可通过直接将特定蛋白导入细胞中来实现 D.发酵工程的中心环节是选育菌种；而基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，该过程需要使用限制酶和DNA连接酶 20.IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷(SCID)患儿的IKKβ基因编码区第1 183位碱基T突变为C。为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是(　　) A.PCR1中使用的引物有引物A、引物C B.PCR2中使用的引物有引物B、大引物a C.PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物 D.PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度 三、非选择题(本题共5小题，共55分) 21.(10分)利用发酵技术制作的各类特色食品，如果酒、果醋、腐乳、泡菜等，很好地展现了中华人民的智慧。请回答下列问题： (1)腐乳制作的流程是：________________→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。制作的后期可加入由酒和多种香辛料配置而成的卤汤，加酒除具有一定的________________作用外，还能使腐乳具有独特的风味。 (2)以石榴为原料制作的石榴酒和石榴醋不仅美味，而且具有保健功能。制作石榴酒利用的微生物是酵母菌，其细胞呼吸类型是________________。石榴酒制作过程中先产生水，后产生酒，先产生水的原因是________________________________________________________________________。 石榴酒发酵结束继续制作石榴醋时，需要改变的条件有________________________________ ________________________(答出两点即可)。 (3)研究人员计划从土壤中重新筛选酿酒酵母以替代老化菌种进行果酒发酵，部分过程如图所示： 图中所示接种方法是________。在3个平板上分别接入0.1 mL的稀释液，经适当培养后，3个平板上菌落数分别是38、42、40，则1 g土壤中的活菌数约为________个。纯化培养酵母菌时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是________________________________________________ ________________________________________________________________________。 22.(10分)下图为胚胎移植过程示意图。回答下列问题： (1)进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的____________。 (2)在促使供体母羊超数排卵时，不宜长期过量使用性激素的原因是_______________________ ________________________________________________________________________。 冲卵是指______________________，进行该操作的生理学基础是__________________________。 (3)一般需将胚胎在体外培养到一定的发育阶段才能进行移植，原因是______________________ ________________________________________________________________________。 (4)冲卵后胚胎移植得到的后代之间与胚胎分割移植得到的后代之间在性状上的区别是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (5)除图中所示外，胚胎移植技术中胚胎的来源还有______________________________________ ____________________________________________________________________(答出两点即可)。 23.(11分)(2023·合肥二模)干扰素在临床上被广泛用于治疗病毒感染性疾病及多种癌症，传统生产干扰素的方法是从人体的白细胞内提取，产量极低。1993年，我国批准生产由侯云德院士研究和开发的药物重组人干扰素α­1b，它是我国第一个具有自主知识产权的基因工程药物，通过转基因的大肠杆菌来生产，产量得到大幅度的提高。