精品解析：青海省西宁市第五中学2023-2024学年高二下学期期末生物试卷

2023-2024学年第二学期高二年级期末考试生物试卷 总分:100分; 考试时间: 75 分钟; 一、单项选择题（共50分，此题包括25 小题，每小题2分，每道题只有一项正确答案）。 1. 镇江陈醋具有“色、香、酸、醇、浓”之特色，其主要工艺流程如下图。相关叙述正确的是（ ） A. 作为工业生产，镇江陈醋的酿制过程需要做到严格无菌 B. “淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，有助于霉菌的糖化等过程 C. 接种醋酸菌后的固态发酵需要“翻缸”，主要目的是抑制杂菌 D. 后发酵时间越长，醋体中风味物质的不断堆积导致醋品更佳 2. 某兴趣小组为了探究自然发酵和人工发酵制作泡菜的过程中亚硝酸盐含量随着发酵时间的变化差异，其中人工发酵是在自然发酵条件下添加一定量的干酪乳酸菌。实验过程中，测量结果如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 该实验的自变量是干酪乳酸菌的有无和发酵时间 B. 发酵早期，人工发酵制作的酸菜，食用相对较安全 C. 自然发酵条件下，杂菌较多，酸菜品质变动较大 D. 两种发酵条件下，发酵装置的气密性情况相同即可 3. 马奶酒是具有民族传统特色高级活性保健饮料，其发酵机理是乳酸菌和酵母菌进行乳酸发酵及酒精发酵。马奶酒酵母菌株不同于一般微生物优先利用葡萄糖，而是在生长起始期就能优先利用半乳糖，然后同时利用这两种糖进行生长。下列有关叙述错误的是（ ） A. 一般发酵食品中的酵母菌细胞中不能合成半乳糖酶 B. 纯化马奶中“特殊”酵母菌常用的方法之一是平板划线法 C. 马奶酒酵母菌株能优先利用半乳糖的原因是其发生了变异 D. 乳酸菌和酵母菌都可进行乳酸发酵和酒精发酵 4. 腐乳是我国传统发酵食品，具有很高的营养价值。某科研机构研究了腐乳生产过程中不同浓度的食盐对腐乳中氨基酸含量的影响。下列叙述正确的是（ ） A. 发酵时间和食盐浓度均可影响腐乳中氨基酸的含量 B. 腐乳生产过程中，发挥主要作用的微生物是曲霉菌 C. 经过发酵后，豆腐中的蛋白质均会被分解为氨基酸 D. 食盐浓度越高，对杂菌的抑制越强，对制作腐乳越有利 5. 利用传统发酵技术制作的果酒、果醋、腐乳、泡菜极大地丰富了人们的饮食，它们是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是（　　） A. 用白萝卜制作泡菜的过程中，定期揭开泡菜坛盖子可缩短腌制时间 B. 变酸的酒表面有白膜出现，是醋酸菌大量繁殖形成的 C. 制作果醋、泡菜、果酒的过程中应先通气培养微生物，再密封发酵 D. 腐乳制作过程主要利用的是毛霉产生的淀粉酶和脂肪酶 6. 某生物兴趣小组制作泡菜时，对发酵早期发酵液中的乳酸菌含量和亚硝酸盐含量进行了测定，结果如图。分析错误的是（　　） A. 前2天乳酸菌含量变化慢，可能是坛子内的O2抑制了乳酸菌繁殖 B. 前4天亚硝酸盐的含量变化快，可能是其他细菌大量繁殖导致的 C. 第6天后亚硝酸盐含量变化缓慢，可能是大量乳酸抑制杂菌活动 D. 为减少泡菜中亚硝酸盐的含量，该泡菜腌制8天左右食用最佳 7. 某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下，下列说法不正确的是（　　） A. 图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，能生长的微生物可能不能合成脲酶 B. 若每支试管稀释10倍，则图中a的数值应为2.7，5号试管共稀释了 106倍 C. 图中左上角培养基菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成 D. 若仅以4号试管接种培养基计数，5g该土壤中含分解尿素菌的估算数目是1.4×108个 8. 基于K-B纸片扩散法进行金黄色葡萄球菌的抗生素药敏实验，分别用含青霉素（P）、克林霉素（DA）、红霉素（E）、氯霉素（C）的药敏纸片处理菌板，抑菌圈的直径大小如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 由图可知，金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性大小为DA>E>C>P B. 若想增加金黄色葡萄球菌对P的耐药性，需从抑菌圈边缘挑选菌落，多次重复实验 C. 在抗生素的选择作用下，金黄色葡萄球菌产生了耐药性变异 D. 金黄色葡萄球菌产生耐药性对人类来说是有害变异，对其本身来说是有利变异 9. 下表为某培养基的配方，下列叙述正确的有（ ）项 成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 蒸馏水 琼脂 含量 10g 10g 2g 0.4g 0.065g 1000mL 20g ①物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基 ②培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨 ③该培养基调节合适的pH和消毒后就可以接种使用 ④该培养基可以用于培养HIV病毒 A. 1项 B. 2项 C. 3项 D. 4项 10. 赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌在科研领域中具有广泛的应用价值。下图表示科研人员利用野生大肠杆菌，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷型突变菌株的流程图，其中A、B、C为操作步骤。已知野生大肠杆菌可以在普通培养基上生长繁殖，但赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌不能，下列叙述错误的是（ ） 注：原位影印是指用无菌绒布轻盖在已经长好菌落的培养基②上，然后不转动任何角度，将②上的菌落按原位“复印”至新的培养基③和④上。 A. 培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂 B. 野生大肠杆菌在紫外线的照射下，可提高基因突变的频率 C. 培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸 D. 培养基④上，乙是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来 11. 为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48 h，结果如图所示。下列说法错误的是（ ） A. 配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，还要调节pH才能用于接种 B. 待高温灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右后，再进行倒平板 C. 在超净工作台上和酒精灯火焰旁进行操作，是为了防止杂菌污染 D. 手掌上的某些微生物在该培养基上并没有生长繁殖形成菌落 12. 微生物纯培养的两种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 图2中每克土样中的菌体数目为1.7×109个 B. 进行平板划线操作之前，需要用酒精对接种环进行灭菌处理 C. 用稀释涂布平板法测微生物数量时，平板上的统计结果一般用活菌数来表示 D. 为获得纯化培养后的菌种，图1中最好选择Ⅲ区的菌落进行挑取 13. 细菌的运动性在其致病性和耐药性方面有重要作用，可采用穿刺接种的方法(如图)研究细菌的运动能力。在培养基中添加无色指示剂，脱氢酶可催化指示剂变成红色。下列叙述正确的是（ ） A. 穿刺针不需要进行灭菌处理 B. 红色区域越大，细菌的运动能力越强 C. 红色区域的大小与细菌的繁殖速度无关 D. 琼脂浓度不影响微生物运动范围 14. 2023年 4月我国新版《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2022)正式实施，其中对微生物的检出要求如下表。兴趣小组的同学们对某蓄水池进行细菌总数测定，以了解池水是否符合饮用水卫生标准。结合下表分析，下列说法错误的是（ ） 序号 指 标 限 值 1 总大肠杆菌/(MPN/100mL 或 CFU/100mL) 不应检出 2 大肠埃希氏菌/(MPN/100mL 或CFU/100mL) 不应检出 3 菌落总数/(MPN/100mL 或CFU/100mL) 100 MPN表示最可能数， CFU表示菌落形成单位 A. 可采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法对取水样的三角瓶灭菌 B. 培养基中应加入伊红—亚甲蓝以区分大肠杆菌和其他细菌菌落 C. 应将0.1mL 稀释水样滴加到培养基表面并用涂布器涂抹均匀 D. 