专题十四 细菌平板划线分离技术（讲义）高考备考讲练测

细菌平板划线分离技术 一、考纲要求 1、技能考点 （1）掌握消毒等操作准备方法 （2）掌握酒精灯使用方法 （3）掌握接种环使用的流程与方法 （4）掌握生物材料常规取材的流程与方法 （5）掌握划线法等方法的流程与操作技巧 2、职业素养 了解生物安全的概念与场景。 二、知识点梳理 （一）实验原理 平板划线分离技术是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。 一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。 （二）实验器材 酒精棉球、琼脂平板、酒精灯、接种环、记号笔、试管架、液体菌种、镊子 （三）操作步骤 1、消毒 用镊子夹酒精棉球进行手消毒，并对操作台消毒（由内向外画圈，与肩同宽的面积） 2、取样 （1）点燃酒精灯 （2）接种环消毒：从试管架上选用平整、圆滑的接种环（使用前接种环在70%乙醇里浸泡备用）。右手持接种环，置于酒精灯火焰的外焰上顺次烧红3次以充分灭菌（深入试管内的接种环其余部分也要充分灭菌）；灼烧灭菌后待冷却后再进行接种划线，划线之间要进行灼烧灭菌。 （3）a.液体菌液取样：左手持盛有被检材料的试管(或广口瓶)，将试管瓶口在酒精灯火焰上过火3次(每次2-3秒)，然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞拨出，试管口再过火。用右手持接种环从试管内的液体菌液中挑取菌种一环(试管 、瓶口保持对着火焰);试管口再次过火消毒后盖上管(瓶)塞，再次过火3次后放人试管架上。 b.平皿内取样:左手持盛有被检材料的平皿，置于酒精灯旁（5cm内为无菌区）用拇指食指及中指将皿盖打开侧（45°）(酒精灯一侧)。右手持消毒后的接种环从打开的口子伸人，将接种环置于平加边缘冷却，从菌落中蘸取菌种少许(保持平皿口对着火焰)。取出接种环后立即盖好平皿盖,平皿倒置于操作台上。 3、平板划线（四区划线法） （1）画A区：左手将平皿置于酒精灯火焰旁用拇指食指及中指将皿盖打开一侧(酒精灯一侧，角度大小以能顺利画线为宜，但以角度小为佳，以免空气中细菌污染培养基)。右手持接种环,将已取菌种的接种环伸人平皿A区靠近边缘。然后自涂抹处成30-40°角在平板表面轻轻地画3一5条连续的“Z”字形平行线(线条多少应依挑菌量的多少而定)。画完A区后应立即烧掉环上的残菌,以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿盖并将其覆盖在平皿上方，以防止杂菌的污染，也可将平皿倒置于桌面上。 4、标记：用记号笔在平皿底部标记被检材料的名称及接种时间，倒置于操作台上 5、器具归位:整理操作现场 6、消毒：手消毒，操作台消毒 7、培养：一般培养（需氧培养），培养温度：37℃（恒温培养箱），培养时间（18-24h） （四）酒精灯的使用方法 1、先要检查灯芯：如果灯芯顶端不平或已烧焦，需要剪去少使其平整 。 2、检查酒精：灯里酒精的体积不能少于酒精灯容积的1／4，不能超过2／3。 3、在使用酒精灯时，应注意，禁止用酒精灯引烧另一盏酒精灯，而应用燃着的火柴或木条来引燃。 4、不要碰倒酒精灯，万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，应立即用湿抹布扑盖。 5、酒精灯灯焰分外焰、内焰、焰心三部分，在给物质加热时，应用外焰加热 。 6、熄灭酒精灯：用灯帽将火焰熄灭，熄灭后再盖一次让空气进入，免得冷却后盖内造成负压使盖打不开。 三、常考题练讲 1、有关平板划线法操作正确的是（  ） A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C.要将最后一区的划线与第一区的划线相连 D.最后将平板倒置，放入恒温培养箱中培养 【答案】D 【解析】平板划线操作过程中每划一个区之前都要进行接种环消毒，烧去环上的细菌以防影响分离效果，A错误。打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需要再次通过火焰灭菌后才能塞上棉塞，B错误。最后一个区的划线需要与第一个区平行，D错误。 2、平板分离划线主要目的是（ ） A. 利于细菌生长 B. 利于观察菌落形态 C. 利于获得足够的单个菌落 D. 利于大量增殖菌落 【答案】C 【解析】平板划线法通过在平板表面划线稀释而获得单菌落。 3、平板培养时，接种的最佳温度是（ ） A. 25℃ B. 37℃ C. 45℃ D. 50℃ 【答案】B 【解析】平板培养时，接种的最佳温度是37℃。 4、在平板划线分离技