回答下列问题： (1)从中国人体脐带血白细胞中提取干扰素基因的mRNA，通过__________的方法合成目的基因，再通过PCR技术扩增。扩增时，引物与模板链的__________碱基互补配对。 (2)若将重组人干扰素α ­1b基因直接导入大肠杆菌细胞，一般不能得到重组干扰素α­1b，原因是________________________________________________________________________。 因此，需将重组人干扰素α ­1b基因、__________和标记基因构建成基因表达载体导入大肠杆菌。 (3)筛选出具有重组干扰素α ­1b基因的大肠杆菌应使用________培养基，可采用________获得纯培养物。 (4)将α­1b第86位上的半胱氨酸变成丝氨酸，可以解决α­1b在水溶液中难以长期保存的难题，在该蛋白质工程中可行的直接操作对象是________________。 24.(12分)(2023·潍坊三模)如图为抗除草剂基因和质粒的结构示意图，科研人员将抗除草剂基因导入玉米细胞，获得了抗除草剂玉米。 　 Mun Ⅰ：　　　　　　　　　　BamHⅠ： MboⅠ： EcoR Ⅰ： (1)在质粒上，启动子的作用是_______________________________________________________， 图中质粒未标出的必需元件是____________。 (2)用PCR技术扩增抗除草剂基因时，需在引物1上设计限制酶的酶切位点，即________，抗除草剂基因的________链为转录的模板链。 (3)在构建抗除草剂基因表达载体时，为将抗除草剂基因正向连接在质粒上需要双酶切，用于切割质粒的限制酶是________，不选择MboⅠ的理由是________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)在分子水平上，检测抗除草剂基因是否导入玉米基因组的方法有_______________________ ___________________________________________________________________(答出两种即可)。 在个体水平上，检测转抗除草剂基因玉米是否成功的方法是___________________________ ________________________________________________________________________。 25.(12分)(2023·衡阳高三联考)人乳铁蛋白(hLF)是一个大约由700个氨基酸残基构成的、分子量约为80 KDa的糖蛋白，主要由腺上皮细胞表达和分泌。乳铁蛋白不仅参与铁的转运，而且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等强大生物功能，被认为是一种新型抗菌、抗癌药和极具开发潜力的食品和饲料添加剂。研究人员通过基因工程将hLF基因导入山羊乳腺上皮细胞中，从而获得大量的人乳铁蛋白，具体操作流程如图所示，图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶的切点，neor为新霉素抗性基因，BLG基因为β­乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。回答下列问题： (1)细胞中RNA结构不稳定很容易被酶分解，因此在提取细胞的RNA时，通常加入________，以保护RNA不被破坏。过程①进行RT­PCR过程中，所需要的酶是___________________________， 所需要的原料是________。 (2)通过①过程获得hLF基因，通常在其两端分别添加上限制酶________识别和切割DNA序列，以便pEBL质粒的构建。将hLF基因插入到GFP基因下游的目的是__________________________ ________________________________________________________________________。 (3)重组质粒中的neor的作用是________________________，将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含________的培养液中培养，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中是否发绿色荧光，以筛选出转染成功的细胞。 (4)转入hLF基因的山羊乳腺细胞在体外培养过程中会逐渐衰老死亡，为获得足够数量的人乳铁蛋白，请利用细胞工程技术，设计实验从山羊乳腺细胞中能够获得大量的人乳铁蛋白，写出实验思路：________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 学科网（北京）股份有限公司 $$ 达标测试卷(十三) 1. A　 配制培养基倒平板前，需要对培养基进行高压蒸汽灭菌，倒平板后无需将培养基进行高压蒸汽灭菌，A正确；每倒入一个培养皿后立即将培养皿置于水平位置上，并轻轻晃动，使培养基铺满底部，待凝固后即形成平面，B错误；等待平板冷却至凝固，将平板倒过来放置，C错误；待培养基冷却至50 ℃ 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，D错误。 2.C　植物细胞次生代谢物通常含量很低，所以要消耗大量材料才能获得一定量的产品，A正确；诱导外植体脱分化获得愈伤组织的过程通常要使用生长素和细胞分裂素，B正确；生长素并没有改变遗传物质的功能，C错误；避光条件下植物细胞不能进行光合作用，故需要提供能源物质才能满足能量需求，糖类是常用的能源物质，D正确。 3.D　图示过程利用的是细胞膜具有一定的流动性，与植物原生质体融合的基本原理相同，A正确；用灭活的病毒作诱导因素，需要将仙台病毒用紫外线等灭活使其失去感染能力，B正确；图中C细胞具有细胞核，进行的细胞分裂方式为有丝分裂，C正确；将A、B细胞等量混合诱导得到的融合细胞可能是A、B细胞各自类型的融合细胞，并不是杂交细胞，杂交细胞是A、B细胞进行融合而成，D错误。 4.B　蛋白质工程是对基因进行修饰改造或重新合成，然后进行表达，改造后的蛋白质的性状能遗传给子代，A正确；对纤维素酶的改造需要以基因工程为基础，是通过修改基因或创造合成新基因来实现的，B错误；蛋白质工程是对基因进行修饰改造或重新合成，然后进行表达，需要构建基因表达载体，C正确，改造的纤维素酶和原纤维素酶不是同一种酶，D正确。 5. A　乳酸菌是细菌，属于原核生物，没有由核膜包被的细胞核，A错误；据题图分析可知，发酵初期乳酸菌活细胞数远多于酵母菌活细胞数，可见乳酸菌为优势菌种，B正确；前6天pH下降，主要由乳酸菌代谢产生的乳酸引起，C正确；发酵中期为无氧条件，酵母菌通过无氧呼吸进行增殖，D正确。 6. D　 PHA是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，要筛选嗜盐细菌，步骤②可用稀释涂布平板法接种到含盐量较高的选择培养基上，A错误；步骤③培养基浓度过高，会导致菌体失水死亡，不利于嗜盐细菌的生长，B错误；步骤④扩大培养应选用液体培养基，液体培养基中无需加入琼脂，C错误；要挑选高产聚羟基脂肪酸酯(PHA)的嗜盐菌，挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量，进行比较，D正确。 7.D　果酒发酵时应在无氧条件下进行，故进行果酒发酵时，需要营造无氧条件，不能打开开关2，A错误；醋酸菌为需氧菌，因此用于探究果醋发酵时，需要打开开关1通入无菌空气，B错误；管口3处取样，可用酸性重铬酸钾溶液检测果酒发酵过程是否产生酒精，酒精与重铬酸钾反应可由橙色变为灰绿色，C错误；果醋发酵后产生的醋酸使培养液pH下降，可检测发酵前后发酵样液的pH变化判断醋酸的生成情况，此外也可通过菌种数量变化进行检测，D正确。 8.A　 对照组培养基的各种成分和用量不需单独配置，以保证单一变量，A错误；细菌的生长需要适宜的温度，因此将对照组的平板倒置后放在恒温箱中进行培养，B正确；设置对照组可以排除实验组中无关变量(如培养基成分、pH)的影响，以保证实验结果的准确性，C正确；设置空白对照组可以验证培养基灭菌是否合格，若空白对照组中的培养基上长出菌落，则说明培养基灭菌不合格，D正确。 9.A　 将Oct3/4，Sox2，c­Myc和Klf4四种转录因子通过逆转录病毒导入肌肉细胞诱导成iPS细胞的过程发生了基因重组，两种细胞的基因有所差别，A正确；将目的基因导入受体细胞需要用到的工具酶是限制酶和DNA连接酶，运载体不属于酶，B错误；使用逆转录病毒作为转录因子的载体可直接导入受体细胞，无须再使用显微注射法，C错误；镰状细胞贫血患者自身体细胞发生基因突变，无法行使正常功能，D错误。 10.C　 将卵母细胞培养到MⅡ期后进行去核操作，此时细胞核退化，出现的是纺锤体—染色体复合物，故去核的实质是去除卵母细胞中的纺锤体—染色体复合物，A正确；胚胎移植前需对供体和代孕母猴注射孕激素进行同期发情处理，保证胚胎移植入相同的生理环境，不发生免疫排斥反应，B正确；结合题意和图示操作可知，将组蛋白去甲基化和增加乙酰化，有利于重构胚的分裂和发育，使其完成细胞分裂和发育进程，C错误；重组细胞融合后，可以用物理或化学方法进行激活，使其完成细胞分裂和发育进程，发育至桑葚胚或囊胚期再进行胚胎移植，D正确。 