应将平板倒置后在适宜条件下培养，以减少培养基污染的几率 15. 将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如图所示实验。下列叙述正确的是（ ） A. 实验中接种至基本培养基的方法是平板划线法 B. 基本培养基出现的少量菌落一定是单菌落 C. 基本培养基中包含菌株a和b的生长因子 D. 菌株a和b需要的生长因子有所不同 16. 科研人员为了培育出在口感、甜度、水分等方面兼备荔枝A和荔枝B的优点的三倍体荔枝，进行了如图所示的实验流程。下列关于该流程的叙述，错误的是（ ） A. 获得单倍体需用到植物组织培养技术 B. 获得原生质体需用到纤维素酶和果胶酶 C. 获得杂种细胞需用到灭活的病毒 D. 获得三倍体荔枝需经历脱分化和再分化 17. 植物经过基因突变产生了某一优良性状，可采用植物组织培养技术将这一优良性状保留下来，下列相关叙述错误的是（ ） A. 培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B. 培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C. 同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因有可能不同 D. 在植物组织培养全过程中应提供充足的光照、营养和适宜的温度、pH等 18. 狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉且其细胞中的黄酮类化合物可入药。某科研小组利用植物细胞工程对狼爪瓦松进行培养，过程如图所示。下列有关分析正确的是（ ） A 过程①前用酒精对植物甲进行消毒，就能保证外植体不被污染 B. 过程⑥中黄酮类化合物可通过植物细胞培养获得，该过程体现了植物细胞的全能性 C. ·除了植株丙，植株乙、丁细胞核遗传物质相同 D. 过程③一般需要给予愈伤组织适当强度的光照 19. 研究人员以某病毒的外壳蛋白A为抗原制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 限制酶主要来源于原核生物，因为原核生物中含有限制酶的识别序列 B. 可用抗原—抗体杂交法检测转基因工程菌是否成功翻译出蛋白A C. 将纯化的蛋白A多次注射到小鼠体内，是为了促进小鼠产生更多的抗体 D. 杂交瘤细胞筛选和单克隆抗体筛选的目的和原理均相同 20. 用DNA重组技术可以赋予生物新的遗传特性，在此过程中需要使用多种工具酶，其中3种限制酶的切割位点如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 限制酶和DNA连接酶作用的均是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键 B. EcoRI酶切割后的DNA片段可以用T4DNA连接酶连接 C. EcoRV酶切割后的DNA片段可以用E．coliDNA连接酶连接 D. 经EcoRI酶和MunI酶切割后产生的两个DNA片段可进行连接 21. 检测和筛选是生物技术中的重要环节。下列叙述正确的是（ ） A. 制备单克隆抗体过程中第一次和第二次筛选的原理相同 B. 基因工程中利用含抗生素的培养基筛选出的受体细胞不一定含有重组质粒 C. 检测目的基因能否稳定遗传的关键是看目的基因是否成功构建为基因表达载体 D. 只要检测到目的基因成功表达出蛋白质，就证明基因工程取得成功 22. 基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等方面，展示出广阔的前景。下列有关基因工程的成果及应用的叙述不正确的是（　　） A. 基因工程能生产食品工业用酶、氨基酸和维生素等 B. 用转基因动物作为器官移植的供体时，导入某种调节因子以抑制抗原决定基因的表达 C. 基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物 D. 基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因表达发挥功能，以达到治疗的目的 23. 重组PCR 技术是一项新的PCR技术，可将原来两个不相关的DNA 连接起来，成为一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1 基因片段，用重组PCR 技术构建了LTB-ST1 融合基因，融合基因的制备过程如图所示。下列相关分析正确的是（ ） A. PCR 实验中，离心管、缓冲液和蒸馏水使用前要进行消毒 B. 在设计引物时，P1、P2和P3的部分碱基都能互补配对 C. 得到的多个杂交链都能作为模板用来延伸子链，以扩增融合基因 D. 由杂交链延伸生成融合基因的过程中，不需要再另外添加引物 24. 生物技术与工程学相结合，可研究、设计和加工生产各种生物工程产品。下列有关叙述正确的有（ ） ①用花药培养得到单倍体植株需要用到植物组织培养技术 ②由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用 ③胚胎移植作为胚胎工程的最后技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用 ④PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，而后常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物 ⑤利用基因工程技术的生物反应器，可以让哺乳动物批量生产相应的药物 ⑥蛋白质工程仅以蛋白质结构为基础，逆中心法则进行，就可以改造或制造新蛋白质 A. 2项 B. 3项 C. 4项 D. 5项 25. 实验人员将一段外源DNA片段（包含约850个基因）与丝状支原体（一种原核生物）的DNA进行重组后，植入大肠杆菌，制造出一种“新的生命”。该生物能够正常生长、繁殖。下列有关该技术应用的叙述中，错误的是（　　） A. 该技术可以制造某些微生物，用于生产药品、制造染料、降解有毒物质等 B. 由于存在生殖隔离，因此人造生命进入自然界并不会破坏生物多样性 C. 人造生命扩散到自然界，有可能造成环境安全性问题 D. 此项技术可能被用来制造生物武器，从而危及人类安全 二、非选择题 （共50分,每空2分）。 26. 酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题： （1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，及时对培养基进行分装，并进行__________________________灭菌。 （2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入在培养皿的_____________上做好标记的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约为_____________的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后_____________培养。 （3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。操作时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_____________________ 。下列关于相关操作叙述合理的有________。 a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌 b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落 c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量 d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株供应。 （4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和__________供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞的计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_________色细胞的个数应不少于____________才能达到每毫升5×109个活细胞的预期密度。 27. 如图为细胞融合的简略过程，请据图回答： （1）若 A、B 是植物细胞，在细胞融合之前已处理，除去了细胞壁；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是______________。 （2）若 A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用_______________技术把D培养成植株。 （3）若 A、B是动物细胞，一般取自_______________，然后用_______________使其分散开来；A、B到C的过程中常用的但不能用于植物细胞培养的手段是_______________。 （4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了_____________。注射后小鼠身体产生了相应的免疫反应，生成的抗体过程有哪些具膜细胞器直接参与__________________， 图中B为_______________________。 28. 基因Pdxl对胰腺定向发育和成熟有重要作用。科研人员将Pdx1基因构建到含Tet诱导型启动子的基因表达载体（GV347）中，转入小鼠胚胎干细胞（ES），以期实现Pdx1基因在胚胎干细胞中的定时和定量表达。回答下列问题： （1）科研人员通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为_____，其应用前景优于胚胎干细胞的原因是_____（答出1点即可）。 （2）从胰腺细胞中提取DNA，利用特定引物PCR扩增获得Pdxl基因，电泳检测发现除目标序列外还有很多非特异性条带，请从引物的角度分析出现此情况的原因可能是_____。 （3）基因表达载体（GV347）如图所示，相关限制酶的识别序列及切割位点如表所示（注：箭头表示切割位点）。科研人员利用两种酶切割Pdxl基因和质粒，为了成功构建基因表达载体，应该选择_____（填“E.coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）将Pdx1基因和质粒连接起来，理由是_____。为使基因表达载体能成功表达Pdx1蛋白和绿色荧光蛋白的融合蛋白，应将_____（填“含”或“不含”）终止子的Pdx1基因插入到GV347的限制酶切割位点。 名称 识别序列和切割位点 PvitⅡ CAG↓CTG GTC↑GAC EcoRⅠ G↓AATTC CTTAA↑G 注：Tet诱导的启动子在四环素存在的条件下，可以激活基因表达。 （4）将重组载体导入ES，然后筛选出成功导入载体的ES。当四环素存在时，有利于RNA聚合酶与_____结合，驱动下游序列转录出mRNA．从细胞水平检测Pdxl基因是否成功翻译的方法是在荧光显微镜下观察ES，若_____，则说明目的基因成功翻译。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $$ 2023-2024学年第二学期高二年级期末考试生物试卷 总分:100分; 考试时间: 75 分钟; 一、单项选择题（共50分，此题包括25 小题，每小题2分，每道题只有一项正确答案）。 1. 镇江陈醋具有“色、香、酸、醇、浓”之特色，其主要工艺流程如下图。相关叙述正确的是（ ） A. 作为工业生产，镇江陈醋的酿制过程需要做到严格无菌 B. “淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，有助于霉菌的糖化等过程 C. 接种醋酸菌后的固态发酵需要“翻缸”，主要目的是抑制杂菌 D. 后发酵时间越长，醋体中风味物质的不断堆积导致醋品更佳 【答案】B 【解析】 【分析】参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、醋酸菌参与果醋制作的工业生产，A错误； B、“淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，为霉菌的糖化等过程提供氧气，B正确； C、醋酸发酵过程中利用的微生物是醋酸菌，发酵需要充足的氧气，所以“翻缸”目的是提供氧气，C错误； D、后发酵时间不能太长，需要适宜，发酵时间越长，可能会产生其他有害的物质或者滋生其他杂菌，D错误。 故选B。 2. 某兴趣小组为了探究自然发酵和人工发酵制作泡菜的过程中亚硝酸盐含量随着发酵时间的变化差异，其中人工发酵是在自然发酵条件下添加一定量的干酪乳酸菌。实验过程中，测量结果如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 该实验的自变量是干酪乳酸菌的有无和发酵时间 B. 发酵早期，人工发酵制作的酸菜，食用相对较安全 C. 自然发酵条件下，杂菌较多，酸菜品质变动较大 D. 两种发酵条件下，发酵装置的气密性情况相同即可 【答案】D 【解析】 【分析】制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜具有特殊的风味，乳酸菌是厌氧菌，分解有机物是不需要氧气的，因此泡菜坛要加盖并用一圈水来封口，以避免外界空气的进入，否则如果有空气进入，就会抑制乳酸菌的活动，影响泡菜的质量。 【详解】A、根据实验目的可知，该实验的自变量是干酪乳酸菌的有无和发酵时间，A正确； B、据图可知，发酵早期，人工发酵制作的酸菜中亚硝酸盐含量较低，食用相对较安全，B正确； C、自然发酵条件下，杂菌较多，致使不同批次的酸菜品质变动较大，C正确； D、乳酸菌进行的是无氧发酵，因此两种发酵条件下，发酵装置需要完全密封，D错误。 故选D。 3. 马奶酒是具有民族传统特色的高级活性保健饮料，其发酵机理是乳酸菌和酵母菌进行乳酸发酵及酒精发酵。马奶酒酵母菌株不同于一般微生物优先利用葡萄糖，而是在生长起始期就能优先利用半乳糖，然后同时利用这两种糖进行生长。下列有关叙述错误的是（ ） A. 一般发酵食品中的酵母菌细胞中不能合成半乳糖酶 B. 纯化马奶中“特殊”酵母菌常用的方法之一是平板划线法 C. 马奶酒酵母菌株能优先利用半乳糖的原因是其发生了变异 D. 乳酸菌和酵母菌都可进行乳酸发酵和酒精发酵 【答案】D 【解析】 【分析】接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。 【详解】A、一般发酵食品中的酵母菌细胞中不能合成半乳糖酶，因此不能利用半乳糖，A正确； B、平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，B正确； C、马奶酒酵母菌株能优先利用半乳糖的原因是其发生了基因突变，C正确； D、乳酸菌是厌氧型细菌，只能进行乳酸发酵，D错误。 故选D。 4. 腐乳是我国传统发酵食品，具有很高的营养价值。某科研机构研究了腐乳生产过程中不同浓度的食盐对腐乳中氨基酸含量的影响。下列叙述正确的是（ ） A. 发酵时间和食盐浓度均可影响腐乳中氨基酸的含量 B. 腐乳生产过程中，发挥主要作用的微生物是曲霉菌 C. 经过发酵后，豆腐中的蛋白质均会被分解为氨基酸 D. 食盐浓度越高，对杂菌的抑制越强，对制作腐乳越有利 【答案】A 【解析】 【分析】腐乳制作过程中多种微生物参与了发酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生蛋白酶能将豆腐中的蛋白质转化成小分子肽和氨基酸，脂肪酶将脂肪转化成甘油和脂肪酸。 【详解】A、本实验的自变量是发酵时间和食盐浓度，从图中可以看到，在同一发酵时间的不同食盐浓度，氨基酸含量不同；在同一食盐浓度的不同发酵时间，氨基酸含量也不同，所以发酵时间和食盐浓度均可影响腐乳中氨基酸的含量，A正确； B、生产腐乳发挥主要作用的微生物是毛霉，B错误； C、经过发酵，豆腐中的蛋白质被分解为小分子肽和氨基酸，C错误； D、高浓度食盐能抑制微生物生长，但同样会影响腐乳口感，这对制作腐乳不利，D错误。 故选A。 5. 利用传统发酵技术制作的果酒、果醋、腐乳、泡菜极大地丰富了人们的饮食，它们是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是（　　） A. 用白萝卜制作泡菜的过程中，定期揭开泡菜坛盖子可缩短腌制时间 B. 变酸的酒表面有白膜出现，是醋酸菌大量繁殖形成的 C. 制作果醋、泡菜、果酒的过程中应先通气培养微生物，再密封发酵 D. 腐乳制作过程主要利用的是毛霉产生的淀粉酶和脂肪酶 【答案】B 【解析】 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌；参与果醋制作的微生物是醋酸菌，醋酸菌能将糖或酒精转变成醋酸；参与腐乳制作的微生物有多种，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要是毛霉；参与泡菜制作的微生物是乳酸菌。 【详解】A、泡菜制作利用的是乳酸菌在无氧条件下能将葡萄糖分解成乳酸的原理，需创造无氧条件进行发酵，即泡菜制作过程中不能定期揭开泡菜坛盖子，A错误； B、白膜位于酒的表面且带有酸味，是醋酸菌大量繁殖形成的，B正确； C、泡菜制作利用的是乳酸菌在无氧条件下能将葡萄糖分解成乳酸的原理，需要密封发酵；果醋制作利用的是醋酸菌在有氧条件下能将糖或酒精转化为醋酸的原理，全过程需要通氧；果酒制作时，先通气培养，使酵母菌在有氧条件下大量增殖，再在密封无氧条件下将葡萄糖转化为酒精；故只有制作果酒时需通气培养微生物，再密封发酵，C错误； D、腐乳制作过程中主要利用的是毛霉等产生的蛋白酶和脂肪酶，D错误。 故选B。 6. 