1.2.2 微生物的选择培养和计数（第二课时）-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修三

1.2.2 微生物的选择培养和计数 授课教师： 授课班级： 复习巩固 1.无菌技术包括什么？ 2.微生物的纯培养包括哪几个步骤？ 3.在倒平板的过程中，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 4.平板划线法注意事项有哪些？ 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。 稀释涂布平板法呈现的杂菌群 该怎么办呢？ 从社会中来 ♣实例 1973年，科学家从美国黄石国家公园的 热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外 扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用 耐高温的DNA聚合酶。 寻找耐高温的DNA聚合酶 为什么水生栖热菌能从热泉中被筛选出来呢？ 水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 筛选原则： 耐寒微生物 石油分解菌 被石油污染的土壤 冰川冻土层 实验室筛选微生物原理： 人为提供_______________的条件（包括_____、_____和_____等），同时_______________________ 有利于目的菌生长 抑制或阻止其他微生物的生长 营养 温度 pH 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 一、选择培养基 1. 概念： 2. 方法： 分离得到酵母菌、霉菌等 分离固氮菌 分离自养型微生物 不加含碳有机物的培养基 不加氮源的培养基 加入青霉素的培养基 （1）在培养基中加入某种化学物质。 分离得到金黄色葡萄球菌 加入高浓度食盐的培养基 （2）改变培养基中的营养成分。 （3）改变微生物的培养条件。 耐高温微生物 高温环境下培养 厌氧型微生物 兼性厌氧型 无氧环境下培养 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 讨论： 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 设计一种选择培养基,尿素作为唯一氮源。 区别：只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。 (细菌生长的氮源) 尿素 NH3 脲酶 尿素分解菌 思考·讨论 选择培养基配方的设计 只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。 进一步思考： 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 思考·讨论 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基一 KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4 ·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基二 1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基，判断依据是_______________；该类培养基的主要用途为_______________。 2.从用途上来讲， 属于选择培养基，目的是为了获得 。 3.两种培养基共有的培养基成分有： 。 培养基一的碳源为 ，氮源为 ； 培养基二的碳源为 ，氮源为 。 固体 添加了凝固剂琼脂 分离、鉴定、计数、保存 培养基二 能分解尿素的微生物 碳源、氮源、无机盐、水 牛肉膏 蛋白胨 葡萄糖 尿素 【现学现用】 二、微生物的选择培养 方法: 稀释涂布平板法 主要过程: 梯度稀释菌液和涂布平板 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到制备好的选择培养基上，进行培养。 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 土壤细菌的数量庞大，怎么获得想要得到的特定微生物的纯培