3.1 细胞培养是动物细胞工程的基础教学课件-2023-2024学年高一上学期生物人教版必修一

动物细胞的培养（第4课时） 动物细胞的培养 是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。 （1）科学研究： 能直接观察到培养细胞的动态变化过程，从而能直接观察、分析细胞的形态结构和真正意义上生命活动。培养正常或病变的细胞，可用于生理、病理、药理等方面的研究。 例如， 细胞全能性的揭示、细胞周期调节控制的分析、癌变机理和衰老原因、抗癌药物的筛选、有毒物质的检测等研究，都与细胞培养技术密不可分。 动物细胞的培养 是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。 如皮肤细胞的培养用于烧伤患者的皮肤移植，其他器官的细胞培养用于相关损伤组织器官的修复等。 借助于某些细胞的大规模培养获得细胞代谢产物，如获得动物疫苗、干扰素、单克隆抗体等有重要价值的生物 制品，是动物细胞培养的重要应用之一。 通过大规模动物细胞培养来获得动物性食品，如世界首个“人造牛肉汉堡”的问世。 （2）现实生活： 动物细胞的培养 是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。 稳定的环境条件 充足的营养物质 严格的无菌操作 动物细胞的培养 是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。 稳定的环境条件 ④气体条件： ②湿 度： ③PH值： 70%以下 7.2〜7.4 ①温度： 37 ℃ 充足的O2 CO2培养箱开放式培养（5%的CO2浓度，95%的空气）： 不仅提供了适宜的温度，还能控制稳定的pH环境，可以保证细胞呼吸对氧气的需要。 动物细胞的培养 是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。 2. 充足的营养物质 培养液基本成分包括水、无机盐、氨基酸、维生素、糖类、生长因子等。 添加血清 ①提供生长因子和激素 ②提供贴附因子和伸展因子 ③提供结合蛋白 ④提供必需脂肪酸和微量元素 胎牛血清、小牛血清、成牛血清 定期更换：为防止细胞代谢产生的有毒物质危害细胞。 动物细胞的培养 是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。 3. 严格的无菌条件 ④操作过程： ①培养材料： 无菌环境取材，酒精消毒等 ②培养基： 高压蒸汽灭菌、过滤除菌、加入抗生素 ③培养环境： 无菌室、超净台、紫外灯杀菌、器材高压蒸汽灭菌 严格无菌，在酒精灯火焰旁操作等 防止污染是决定细胞培养成败的关键 动物细胞的培养 贴附是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式，包括细胞与细胞间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触。正是基于细胞这种贴附生长的特征，使得不同细胞之间结合而形成组织，也使得细胞和周围环境之间保持联系。 (1)贴附生长 血液、淋巴组织的细胞以及某些肿瘤细胞不需要贴附在支持物上，而是呈悬浮生长状态。 体外培养时，绝大多数细胞仍然保持了贴附生长的特性，必须贴附在某一固相支持物上如培养瓶壁上生长。 培养皿 培养瓶 体外培养的动物细胞的特点 动物细胞的培养 体外培养的动物细胞的特点 接触抑制是体外细胞培养时贴附型细胞生长的特性。 由于细胞之间有接触抑制的特性，一般的正常细胞并不重叠于其他细胞之上生长，而是单层生长。 癌细胞由于无接触抑制而能够继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩展，发生堆积。因此，是否接触抑制可作为区别正常细胞与癌细胞的标志之一。 (2)接触抑制 原代培养 动物细胞的培养 2.传代培养 将原代培养细胞分成若干份，接种到若干培养基中，使其继续生长繁殖。 是指细胞或组织离开有机体后的首次培养。 原代培养 动物细胞的培养 取材，分离组织 取小鼠拉颈处死，置入70%酒精浸泡杀菌，放置在操作盘中，用手术器械分离皮肤和肌肉组织层，打开腹腔和胸腔，取出心脏和肝脏，置于无菌瓶皿内，Hanks缓冲液洗3次。 动物细胞的培养 解离组织 用弯头剪分别把心脏和肝脏剪碎，每个组织块大约1mm3左右，用Hanks缓冲液洗2-3次，自然沉降，用吸管吸去上清液。 原代培养 动物细胞的培养 原代培养 肝脏细胞、肾脏细胞等 ①组织块法： ②分散细胞法： 心肌细胞、皮肤细胞等 动物细胞的培养 原代培养 ①组织块法：将剪碎的组织块，直接贴附在培养瓶皿的瓶壁上，加入培养基后进行培养。随着培养时间的延长，细胞自行从组织块中向外长出、迁移。待迁出的细胞长至生长面积一半以上时，即可进行传代。 心肌细胞、皮肤细胞等 动物细胞的培养 原代培养 ②分散细胞法：采用机械法或酶消化法，使组织块解离，通过注射器挤压，筛网过滤、反复吹打等方法，使细