某生物兴趣小组制作泡菜时，对发酵早期发酵液中的乳酸菌含量和亚硝酸盐含量进行了测定，结果如图。分析错误的是（　　） A. 前2天乳酸菌含量变化慢，可能是坛子内的O2抑制了乳酸菌繁殖 B. 前4天亚硝酸盐的含量变化快，可能是其他细菌大量繁殖导致的 C. 第6天后亚硝酸盐含量变化缓慢，可能是大量乳酸抑制杂菌活动 D. 为减少泡菜中亚硝酸盐的含量，该泡菜腌制8天左右食用最佳 【答案】D 【解析】 【分析】泡菜制作的菌种是乳酸菌，属于厌氧型细菌，在无氧条件下，将葡萄糖分解成乳酸；硝酸盐在硝酸盐还原细菌作用下产生大量亚硝酸盐，在特定条件下（适宜的PH、温度等），亚硝酸盐转化成具有致癌、致畸和致突变的亚硝胺，对人体有害。 【详解】A、前2天坛子内氧气含量较高，而乳酸菌是厌氧型微生物，所以繁殖速度慢，A正确； B、前4天由于其他细菌大量繁殖，导致亚硝酸盐含量升高，B正确； C、第6天后氧气浓度降低，乳酸菌大量繁殖，导致其他杂菌无法生长，所以亚硝酸盐含量变化缓慢，C正确； D、第8天该泡菜亚硝酸盐含量最高，不适宜食用，D错误。 故选D。 7. 某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下，下列说法不正确的是（　　） A. 图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，能生长的微生物可能不能合成脲酶 B. 若每支试管稀释10倍，则图中a的数值应为2.7，5号试管共稀释了 106倍 C. 图中左上角培养基菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的 D. 若仅以4号试管接种培养基计数，5g该土壤中含分解尿素菌的估算数目是1.4×108个 【答案】D 【解析】 【分析】1.、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （1）分离原理： ①土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。 ②配制以尿素为唯一氮源的选择培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。 （2）鉴定原理 分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，在培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，则可确定该细菌能分解尿素。 2、稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，还能用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多个活菌。 【详解】A、分离土壤中分解尿素的细菌时，应配制以尿素为唯一氮源的固体培养基，能生长的微生物可能不能合成脲酶，如固氮菌能利用氮源生存，但其不能合成脲酶，A正确； B、若每支试管稀释10倍，则将0.3mL上清液与a mL无菌水混合稀释10倍，需要a的数值为2.7。5g土壤加入50mL无菌水中被稀释了10倍，则5号试管共稀释了106倍，B正确； C、涂布不均匀会造成的培养基中菌落分布不均匀，可能会造成菌落连成一片，C正确； D、使用稀释涂布平板法进行计数的计算方法为：每克样品中的菌落数=（C/V）×M，其中C表示某一稀释度的平板上生长的平均菌落数，V表示涂布平板时稀释液的体积，M表示稀释倍数。若仅以4号试管接种培养基计数，5g该土壤中含有分解尿素的细菌的估算数目=（275+285+280）÷3÷0.2×105×5=7×108个，D错误。 故选D。 8. 基于K-B纸片扩散法进行金黄色葡萄球菌的抗生素药敏实验，分别用含青霉素（P）、克林霉素（DA）、红霉素（E）、氯霉素（C）的药敏纸片处理菌板，抑菌圈的直径大小如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 由图可知，金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性大小为DA>E>C>P B. 若想增加金黄色葡萄球菌对P的耐药性，需从抑菌圈边缘挑选菌落，多次重复实验 C. 在抗生素的选择作用下，金黄色葡萄球菌产生了耐药性变异 D. 金黄色葡萄球菌产生耐药性对人类来说是有害变异，对其本身来说是有利变异 【答案】C 【解析】 【分析】K-B纸片扩散法实验原理：若病原菌对各种抗生素敏感，在该抗生素纸片周围会出现透明圈，透明圈越大，说明病原菌对抗生素越敏感，若病原菌对各种抗生素不敏感，则不会出现透明圈。 【详解】A、图中抑菌圈的大小依次为P>C>E>DA，抑菌圈越大说明金黄色葡萄球菌对该抗生素的耐药性越低，所以耐药性的大小为DA>E>C>P，A正确； B、抑菌圈边缘生长的细菌可能是耐药菌，若想增加金黄色葡萄球菌对P的耐药性，需从抑菌圈边缘挑选菌落，多次重复实验，B正确； C、金黄色葡萄球菌突变产生耐药性，抗生素对其进行选择，不是因为选择才产生耐药性，C错误； D、变异是否有利是相对的，金黄色葡萄球菌产生耐药性对人类来说是有害变异，对其本身来说是有利变异，D正确。 故选C。 9. 下表为某培养基的配方，下列叙述正确的有（ ）项 成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 蒸馏水 琼脂 含量 10g 10g 2g 0.4g 0.065g 1000mL 20g ①物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基 ②培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨 ③该培养基调节合适的pH和消毒后就可以接种使用 ④该培养基可以用于培养HIV病毒 A. 1项 B. 2项 C. 3项 D. 4项 【答案】B 【解析】 【分析】分析表格，此培养基中有琼脂，是固体培养基，伊红-美蓝可以鉴别大肠杆菌，是鉴别培养基。 【详解】①该培养基中含有琼脂，说明是固体培养基，含有伊红美蓝指示剂，说明可以鉴定大肠杆菌，①正确； ②配方中的葡萄糖是主要的碳源，蛋白胨是主要的氮源，②正确； ③该培养基调节合适的pH和灭菌后就可以接种使用，③错误； ④病毒只能寄生于活细胞才能生存，该培养基不能用于培养HIV病毒，④错误； 综上所述，共有2项正确，即B正确。 故选B。 10. 赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌在科研领域中具有广泛的应用价值。下图表示科研人员利用野生大肠杆菌，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷型突变菌株的流程图，其中A、B、C为操作步骤。已知野生大肠杆菌可以在普通培养基上生长繁殖，但赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌不能，下列叙述错误的是（ ） 注：原位影印是指用无菌绒布轻盖在已经长好菌落的培养基②上，然后不转动任何角度，将②上的菌落按原位“复印”至新的培养基③和④上。 A. 培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂 B. 野生大肠杆菌在紫外线的照射下，可提高基因突变的频率 C. 培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸 D. 培养基④上，乙是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来 【答案】D 【解析】 【分析】1、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 2、培养基种类：培养基按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。 3、微生物的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 【详解】A、培养基①是液体培养基，培养基②是固体培养基，培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂，A正确； B、野生大肠杆菌在紫外线的照射下，可提高基因突变的频率，B正确； C、培养基③是不添加赖氨酸的普通培养基，培养基④是添加赖氨酸的普通培养基，所以培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸，C正确； D、培养基④上，甲能在④普通培养基上生长，但不能在③不添加赖氨酸的普通培养基上生长，因此甲是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来，D错误。 故选D。 11. 为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48 h，结果如图所示。下列说法错误的是（ ） A. 