2024届高考生物二轮复习：基因工程

1 专题复习：基因工程 一、知识回顾： 1.基因工程的 3种基本工具： 限制酶 、 DNA 连接酶 和 载体 。 2.基因工程操作的基本程序： (1)_目的基因的筛选和获取___; (2)基因表达载体的构建（核心）; (3)将目的基因导入受体细胞_; (4)_目的基因的检测与鉴定_。 一个完整的基因表达载体包括：启动子+目的基因+终止子+标记基因+复制原点， 目的基因的位置在：_在启动子和终止子之间。 3.DNA 粗提取的原理：_DNA 不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精。 4.鉴定 DNA 的方法及现象：_DNA 和二苯胺在沸水浴条件下呈蓝色。 5.筛选合适的目的基因较为有效的方法：从相关的已知结构和功能清晰 的基因中进 行筛选。 6.认识基因结构和功能的技术方法： 测序技术、 序列数据库（GenBank）、序列比对工具（如 BLAST）等为人类找到合适的目的基因提供了更多的机会和可能。 7.获取目的基因的 3条途径： 人工合成 、从基因文库中获得和利用 PCR 获取和扩增 。 8.限制酶的作用： 能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位 的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 9.DNA 连接酶的分类及作用：E.coli DNA 连接酶和 T4 DNA 连接酶，形成磷酸二酯键。 10.与单酶切相比，双酶切的优点是：防止目的基因和质粒的自身环化，防止目的基因和质粒 的反向连接。 11.标记基因的作用：鉴别和筛选含有重组质粒的受体细胞。 12.启动子的作用： RNA 聚合酶的识别和结合的部位，驱动基因转录出 mRNA。 13.终止子的作用： 使转录在需要的地方停下来。 14.PCR 技术的原理：DNA 的半保留复制。 15.PCR 技术的条件：_模板、原料、酶、能量、引物和缓冲液。 16.PCR 技术扩增缓冲液中一般含有 Mg2+ ，作用：激活真核细胞和细菌的 DNA 聚合酶。 17.PCR 技术复制的原料实际为 dNTP （dATP、dTTP、dCTP、dGTP），作用是： 为合成 DNA 子链提供原料和能量 。 18.PCR 技术的三步分别是：变性、复性和退火。 19.PCR 技术引物的本质：单链 DNA，根据_目的基因两端的核苷酸序列设计而成。 20.引物的作用：使 DNA 聚合酶能够从引物的 3’端开始连接脱氧核苷酸。 2 21.PCR 反应中加入引物的原因：DNA 复制不能从头开始，DNA 聚合酶只能从引物的 3'端延伸 DNA 链。 22.鉴定 PCR 扩增产物的的方法：琼脂糖凝胶电泳。 23.PCR 扩增仪的温度升高到 90℃的目的：使双链 DNA 解聚为单链， 变性温度过低可能导致：DNA 双链解聚不完全。 24.PCR 扩增仪的温度下降到 50℃左右的目的：使两种引物通过碱基互补配对与两条单链 DNA 结合，复性温度过高可能导致：不利于引物与模板结合，导致 PCR 过程没有产物； 复性温度 过低可能导致：引物与模板的结合位点增加，非特异性扩增产物增多。 25.PCR 扩增仪的温度上升到 72℃左右的目的：使溶液中的 4种脱氧核苷酸在耐高温的 DNA 聚 合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的 DNA 链，延伸时间过长可能导致：非特异性 扩增产物增加。 26.PCR技术能直接扩增mRNA吗？mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。 27.PCR 技术中的相关计算： 第一轮 第二轮 第三轮 第 n轮 DNA 总数 2 4 8 2n 含引物 A或 B的 DNA 分子数 1 3 7 2n－1 同时含引物 A和 B的 DNA 分子数 0 2 6 2n－2 共消耗引物数 2 6 14 2n+1－2 长链-中链的 DNA 分子数 2 2 2 2 中链-短链的 DNA 分子数 0 2 4 2n－2 短链-短链的 DNA 分子数 0 0 2 2n－2n 28.将目的基因导入 3种受体细胞的方法： ①植物细胞：基因枪法、 花粉管通道法 和 农杆菌转化法 。 ②动物细胞：显微注射法 。 3 ③微生物细胞：Ca2+处理法。 29.在农杆菌转化法中，两次拼接： 第一次拼接：将目的基因拼接到 Ti 质粒的 T-DNA 上; 第二次拼接：插入目的基因的 T-DNA 拼接到受体细胞染色体的 DNA 上。 30.在农杆菌转化法中，两次导入： 第一次导入：_将含目的基因的 Ti 质粒重新导入农杆菌; 第二次导入：含目的基因的 T-DNA 导入受体细胞（非人工操作）。 31.在农杆菌转化法中，目的基因的位置在：_在 T－DNA 中_。 目的基因的检测与鉴定的目的： （1）检查目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性。 （2）检查转基因生物是否培育成功 。 32.目的基因分子水平检测