1.2 微生物的培养技术及应用（第3课时）课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

分离原理：大多数微生物都能利用葡萄糖，但只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可从土壤分离出分解尿素的细菌。 二、微生物的选择培养 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 实验原理： 计数原理：当样品稀释度足够高时，通过统计平板菌落数，能推测出样品中的活菌数目。 选择培养基配方组分 含量 KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2)2 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容1000ml 能分解尿素的细菌可存活 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml 牛肉膏蛋白胨培养基 通用培养基 能+不能分解尿素的细菌都存活 固体、天然培养基 固体、合成培养基 通用培养基 选择培养基 灭菌 （高压蒸汽灭菌） 倒平板 （备用） 不能高温灭菌 二、微生物的选择培养 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面的方法。在稀释度足够高菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。 细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3〜8 cm的土壤层。因此，取样时一般要铲去表层土。在城市，常见的是公园里、街道旁、花盆中的土壤；在农村，则容易收集到农田或菜园里的土壤。将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g ②在火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。 取 1 mL 上清液加入盛有 9 mL 无菌水的试管中，依次等比稀释。 平板划线法是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的微生物细胞逐步稀释分散到培养基的表面的方法。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落。 恒温培养箱 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 10g ③取0.1mL菌液滴加到培养基表面。 微量移液枪 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 ⑦待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30〜37 ℃的恒温培养箱中培养1〜2 d。 稀释涂布平板法操作过程 ②在火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取 1 mL 上清液加入盛有 9 mL 无菌水的试管中，依次等比稀释。 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。 注意事项：①各操作细节要保证“无菌”。如移液管要经过灭菌，梯度稀释时，试管口和移液管在离火焰1~2cm处，涂布器要经过灼烧灭菌等。②将涂布器浸在盛有质量分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧。③操作中要注意防火。不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。④涂布结束后，应将一个未接种的培养基和已接种的培养基放在一起培养，以检测培养基是否灭菌彻底。 培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 分离和纯化微生物方法：稀释涂布平板法 二、微生物的选择培养 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 实验结果： 你知道本实验用了多少培养基平板吗？都是什么类型的培养基平板？ 未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板一个 未接种的选择培养基平板一个 102 103 104 105 106 不同稀释倍数已接种的牛肉膏蛋白胨培养基各一个 102 103 104 105 106 不同稀释倍数已接种的选择培养基每种稀释倍数至少3个 减少实验误差，保证实验结果更准确 一组对照 一组对照 思考：这组培养基没有菌落生成，说明什么？若这组培养基有菌落生成呢？ 说明培养基没有被杂菌污染。说明培养基被杂菌污染了 未接种的 牛肉膏蛋白胨培养基 未接种的 选择培养基 同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求平均