配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，还要调节pH才能用于接种 B. 待高温灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右后，再进行倒平板 C. 在超净工作台上和酒精灯火焰旁进行操作，是为了防止杂菌污染 D. 手掌上的某些微生物在该培养基上并没有生长繁殖形成菌落 【答案】A 【解析】 【分析】1、制备牛肉膏蛋白胨培养基：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 2、培养基除了含有主要营养物质之外，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。例如培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，且培养基一般先调节pH后进行灭菌。 【详解】A、配制牛肉膏蛋白胨培养基时，先调节pH，再进行高压蒸汽灭菌，A错误； B、待高温灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右后，再进行倒平板，此温度下培养基不烫手，便于后续操作，且培养基尚未凝固，容易倒出，B正确； C、超净工作台在使用前经紫外线消毒，而酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了防止杂菌污染，要在超净工作台上和酒精灯火焰附近进行操作，C正确； D、牛肉膏蛋白胨培养基虽然营养齐全，但并非所有微生物均可在其上生存，如病毒则无法在该培养基上生长繁殖，D正确。 故选A 12. 微生物纯培养的两种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 图2中每克土样中的菌体数目为1.7×109个 B. 进行平板划线操作之前，需要用酒精对接种环进行灭菌处理 C. 用稀释涂布平板法测微生物数量时，平板上的统计结果一般用活菌数来表示 D. 为获得纯化培养后的菌种，图1中最好选择Ⅲ区的菌落进行挑取 【答案】D 【解析】 【分析】平板划线法：将已经融化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、由图可知，根据C÷V×M可知，图2中每克土样中的菌体数目为（168+175+167）÷3÷0.2ml×106=8.5×108个，A错误； B、进行平板划线操作之前，需要用酒精对接种环进行浸泡，然后灼烧灭菌，B错误； C、用稀释涂布平板法测微生物数量时，平板上的统计结果一般用菌落数来表示，C错误； D、为获得纯化培养后的菌种，应选择单个独立的菌落挑取菌种，即图1中最好选择Ⅲ区的菌落进行挑取，D正确。 故选D。 13. 细菌的运动性在其致病性和耐药性方面有重要作用，可采用穿刺接种的方法(如图)研究细菌的运动能力。在培养基中添加无色指示剂，脱氢酶可催化指示剂变成红色。下列叙述正确的是（ ） A. 穿刺针不需要进行灭菌处理 B. 红色区域越大，细菌的运动能力越强 C. 红色区域的大小与细菌的繁殖速度无关 D. 琼脂浓度不影响微生物的运动范围 【答案】B 【解析】 【分析】图中所用的方法为穿刺方法，根据题干采用穿刺接种的方法(如图)研究细菌的运动能力，在培养基中添加无色指示剂，脱氢酶可催化指示剂变成红色，所以根据产生的红色区域的大小可以比较细菌的运动能力。 【详解】A、微生物技术的核心是防止杂菌污染，故穿刺针需要进行灭菌处理，A错误； B、脱氢酶可催化指示剂变成红色，红色区域越大，说明细菌的运动能力越强，B正确； C、红色区域越大，说明细菌的运动能力越强，繁殖速度也越快，C错误； D、为不影响菌的运动，应选用半固体培养基，因此琼脂浓度会影响微生物的运动范围，D错误。 故选B。 14. 2023年 4月我国新版《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2022)正式实施，其中对微生物的检出要求如下表。兴趣小组的同学们对某蓄水池进行细菌总数测定，以了解池水是否符合饮用水卫生标准。结合下表分析，下列说法错误的是（ ） 序号 指 标 限 值 1 总大肠杆菌/(MPN/100mL 或 CFU/100mL) 不应检出 2 大肠埃希氏菌/(MPN/100mL 或CFU/100mL) 不应检出 3 菌落总数/(MPN/100mL 或CFU/100mL) 100 MPN表示最可能数， CFU表示菌落形成单位 A. 可采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法对取水样的三角瓶灭菌 B. 培养基中应加入伊红—亚甲蓝以区分大肠杆菌和其他细菌菌落 C. 应将0.1mL 稀释水样滴加到培养基表面并用涂布器涂抹均匀 D. 应将平板倒置后在适宜条件下培养，以减少培养基污染的几率 【答案】C 【解析】 【分析】获得纯净的微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 【详解】A、用三角瓶取水样前，为了防止外来杂菌污染，三角瓶（玻璃制品）可采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌，A正确； B、大肠杆菌的代谢产物能与培养基中的染料伊红—亚甲蓝反应，使菌落呈黑色，所以可根据培养基上的菌落是否呈现黑色来区分大肠杆菌和其他细菌菌落，B正确； C、对某蓄水池进行细菌总数测定，不应对所取的水样进行稀释，C错误； D、为了减少培养基污染的几率，在平板上接种菌液后，应将平板倒置在培养箱里培养，并提供适宜的培养条件，D正确。 故选C。 15. 将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如图所示实验。下列叙述正确的是（ ） A. 实验中接种至基本培养基的方法是平板划线法 B. 基本培养基出现的少量菌落一定是单菌落 C. 基本培养基中包含菌株a和b的生长因子 D. 菌株a和b需要的生长因子有所不同 【答案】D 【解析】 【分析】1、培养基：（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，生长因子等。 2、生长因子：对调节微生物正常代谢所必需的、不能用简单的碳源和氮源自行合成的微量有机物，如维生素等。 【详解】A、根据菌株a和菌株b混合后菌落的分布情况可知，接种至基本培养基时宜用稀释涂布平板法，A错误； B、基本培养基出现的少量菌落不一定都为单菌落，也有可能是重叠的菌落，B错误； C、单独培养菌株a和b时，培养基中均无法生长菌落，而当a和b共同培养时，培养基中有少量菌落产生，因此培养基中无法提供它们单独生长的生长因子，C错误； D、a单独培养和b单独培养均不能生长，a和b混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的特殊营养物质，所需要的生长因子有所不同，D正确。 故选D。 16. 科研人员为了培育出在口感、甜度、水分等方面兼备荔枝A和荔枝B的优点的三倍体荔枝，进行了如图所示的实验流程。下列关于该流程的叙述，错误的是（ ） A. 获得单倍体需用到植物组织培养技术 B. 获得原生质体需用到纤维素酶和果胶酶 C. 获得杂种细胞需用到灭活的病毒 D. 获得三倍体荔枝需经历脱分化和再分化 【答案】C 【解析】 【分析】植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 【详解】A、利用花药离体培养获得单倍体，花药离体培养需用到植物组织培养技术，A正确； B、用纤维素酶和果胶酶可以除去植物细胞的细胞壁，进而获得原生质体，B正确； C、单倍体原生质体和荔枝B原生质体融合成杂种细胞，可采用的融合方法有物理法和化学法，灭活病毒诱导法是诱导动物细胞融合时采用的方法，C错误； D、将杂种细胞培育成三倍体，需用到植物组织培养技术，因此该过程需经历脱分化和再分化，D正确。 故选C。 17. 植物经过基因突变产生了某一优良性状，可采用植物组织培养技术将这一优良性状保留下来，下列相关叙述错误的是（ ） A. 培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B. 培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C. 同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因有可能不同 D. 在植物组织培养全过程中应提供充足光照、营养和适宜的温度、pH等 【答案】D 【解析】 【分析】植物组织培养过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成芽、根等，进一步发育成植株，植物组织培养技术的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、蔗糖属于二糖，属于能源物质，培养基中添加蔗糖可以提供营养和调节渗透压，A正确； B、决定分化和脱分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要，所以培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化，B正确； C、同一株绿色开花植物不同部分的细胞经培养获得的愈伤组织基因组成不一定相同，如花粉细胞和体细胞培养形成的愈伤组织基因组成不同，C正确； D、脱分化过程中植物还不能进行光合作用，不用给予充足光照，D错误。 