2.2.1 动物细胞培养 课件 2023—2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

2.2 动物细胞工程 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 是其他动物细胞工程技术的基础。 2.2.1 动物细胞培养 2.2 动物细胞工程 1、定义： 从动物体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖。 原理：细胞增殖 一、动物细胞培养 对象：胚胎或幼龄动物细胞 目的：获得细胞或细胞产物 地位：动物细胞工程基础技术 动物细胞培养 （一）动物细胞培养的条件 （三）动物细胞培养的应用 （二）动物细胞培养的过程 （一）动物细胞培养的条件 还记得动物细胞生活的环境吗？ 细胞外液的主要成分呢？ 营养条件 其他条件 动物细胞培养 所需的基本条件 ＜ ＞ 糖类、氨基酸、无机盐、维生素 …… 无菌、无毒的环境 适宜温度、pH、渗透压 适宜的气体环境 （一）动物细胞培养的条件 1、营 养 培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。 ▲培养皿 ▲培养瓶 合成培养基+血清等 合成培养基：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素 2、无菌、无毒的环境 培养液定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。 对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。 ▲超净工作台 ▲酒精灯火焰附近 加抗生素，更换培养液 1、定期更换培养液的目的是什么？ 2、如何防止培养过程中的微生物污染？ 3、温度、pH和渗透压 温度：36.5±0.5℃ pH：7.2 ~ 7.4 渗透压：等渗 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2：细胞代谢所必须的 CO2：维持培养液PH CO2培养箱 （二）动物细胞培养的过程 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 阅读课文44—45页相关内容 动物细胞培养的类型： 第1类：悬浮生长细胞 第2类：贴壁生长细胞 （主流） 接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖。 悬浮培养瓶 细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。 取动物组织 分散成单个细胞（剪碎、胰蛋白酶处理） 制成细胞悬液 原代培养 分散，传代培养 机械法或酶解法：胰蛋白酶或胶原蛋白酶 分解细胞间的蛋白质 1、取动物组织 动物胚胎或幼年动物 增殖能力强，有丝分裂旺盛，取材一般取分化程度低，分裂能力强的 2、分散成单个细胞 为什么？ 机械法或酶解法：胰蛋白酶或胶原蛋白酶 分解细胞间的蛋白质 1、取动物组织 1、有利于细胞营养物质的吸收，代谢废物的排出。 2、成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 2、分散成单个细胞 （二）动物细胞培养的过程 为什么要分散成单个细胞？ 机械法或酶解法：胰蛋白酶或胶原蛋白酶 分解细胞间的蛋白质 1、取动物组织 2、分散成单个细胞 不能，胃蛋白酶PH为2 ，细胞培养PH7.2-7.4， 要控制时间，否则会消化细胞膜蛋白质，损伤细胞 （二）动物细胞培养的过程 可以用胃蛋白酶吗？处理时间有限制吗？ 1、取动物组织 2、分散成单个细胞 3、制成细胞悬液 4、原代培养 （二）动物细胞培养的过程 细胞悬液放入培养瓶，适宜条件培养。 4、原代培养 初次培养， 特点：细胞贴壁、接触抑制的 （二）动物细胞培养的过程 悬浮生长类：能够悬浮在培养液中生长增殖。 动物细胞生长特点： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖 细胞贴壁过程 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 接触抑制 动物细胞生长特性 3、过程 4、原代培养 5、传代培养分瓶后的培养 为什么要分瓶培养？怎样处理？ 传代培养（视频） 3、过程 4、原代培养 5、传代培养分瓶后的培养 接触抑制后的贴壁细胞重新用胰蛋白酶处理，再分瓶继续培养 悬浮生长类：离心法收集， 原代培养： 传代培养： 原代培养与传代培养的区别 分瓶之前，10代以前 分瓶后继续培养，10代以后 取动物组织 分散成单个细胞 细胞悬液 原代培养 用机械的方法， 或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理 加培养液 放入培养皿或培养瓶内 一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖（悬浮生长） 一类需要贴附于某些基质表面才能生长增殖（贴壁生长） 细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液营