11.C　 ①试管中加入PEG的目的是诱导A、B原生质体融合，PEG不具有诱导细胞壁再生的作用，A错误；题图为细菌细胞的杂交过程，与植物体细胞杂交过程相比，诱导融合的方法不完全相同，所依据的原理均为细胞膜具有一定的流动性的结构特点，B错误；离心洗涤后向培养液中加入的酶可能是溶菌酶，溶菌酶可溶解细菌的细胞壁，以获得原生质体，C正确；题图中的甲实验和乙实验是指个体水平上进行灭蚊实验和杀灭玉米螟实验；获得的融合株由两种细菌融合而来，细菌属于原核生物，细胞中没有染色体，D错误。 12.D　 已知TAL靶向识别单元中双连氨基酸序列和Fokl蛋白的氨基酸序列，可先推测出信使RNA序列，再推测出目的基因的核苷酸序列，利用化学法以单个核苷酸为原料合成目的基因，再通过PCR技术进行扩增，A正确；在构建的基因表达载体中，有启动子、终止子、目的基因、标记基因等，其中启动子位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，B正确；TALEN是一种靶向基因操作技术，该技术利用了TAL靶向识别单元对靶向基因的识别作用和Fokl蛋白对靶向基因的切割作用，实现了对特定靶向基因的敲除，可见Fokl蛋白实质上是一种限制酶，C正确；只有含氮碱基之间能发生碱基互补配对，而双连氨基酸不含有含氮碱基，D错误。 13.D　戊型肝炎病毒是一种RNA病毒，过程①是以病毒RNA为模板合成DNA，获取目的基因的过程，需要的酶是逆转录酶，原料是四种脱氧核苷酸，A错误；启动子是一段有特殊结构的DNA片段，其作用是供RNA聚合酶的识别结合以驱动目的基因的转录，启动子具有物种或组织特异性，构建在大肠杆菌细胞内特异表达pORF2蛋白的载体时，需要选择大肠杆菌细胞的启动子，而不能选择其他物种和组织细胞的启动子，B错误；将目的基因导入微生物细胞的方法是Ca2＋处理法，需要用Ca2＋处理大肠杆菌，增大大肠杆菌细胞壁的透过性，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，C错误。 14. B　选择受精卵作为外源基因的受体细胞，是因为这种细胞全能性最高，A正确；采用DNA分子杂交技术可检测外源基因是否导入受体细胞，但不能检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达，检测外源基因是否表达，可用抗原—抗体杂交，B错误；人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明地球上所有生物共用一套遗传密码，C正确；克隆属于无性繁殖，产生的后代相同，D正确。 15.B　单克隆抗体是由杂交瘤细胞合成和分泌的，具有特异性强，灵敏度高等特点，A正确；阿霉素是一种抗肿瘤药，可抑制DNA和RNA的合成，因此活化阿霉素能抑制细胞中的DNA复制和转录过程，B错误；单克隆抗体的定位导向作用将药物带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，进而治疗癌症，C正确；阿霉素对正常细胞也有一定毒性，而单克隆抗体特异性强，从而减轻阿霉素对正常细胞的伤害，D正确。 16. BD　从生物的生存环境中寻找微生物更容易成功，所以在施用过尿素的土壤中取样，更易得到尿素分解菌，A正确；尿素分解菌是异养型微生物，需提供糖类等碳源，尿素可为其提供氮源，故该选择培养基要以尿素为唯一氮源，B错误；土样中的微生物数量较多，通常需要稀释后再涂布，以便于获得单菌落，C正确；尿素分解菌有很多种，因此培养过程中平板上可能出现多种菌落，未必是杂菌污染，D错误。 17.BD　果酒制作过程中需定时拧松发酵瓶盖，以释放发酵产生的CO2，A错误；果酒偏酸，可能原因是醋酸菌有氧发酵产生了乙酸，B正确；参与果醋制作的醋酸菌是嗜氧菌和嗜温菌，果酒制成后需要将装置移至温度略高的环境中，同时制造有氧环境，才能酿成果醋，C错误；随着酒精发酵的进行，发酵液呈酸性、缺氧及含酒精，各种微生物的繁殖受到抑制，D正确。 18.ACD　生长素/细胞分裂素的值高时，利于生根，该值低时利于生芽，过程③需先生芽，再生根，因此过程③先在生长素/细胞分裂素的值低的培养基中培养，再转移至其值高的培养基中，A错误；制备培养基时，先调节pH后灭菌，因此制备培养基的正确顺序是：称量→溶解→定容→调pH值→分装→灭菌，B正确；过程④常用射线或化学物质处理，发生的是基因突变，基因突变具有不定向性和低频率性，故过程④常用射线或化学物质处理后不一定可获得大量所需的突变体植株丙，C错误；过程⑥利用愈伤组织分裂能力强的特点可大量获得黄酮类化合物，没有培育成相应植株，不能体现其全能性，D错误。 