第49讲 基本操作程序（第2课时）-2025届高考生物一轮高效复习优质课件

第49讲 基因工程的基本工具 和基本操作程序 1. 基因工程(重组DNA技术)的基本工具 2. 基因工程的基本操作程序 3. DNA的粗提取与鉴定、DNA片段的扩增及电泳鉴定 基因工程的基本操作程序 将目的基因导入受体细胞 目的基因的筛选与获取 基因表达载体的构建 目的基因的检测与鉴定 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达 （核心） 大本330 基因工程的基本操作程序 1．目的基因的筛选与获取 通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 大本330 (主要指cDNA文库) 基因文库 基因组文库： 部分基因文库： 包含某种生物部分基因 包含某种生物全部基因 cDNA：经逆转录后与RNA互补的DNA 图中基因组文库________(小于/等于/大于)cDNA文库 大于 (主要指cDNA文库) 基因文库 基因组文库： 部分基因文库： 包含某种生物部分基因 包含某种生物全部基因 cDNA：经逆转录后与RNA互补的DNA 基因工程的基本操作程序 1．目的基因的筛选与获取 通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因 大本330 利用PCR获取和扩增目的基因 PCR技术： PCR是_______________的缩写，是一项根据________________ 的原理，在_____提供参与DNA复制的_________与_________，对______________________进行_________的技术 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 体外 各种组分 反应条件 目的基因的核苷酸序列 大量复制 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 体外（PCR扩增仪） 对目的基因的核苷酸序列进行大量复制 原理 操作环境 目的 全称 PCR扩增仪 大本330 基因工程的基本操作程序——1.目的基因的筛选与获取 基因工程的基本操作程序——1.目的基因的筛选与获取 利用PCR获取和扩增目的基因 利用DNA的热变性原理 大本330 ①在PCR过程中实际加入的原料为dNTP(脱氧核苷三磷酸即dATP、dGTP、dTTP、dCTP)，既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。 ②引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，作为新子链的合成起点，只能结合在母链的3′端，使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。 ④真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。因此，PCR反应缓冲溶液中一般要添加Mg2＋。　　　 引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 3’ 5’ 引物1 3’ 5’ 引物2 引物： 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 引物可以是DNA单链，也可以为RNA单链 ·细胞内的DNA复制通常以RNA单链为引物 ·细胞外（PCR）一般以DNA单链为引物 用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸 引物结合在模板链的3’端 大本330 草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因，应选用的引物组合为： ②④ 草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因，应选用的引物组合为： A 5’ 1. 设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如图)，请分别说明理由。 ①第1组：_________________________________________________________________； ②第2组：_________________________________________________________________。 引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效 引物Ⅰ自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 大本331 参与的组分 在DNA复制中的作用 断开氢键，打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成DNA子链的原料 催化合成DNA子链 DNA母链 4种脱氧核苷酸 90℃以上高温 耐高温的DNA聚合酶 引物 激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶 （2种） 或 Taq DNA聚合酶 1.DNA体外复制（PCR）的条件 使DNA聚合酶能够从引物的3’端 开始连接脱氧核苷酸 PCR 不同的温度：变性、复性和延伸需要不同温度 大本330 缓冲液（含Mg2+） PCR 2.PCR反应过程 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ A.