内容正文:
网络构建
腐乳
毛霉(主要)
酵母、曲霉
蛋白质→多肽+氨基酸
脂肪→脂肪酸+甘油
乳酸链球菌
乳酸杆菌
双歧杆菌
亚硝酸盐
硝酸还原菌
硝酸还原酶
激活剂:Mn2+
(必一P38)
柠檬酸→黑曲霉
酱油→黑曲霉
味精→谷氨酸棒状杆菌
计算机控制系统
某些杂菌分泌青霉素酶分解青霉素
中性、弱碱性→谷氨酸
酸性→谷氨酰胺
应用热点:
①微生物肥料-根瘤菌肥
②微生物农药-苏云金杆菌、白僵菌、放线菌(井冈霉素)
③微生物饲料-单细胞蛋白
④纤维废料产酒精、乙烯
极端微生物-提高热敏产品产量
获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染
生物消毒法(P10)利用生物/代谢物
芽孢孢子
牛肉膏蛋白胨培养基→细菌
马铃薯琼脂培养基→真菌
乳酸杆菌→+纤维素
霉菌→酸性 细菌→中性、弱碱性
两种对照:
①普通培养基-涂菌:证明选择培养基有选择作用
②选择培养基-不涂菌:排除培养基污染或操作污染
纤维素分解菌(刚果红)
大肠杆菌(伊红亚甲蓝-深紫色金属光泽)
菌落特征:性状、大小、颜色
相同培养条件下,同种微生物表现出稳定的菌落特征
两个或多个细胞连在一起时,平板上只能观察到一个菌落
网络构建
外植体
消毒方法
完整概念
炼苗
酒精30s
无菌水冲
次氯酸钠30min
无菌水冲
已分化
→失去特有结构功能
→转化成未分化细胞
洗掉培养基→消毒的蛭石/珍珠岩
应用 原理 主要过程 优点
快速繁殖 植物细胞的全能性 脱分化、再分化 ①保持优良品种的遗传特性;②高效快速地实现种苗的大量繁殖
作物脱毒 茎尖病毒极少,植物细胞的全能性 茎尖组织培养 提高作物产量和品质
单倍体育种 植物细胞的全能性、染色体变异 花药离体培养、秋水仙素诱导染色体数目加倍 明显缩短育种年限
突变体的
利用 突变、植物细胞的全能性 愈伤组织诱变处理后组织培养 提高突变率,获得优良性状
细胞产物的工厂化生产 植物细胞增殖 从愈伤组织中提取次生代谢物 不占用耕地,几乎不受季节、天气等的限制
微型繁殖
顶端分生区附近
少毒、无毒≠抗毒
当年→纯种二倍体
使染色体加倍后,隐性性状容易显现→诱变的理想材料
不必需、特定组织器官、一定条件下产生
+血清
培养液和用具灭菌、无菌环境操作
定期更换培养液、清除代谢产物
36.5±0.5、7.2-7.4
95%空气+5%CO2
松盖培养瓶、培养皿
胶原蛋白酶
分散成单个细胞
种类 胚胎干细胞(ES细胞) 成体干细胞
来源 早期胚胎 成体组织或器官
特点 全能性 组织特异性
iPS细胞制备:
①借助载体导入特定基因
②导入特定蛋白
③小分子化合物诱导
来自成纤维细胞、B细胞、T细胞
优点:
不破坏胚胎
避免免疫排斥
所需
每孔≤1个细胞
特异性强、灵敏度高、可大量制备
灭活:物理或化学手段、病毒或细菌
失去感染能力,保留抗原结构
灭火病毒诱导原理:
病毒表面的糖蛋白或某些酶
与细胞膜糖蛋白发生作用
细胞互相凝聚,膜蛋白和脂质分子重新排布
ADC:抗体-接头-药物
去除纺锤体-染色体复合物
人工重新构建的胚胎
具有发育成完整个体的能力
电刺激、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂
使其完成细胞分裂和发育进程
线粒体捐赠治疗
意义:利用克隆技术得到在遗传上相同的克隆猴:
①与人亲缘关系很近,更适合研究人类疾病;
②遗传上相同,用于药物对照实验有利于更准确评估药效
精子获能
卵子成熟
获能液:肝素、Ca2+载体
输卵管MⅡ
防止多精入卵的屏障
受精标志
胎膜、胎盘
孵化:透明带破裂
胚胎移植的优势:充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力
胚胎移植是早期胚胎在相同生理环境条件下,空间位置的转移
胚胎分割:
无性繁殖
体内(二P28)
网络构建
限制酶的选择
限制酶在原核中的作用
大多数识别序列由6个核苷酸组成
DNA聚合酶、DNA连接酶区别(底物、模板)
质粒:裸露、结构简单、独立于细胞核外或拟核外、可自我复制、环状
基因工程的理论基础
DNA的粗提取与鉴定
①提取原理、鉴定原理
②选材(DNA丰富)
③注意:
冷藏的作用
纱布过滤的原因(离心)
鉴定条件、颜色
目的基因:改变受体性状/获得预期表达产物
(主要是编码蛋白质的基因)
Bt抗虫蛋白作用:
→多肽→(碱性环境)害虫肠上皮细胞的特异性受体→细胞膜穿孔(人畜无害)
人工合成、基因文库
克隆载体
诱导型启动子:
诱导物存在时,可激活或抑制目的基因表达
筛选含有目的基因(重组质粒)的受体细胞
构建的目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并遗传给下一代,同时能表达并发挥作用
人工合成、基因文库
克隆载体
转化:目的基因进入受体细胞,并在受体细胞内维持稳定和表达的过程
农杆菌:侵染双子叶/裸子植物
转化方法:①小叶圆片与农杆菌共