故选D。 18. 狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉且其细胞中的黄酮类化合物可入药。某科研小组利用植物细胞工程对狼爪瓦松进行培养，过程如图所示。下列有关分析正确的是（ ） A. 过程①前用酒精对植物甲进行消毒，就能保证外植体不被污染 B. 过程⑥中黄酮类化合物可通过植物细胞培养获得，该过程体现了植物细胞的全能性 C. ·除了植株丙，植株乙、丁细胞核遗传物质相同 D. 过程③一般需要给予愈伤组织适当强度的光照 【答案】D 【解析】 【分析】根据图分析可知：过程①为接种外植体，②为诱导脱分化形成愈伤组织，③为诱导再分化，④为诱变育种，⑤为植物体细胞杂交，⑥为植物细胞培养。 【详解】A、过程①前需要用75%酒精和次氯酸钠对植株甲进行消毒，以保证外植体不被污染， A错误； B、过程⑥利用愈伤组织分裂能力强的特点可大量获得黄酮类化合物，没有培育成相应植株，不能体现其全能性，B错误； C、植株丙经历了诱变处理，基因发生了突变，遗传物质与甲植株不同；植株乙是通过植物组织培养过程获得，属于无性繁殖，基因型不变，植株乙和植株甲细胞核遗传物质相同；植物丁是将原生质体进行了融合，则遗传物质翻倍与甲植株不相同，因此植株乙、丁细胞核遗传物质也不相同，C错误； D、过程③为诱导再分化，一般需要给予愈伤组织适当强度的光照，D正确。 故选D。 19. 研究人员以某病毒的外壳蛋白A为抗原制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 限制酶主要来源于原核生物，因为原核生物中含有限制酶的识别序列 B. 可用抗原—抗体杂交法检测转基因工程菌是否成功翻译出蛋白A C. 将纯化的蛋白A多次注射到小鼠体内，是为了促进小鼠产生更多的抗体 D. 杂交瘤细胞筛选和单克隆抗体筛选的目的和原理均相同 【答案】B 【解析】 【分析】在制备单克隆抗体时，首先要给小鼠免疫，产生相应的浆细胞，然后将浆细胞与骨髓瘤细胞融合，经过选择培养基两次筛选，最后获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。在单克隆抗体的制备过程中，使用了动物细胞培养和动物细胞融合等动物细胞工程技术。单克隆抗体制备的两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）；②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。 【详解】A、限制酶主要来源于原核生物，因为原核生物 DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰，A错误； B、 可以利用抗原—抗体杂交法检测转基因工程菌是否成功翻译出蛋白A，B正确； C、将纯化的蛋白A多次注射到小鼠体内，是为了促进小鼠产生更多的B淋巴细胞，C错误； D、杂交瘤细胞筛选原理是在特定培养基上只有杂交瘤细胞能生长，从而筛选出各种杂交瘤细胞；单克隆抗体筛选是利用抗体和抗原特异性结合的原理筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，两者的的目的和原理均不同，D错误。 故选B。 20. 用DNA重组技术可以赋予生物新的遗传特性，在此过程中需要使用多种工具酶，其中3种限制酶的切割位点如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 限制酶和DNA连接酶作用的均是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键 B. EcoRI酶切割后的DNA片段可以用T4DNA连接酶连接 C. EcoRV酶切割后的DNA片段可以用E．coliDNA连接酶连接 D. 经EcoRI酶和MunI酶切割后产生的两个DNA片段可进行连接 【答案】C 【解析】 【分析】E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端；T4DNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端。 【详解】A、限制酶能切开磷酸二酯键，DNA连接酶是催化DNA片段的连接，形成的是磷酸二酯键，A正确； B、EcoRI酶切割后的DNA片段为黏性末端，可用T4DNA连接酶连接，B正确； C、EcoRV切出的为平末端，应用T4DNA连接酶连接，C错误； D、经EcoRI酶和MunI酶切割后产生的末端相同，因此两个DNA片段可进行连接，D正确。 故选C。 21. 检测和筛选是生物技术中的重要环节。下列叙述正确的是（ ） A. 制备单克隆抗体过程中第一次和第二次筛选的原理相同 B. 基因工程中利用含抗生素的培养基筛选出的受体细胞不一定含有重组质粒 C. 检测目的基因能否稳定遗传的关键是看目的基因是否成功构建为基因表达载体 D. 只要检测到目的基因成功表达出蛋白质，就证明基因工程取得成功 【答案】B 【解析】 【分析】基因工程中标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 【详解】 A、单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是筛选出针对目标抗原的抗体为阳性的杂交瘤细胞，两次的原理不同，A错误； B、基因工程中利用含抗生素的培养基筛选出的受体细胞不一定含有重组质粒 ，有可能是只含有质粒的受体细胞，B正确； C、检测目的基因能否稳定遗传的关键是看目的基因有没有整合到受体细胞的染色体DNA上，C错误； D、在生物体内检测到了该基因对应的蛋白质且生物体表现出了相应的性状，才证明基因工程取得成功，D错误。 故选B。 22. 基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等方面，展示出广阔的前景。下列有关基因工程的成果及应用的叙述不正确的是（　　） A. 基因工程能生产食品工业用酶、氨基酸和维生素等 B. 用转基因动物作为器官移植的供体时，导入某种调节因子以抑制抗原决定基因的表达 C. 基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物 D. 基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因表达发挥功能，以达到治疗的目的 【答案】D 【解析】 【分析】基因工程是指按人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外重组DNA分子和转基因技术，获得人们需要的新的生物类型和生物产品。其基因改变的方向是认为决定的。 【详解】A、利用基因工程菌除了可以生产药物，还能生产食品工业用酶、氨基酸和维生素等，A正确； B、用转基因动物作为器官移植的供体时，导入的调节因子也属于目的基因，可以抑制抗原合成，B正确； C、基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物，从而提高经济效益，C正确； D、基因治疗是指用正常基因取代或修补患者细胞中有缺陷的基因，从而达到治疗疾病的目的，D错误。 故选D。 23. 重组PCR 技术是一项新的PCR技术，可将原来两个不相关的DNA 连接起来，成为一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1 基因片段，用重组PCR 技术构建了LTB-ST1 融合基因，融合基因的制备过程如图所示。下列相关分析正确的是（ ） A. PCR 实验中，离心管、缓冲液和蒸馏水使用前要进行消毒 B. 在设计引物时，P1、P2和P3的部分碱基都能互补配对 C. 得到的多个杂交链都能作为模板用来延伸子链，以扩增融合基因 D. 由杂交链延伸生成融合基因的过程中，不需要再另外添加引物 【答案】D 【解析】 【分析】PCR技术： （1）定义：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术； （2）原理：DNA复制； （3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物； （4）条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、能量； （5）过程：高温变性，DNA双链解旋；低温复性，引物与互补链DNA结合；中温延伸，在耐高温的DNA聚合酶作用下合成子链。 