3.1.1 DNA的粗提取与鉴定-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修三

3.1.1 DNA的粗提取与鉴定 授课教师：XXX 选必三 P74 WxW 1 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (一)原理 1. 粗提取的原理： （2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。 （1）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可初步分离DNA与蛋白质。 DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。 WxW 【资料】当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 利用这一特点， 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀； 或者让其他成分溶解，DNA析出 WxW 补充：(3)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶—水解蛋白质，对DNA没有影响。 ②高温—大多数 在60～80℃时变性沉淀,而 在 80℃以上才会变性。 ③洗涤剂—溶解细胞膜， 去除 ; 但对DNA没有影响。 蛋白质 DNA 脂质、蛋白质 1. DNA 粗提取的原理： WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (一)原理 1. 粗提取的原理： （2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。 （1）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可初步分离DNA与蛋白质。 2. 鉴定的原理： 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此用二苯胺试剂鉴定DNA分子。 DNA + 二苯胺 沸水浴 蓝色 WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (二)材料用具 1. 实验材料的选取： 原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑。选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 2. 实验用具： 【思考】可以使用哺乳动物的成熟红细胞作为实验材料吗？ × 烧杯、量筒、玻璃棒、 研钵、纱布、漏斗、 试管、试管架、试管夹、 酒精灯、陶土网、三脚架、火柴、 刀片和天平等。 WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (二)材料用具 3. 试剂： ①研磨液 ②体积分数为95%的酒精 ③2mol/L 的NaCl溶液 ④二苯胺试剂 ⑤蒸馏水 研磨液和二苯胺试剂的配制方法参见本书附录 2（P117） 含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl 析出DNA 溶解DNA 鉴定DNA，要现配现用 WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤： 取材、研磨 过滤或离心取上清液 预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA NaCl溶液溶解DNA并鉴定 WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤： 1. 取材、研磨： 称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨(可加入少量石英砂)。 研磨的目的： 破碎细胞壁，破坏细胞核，释放出DNA 。 WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤： 抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解。 2.过滤或离心取上清液： 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。 也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。 ①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？ 可能含有核蛋白、多糖等杂质 ②低温放置几分钟的作用： 纱布允许DNA通过，减少DNA损失。不能用滤纸！ WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤： 3. 预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分； 或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。 搅拌时应轻缓、沿一个方向的原因： 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子 →除去RNA、大部分核蛋白和多糖等。 WxW 选必三 P74 实践•探究：DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤： 4. NaCl溶液溶