变性 当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链 B.复性 当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 C.延伸 当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 大本330、336 第二轮循环的产物 PCR 2.PCR反应过程 第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物 第二轮循环的产物作为第三轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第三轮的产物 第三轮循环的产物 完成以后，常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物 大本330、336 PCR 2.PCR反应过程 过程归纳： 目的基因DNA__________后__________，______与单链相应互补序列结合；然后以单链DNA为模板在____________作用下进行_____，即将4种____________加到引物的_______，如此重复循环多次。 受热变性 解为单链 引物 延伸 DNA聚合酶 3’端 脱氧核苷酸 每次循环一般可以分为_____、_____、_____三步。 变性 复性 延伸 由于延伸后得到的产物又可以作为下一个循环的_____，因而每一次循环后目的基因的量可以增加_____，即成_____形式扩增（约为2n，其中n为扩增循环的次数）。 模板 一倍 指数 大本330 PCR技术 体内DNA复制 相同点 原则 条件 延伸方向 不同点 解旋方式 场所 延伸用酶 温度 过程 结果 碱基互补配对原则 DNA链作为模板、引物(体内引物RNA、体外引物DNA） 4种脱氧核苷酸为原料 90℃以上高温解旋 解旋酶催化 PCR扩增仪 主要在细胞核 耐高温的DNA聚合酶 DNA聚合酶 需要在不同温度下进行（90℃以上变性、50℃左右复性、72℃左右延伸） 体内温和条件 大量的DNA片段（目的基因） 形成完整的子代DNA 新链都是从5’端向3’端延伸 体外DNA复制（PCR技术）与体内DNA复制条件的比较 或 Taq DNA聚合酶 第一轮循环 第二轮循环 第三轮循环 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 非目的基因序列 目的基因序列 引物 【思考】利用PCR技术扩增目的基因，至少在第几次循环产物中才开始出现双链等长的DNA片段(即出现完整的目的基因)？ 第三次循环 ①n代后，DNA分子有_____个 ②n代后，脱氧核苷酸链数有_______条 ③n代后，含引物的DNA分子有_____个 ④n代后，共消耗________个引物或 含有引物的脱氧核苷酸链数 ⑤n代后，完整的目的基因(或双链等长的DNA)有_______个 2n 2n+1 2n 2n+1-2 2n-2n 呈指数形式扩增（ n次扩增循环后，DNA数量约为2n） PCR结果： 一 二 三 四 五 注意区分DNA分子数和单链数 2.PCR中的数量关系 循环次数 1 2 3 n DNA分子数 2 4 8 2n 只含引物A(或B) 的DNA分子数 1 3 7 2n－1 同时含引物A、B 的DNA分子数 0＝21－2 2＝22－2 6＝23－2 2n－2 共消耗的引物数量 2＝21＋1－2 6＝22＋1－2 14＝23＋1－2 2n＋1－2 大本336 大本330 2．基因表达载体的构建——核心 (1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 基因工程的基本操作程序——2.基因表达载体的构建(核心) (2)组成 提醒　启动子、起始密码子、终止子、终止密码子的区别 大本331 大本331 (3)基因表达载体构建过程 如何构建抗虫棉的基因表达载体？ 两种工具酶分别是？ ① 用一定的限制酶切割载体，使其出现一个切口 ② 用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段 ③ 将切下的Bt基因片段拼接到载体的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子 载体 基因表达载体 基因工程的基本操作程序——2.基因表达载体的构建(核心) 大本331 (3)基因表达载体构建过程 基因工程的基本操作程序——2.基因表达载体的构建(核心) 大本331 ①如果用一种限制酶分别切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶处理后会出现几种产物？(只考虑两两结合) ？ ②质粒与目的基因会发生反向连接 ①质粒、目的基因会发生自身环化连接 单酶切的缺点： (3)基因表达载体构建过程 基因工程的基本操作程序——2.