19.ABD　配制好的培养基需要通过湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)，A错误；获取原生质体和原生质体的融合都需要在等渗溶液中操作，等渗溶液可维持去除细胞壁后的原生质体的正常形态，B错误；植物组织培养技术中脱分化需要离体、激素、无菌等条件，iPS细胞的形成可借助载体将特定基因导入细胞中、直接将特定蛋白导入细胞中或者用小分子化合物等来诱导，C正确；基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，需要使用限制酶和DNA连接酶，但发酵工程的中心环节不是选育菌种，而是发酵罐内的发酵，D错误。 20.AD　在PCR1中，需要两种引物，将来在切取IKKβ基因时，需要在基因的左侧用限制酶Hind Ⅲ来切割，在基因的右侧用限制酶Sac Ⅰ来切割，因此在该基因的左端应有限制酶Hind Ⅲ识别的序列，在基因的右端应有限制酶Sac Ⅰ识别的序列，因此在PCR1中结合到基因右端的引物序列从5′­端到3′­端的开始部位应含有限制酶SacI识别的序列，所以要用到引物C，从题图中看，另一个引物从5′­端到3′­端的序列中开始部位应含有突变碱基C，所以要用到引物A，A正确；在PCR2中，有一个引物结合到了基因的左端，在它从5′到3′的序列的开始部位应含有限制酶Hind Ⅲ识别的序列，所以要用到引物B，而另外的一个引物就是大引物中的一条链，它应该结合到基因的右端，且从5′­端到3′­端的序列中开始部位应含有Sac Ⅰ识别的序列，从图中看，它是大引物的b链，B错误；PCR1过程主要是为了获得大引物a、b，则扩增2轮即可获得目标产物，C错误；由于大引物较长，含C与G的碱基较多，为减少非目标基因的获得，在PCR2复性过程中应适当提高退火温度，便于引物与模板链的结合，D正确。 21.解析　(1)腐乳制作的流程是让豆腐长出毛霉、加盐腌制、加卤汤装瓶、密封腌制。制作的后期可加入由酒和多种香辛料配置而成的卤汤，加酒除具有一定的防腐杀菌作用外，还能使腐乳具有独特的风味。(2)酵母菌细胞呼吸类型是兼性厌氧型，石榴酒制作过程中先产生水，后产生酒，先产生水的原因是酵母菌进行了有氧呼吸，有氧呼吸第三阶段，在线粒体内膜会产生水。石榴酒发酵结束继续制作石榴醋时，需要用醋酸菌，醋酸菌适宜生长温度是30～35 ℃，醋酸杆菌是好氧菌，需要改变的条件有更换发酵菌种、适当提高温度、持续通氧。(3)题图中所示接种方法是稀释涂布平板法。取1 g土壤，按如图所示稀释后(稀释倍数是105)，在3个平板上分别接入0.1 mL的稀释液，3 个平板上的菌落数分别是38、42、40，即平均菌落数是40，据此可计算出每克土样中的活菌数约为(40÷0.1)×105＝4 ×107(个)。纯化培养酵母菌时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是检测培养基是否完全灭菌以及培养过程中培养基是否被杂菌污染。 答案　(1)让豆腐长出毛霉　防腐杀菌　 (2)兼性厌氧型　酵母菌进行了有氧呼吸　更换发酵菌种、适当提高温度、持续通氧　 (3)稀释涂布平板法　 4×107 检测培养基是否完全灭菌以及培养过程中培养基是否被杂菌污染 22.解析　(1)进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，能够增加其后代数量。(2)长期过量使用的性激素会通过负反馈调节，抑制垂体分泌促性腺激素，导致性腺萎缩，因此不宜长期过量使用性激素促使供体母羊超数排卵。冲卵是指把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来，原因是早期胚胎形成后，在一定时间内处于游离状态能够冲出。(3)羊受精卵发育成胚胎的不同阶段移植成功率不同，选择合适的发育时期(一般是桑葚胚及之前)进行移植，能提高胚胎移植的成功率，因此需将胚胎在体外培养到一定的发育阶段才能进行移植。(4)冲卵后胚胎移植得到的后代是有性生殖产生的后代，由于基因重组的存在，彼此之间性状有较大差异；而胚胎分割移植得到的后代为无性生殖，细胞都是源于同一个细胞，个体彼此之间性状基本一致。(5)胚胎移植技术中胚胎的来源有重组获得的胚胎、转入目的基因的胚胎、核移植得到的重组胚胎、体外受精后形成的胚胎等。 答案　(1)繁殖潜力　 (2)长期过量使用的性激素会通过负反馈调节，导致性腺萎缩　 把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来　早期胚胎形成后，在一定时间内处于游离状态　(3)羊受精卵发育成胚胎的不同阶段移植成功率不同，选择合适的发育时期进行移植，能提高胚胎移植的成功率　(4)冲卵后胚胎移植得到的后代为有性生殖产生的后代，彼此之间性状有较大差异；胚胎分割移植得到的后代为无性生殖，彼此之间性状基本一致　(5)转入目的基因的胚胎、核移植得到的重组胚胎、体外受精后形成的胚胎等(答案合理即可) 23.