【详解】A、PCR实验中，为防止外源DNA等因素的污染，使用的微量离心管、缓冲液、蒸馏水等在使用前必须进行灭菌处理，A错误； B、防止引物的碱基配对影响扩增结果，引物P1与引物P2的碱基序列不能互补，B错误； C、DNA子链是从5′端向3′端延伸，只有杂交链L、S才能作为模板用来延伸子链，以扩增融合基因，C错误； D、杂交链延伸生成LTB-ST1融合基因的过程中，不需要加入引物，两条母链的起始位置的碱基序列即为引物，可以作为子链合成的引物，D正确。 故选D。 24. 生物技术与工程学相结合，可研究、设计和加工生产各种生物工程产品。下列有关叙述正确的有（ ） ①用花药培养得到单倍体植株需要用到植物组织培养技术 ②由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用 ③胚胎移植作为胚胎工程的最后技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用 ④PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，而后常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物 ⑤利用基因工程技术的生物反应器，可以让哺乳动物批量生产相应的药物 ⑥蛋白质工程仅以蛋白质结构为基础，逆中心法则进行，就可以改造或制造新的蛋白质 A. 2项 B. 3项 C. 4项 D. 5项 【答案】D 【解析】 【分析】PCR技术是对体内DNA复制过程的模仿，也需要模板、原料、酶和引物等。待扩 增的DNA分子是模板，原料是4种脱氧核苷三磷酸，即dNTP，N代表A、T、G、C四 种碱基。PCR过程 包括多次循环，每个循环分为3个步骤。①变性：模板DNA 双链在高温下 （90 ℃） 氢键断裂，解旋成2条 DNA 单链，这个过程称为变性。 ②退火：温度降低（50 ℃）后，2个引物分别与各自互补的DNA单链结合，称为 退火。③延伸：分别以两条DNA单链为模板，4种脱氧核苷三磷酸为原料，耐高温的 DNA 聚合酶在适宜的温度（约72 ℃）下，以引物与模板形成的小段DNA双链区为 起点，催化合成一条新的DNA互补链。 【详解】①用花药需要经过脱分化，再经过再分化，培养得到单倍体植株，所用技术植物组织培养技术，①正确； ②iPS细胞为多功能干细胞，能分裂分化产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用，②正确； ③胚胎移植作为胚胎工程的最后技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用，例如胚胎分割技术，可通将胚胎均等分割后经胚胎移植实现无性繁殖，③正确； ④PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，PCR的产物的分子量大小等不同，因此常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物，④正确； ⑤利用基因工程技术的制造的生物反应器，可以利用哺乳动物源源不断地批量生产相应的药物，例如乳腺生物反应器，可通过乳腺细胞批量合成分泌相应药物，再从乳汁中获取，⑤正确； ⑥蛋白质工程是指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要，⑥错误。 故选D。 25. 实验人员将一段外源DNA片段（包含约850个基因）与丝状支原体（一种原核生物）DNA进行重组后，植入大肠杆菌，制造出一种“新的生命”。该生物能够正常生长、繁殖。下列有关该技术应用的叙述中，错误的是（　　） A. 该技术可以制造某些微生物，用于生产药品、制造染料、降解有毒物质等 B. 由于存在生殖隔离，因此人造生命进入自然界并不会破坏生物多样性 C. 人造生命扩散到自然界，有可能造成环境安全性问题 D. 此项技术可能被用来制造生物武器，从而危及人类安全 【答案】B 【解析】 【分析】根据题中“将一段外源DNA片段(包含约850个基因)与丝状支原体(一种原核生物)的DNA进行重组后，植入大肠杆菌”，属于基因工程，原理是基因重组。 【详解】A、通过导入不同的目的基因，可用于生产药品、制造染料、降解有毒物质，A正确； B、“新的生命”是一个新的物种，由于其没有天敌，进入自然界后，会破坏生物的多样性，B错误； C、人造生命扩散到自然界，竞争能力强，因此能成为“入侵的外来物种”，有可能造成环境安全性问题，C正确； D、利用基因工程技术，在一些不致病的微生物体内插入制备基因，或在一些致病的细菌或者病毒中插入能对抗普通疫苗或药物的基因，就会培育出新的致病微生物或新的抗药性增强的致病微生物，这些微生物可制成生物武器，D正确。 故选B。 二、非选择题 （共50分,每空2分）。 26. 酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题： （1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，及时对培养基进行分装，并进行__________________________灭菌。 （2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入在培养皿的_____________上做好标记的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约为_____________的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后_____________培养。 （3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。操作时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_____________________ 。下列关于相关操作叙述合理的有________。 a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌 b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落 c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量 d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株供应。 （4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和__________供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞的计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_________色细胞的个数应不少于____________才能达到每毫升5×109个活细胞的预期密度。 【答案】（1）高压蒸汽灭菌##湿热灭菌法 （2） ①. 皿底 ②. 50℃ ③. 倒置 （3） ①. 随着划线次数的增加使细菌的数量逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖形成的菌落 ②. a、b、d （4） ①. 氧气 ②. 无 ③. 50 【解析】 【分析】配置培养基的基本操作步骤为：称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板。获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。 因此，无菌技术是发酵工程的重要技术之一，是指在操作过程中，保持物品与操作区域的无菌状态并不被微生物污染的技术，其核心是灭菌。常见的灭菌方法有干热灭菌法、湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌）。 【小问1详解】 对于培养基进行灭菌常采用高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）。所以配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，及时对培养基进行分装，并进行高压蒸汽灭菌。 【小问2详解】 对培养皿进行标记时要标记在培养皿的皿底上，步骤③是倒平板，倒平板时温度控制50℃左右，在步骤③中将温度约为50℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养，倒置培养主要为了防止皿盖上的冷凝水落入培养基。 【小问3详解】 操作时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是随着划线次数的增加使细菌的数量逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖形成的菌落。相关操作合理的有：a、b、d。