基因表达载体的构建(核心) -G -CTTAA AATTC- G- AATTC-…………-G G-…………-CTTAA 单酶切：质粒与目的基因会发生自身环化、质粒与目的基因会发生反向连接 ②如何防止目的基因和质粒的自身环化以及目的基因的反向连接？ -G -CTTAA GATCT- A- AATTC-…………-A G-…………-TCTAG 双酶切 20.啤酒酵母可使啤酒产生泡沫，将从大麦细胞中提取的 基因导入啤酒酵母的细胞中可使啤酒酵母的产泡沫能力增强。下图是培育产泡沫能力强的转基因啤酒酵母的简图（限制酶识别序列的方向均为从 ）。回答下列问题： （1）利用技术扩增 基因的过程需要依次经过__________________三个过程， 其中温度最高的过程为_______。 变性、复性、延伸 变性 20.啤酒酵母可使啤酒产生泡沫，将从大麦细胞中提取的 基因导入啤酒酵母的细胞中可使啤酒酵母的产泡沫能力增强。下图是培育产泡沫能力强的转基因啤酒酵母的简图（限制酶识别序列的方向均为从 ）。回答下列问题： （2）若 基因两端为平末端，需要在其两端分别添加上的序列为 ______________________________________，质粒上启动子的作用是____________________________。 ①根据上图可知，Bar基因的作用是______；若Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ为5种限制酶及其酶切位点，为使StP5CS基因最终能正确表达，过程①应选用______（填符号）进行酶切；耐盐碱的结球甘蓝转基因植株细胞是以StP5CS基因的______（选填“a链”或“b链”）为模板进行转录，并最终使植株表现出耐盐碱性状。 作为标记基因，便于重组DNA分子的筛选 Ⅲ、Ⅳ b链 大本331 (3)基因表达载体构建过程 基因工程的基本操作程序——2.基因表达载体的构建(核心) 大本329 标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞： 大本333 标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞： 【受体细菌】因不带有抗生素抗性基因，不能在含抗生素的培养基中生长。 【空白质粒和重组质粒】带有抗生素抗性基因的质粒进入受体菌后， 受体菌具有相应的抗性，能生长。 构建表达载体时，在质粒的抗四环素基因上插入目的基因后： 重组质粒中：抗四环素基因失活，只对氨苄青霉素有抗性。 空白质粒中：对两种抗生素都有抗性。 1.用含氨苄青霉素的选择培养基筛选出导入 和 的受体菌。 2.用含四环素的选择培养基筛选出导入空白质粒的受体菌，进一步筛选出导入重组质粒的受体菌。 空白质粒 重组质粒 插入目的基因 双标记基因 步骤 结果和结论 1 2 不带有抗生素抗性基因的受体菌， 不能在含抗生素的培养基中生长。 带有抗生素抗性基因的质粒(空白质粒、重组质粒均有氨苄青霉素抗性基因)进入受体菌后，受体菌具有的抗性，能生长。 导入空白质粒的受体菌：对两种抗生素都有抗性。能生长。 【4、5、7、8、10菌落】 导入重组质粒的受体菌：对四环素没有抗性，不能生长。 【在上图A培养基上选取1、2、 3、6、9菌落】 平板影印法指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度,“复印”至新的培养基上 跳出题海　 如何筛选出含有目的基因的受体细胞 (1)原理：将目的基因插入含有两种抗生素抗性基因的载体时，如果插入某种抗生素抗性基因内部，则会导致该抗生素抗性基因失活。如下图，目的基因插入四环素抗性基因内部，则四环素抗性基因失活。 (2)被转化的细菌有三种：含环状目的基因的细菌、含重组质粒的细菌、含自身环化质粒的细菌。 大本333 跳出题海　 如何筛选出含有目的基因的受体细胞 (3)筛选方法： ·将混合处理后的细菌先放在含氨苄青霉素的培养基上培养，能生长的是含重组质粒的细菌和含自身环化质粒的细菌，如图1、2、3、4、5菌落， ·再利用无菌的绒布影印到含有四环素的培养基上，如图能生长的菌落为2、3、4，则在含四环素培养基上不生长的即为含有目的基因的菌落，如图1、5菌落。 ·最后，可在含氨苄青霉素的培养基上挑取1、5菌落进行培养。 大本333 基因工程的基本操作程序——3.将目的基因导入受体细胞 大本331 只有该步骤没涉及碱基互补配对原则 常用方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——Ca2+处理法 我国科学家独创 (常用) 基因工程的基本操作程序——3.将目的基因导入受体细胞 大本331 只有该步骤没涉及碱基互补配对原则 转化 指目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程 农杆菌转化法 T-DNA 目的基因 构建表达载体 含目的基因的重组Ti质粒 转入农杆菌 含重组Ti质粒的农杆菌 导入植物细胞 表现出新性状的植物 植物细胞 将目的基因插入染色体DNA中 植物组织培养 目的基因插入 Ti质粒的T-DNA上 导入植物细胞 整合到 受体细胞的染色体DNA上 表达 转入 农杆菌 名师解读 (1)农杆菌特点 ①能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。 ②农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T­DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 (2)农杆菌转化法中的两次拼接 第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T­DNA上，第二次拼接(非人工操作)是指插入目的基因的T­DNA拼接到受体细胞的染色体DNA上； 两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入农杆菌，第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T­DNA导入受体细胞。 名师解读：导入的目的基因，可能存在于细胞质中，也可能整合到染色体DNA上。存在于染色体DNA上的目的基因有可能通过花粉传播进入杂草或其他作物中，造成“基因污染”。 大本331 基因工程的基本操作程序——3.将目的基因导入受体细胞 大本331 感受态细胞 原核细胞作为受体细胞的优点： 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少，易于培养 基因工程的基本操作程序——3.将目的基因导入受体细胞 大本331 种类项目 　　 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 受体细胞 - 转化过程 目的基因插入Ti质粒的 T-DNA上→ 农杆菌（Ca2+处理）→ 导入植物细胞→ 整合到受体细胞DNA中→表达 目的基因表达载体提纯→取受精卵→ 显微注射→ 受精卵发育→ 获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→ 感受态细胞→ 表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 农杆菌转化法 花粉管通道法 显微注射法 Ca2＋处理法 受精卵 常用原核细胞 大本331 基因工程的基本操作程序——4.目的基因的检测与鉴定 目的：检查目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性 类型 检测内容 方法 分子水平的检测 个体生物学水平的鉴定 受体细胞的染色体DNA上是否插入了目的基因 目的基因是否转录出了mRNA PCR扩增后电泳 目的基因是否翻译成蛋白质 方法：抗原-抗体杂交技术 原理：抗原-抗体的特异性结合 个体是否具有相应性状 比如抗虫、抗病、抗盐碱等 病原体接种实验等 大本331 基因工程的基本操作程序——4.目的基因的检测与鉴定 目的：检查目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性 大本331 4.目的基因的检测与鉴定——分子水平的检测 PCR扩增技术 转基因生物 提取DNA DNA作为模板 用与目的基因相关的引物进行PCR扩增 是否扩增出目的基因 琼脂糖凝胶电泳鉴定 (1)是否插入目的基因 转基因生物 提取mRNA mRNA cDNA作为模板 逆转录 (2)目的基因是否转录出mRNA 用与目的基因相关的引物进行PCR扩增 琼脂糖凝胶电泳鉴定 是否扩增出目的基因 大本331 4.目的基因的检测与鉴定——分子水平的检测 抗原-抗体杂交技术 抗原抗体的特异性结合 原理： 目的基因是否表达翻译出蛋白质 目的： 提取转基因植物的蛋白质+相应被标记的抗体 → 是否出现杂交带 若出现杂交带，则目的基因成功翻译出蛋白质 个体生物学水平的鉴定具体方法举例 转基因生物 鉴定方法 成功标志 抗虫植物 抗病毒（菌）植物 抗盐碱植物 抗除草剂植物 获取目的基因产物的转基因生物 饲喂害虫（抗虫接种实验） 害虫死亡 病毒（菌）接种实验 未染病 种植在盐碱地 正常生长 喷洒除草剂 正常生长 提取细胞产物与天然产品进行功能活性比较 功能、活性正常 用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未插入目的基因或插入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明插入了抗虫基因并得到表达。 3.目的基因导入受体细胞后，常用____________技术检测目的基因是否翻译出乙肝病毒外壳。 2.草甘膦是一种除草剂，科研人员试图培育抗草甘膦作物，对转基因矮牵牛进行个体生物学水平鉴定，最为合理有效的方法是_______________________________ __________，为了使结果更具有说服力，进行该过程时可选择_______________ 作为对照。 利用一定浓度的草甘膦溶液喷酒转基因 非转基因矮牵牛植株 4.检测 HCD 基因成功表达真菌细胞壁降解酶(HCD)的方法技术是_________ 抗原-抗体杂交 抗原-抗体杂交技术 1.科研人员利用转基因技术将绞股蓝细胞中的抗TMV(烟草花叶病毒)基因转入烟草细胞，培育出了抗TMV的烟草，在个体生物学水平鉴定，需要做________实验，可检测植株是否具有抗性以及抗性的强度。 TMV接种 5.我国科学家将CryIC，CIyIA，Cry9C三个Bt基因用农杆菌转化法导入棉花细胞内，培育出了具有自主知识产权的转基因抗虫棉。 ①科研人员通过PCR检测目的基因是否成功导入，具体步骤是：提取植物基因组 DNA，根据___________________________________________设计引物进行PCR扩增，再用电泳鉴定PCR的产物。 ②除了分子水平的检测外，要判断转基因抗虫棉是否具有抗虫特性，还需要进行个体生物学水平的鉴定，具体做法是____________________________ CryIC，CryIIA，Cry9C三个Bt基因的一段核苷酸序列 给抗虫棉接种害虫，观察害虫的存活情况 /进行抗虫棉的抗虫接种实验 4.提取转基因植株幼嫩根、茎、叶的mRNA，进一步得到cDNA，进行PCR检测，以确定目的基因是否完成了_____。后期为确定转基因植株的抗虫(玉米螟)能力是否增强，请设计相关实验进行个体生物学水平的鉴定并预期结果。 转录 将转基因植株和未转基因的植株分别接种相同数量的玉米螟，几天之后统计两类植株上存活的害虫数量。若转基因植株只有少部分害虫继续存活，未转基因植株上害虫数量基本不变，说明转基因植株的抗虫能力增强 矮牵牛植株 大本331 4.目的基因的检测与鉴定——分子水平的检测 DNA分子杂交技术 碱基互补配对原则 原理： (1)是否插入目的基因 (2)目的基因是否转录出mRNA ①将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记，以此做探针 ②取出转基因生物的基因组DNA ③使探针和转基因生物的基因组DNA杂交，若显示出杂交带，表明目的基因已插入染色体DNA中 是一段带有检测标记（荧光或同位素标记），且顺序已知的，与目的基因能互补的核酸序列（DNA或RNA）。应是单链，若为双链，必须先行变性处理成单链。 基因探针 变性 变性 转基因生 物的DNA 15N 15N 基因探针 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交，若出现杂交带，表明目的基因转录出mRNA 类型 检测内容 方法 分子水平的检测 个体生物学水平的鉴定 受体细胞的染色体DNA上是否插入了目的基因 目的基因是否转录出了mRNA PCR扩增后电泳 设计基因探针进行DNA分子杂交等技术 目的基因是否翻译成蛋白质 方法：抗原-抗体杂交技术 原理：抗原-抗体的特异性结合 个体是否具有相应性状 比如抗虫、抗病、抗盐碱等 病原体接种实验等 大本331 基因工程的基本操作程序——4.目的基因的检测与鉴定 目的：检查目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性 3．利用大肠杆菌可生产出人的胰岛素，联系前面各种细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的胰岛素，可用大肠杆菌吗？ 提示　不可用。大肠杆菌为原核生物，没有真核生物所具有的内质网、高尔基体等结构，无法对核糖体合成的肽链进行加工。 【情境推理·探究】 大本332 4.(2023·中原名校联盟)某质粒上有Sal Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程，如下图所示。请回答下列问题： (1)将目的基因导入植物细胞，采用最多的方法是农杆菌转化法。其中用到的质粒是________；该质粒含有一段特殊的DNA片段，称为________。该方法中农杆菌的作用是_______________________________________________________。 Ti质粒 T-DNA 感染烟草细胞，把目的基因插入到烟草细胞的染色体DNA上　 大本333 (2)在构建重组质粒时，和只用一种酶切割目的基因的两端及质粒相比，选用Hind Ⅲ和Sal Ⅰ两种酶的好处是_________________________________________ _______________________________________________________。 防止目的基因自连和质粒自连，以提高带有目 的基因的重组质粒的合成效率；防止目的基因与质粒反向连接 4.(2023·中原名校联盟)某质粒上有Sal Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程，如下图所示。请回答下列问题： 大本333 (3)含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否已含有目的基因？________(填“是”或“否”)。为什么？_________________________________ __________。 否 含有目的基因的质粒中抗四环素基 因被破坏 4.(2023·中原名校联盟)某质粒上有Sal Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程，如下图所示。请回答下列问题： 大本333 (4)将已经转化的农杆菌进行如下操作，筛选出符合要求的农杆菌。先把转化的农杆菌接种到A培养基中培养，长出菌落后，用无菌牙签挑取A上的单个菌落，分别接种到B(含氨苄青霉素)和C(含四环素和氨苄青霉素)两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于B或C上的哪些菌落中？请在图中相应的位置上圈出来。 答案 大本333 $$