2024届高三生物二轮聚焦“PCR”，突破考试重难点（题）

1、 基本概念 1. (2020·新高考Ⅰ)通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出 Wx基因的cDNA，原因是__________________________________________________ 2. (2022·全国乙卷) 为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的__________________来进行。PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是___________ 3. (2022·广东) 研究者针对每个需要扩增的酶基因设计一对______，利用PCR技术，在优化反应条件后扩增得到目标酶基因。 4. (2022·山东)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增基因。用于扩增基因的引物需满足的条件是_______________________________ 5. (2021·全国)PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答问题 (1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是_________（用数字序号）。 (2)操作③中使用的酶是_______________________，PCR 反应中的每次循环可分为变性、复性、________三步，其中复性的结果是________。 (3)为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与____________特异性结合。 (4)PCR（多聚酶链式反应）技术是指____________________________________。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。 【参考答案】 1. 引物能与WX基因的cDNA特异性结合 聚焦“PCR技术”，突破考试难点 2. 2 / 2 学科网（北京）股份有限公司 3. 特异性核苷酸序列 复性 4. 引物 5. 6. 两种引物分别与两条模板链3′端的碱基序列互补配对 7. (1) ④②③① (2) 耐高温的DNA聚合酶 延伸 (3) 病原菌DNA (4) 在生物体外大量快速扩增DNA片段的技术 2、 条件优化 1. (2021·湖北)某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是 A.增加模板DNA的量 B.延长热变性的时间 C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 2. (2021·江苏)热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除𝑇𝑎𝑞DNA聚合酶以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有_____。 A. 𝑇𝑎𝑞酶最适催化温度范围为50∼60℃ B.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物 C.两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸 D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了𝑇𝑎𝑞酶的特异性 3. (2017· 江苏)设计引物是 PCR 技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（见图），请分别说明理由。 (1)第1组： ； (2)第2组： 。 【参考答案】 1. D 2.BC 3. (1)引物Ⅰ与引物Ⅱ局部互补配对而失效 (2)引物Ⅰ′自身折叠后互补配对而失效 3、 应用类型 1. (2020· 北京)为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的𝐻𝑀𝐴3基因，同时避免内源𝐻𝑀𝐴3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是( )。 A.①+③ B.①+② C.③+② D.③+④ 2. (2022· 山东)为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的______（填“ 3′端”或“ 5′ 端”）。 3. (2023· 模拟)限制酶识别序列应添加在引物的______（填“ 3′端”或“ 5′端”），原因是________________________________________________ 4. 融合PCR技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如图所示. (1) 第一阶段中PCR至少进行____次循