a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防杂菌污染，a正确；b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落，若培养基表面划破会导致菌落聚集，b正确；c.挑取菌落时，应挑取单个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量，c错误；d.培养基中甲醇浓度越高，能够生存下来的酵母菌利用甲醇的能力越强，所以可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株供应，d正确。 【小问4详解】 步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和氧气供应，在有氧条件下酵母菌能大量的繁殖。台盼蓝染液染的死细胞，正常活细胞都是无色的，已知血细胞的计数板25×16型：每毫升菌液中待测样本总数=80个小方格内总数/80×400×104×稀释倍数。发酵液稀释1000倍后，台盼蓝等体积加入，所以实际稀释倍数是2000倍。带入可得：5×109=80个小方格内总数/80×400×104×2000，理论上无色细胞的个数应不少50个。 27. 如图为细胞融合的简略过程，请据图回答： （1）若 A、B 是植物细胞，在细胞融合之前已处理，除去了细胞壁；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是______________。 （2）若 A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用_______________技术把D培养成植株。 （3）若 A、B是动物细胞，一般取自_______________，然后用_______________使其分散开来；A、B到C的过程中常用的但不能用于植物细胞培养的手段是_______________。 （4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了_____________。注射后小鼠身体产生了相应的免疫反应，生成的抗体过程有哪些具膜细胞器直接参与__________________， 图中B为_______________________。 【答案】（1）离心、振动、电激 （2）植物组织培养 （3） ①. 幼龄动物组织或胚胎 ②. 胰蛋白酶 ③. 病毒诱导 （4） ①. 相应的抗原 ②. 内质网和高尔基体 ③. 骨髓瘤细胞 【解析】 【分析】1、若A、B为植物细胞，则图示为植物体细胞杂交过程，在细胞融合之前应用纤维素酶、果胶酶去除植物细胞壁，C为正在融合的细胞，诱导原生质体融合时常用化学法（聚乙二醇），形成杂种细胞后要利用植物的组织培养技术将细胞培养成植株。 2、若A、B是动物细胞，则一般取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，然后使用胰蛋白酶处理使之分散成单个细胞，在进行培养，在进行动物细胞融合时，诱导方法有化学法、物理法和生物法（灭活病毒），植物体细胞杂交则只能使用化学法和物理法。 3、单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。 【小问1详解】 植物体细胞杂交时，在细胞融合之前先要去除细胞壁，常用酶解法，即用纤维素酶和果胶酶处理细胞；诱导植物细胞融合的方法包括：物理法（电刺激、振动、离心）和化学法（PEG）。 【小问2详解】 若 A、B是植物细胞，将杂种细胞D培养成杂种植株还需采用植物组织培养技术。 【小问3详解】 若A、B是动物细胞，一般取幼龄动物组织或胚胎，因为其生命力旺盛，细胞分裂能力强；用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理使其分散开形成单个细胞；动物细胞融合过程，不同于植物细胞融合的手段是用灭活的病毒做诱导剂。 【小问4详解】 制备单克隆抗体的细胞来源是效应B细胞和骨髓瘤细胞，故若A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了相应的抗原。抗体属于分泌蛋白，由浆细胞分泌，生成抗体的过程是：最初是在核糖体中由氨基酸形成多肽，然后进入内质网进行加工，形成有一定空间结构的蛋白质，内质网以“出芽”形成囊泡，包裹着要运输的蛋白质到达高尔基体，并实现膜融合，最后以胞吐的形式出细胞，此过程还有线粒体参与供能，但直接参与的具膜细胞器只有内质网和高尔基体。图中B是骨髓瘤细胞，D是杂交瘤细胞。 28. 基因Pdxl对胰腺定向发育和成熟有重要作用。科研人员将Pdx1基因构建到含Tet诱导型启动子的基因表达载体（GV347）中，转入小鼠胚胎干细胞（ES），以期实现Pdx1基因在胚胎干细胞中的定时和定量表达。回答下列问题： （1）科研人员通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为_____，其应用前景优于胚胎干细胞的原因是_____（答出1点即可）。 （2）从胰腺细胞中提取DNA，利用特定引物PCR扩增获得Pdxl基因，电泳检测发现除目标序列外还有很多非特异性条带，请从引物的角度分析出现此情况的原因可能是_____。 （3）基因表达载体（GV347）如图所示，相关限制酶的识别序列及切割位点如表所示（注：箭头表示切割位点）。科研人员利用两种酶切割Pdxl基因和质粒，为了成功构建基因表达载体，应该选择_____（填“E.coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）将Pdx1基因和质粒连接起来，理由是_____。为使基因表达载体能成功表达Pdx1蛋白和绿色荧光蛋白的融合蛋白，应将_____（填“含”或“不含”）终止子的Pdx1基因插入到GV347的限制酶切割位点。 名称 识别序列和切割位点 PvitⅡ CAG↓CTG GTC↑GAC EcoRⅠ G↓AATTC CTTAA↑G 注：Tet诱导的启动子在四环素存在的条件下，可以激活基因表达。 （4）将重组载体导入ES，然后筛选出成功导入载体的ES。当四环素存在时，有利于RNA聚合酶与_____结合，驱动下游序列转录出mRNA．从细胞水平检测Pdxl基因是否成功翻译的方法是在荧光显微镜下观察ES，若_____，则说明目的基因成功翻译。 【答案】（1） ①. iPS细胞 ②. 诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可来源于病人自身体细胞 （2）复性温度过低会造成引物与模板的结合位点增加，引物和模板不完全配对 （3） ①. T4DNA连接酶 ②. Pvit Ⅱ切割的是平末端，而EcoR Ⅰ切割的是黏性末端，而T4DNA连接酶既能连接平末端，又能连接黏性末端 ③. 不含 （4） ①. Tet诱导的启动子 ②. 发出绿色荧光 【解析】 【分析】重组DNA技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成； （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等； （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样； （4）目的基因的检测与鉴定 【小问1详解】 科研人员通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为iPS细胞，因为诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可来源于病人自身体细胞，因此iPS细胞应用前景优于胚胎干细胞。 【小问2详解】 从胰腺细胞中提取DNA，利用特定引物PCR扩增获得Pdxl基因，电泳检测发现除目标序列外还有很多非特异性条带，非特异性产物增加的原因可能是复性温度过低会造成引物与模板的结合位点增加，引物和模板不完全配对，故可通过提高复性的温度来减少非特异性条带的产生。 【小问3详解】 目的基因应插入到质粒的启动子和终止子之间，所以为了成功构建基因表达载体，应该选择Pvit Ⅱ和EcoR Ⅰ来切割Pdxl基因和质粒，由于PvitⅡ切割的是平末端，而EcoRⅠ切割的是黏性末端，故选择T4DNA连接酶。为使基因表达载体能成功表达Pdx1蛋白和绿色荧光蛋白的融合蛋白，应将不含终止子的Pdx1基因插入到GV347的限制酶切割位点，原因是Pdx1蛋白和绿色荧光蛋白共用一个启动子和终止子，因此Pdx1基因不含终止子，否则绿色荧光蛋白基因无法表达。 【小问4详解】 将重组载体导入ES，然后筛选出成功导入载体的ES。当四环素存在时，有利于RNA聚合酶与Tet诱导的启动子结合，驱动下游序列转录出mRNA。由于目的基因与绿色荧光蛋白基因形成融合基因，因此可通过显微镜检测是否发出绿色荧光来反映目的基因是否翻译，若发出绿色荧光，则说明目的基因成功翻译。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $$