2024届高三生物二轮复习课件PCR技术及应用

聚焦“PCR技术” 张晓宇 高三生物组 应用类型 条件优化 基本概念 原理、条件、基本过程 温度时间的控制、引物的设计 仅扩增、扩增且截取、扩增且延长、定点诱变、定量分析等 目录 全称： 原理： 操作环境： 组分： 步骤： 优点： 与体内DNA复制比较 聚合酶链式反应 DNA半保留复制、DNA的热变性 体外（PCR扩增仪/PCR仪） 模板（目的基因）、2种引物、4种脱氧核苷酸 耐高温的DNA聚合酶、含“Mg2+”缓冲溶液 可以在短时间内大量扩增目的基因 变性——复性（退火）——延伸 一、基本概念 一、基本概念 与体内DNA复制比较 PCR 细胞内DNA复制 反应场所 解旋方式 引物 酶 新链延伸 解旋酶催化 细胞内(主要在细胞核内) 两条新链都连续延伸 单链DNA 高温解旋 细胞外(在PCR扩增仪内) 耐高温的DNA聚合酶 单链RNA 解旋酶、普通DNA聚合酶等 半不连续复制 (2022·全国乙卷) 一、基本概念 (2)为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒R NA中的__________________来进行。PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的 一步是______。 特异性核苷酸序列 复性 (3)通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出 Wx基因的cDNA，原因是　 　。 引物能与WX基因的cDNA特异性结合 (2020·新高考Ⅰ) （1）为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增 <m></m> 基因。用于扩增 <m></m> 基 因的引物需满足的条件是________________________________________________。 两种引物分别与两条模板链 <m></m> 端的碱基序列互补配对 (2022·山东卷) (1)研究者针对每个需要扩增的酶基因设计一对______，利用PCR技术，在优化反应 条件后扩增得到目标酶基因。 引物 (2022·广东卷) （2021·全国卷） PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答问题 (1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是　 　（用数字序号表示）。 (2)操作③中使用的酶是　 　，PCR 反应中的每次循环可分为变性、复性、　 　三步，其中复性的结果是　 　 。 (3)为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与　 　 特异性结合。 (4)PCR（多聚酶链式反应）技术是指　 　。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。 一、基本概念 ④②③① 耐高温的DNA聚合酶 延伸 病原菌DNA 在生物体外大量快速扩增DNA 片段的技术 二、条件优化 温度时间控制 ①解旋温度影响扩增的特异性； ②退火温度会影响引物与模板的配对，进而会影响产物的特异性 ③延伸温度影响 Taq 酶的活性 ④延伸时间与产物的特异性及产量有关 （2021·湖北） 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是 A.增加模板DNA的量 B.延长热变性的时间 C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 二、条件优化 D ③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除 <m></m> 聚合酶（ <m></m> 酶）以 外的各成分混合后，加热到 <m></m> 以上再混入酶，然后直接从 <m></m> 开始PCR扩增， 下列叙述正确的有_____。 A. <m></m> 酶最适催化温度范围为 <m></m> B.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物 C.两条子链的合成一定都是从 <m></m> 端向 <m></m> 端延伸 D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了 <m></m> 酶的特异性 BC 二、条件优化 (202