解析　(1)以mRNA为模板合成cDNA的方法称为逆转录法；DNA分子的两条链是反相平行的，DNA分子合成时从3′末端延伸，则扩增时，引物与模板链的3′­端碱基互补配对。(2)干扰素α­1b基因在大肠杆菌中不能稳定存在和复制，也不能表达和发挥作用，所以若将重组人干扰素α ­1b基因直接导入大肠杆菌细胞，一般不能得到重组干扰素α ­1b。因此，需将重组人干扰素α­1b基因、启动子、终止子(复制原点)和标记基因构建成基因表达载体导入大肠杆菌。(3)需要用选择培养基筛选出具有重组干扰素α ­1b基因的大肠杆菌，可采用平板划线法(稀释涂布平板法)纯化微生物。(4)在该蛋白质工程中，对天然蛋白质的改造须通过对基因的操作来实现。 答案　(1) 逆转录　3′­端　 (2) 干扰素α­1b基因在大肠杆菌中不能稳定存在和复制，也不能表达和发挥作用(合理即可)　 启动子、终止子(复制原点) (3)选择　 平板划线法(稀释涂布平板法)　 (4)基因(α ­1b基因) 24.解析　(1)启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录出mRNA。质粒上应包括启动子、终止子、标记基因和复制原点等，复制原点是质粒上必需的一段复制起始的序列，与重组质粒的自主复制有关，故图中未标注出的必需元件还有复制原点。(2)用PCR技术扩增抗除草剂基因时，需在引物1上设计限制酶的酶切位点，MunⅠ会破坏抗除草剂基因，MunⅠ和EcoRⅠ产生的黏性末端相同，故引物1上设计EcoRⅠ的限制酶的酶切位点。目的基因使用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行切割，在质粒上，有BamHⅠ的酶切位点，MunⅠ和EcoRⅠ产生的黏性末端相同，因此可以选择MunⅠ和BamHⅠ切割质粒。用于切割质粒的限制酶是转录时以DNA的一条链为模版合成的，由题图可知，抗除草剂基因的b链为转录的模板链。(3)MboⅠ会破坏卡那霉素抗性基因，且MboⅠ和BamHⅠ产生的黏性末端相同，会导致目的基因、载体自身环化，目的基因反向连接到载体上，故不选择MboⅠ。(4)在分子水平上，检测抗除草剂基因是否导入玉米基因组可采用DNA分子杂交技术(检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因)、分子杂交技术(检测目的基因是否转录出mRNA)，为从个体水平上检测抗除草剂基因玉米是否具有抗除草剂性状，可采用相应除草剂喷洒待抗除草剂基因玉米。 答案　(1)RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录出mRNA　复制原点　(2)EcoRⅠ　b (3)EcoRⅠ和BamHⅠ　MboⅠ会破坏卡那霉素抗性基因，且MboⅠ和BamHⅠ产生的黏性末端相同，会导致目的基因、载体自身环化，目的基因反向连接到载体上　(4)DNA分子杂交技术、分子杂交技术　用相应除草剂喷洒待抗除草剂基因玉米 25.解析　(1)RNA结构不稳定很容易被酶分解，为保护RNA不被破坏，在提取细胞的RNA中，通常加入RNA酶抑制剂。过程①进行RT­PCR过程中，是以mRNA为模板，逆转录合成DNA，故需要逆转录酶，PCR过程中需要耐高温的DNA聚合酶，原料是4种脱氧核苷酸。(2)AseⅠ会破坏BLG基因(β­乳球蛋白基因)，NheⅠ会破坏GFP基因(绿色荧光蛋白基因)，且限制酶SalⅠ和BamHⅠ位于GFP基因(绿色荧光蛋白基因)的下游，将hLF基因插入到GFP基因的下游可以利用GFP基因的启动子进行转录，因此，通过①过程获得hLF基因，通常在其两端分别添加上限制酶SalⅠ和BamHⅠ识别和切割DNA序列，以便pEBL质粒的构建。(3)neor为新霉素抗性基因是标记基因，便于含hLF基因的受体细胞(山羊乳腺上皮细胞)的筛选，将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中是否发绿色荧光，以筛选出转染成功的细胞。(4)山羊骨髓瘤细胞具有无限增殖能力，因此将含有hLF基因的山羊乳腺细胞与山羊骨髓瘤细胞融合，并筛选出能产生人乳铁蛋白的杂交瘤细胞，体外培养杂交瘤细胞获得大量的人乳铁蛋白。 答案　(1)RNA酶抑制剂　逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶　4种脱氧核苷酸　(2)SalⅠ和BamHⅠ　 利用GFP基因的启动子进行hLF基因转录　(3)便于含hLF基因的受体细胞(山羊乳腺上皮细胞)的筛选 新霉素　 (4)将含有hLF基因的山羊乳腺细胞与山羊骨髓瘤细胞融合并筛选出能产生人乳铁蛋白的杂交瘤细胞，体外培养杂交瘤细胞，获得大量的人乳铁蛋白 学科网（北京）股份有限公司 $$